学术投稿

日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选及EST序列的分析

陈奕慧;李孜;李涛;李巧燕;麦璟莹

关键词:日本血吸虫, 免疫学筛选, TGF-β
摘要:目的 为获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cDNA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列.方法 采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Si尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500 bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定.结果 对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500 bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的三个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200).结论 SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行.
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    目的 观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答,探讨弓形虫黏膜疫苗能否在感染起始阶段有效诱导免疫应答.方法 将BALB/c小鼠随机分为免疫和对照组,免疫组小鼠以弓形虫复合黏膜疫苗20μl/只(20μg STAg+1μgCT)滴鼻免疫2次(间隔2周),对照组PBS滴鼻.于末次滴鼻后14 d颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液IgA抗体水平:计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平.结果 免疫组小鼠粪便IgA和鼻咽冲洗液IgA抗体显著高于对照组(P<0.05).NALT内淋巴细胞明显增生(P<0.05),其中CD4+、CD8+T细胞均有增生(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05).NC中淋巴细胞数明显升高(P<0.01),以CD4+T细胞水平为主(P<0.01).GALT部位PP淋巴细胞增生显著(P<0.01),主要以CD4+T细胞为主;而IEL以CD8+T细胞增生为主(P<0.01),CD4+/CD8+比值降低(P<0.05).结论 弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答.

    作者:李珀;孟晓丽;殷国荣;张杰 刊期: 2007年第01期

  • 大豆卵磷脂辅助降血脂功能实验研究

    目的 研究大豆卵磷脂调节血脂的作用.方法 将动物随机分为空白对照组、高脂模型对照组和大豆卵磷脂低、中、高三个剂量组,剂量组每天灌胃给予样品,并同时喂饲高脂饲料.于给样30 d后,取血分别测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)等指标.结果 大豆卵磷脂三个剂量组的TG、TG水平均较高脂模型对照组降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 大豆卵磷脂具有调节血脂作用.

    作者:池莉平;谭剑斌;陈瑞仪 刊期: 2007年第01期

  • 阿托伐他汀对老年冠心病患者血小板α颗粒膜蛋白GMP-140的影响

    目的 探讨阿托伐他汀对老年冠心病患者血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的影响.方法 80例老年冠心病患者服用阿托伐他汀8周,测定冠心病患者和正常对照者的GMP-140含量并比较冠心病患者服用阿托伐他汀前后总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)的变化.结果 发现冠心病患者治疗后总胆固醇、低密度脂蛋白、GMP-140浓度均明显降低,高密度脂蛋白浓度增高.结论 阿托伐他汀治疗老年冠心病患者能有效地降低胆固醇,抑制血小板活性.

    作者:林玲;欧少雯;吕红;殷丽萍;罗荣娟 刊期: 2007年第01期

  • 云南医学革螨数值分类研究

    目的 以云南省57种医学革螨作为分类单元,以形态特征为主列出60项分类性状特征来探讨云南省医学革螨不同属和种的亲缘关系.方法 运用SPSS 11.5统计软件中的系统聚类分析,对57种医学革螨进行数值分类.结果 赫刺螨属和棘刺螨属单独从厉螨科中分离出来,其余种类的分类结果与传统的分类结果一致.结论 数值分类能比较客观地反映医学革螨各分类阶元的分类地位与亲缘关系,分类结果与传统形态分类结果基本一致.

    作者:罗礼溥;郭宪国 刊期: 2007年第01期

  • 日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选及EST序列的分析

    目的 为获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cDNA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应蛋白对应的基因序列.方法 采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Si尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选,对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500 bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定.结果 对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后,其中有4个克隆大于500 bp,复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的三个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200).结论 SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF-β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行.

    作者:陈奕慧;李孜;李涛;李巧燕;麦璟莹 刊期: 2007年第01期

  • 新兵流感防治的知行信调查

    目的 了解部队新兵人群对流感及禽流感相关知识的知晓、态度和行为,为在部队新兵中开展传染病防治的相关健康教育提供科学依据.方法 采用整群抽样的方法,抽取了某兵种驻南方三个地区新兵2 064名,自行设计问卷进行不记名问卷调查.结果 新兵人群缺乏对流感防治的全面、正确的认识,能完全答对流感基本知识所有问题的仅占7%,经常性防治措施的接受程度只有60%~70%,新兵对传染病防治知识存在较大的需求.结论 新兵人群对流感等传染病知识普遍缺乏知晓和重视,应加强新兵传染病防治知识的教育.

    作者:高璐璐;陈清;朱文昌;于德宪;柯雪梅;谢文良;聂军;俞守义 刊期: 2007年第01期

  • 抗菌肽的应用及存在的问题

    抗菌肽是生物体抵御外源性病原微生物入侵而产生的一类多肽,从细菌到高等哺乳动物都普遍存在.和传统的抗生素相比,抗菌肽分子量小、热稳定性好,具有抗细菌、真菌、病毒、原虫及抑癌活性等广谱杀菌作用,对动物安全、无毒、无副作用.本文介绍了目前抗菌肽在生产和应用领域方面的研究状况,并探讨抗菌肽的存在问题及应用前景.

    作者:林承德;彭鸿娟;王衍海 刊期: 2007年第01期

  • SARS相关冠状病毒Spike蛋白定点诱变

    目的 分析确定SARS-CoV Spike蛋白序列中对SARS-CoV的感染能力相关性较强的位点,并进行定点诱变.方法 比对不同来源株SARS-CoV的Spike蛋白的序列,计算其相应位点的突变墒值和突变几率,结合进一步的生物信息学分析,筛选出经预测可能影响Spike蛋白与其受体结合进而导致SARS病毒对宿主细胞的膜融合侵染能力的7个位点,对各个位点用重叠延伸PCR法或直接PCR法进行人工定点诱变,获7个突变片段,之后将各片段亚克隆至克隆载体PSP72中.结果 经PCR和测序确认各片段点突变成功,并正确插入克隆载体PSP72中.结论 成功实施Spike蛋白的定点诱变,获得7个突变片段的重组子,这些突变体可为研究这些突变位点在Spike蛋白与受体结合中的意义,进而可为阐述Spike蛋白的结构与功能的关系、揭示Spike蛋白变异与SARS病毒侵入(染)细胞能力的相关性提供坚实的实验基础.

    作者:刘利东;涂洪斌;李冰 刊期: 2007年第01期

  • SARS冠状病毒受体结合域在大肠杆菌中的融合表达和鉴定

    目的 为了研究SARS冠状病毒感染与免疫和跨种属传播机制,从来源于人和果子狸的SARS冠状病毒Spike蛋白基因中,克隆病毒受体结合域(receptor binding domain,RBD)基因片段,在大肠杆菌中进行表达.方法 用PCR方法扩增RBD基因,先经T-A连接,转化大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆测序鉴定,双酶切后进一步亚克隆至质粒pGEX-6p-3,构建原核表达重组质粒,通过IPTG诱导在大肠杆菌BL21中表达,并用SDSPAGE和Western-blotting方法检测表达情况.结果 扩增了RBD的编码基因并成功构建了其原核表达载体pGEX-6p-3-hsRBD和pGEX-6p-3-csRBD,RBD能够在大肠杆菌中获得良好的表达,表达的融合蛋白相对分子质量约为47 000.结论 本工作利用基因工程技术表达了两物种来源的SARS冠状病毒的RBD,两者具有高度的同源性,因此我们可通过配基受体结合实验,为进一步研究SARS冠状病毒感染与免疫及跨种属传播机制奠定了基础.

    作者:高俊;肖洪广;林勇平 刊期: 2007年第01期

  • 登革病毒基因组核苷酸变异与毒力的关系

    登革病毒是一种流行于热带、亚热带地区的蚊媒病毒,其引起的登革热、登革出血热/登革休克综合征(DSS/DHF)已成为严重威胁人类健康的公共卫生问题.登革病毒缺乏精确的复制校正系统,在传播过程中核苷酸的变化会导致病毒毒力的变化,目前其致病与免疫机制尚未明了,缺乏有效的疫苗.本文就登革病毒基因变异与其毒力关系方面的研究进行综述.

    作者:曹丹;周俊梅 刊期: 2007年第01期

  • 工作台面微生物污染状况对产品的影响

    目的 了解化妆品分装间工作台面微生物污染情况及分布,探讨生产车间分装间工作台面微生物污染水平和分布对产品卫生质量的影响.方法 按不同季节、生产前后分别检测粉类车间、净化车间和非净化车间的分装间工作台面和化妆品产品的微生物指标.结果 工作台面未检出大肠菌群,细菌总数均值为(447.1±217.2)cfu/25 cm2,其中净化车间细菌总数均值远低于其余两类车间,生产前低于生产中.化妆品全部合格.工作台面和产品之间r=0.203,P=0.126,两者无线性相关关系.结论 工作台面细菌污染较严重,主要是生产中非净化车间工作台面细菌总数浓度偏高.

    作者:郭重山;钟嶷;李小晖 刊期: 2007年第01期

  • 广州及其周边地区福寿螺体内广州管圆线虫感染的现状调查

    目的 了解广州及其周边地区福寿螺感染广州管圆线虫的情况,为防治提供依据.方法 人工消化174只福寿螺,显微镜下检查消化液中有无广州管圆线虫幼虫.结果 广东省广州市花都区、广州市越秀区、兴宁、化州、蕉岭、茂名等六地的福寿螺感染率分别为25.0%、23.1%、24.2%、18.5%、14.3%、13.3%,广东省东莞采集的福寿螺未发现感染广州管圆线虫.结论 广东省广州市花都区、广州市越秀区、兴宁、化州、蕉岭、茂名等六地存在广州管圆线虫的自然疫源地.

    作者:郝丽;吴焜;程璐;王琼;陈晓光 刊期: 2007年第01期

  • 东莞地区265例住院麻疹临床特征分析

    目的 探讨3年来麻疹的流行、临床及实验室检查的特点,以期更好的预防和治疗麻疹.方法 对东莞市人民医院自2003年6月至2006年1月收治的265例麻疹的流行病学及临床资料进行回顾性分析.结果 从4个月的婴幼儿至48岁的成年人均有麻疹发病,以6个月至3岁年龄组发病率高,占56.2%.城镇儿童麻疹疫苗接种率明显高于农村和外来工的儿童.所有病例均有发热,多在38~39 ℃之间.成人麻疹多为不典型,并发症多,以腹泻较常见.麻疹抗体IgM检测阳性率为86.4%.结论 婴幼儿仍为目前麻疹的高发人群,在春夏季节,密切接触者发病率高.加强农村和外来工的儿童麻疹疫苗接种工作尤为重要和迫切.

    作者:吴福全;刘军;邝明子;王文琦;殷思纯;李发武;陈桂轩;夏宪照;程元桥 刊期: 2007年第01期

  • 医院感染患者痰液中分离细菌的分布特征和耐药性变迁分析

    目的 了解2003-2005年医院感染患者痰液中分离细菌的分布特征和耐药性,为合理使用抗菌药物提供依据.方法 大多数分离细菌的鉴定和药敏试验利用BD Phoenix仪,少数利用手工鉴定和K-B法药敏试验.数据分析用WHONET 5.0软件.结果 医院感染患者痰液中常见的为铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌.痰液中分离的G-杆菌合计,耐药率低于40%的为美洛培南、亚安培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢他啶和头孢吡肟.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率为45.2%~62.5%和36.7%~52.3%.葡萄球菌对多肽类抗菌药物万古霉素的敏感率一直为100%,对其他抗菌药物的耐药率均大于30%.金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌甲氧西林耐药性居高不下,分别为69.8%~72.0%、77.3%~87.1%.非发酵菌碳青霉烯类耐药率不断升高,铜绿假单胞菌对美洛培南和亚安培南耐药率已分别高达30.5%和49.4%.结论 医院感染患者痰液中肠杆菌科产ESBLs比例、葡萄球菌甲氧西林耐药率和非发酵菌碳青霉烯类耐药率均较高,应加强抗菌药物的合理使用和采取有效的隔离措施以降低耐药率及多重耐药菌的扩散.

    作者:芮勇宇;耿穗娜;王前;裘宇容 刊期: 2007年第01期

  • 一起学校流感暴发的调查和分析

    目的 调查此次疫情暴发的原因和特点,防止类似疫情再次发生.方法 按2005年广东省卫生厅《广东省流感样病例暴发疫情报告及调查处理工作指引(试行)》进行.结果 全校学生902人,发病74例,罹患率为8.20%.整个疫情流行过程为17日,7~9岁年龄组发病较多,男女发病无显著差别.一、二年级学生和在校午休学生罹患率较高,具明显的班级和宿舍聚集性;病毒分离培养为B型流感病毒.结论 此次为一起由B型流感病毒引起的流感暴发疫情,暴发原因为未及时隔离治疗病人、疫情报告迟缓、室内通风换气不够和学校未开展流感疫苗接种等.

    作者:钟新光;刘艳璋;张泽武 刊期: 2007年第01期

  • RNAi-生命科学的又一重大发现:2006年诺贝尔生理学/医学奖介绍

    2006年10月2日,47岁的斯坦福大学教授Andrew Z.Fire和46岁的马萨诸塞州大学教授Craig C.Mello由于发现RNA干涉(RNA interference,RNAi)以及他们在基因沉默现象研究领域的杰出贡献而成为2006年诺贝尔生理学/医学奖获得者.本文概要介绍这一重大发现及其应用前景.

    作者:朱兴全;陈宁;周鹏 刊期: 2007年第01期

  • 大豆皂甙在Ames实验中的抗突变作用研究

    目的 应用鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验),试验从基因水平上研究大豆皂甙(soyasaponin,SS)抗突变性.方法 设计A、B、C、D四种不同处理方式进行鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验.结果 Ames试验结果显示,SS试验组回变菌落数与阳性对照组相比显著抑制(P<0.01),其抑制率在一定范围内随SS剂量增加而增加.结论 SS在基因水平的体外测试中,显示出明确的抗突变作用.SS既存在可灭活所用突变剂的细胞外对抗作用,同时又存在促使DNA损伤修复的细胞内对抗作用.

    作者:张咏莉;甘卉芳;李百祥 刊期: 2007年第01期

  • 基因免疫制备抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体

    目的 通过基因免疫方法,制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并对单抗进行初步鉴定.方法 将含有N蛋白的编码基因的真核重组质粒pSecTagB/N免疫BALB/c小鼠,然后取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用原核表达的SARS病毒N蛋白筛选阳性克隆.然后通过免疫印迹法进一步证明抗体对N蛋白的特异性,用ELISA方法检测抗体对灭活SARS全病毒的免疫反应.结果 筛选得到10株抗N蛋白的单克隆抗体,ELISA和免疫印迹结果表明这些抗体特异性针对N蛋白上的抗原决定簇,且有7株抗体对SARS灭活病毒有阳性反应.结论 所得的单克隆抗体特异针对N蛋白.

    作者:盛慧英;曾其毅;田新贵;朱冰;邝璐;王长兵;周荣 刊期: 2007年第01期

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    目的 探讨诺瓦克样病毒与广州成人散发急性腹泻的病原关系和感染毒株的基因型别.方法 采用ELISA方法筛检轮状病毒,RT-PCR方法检测诺瓦克样病毒,诺瓦克样病毒阳性样品的PCR产物经纯化、测序后进行基因分型.结果 35份成人散发急性腹泻患者粪便标本中检出轮状病毒8例,诺瓦克样病毒4例,测序分析确定1株为诺瓦克样病毒GⅡ-3型,另1株为GⅡ-4型.结论 广州成人散发急性腹泻患者中存在诺瓦克样病毒感染,且感染毒株的基因型别不一.

    作者:詹惠春;聂军;唐亚丽;李建栋;戴迎春;陈清;俞守义 刊期: 2007年第01期

  • 射频消融对人体单相动作电位的影响

    目的 探讨射频消融对人体心内膜记录的单相动作电位(MAP)的影响.方法 132例行射频消融的病人,在消融过程中同步记录MAP和心腔内心电图,分析消融时间和温度对MAP各项指标的影响.结果 单相动作电位振幅(MAPA)和大除极速度(Vmax)随消融时间的延长而逐渐降低,40 s后不再变化;随消融温度升高使MAPA和Vmax降低;消融时间和温度对MAPD90和MAPD50无明显影响.结论 MAPA和Vmax随消融时间和温度的变化而变化,提示利用MAP可以监测局部心肌损伤的程度.

    作者:李宜富;谭倩;张杏;高飞 刊期: 2007年第01期

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