学术投稿

通用表达型T载体的构建与真核基因的快速克隆表达

卢银平;郭涛;祝建芳;刘朝;董继华

关键词:基因表达, 表达型T载体, 基因克隆
摘要:目的:为简化PCR产物真核表达载体构建步骤,构建真核表达型T载体,并对其特性及表达效率进行分析.方法:限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与dTTP 70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化.将增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)和中国旱獭a干扰素基因(cwIFNA5)分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭a干扰素的生物学活性.结果:外源基因EGFP和cwIFNA5克隆进该载体后可以进行高效表达,基因转染72 h后,荧光显微镜观察到EGFP基因转染细胞荧光阳性率在80%以上,荧光强度高:病毒保护试验表明cwIFNA5转染细胞培养上清干扰素效价高达1∶600.结论:本研究构建的表达型T载体可用于基因的克隆之外,还可以直接用于基因的高效表达作蛋白质功能分析.
实用医学杂志相关文献
  • 金葡素联合顺铂腔内治疗恶性积液疗效观察

    目的:观察金葡素联合顺铂局部腔内注射治疗晚期肿瘤所致恶性体腔积液的近期疗效和毒性反应.方法:40例晚期肿瘤伴有恶性体腔积液的患者,局部抽出积液后注射金葡素10支及化疗药物顺铂60mg,所有患者完成局部治疗1~2个疗程,2次用药间隙时间为21~28 d.全身化疗一般在局部治疗后一周进行,共治疗1~6个疗程.结果:40例患者中完全缓解12例,部分缓解18例,无效10例,有效率为75%.毒性反应主要为局部疼痛、发热、恶心、呕吐等消化系统症状及骨髓抑制.结论:金葡素联合顺铂局部腔内注射治疗晚期肿瘤所致恶性体腔积液安全有效.

    作者:章莉;李小平;顾建春;马飞;郑磊贞 刊期: 2009年第22期

  • 微创技术在正畸牙拔除中的应用

    目的:探讨微创技术在正畸牙拔除中的应用效果.方法:收集360颗需要正畸减数的牙齿,分为两组进行治疗,微创组用微创拔牙刀拔除,传统组用常规器械拔除,比较两种拔牙方法的效果.结果:微创组的患者畏惧率10%、断根率1.67%、拔牙窝完整率94.44%、术中无痛率88%、术后无痛率94%、术后肿胀发生率5.56%、拔牙手术时间(2±0.3)min、患者主观感受痛苦率4%;传统组畏惧率56%、断根率12.22%、拔牙窝完整率48.33%、术中无痛卒68%、术后无痛率52%、术后肿胀发生率33.89%、拔牙手术时间(5±0.2)min、患者主观感受痛苦率48%.以上指标两组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论:微创拔牙技术用于正畸减数拔牙效果优于传统拔牙方法.

    作者:黄新生;乔玉香;徐静;刘道峰;汤琳;王涛 刊期: 2009年第22期

  • 呼吸困难护理综合评分研究

    目的:研究呼吸困难护理的综合评分.方法:(1)确定纳入评分的护理参数内容;(2)纳入参数的内容根据不同的技术要求和工作量大小评定分数;(3)统计126例非综合评分护理的护理病程作对照;(4)根据综合评分进行分型.结果:本组病例评定为轻型8例,中型31例,重型52例,极重型35例.根椐综合评分结果进行护理,保证了医疗安全,保证了护理质量,缩短了护理病程.结论:呼吸困难护理综合评分是必要的.本项研究具有科学性和实用性.

    作者:房民琴;房民洁;王静;张岚;刘敬兰;韩蓓;李玉兰;姚宜;杜枝梅;兰燕 刊期: 2009年第22期

  • 生物反馈治疗老年冠心病患者焦虑障碍的临床研究

    目的:研究多通道生物反馈治疗老年冠心病患者焦虑障碍的临床疗效.方法:在用扩冠药物治疗的基础上,对60例老年冠心病合并焦虑的患者进行8周的随机对照临床研究.研究组30例加用多通道生物反馈治疗,对照组30例加用抗焦虑药物舍曲林治疗.采用汉密尔顿焦虑量表(HAMA)和匹兹堡睡眠问卷(PSQI)评定疗效及观察不良反应,于治疗前及治疗8周末各评定1次.结果:治疗8周后,两组的HAMA和PSQI评分均有显著的下降(P<0.01),但研究组的PSQI总分比对照组的下降更为显著(P<0.01);研究组治疗焦虑障碍的显效率显著高于对照组(P<0.01);研究组治疗后的主观症状胸痛频数也显著少于对照组(P<0.01);而不良反应少于对照组.结论:多通道生物反馈是冠心病伴焦虑障碍的一种安全有效的心理干预治疗.

    作者:张美兰;林举择;叶瑞繁 刊期: 2009年第22期

  • 白内障超声乳化透明角膜切口与术后散光分析

    目的:比较不同位置的透明角膜切口对白内障超声乳化术后角膜散光的影响.方法:将白内障患者66例(66只眼)分为3组,A组(22眼)行颞侧透明角膜斜行切口,B组(22眼)在角膜上方行透明角膜隧道切口,C组(22眼)在角膜大散光轴方向作透明角膜隧道切口,分别进行白内障超声乳化人工晶体植入术,术后分别第1周,第1个月及第3个月随访,验光及作角膜地形图检查,记录术后矫正视力、角膜散光度、角膜散光轴向等,并对数据进行统计学分析.结果:各组术后视力均较术前有明显提高,矫正视力对比差异无显著性(P>0.05).术后第1周,第1个月A、B两组角膜散光度对比差异无显著性(P>0.05),但明显大于C组角膜散光度(P<0.05),C组角膜散光度术后第1周,第1个月较术后第3个月差异无显著性(P>0.05).结论:不同位置透明角膜切口作白内障超声乳化术手术效果好,根据角膜散光轴向选择的透明角膜切口术后角膜散光小,早期屈光稳定.

    作者:邱新文;徐海萍;陈彩娟 刊期: 2009年第22期

  • 下肢静脉曲张术后复发的微创治疗

    目的:探讨下肢静脉曲张术后复发外科微创治疗的效果.方法:回顾性分析32例(35条患肢)下肢脉曲张术后复发患者的临床资料,根据彩色多普勒超声和患肢深静脉造影的结果,对4例(4侧患肢)行静脉腔内激光治疗(EVLT)+内镜深筋膜下交通静脉离断(SEPS)+股浅静脉瓣膜戴戒术;8例(8侧患肢)行EVLT+股浅静脉瓣膜戴戒术,14例(15侧患肢)行EVLT+SEPS;6例(8侧患肢)行EVLT+点状抽剥术.结果:术后35侧患肢浅静脉曲张均消失,16侧患肢色素沉着、湿疹样病变均明显减轻;18侧小腿酸胀沉重感、疼痛、水肿10~21 d消失,6例溃疡18~42 d内愈合.随访6~40个月,平均22.6个月,无1例复发.结论:下肢静脉曲张术后复发的原因较为复杂,通常累及3个静脉系统,EVLT和SEPS术操作简便、微创、安全.术前全面的影像学检查和选择正确的手术方式是避免术后静脉曲张复发的关键.

    作者:赵为国;吴良平;戴晓江;王俊 刊期: 2009年第22期

  • 痰热清辅助治疗肺癌氩氦刀术后咯血的临床观察

    目的:研究肺癌氩氦刀冷冻术后咯血的治疗方法.方法:将97例术后咯血患者分为对照组47例,用常用的方法进行抗炎、止血等处理;治疗组50例,在常用方法上加用痰热清注射液.结果:治疗组临床有效率为96%,明显高于对照组,且伴随症状好转率也明显高于对照组.两组总有效率及好转率比较差异有显著性(P<0.05).结论:痰热清注射液辅助治疗肺癌氩氦刀术后咯血的疗效显著,具有一定的临床价值.

    作者:王慧;易峰涛 刊期: 2009年第22期

  • 基质金属蛋白酶-2组织抑制剂基因多态性与慢性阻塞性肺病易感性研究

    目的:研究基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)基因多态性与慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)易感性.方法:采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测92例COPD患者(COPD组)及80例健康对照者(对照组)TIMP-2基因启动子区域(-418位点)和外显子3区域(+853位点)单核苷酸多态性(SNPs),统计各基因型频率进行分析比较.结果:TIMP-2基因+853位点COPD组基因型频率为G/G 83.7%、G/A 15.2%、A/A 1.1%,基因型分布两组间差异有显著性(P=0.002);等位基因G在COPD组为91.3%,对照组为78.1%.等位基因频率相比两组差异有显著性(P=0.001);-418位点基因型和等位基因频率分布在两组间差异无显著性(P>0.05).结论:(1)TIMP-2基因+853位点G/A等位基因改变在吸烟时与COPD易感性相关.(2)TIMP-2基因-418住点等位基因G/C的改变与COPD易感性无关.

    作者:王伟;徐敏;胡克 刊期: 2009年第22期

  • ω3多不饱和脂肪酸对脓毒症大鼠骨骼肌高分解代谢的影响

    目的:探讨ω3多不饱和脂肪酸对脓毒症大鼠骨骼肌高分解代谢的影响.方法:30只SD大鼠随机分组,模型组采用盲肠结扎穿刺术复制脓毒症模型,假手术组仅翻动盲肠,不做结扎处理.试验期间大鼠禁食不禁水,试验组给予加用ω3脂肪酸的肠外制剂,药物对照组除了ω3脂肪酸外,其余成分相同.其余仅给予生理盐水肠外注射.在模型复制前5 d即开始连续给相应治疗.造模第16小时,无菌操作下取双侧伸趾长肌,一侧放入液氮中保存,另一侧放入孵育液中继续孵育2 h,并测定湿重.高效液相色谱法测定肌肉组织中3甲基组氨酸(3-MH)含量.结果:各组一侧伸趾长肌湿重差异未见显著性(P>0.05).与正常组比较,脓毒症组16 h点伸趾长肌降解率升高明显(P<0.05).与脓毒症组比较,ω3脂肪酸组大鼠3-MH含量均下降明显(P<0.05).结论:脓毒症时存在骨骼肌高分解代谢,ω3脂肪酸可明显降低骨骼肌高分解代谢率.

    作者:孟繁甦;苏磊;陶雪飞;唐柚青 刊期: 2009年第22期

  • 血小板聚集功能测定室内对照控制品的制备与应用

    目的:确证混合正常人的新鲜血浆作为血小板聚集功能测定的室内质控的可行性.方法:连续20个工作日制备富含正常血小板的新鲜混合血浆,用比浊法测定其血小板大聚集率、5 min聚集率及大聚集时间,分析质控情况.结果:对照控制品或试剂失效时,当天测定值超出±2 s限值,除去这些数据后各测定值变异系数均<10%.结论:制备新鲜血浆简便易行,可作为质控的对照控制品有效地控制血小板聚集功能的准确性和精密度.

    作者:李广华;罗燕飞;叶联珍;范小斌;柯晓雯;荣卡彬 刊期: 2009年第22期

  • 肿瘤坏死因子-α、白介素-6、丙二醛、超氧化物歧化酶在大鼠腹腔海水浸泡伤中的表达

    目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)在大鼠腹部开放合并海水浸泡中的表达.方法:采用腹部开放伤合并海水浸泡大鼠致伤模型.在光镜下观察肠黏膜损伤程度;利用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血浆TNF-α、IL-6含量的变化;分光光度法检测小肠组织MDA、SOD的含量.结果:腹部开放伤合并海水浸泡后,大鼠小肠病理学检查出现小肠充血、淋巴细胞浸润及肠上皮细胞间紧密连接破坏等改变;血中TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05或P<0.01):肠组织MDA水平升高,SOD活性降低(P<0.05或P<0.01).结论:腹部开放合并海水浸泡可致大鼠肠黏膜屏障功能受损,TNF-α、IL-6、氧自由基参与了腹部开放海水浸泡伤后继发性炎症反应过程.

    作者:张炎;刘刚;王育红;陈学东 刊期: 2009年第22期

  • 肾移植术后高血压患者服用非洛地平的远期疗效观察

    目的:研究非洛地平长期用于肾移植术后高血压患者治疗的有效性与安全性.方法:74例肾移植患者随机分为两组,非洛地平组与硝苯地平组.观察两组的3年人/肾存活率、血肌酐水平及环孢素A的副作用等.两组患者原发病、年龄、性别、体重、抗排斥药物方案等差异均无显著性.结果:非洛地平组患者3年人/肾存活率与硝苯地平组相比明显提高(P<0.05);非洛地平组患者血肌酐水平与硝苯地平组相比明显降低(P<0.05);而两组患者由于环孢素A肾毒性引起的不良反应的发生率差异无显著性(P>0.05).结论:非洛地平用于肾移植并发高血压患者可明显提高3年的人/肾存活率,改善远期移植肾功能,而不增加环孢素A的肾毒性.

    作者:詹胜利;蔡明;石炳毅;李州利;李鹏程 刊期: 2009年第22期

  • 妈富隆治疗17例复发性子宫内膜异位症的健康教育

    子宫内膜异位症(EMS)是生育年龄妇女的多发病、常见病,发病率约10%,占普通妇科手术的30%以上,其主要症状是痛经、下腹痛和性交痛等,严重地影响着患者的生存质量.由于EMS的手术治疗效果不甚理想,术后又易于复发,因此药物治疗仍占重要地位[1].

    作者:陈雪聪;陆建萍 刊期: 2009年第22期

  • 熊去氧胆酸预防重型地中海贫血移植后肝静脉闭塞病

    目的:为探讨更好的重型地中海贫血(地贫)造血干细胞移植患者肝静脉闭塞病(VOD)预防方案,观察熊去氧胆酸联合小剂量肝素及前列腺素E脂质微球预防重型β-地中海贫血造血干细胞移植VOD的效果.方法:58例重型β-地中海贫血患儿接受异基因造血干细胞移植61次,所有患者从移植前开始至移植后20 d均给予肝素钠每日100~150 IU/kg,24 h微量泵维持静脉注射,前列腺E脂质微球每日1~1.5μg/kg,输液泵持续静脉输注10 h以上;研究组给予口服熊去氧胆酸[12 mg/(kg·d)],对照组则不给熊去氧胆酸,两组均用肝素及前列腺素E脂质微球至移植后第20天,以预防VOD.结果:研究组3例发生VOD(3/33,8.8%),对照组10例发生VOD(10/28,37.0%).两种预防方案在使用过程中均未出现明显的药物毒副反应.结论:熊去氧胆酸联合肝素及前列腺素E脂质微球预防重型β-地中海贫血造血干细胞移植后肝静脉闭塞病疗效更加显著.

    作者:吴学东;刘华颖;何岳林;冯晓勤;陈戈煜;石磊;苏清霞;孟凡义;李春富 刊期: 2009年第22期

  • 外周血造血干细胞体外保存的研究进展

    外周血造血干细胞移植(PBSCT)是目前治疗恶性血液病和多种实体瘤的有效方法.外周血造血干细胞的体外保存是PBSCT的重要组成部分.如何经济、高效地体外保存外周血造血干细胞,一直受到国内外的关注.现就有关外周血造血干细胞的体外保存技术的研究进展作一综述.

    作者:娄琳;陆志刚 刊期: 2009年第22期

  • 髋臼骨折的外科治疗进展

    髋臼骨折的治疗对于骨科医生依然是一大挑战.众所周知,切开复位内固定已经成为治疗移位髋臼骨折的金标准[1-4].本文拟对髋臼骨折的外科治疗及相关研究进展做一综述.

    作者:刘欣伟;王攀峰;张春才 刊期: 2009年第22期

  • 血浆置换联合大黄灌肠治疗对重型肝炎患者血清细胞因子的影响

    目的:观察血浆置换联合大黄灌肠治疗对重型肝炎患者血清细胞因子即肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及内毒素(LPS)的影响及其临床意义.方法:将收冶的76例重型肝炎患者分为两组,A组40例,给予常规内科治疗加人工肝血浆置换术:B组36例,在A组治疗基础上联合大黄煎剂灌肠治疗.于治疗前后检测两组患者血清TNF-α、IL-6、IL-8及LPS的浓度,并与健康体检者30例(C组)进行比较.结果:A、B两组治疗前TNF-α、IL-6、IL-8及LPS浓度均高于C组(P<0.01);治疗后A组和B组血清TNF-α、IL-6、IL-8、LPS水平均有所下降,其中B组治疗后血清TNF-α、IL-6、IL-8、LPS水平下降尤为显著(P<0.01),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:血浆置换联合大黄灌肠治疗能促进患者康复,并有纠正患者TNF-α、IL-6、IL-8及LPS紊乱之功效.

    作者:覃雪英;陆启峰;覃后继;陆春雷;丘海先 刊期: 2009年第22期

  • 单心室起搏升级为心脏同步化治疗1例

    患者男,56岁,于2007年1月本院门诊心电图检查提示为Ⅲ度房室传导阻滞(QRS 0.08s),当时患者无头晕、气短等症状,拒绝起搏器治疗.2007年3月患者因头晕于外院就诊,查心电图提示房颤伴Ⅲ度房室传导阻滞(QRS 0.08s),同时植入VVI心脏起搏器(右室心尖部),术前心超检查提示左室增大伴左室多壁段收缩活动减弱,轻中度二尖瓣、主动脉瓣反流,中度肺动脉高压伴中度三尖瓣反流,LVEF49%.

    作者:朱华;张瑜;邱建平 刊期: 2009年第22期

  • 罗哌卡因复合舒芬太尼用于剖宫产的麻醉效果

    目的:评价剖宫产术中应用罗哌卡因复合小剂量舒芬太尼的麻醉效果.方法:选择40例择期行剖宫产术的产妇,年龄20~40岁,ASA为Ⅰ~Ⅱ级,根据腰庥用药不同随机分为两组,每组20例,S组为罗哌卡因12mg+舒芬太尼4μg,R组为罗哌卡因14 mg.记录两组产妇感觉阻滞、运动阻滞情况,术中牵拉反应程度,术中低血压、心动过缓、恶心、呕吐、寒战及瘙痒等不良反应,新生儿出生后1 min和5 min Apgar评分.结果:两组术中血流动力学、Bromage评分、Apgar评分无区别.与R组比较,S组恶心、呕吐、寒战等不良反应发生率少、术中局麻药追加量明显减少、牵拉反应评分明显降低.但是S组瘙痒发生率明显高于R组.结论:罗哌卡因复合小剂量舒芬太尼,其感觉、运动阻滞起效时间缩短,且作用时间延长,能更好的抑制牵拉反应,麻醉效果优于单纯应用罗哌卡因,适合于剖宫产手术.

    作者:唐江华 刊期: 2009年第22期

  • 手部人工指关节置换术康复护理

    目的:探讨手部人工指关节置换术后,早期护理方案和后期护理康复功能训练的临床应用效果.方法:14例21指关节采用人工关节置换,术后早期局部护理观察、手指有限度的主动运动,后期局部专业的康复理疗、功能训练,积极开展健康教育.结果:术后患者无一例发生伤口感染,患者对手功能满意,均可以完成日常生活自理需要和胜任普通工作.结论:人工关节置换术是解决手部关节僵直的好方法,相对于其他大的人工关节置换,人工指关节置换术后的临床护理与康复训练更为重要.

    作者:王艺 刊期: 2009年第22期

实用医学杂志

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主管:广东省卫生厅

主办:广东省医学情报研究所