学术投稿

重组日本血吸虫亲环素B的克隆、表达及免疫分析

陈金桃;胡旭初

关键词:日本血吸虫, 亲环素B, 原核表达
摘要:目的 克隆、表达日本血吸虫亲环素B(SjCyPB)基因,鉴定并分析重组蛋白的免疫性.方法 根据Genbank中日本血吸虫序列设计一对特异性引物,以日本血吸虫cDNA为模板扩增SjCyPB基因,酶切后连接到表达载体pET28,构建pET28a(+)-SjCyPB重组质粒,转化入感受态大肠杆菌BL21/DE3后对质粒进行双酶切和测序鉴定.IPTG诱导表达后,经亲和层析纯化重组蛋白.采用Western Blotting分析鉴定重组蛋白的抗原性.将纯化的重组蛋白免疫大鼠,获得免疫血清,ELISA检测抗SjCyPB特异性抗体滴度.结果 构建的pET28a(+)-SjCyPB重组质粒经双酶切和测序鉴定证实SjCyPB基因成功连接到pET28a(+)质粒中.经原核表达后获得纯化的重组蛋白,Western Blotting结果显示,该重组蛋白可与感染日本血吸虫的兔血清结合形成明显的条带.采用ELISA检测重组蛋白免疫后大鼠免疫血清的特异性IgG抗体滴度为1:51 200.结论 成功克隆了日本血吸虫CyPB基因,并获得大量纯化的重组蛋白,重组SjCyPB具有免疫原性和抗原性.
国际检验医学杂志相关文献
  • 慢性粒细胞白血病患者骨髓中白血病相关巨噬细胞的表达及意义

    目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓中巨噬细胞的表达及在CML发病中的作用,明确其临床意义.方法 采用免疫组织化学染色法检测CML慢性期(CML-CP组)30例、加速期(CML-AP组)21例、急变期(CML-BP组)15例、经治疗后缓解患者44例、未缓解患者7例及30例非血液系统恶性疾病患者骨髓组织中CD68、CD163、CD206的表达变化,比较骨髓巨噬细胞在CML患者不同时期骨髓组织中的表达差异.结果 CML各组患者骨髓组织中CD68、CD163、CD206的表达明显高于对照组及缓解组,CML-BP组患者高于CML-AP组,CML-AP组高于CML-CP组,且差异均有统计学意义(P<0.01);缓解组CD68虽高于对照组但差异无统计学意义(P>0.05),而CD163、CD206仍高于对照组,且差异均具有统计学意义(P<0.01),未缓解组与CML-BP组相比有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);在对照组中CD163和CD206表达明显低于CD68的表达,且差异具有统计学意义(P<0.01),同时,CML-CP组、CML-AP组、CML-BP组、缓解组、未缓解组中CD163与CD68阳性细胞数密切相关(P<0.01),CD68的阳性细胞数略高于CD163,但差异无统计学意义(P>0.05);而在CML疾病的同一时期CD163、CD206的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 巨噬细胞在CML患者骨髓中具有较高的浸润密度,并随着病情的进展逐渐向M2型极化,且在CML不同时期浸润密度不同,与CML的发生、发展密切相关,同时也可能是CML患者复发的原因之一.而在骨髓组织中CD163、CD206均可作为识别M2型巨噬细胞的标志物.

    作者:宋建新;欧阳红梅;汤一菲;蒋雅先;闻艳;梅芬;甸自金;撒亚莲 刊期: 2017年第01期

  • 血清抗苗勒氏管激素检测在多囊卵巢综合征中的临床应用

    目的 评价分析抗苗勒氏管激素(AMH)检测在多囊卵巢综合征中的临床应用价值.方法 分别检测480例多囊卵巢综合征(PCOS)患者和500例健康女性的抗苗勒氏管激素(AMH),比较AMH在PCOS患者和健康人群中的结果.结果 p-COS患者组血清AMH、血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)明显高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05);而雌二醇(E2)促卵泡激素(FSH)与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);随着年龄的增加,AMH水平呈显著下降趋势.结论 AMH水平在p-COS患者中显著高于健康者,并且AMH的水平随着年龄的增加而下降.

    作者:徐金龙;王依屹;蒋国静;张珏 刊期: 2017年第01期

  • 汕头市新生儿先天性甲状腺功能减低症TSH筛查切值的研究

    目的 探讨建立汕头地区诊断新生儿先天性甲状腺功能减低症(CH)促甲状腺素(TSH)切值的方法.方法 时间分辨荧光法检测2013年1月至2015年12月汕头地区90 798例新生儿足跟血的TSH水平.百分位数法及ROC曲线确立TSH筛查切值.结果 90 798例新生儿TSH筛查频数呈现偏态分布,TSH平均水平为(2.38±2.12) mU/L;范围0.0~324.2 mU/L;P9o为3.46 mU/L;P95为4.63 mU/L;P99为8.88 mU/L;汕头地区CH发病率为1/2 974;P99百分位法TSH诊断切值8.88mU/L,ROC曲线法诊断切值8.49 mU/L,召回率经χ2检验分析,P99百分位法与ROC曲线差异无统计学意义(χ2=0.965,P=0.326),P..百分位法与试剂盒差异有统计学意义(χ2=10.861,P=0.001);ROC曲线与试剂盒差异有统计学意义(χ2=5.450,P=0.020);P99百分位法、ROC曲线法灵敏度均为100.0%,P99百分位法Youden指数为0.969、特异度为96.9%,稍占优.结论 P99百分位法确立的TSH筛查切值更适合临床新生儿疾病的筛查工作.

    作者:谢洁娜;张延玮;郭书邑 刊期: 2017年第01期

  • 人附睾分泌蛋白4对判断卵巢癌复发中的应用

    目的 在诊断卵巢癌复发的过程中应用人附睾分泌蛋白4(HE4),分析和探讨其诊断的特异度和敏感度.方法 选取来该院就诊的40例疑似巢癌复发患者作为本研究的观察组,同时选取40例良性卵巢肿瘤患者作为对照组.所有疑似巢癌复发患者均进行病理检查,2组患者均在在手术的前1d抽取血液,分别进行血清HE4和糖类抗原125(CA125)水平的检测,比较2组患者血清HE4和CA125水平以并分析其诊断卵巢癌的特异度和敏感度.结果 观察组患者的CA125中位数(184.70±20.23)kU/L和HE4平均水平(225.80±19.98)pmol/L均明显高于对照组水平,且血清HE4水平对诊断卵巢癌的特异度和灵敏度分别为97.00%和85.00%明显高于CA125的特异度和灵敏度(67.00%,80.00%),差异具有统计学意义(P<0.05).结论 相比CA125而言,HE4对于诊断卵巢癌复发有较高的特异度和敏感度,且安全可靠,无创方便,可在临床上进行广泛应用.

    作者:黄少兴;叶映红 刊期: 2017年第01期

  • 强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪性能验证报告

    目的 对强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪主要分析性能进行验证.方法 根据实验室认可准则和美国CLIA'88性能验证文件,对强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪上开展的17介常规生化项目进行精密度、准确度、线性范围、临床可报告范围和生物参考区间进行验证.结果 强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪精密度、准确度、线性范围、临床可报告范围和生物参考区间验证等均符合要求.结论 强生VITROS 5600全自动生化免疫分析仪检测性能完全满足预期的临床应用要求.

    作者:于淼琛;孙芹敏;姜凤全 刊期: 2017年第01期

  • 平行诊断试验监测疟疾流行区归国人员疟原虫感染者的性能评价

    目的 评价厚血涂片和疟原虫快速检测(RDT)组成的平行诊断试验用于疟疾流行区归国人员疟原虫感染监测的性能.方法 使用厚血涂片、RDT和巢氏PCR分别检测长沙市4家涉非洲劳务派遣单位归国人员静脉血484份,对检测结果进行统计分析.结果 单独使用厚血涂片和RDT的敏感度分别为0.628和0.744,平行试验的敏感度可达到0.930;平行诊断试验ROC曲线下面积为0.930(95%CI:0.895~0.986),高于厚血涂片的0.814(95%%CI:0.724~0.904)和RDT的0.847(95%CI:0.769~0.926).结论 厚血涂片和RDT组成的平行试验可以有效提高对疟疾流行区归国人员疟原虫感染者监测敏感度和准确度,值得推广应用.

    作者:文岚;田斌;申晓君;廖瑜;张兵 刊期: 2017年第01期

  • 同室2台全自动生化分析仪常规项目检测结果比对和偏差评估

    目的 通过对本实验室OIYMPUS AU640和BECKMAN AU5821全自动生化分析仪部分项目检测结果进行比对和偏差评估,探讨2台生化分析仪检测结果是否具有可比性.方法 参考美国临床实验室标准化委员(NCCLS)的EP9-A2文件要求,分别在2台仪器上测定新鲜临床混合血清和质控血清,以OLYMPUS AU640为参考仪器,BECKMAN AU5821作为比对仪器,利用相关回归分析和配对t检验对相同项目的检测结果进行比对和偏差评估,以美国临床实验室改进修正案能力验证(CIIA'88)允许总误差的1/2为标准,评价检测结果是否具有可比性.结果 2台生化分析仪的大部分检测结果具有较好的一致性.结论 通过对不同生化分析仪测定结果进行比对和偏差分析,可以验证相同项目检测结果间的相关性,有助于对仪器评价、校正,以满足临床需求.

    作者:谢宝森 刊期: 2017年第01期

  • 血浆总tau蛋白和磷酸化tau蛋白在阿尔茨海默病中的诊断意义

    目的 探讨血浆总tau(T-tau)蛋白和磷酸化tau(P-tau)蛋白在阿尔茨海默病(AD)中的诊断意义.方法 以天津市北辰区某社区服务中心≥60岁的22 352例体检者作为调查对象,运用随机整群抽样方法,先采用简易智力状态检查量表(MMSE)和日常生活能力评定表(ADL)进行认知功能和日常能力的评分,评分低于标准者再使用Hamilton抑郁量表和Hachins-ki缺血量表进行诊断性评分,相关的实验室检查排除其他中枢神经系统,以及其他系统和物质原因等所致的痴呆患者,终由神经内科医师确诊AD患者105例,将无中枢神经系统疾病、无痴呆的非神经系统疾病患者作为健康对照组,共42例.采用ELISA方法检测两组受试者的血浆T-tau蛋白和P-tau蛋白水平.结果 AD组和健康对照组血浆T-tau和P-tau蛋白水平比较,AD组血浆T-tau水平(15.93±6.59)ng/L高于健康对照组(14.10±6.32)ng/L,但差异无统计学意义(P>0.05);AD组血浆P-tau蛋白水平(1.26±0.75)ng/L高于健康对照组(0.69±0.24)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05).结论 血浆磷酸化tau蛋白水平可能对AD患者具有辅助诊断价值.

    作者:康建华;杨立顺;李娜 刊期: 2017年第01期

  • 2种尿液分析仪与显微镜检测尿液白细胞的对比分析

    目的 探讨UF-1000i尿细胞分析仪(UF-1000i)、MA-4280KB干化学尿液分析仪(尿干化学)与显微镜法(镜检法)对尿液中白细胞检测结果的差异及原因.方法 对622例尿液标本用UF-1000i、尿干化学及镜检法同时进行白细胞检测并对比分析.结果 UF-1000i与干化学对白细胞的检测差异无统计学意义(P>0.05),而两者与镜检法结果比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 3种方法测定尿液白细胞结果有一定差异,在临床工作中,联合应用可提高检测结果的准确性.

    作者:宋尉;宋翠梅 刊期: 2017年第01期

  • DNA倍体分析在浆膜腔积液诊断中的应用

    目的 探讨全自动细胞DNA倍体分析系统在良、恶性浆膜腔积液诊断中的应用价值.方法 262例浆膜腔积液标本(胸腔积液169例、腹水78例、心包积液15例)经离心处理后,制片2张,其中1张用于Feulgen染色后,给予全自动细胞DNA倍体分析,另1张用于巴氏染色,同样给予常规的细胞学检查,比较2种不同的检测方法对恶性浆膜腔积液的阳性检出率.结果 262例浆膜腔积液常规细胞学检测出119例(45.4%)异常,而同样标本中DNA倍体分析检测出113例(43.1%)异常,常规细胞学找到肿瘤细胞及可疑肿瘤细胞73例标本,均发现异倍体细胞的存在,而在常规细胞中找到核异质细胞的46例中,仅有34例出现异倍体细胞.结论 全自动细胞DNA倍体分析系统有助于提高浆膜腔积液的阳性检出率,可作为细胞学检查的重要辅助手段.

    作者:刘娑 刊期: 2017年第01期

  • 溶血和乳糜血对PT和APTT测定干扰的评价

    目的 依据美国临床实验室标准化协会(CLSI) EP7-A2文件评价溶血和乳糜血对凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)测定的干扰.方法 按照“配对差异”方案,配置含不同浓度血红蛋白(Hb)和不同浊度的乳糜的正常及高值PT和APTT标本,进行干扰评价试验.结果 正常水平的PT和APTT不受Hb和乳糜浊度的干扰.当Hb≥2.55 g/L时,Hb对高值APTT测定产生负干扰,并呈线性函数关系,Hb≥10.20 g/L时对高值PT有干扰;当乳糜浊度≥745 FTU时,乳糜血对高值PT测定产生正干扰,呈线性函数关系;高值APTT测定不受乳糜血干扰.结论 中度溶血对高值APTT干扰明显,重度溶血对高值PT测定有干扰;中度乳糜血对高值PT干扰明显;正常水平的PT和APTT不受溶血和乳糜血的干扰,高值APTT不受乳糜血干扰.

    作者:张海涛;赵宝鹤;张吉奎;杨亚轩;高文育;徐福海;郑福和;于水江;王华新 刊期: 2017年第01期

  • microRNA检测方法的优缺点评价

    microRNA是由Lee等[1]在1993年首次报道存在的,他们对线虫体进行了全基因组扫描研究,以此来寻找对秀丽隐杆线虫的幼虫起重要作用的基因.后发现线虫的发育出现障碍是由于一种被命名为lin-4的基因发生了变异.但是这项发现在当时并没有被人们引起足够的重视.直到2000年,Reinhart等[2]在线虫研究中报道了第二种被发现的microRNA分子let-7microRNA,这才引起了人们的密切关注.此后,上万种不同的microRNA分子在植物、动物和病毒中被发现,其中在人类细胞中也发现了2 000多种,所占人类基因组的比重是1%,调控着体内30%的基因表达.

    作者:祁双 刊期: 2017年第01期

  • 制备时间及亚甲蓝光化学处理对血浆凝血因子影响的研究

    目的 探讨血浆制备时间及亚甲蓝光化学处理的联合效应对新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ(FⅧ)及纤维蛋白原水平的影响.方法 按相同的血型比例随机分为2个实验组,两组在不同的时间段内完成血浆分离、亚甲蓝光化学灭活处理,检测灭活前后纤维蛋白原和FⅧ的水平及回收率,并把相对应的两组数据进行比较分析.结果 经亚甲蓝光化学法灭活后新鲜冰冻血浆中Ⅷ因子和纤维蛋白原水平下降,与灭活前对比差异有统计学意义(P<0.05),但FⅧ回收率与纤维蛋白原回收率两组比较差异无统计学意义(P>0.05);FⅧ回收率和纤维蛋白原回收率的Pearson相关系数为0.58.结论 血浆制备时间及亚甲蓝光化学处理对新鲜冰冻血浆凝血因子存在影响,两者联合效应主要反映在FⅧ水平减少上,FⅧ回收率和纤维蛋白原回收率之间没有明显相关性.

    作者:易峰;袁文声;何锐洪;林惠燕 刊期: 2017年第01期

  • Nordertest准则评价13项生化检测项目的测量不确定度

    目的 评价13项生化检测项目的测量不确定度.方法 收集甘肃省天水市第三人民医院检验科2014年13项生化检测项目的室间质评结果与2014年7-12月实验室室内质控数据,利用Nordertest准则计算与偏倚和精密度有关的不确定度分量,然后评估合成标准不确定度和扩展不确定度.结果 13项检测指标中,碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、清蛋白(Alb)、总胆红素(TBil)、尿素氮(UREA)、三酰甘油(TG)、Ca等项目的扩展不确定度值超出了目标不确定度要求.丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰氨基转移酶(Υ-GT)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、葡萄糖(GLU)等项目的扩展不确定度值符合目标不确定度要求.结论 Nordertest准则评价实验室测量不确定度时简便可行,适用于评估常规检测项目结果的测量不确定度.

    作者:汪旭强;方洁芸 刊期: 2017年第01期

  • 血清前列腺特异性抗原对前列腺良恶性肿瘤诊断的临床应用

    目的 研究血清前列腺特异性抗原(tPSA)、复合前列腺特异性抗原(cPSA)及cPSA/tPSA比值(C/T)在前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)鉴别诊断中的应用.方法 收集2009年5月至2015年12月该院门诊和住院患者血清共184例,其中BPH组患者80例,PCa组患者36例,其他疾病组患者68例.化学发光法检测tPSA、cPSA浓度,计算C/T值,比较3组的tP-SA、cPSA浓度和C/T值.结果 PCa组血清tPSA、cPSA浓度及C/T值均高于其他疾病组和BPH组,且差异具有统计学意义(P<0.01);而BPH组和其他疾病组的C/T值差异无统计学意义(P>0.05);PCa组的tPSA和cPSA浓度相关性好,回归方程为cPSA=0.708×tPSA-0.219,且相关系数(r=0.956)高于BPH组的tPSA和cPSA浓度相关系数(r=0.651);血清tPSA浓度在4.0~10.0 ng/mL灰区内各组间血清tPSA、cPSA浓度和C/T值差异无统计学意义(P>0.05).结论 联合检测血清tPSA、cPSA浓度并计算C/T值,在鉴别诊断前列腺良恶性肿瘤中具有重要意义.

    作者:胡海强;朱雪萍;宋捷;潘慧娟;张玉娜 刊期: 2017年第01期

  • PDCA循环法缩短急诊检验报告回报时间的研究

    目的 应用PDCA循环法提高急诊检验报告回报时间的合格率.方法 统计2014年9-12月472例急诊检验报告(血常规、血生化、凝血、尿液分析、脑脊液)回报时间的不合格率,分析原因并采取措施降低急诊检验报告回报时间的不合格率,同时统计改善后2015年7-11月654例急诊检验报告的回报时间的不合格率,并比较改进措施前后的变化.结果 通过采取相应的措施,急诊检验报告的回报时间总的不合格率由13.9%下降到4.9%;凝血、血生化、尿液分析、血常规、尿液分析、脑脊液的不合格率分别由18.2%、16.2%、10.3%、9.1%、6.7%下降到5.2%、5.0%、6.4%、3.9%、5.0%.结论 应用PDCA循环法对急诊检验报告时间符合率进行了质量管理,尽可能在在短时间内高质量、高效率地完成急诊检测并报告检测结果.

    作者:褚志华;陆光辉;刘国生;周维;周发为 刊期: 2017年第01期

  • 复发性自然流产夫妇染色体核型的检验分析

    目的 探讨复发性自然流产与染色体核型之间的相关性,为临床自然流产的诊治提供参考依据.方法 选取2010年3月至2013年3月该地区51对夫妇外周血进行淋巴细胞培养,均进行染色体核型分析,观察染色体异常分布情况,同时比较流产次数和染色体之间相关性.结果 51对102例受试者中,复发性自然流产(RSA)患者染色体异常32例(31.37%),其中以多态变异比率高,占染色体异常数的56.25%,占总数的17.65%,明显高于其他染色体异常率,且与其他变异比较,差异具有统计学意义(P<0.05);RSA和染色体异常核型中男10例(31.25%),女22例(68.75%);女性显著高于男性,且差异具有统计学意义(P<0.05);其中以多态变异常见,占56.25%;染色体多态性中以46XY(Y≥18)发生率高,占33.33%,流产次数高,占30.77%;RSA次数和染色体异常率中以流产3次异常率高,占43.48%.结论 染色体异常是复发性流产的一个重要因素,复发性流产不仅和染色体结构有关,同时和染色体多态性变异也有一定关联性.

    作者:吴亚敏;李超强;黎丽芬;伍春蓉 刊期: 2017年第01期

  • 血清肌酸激酶同工酶活性大于肌酸激酶的病例分析

    目的 对血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性大于肌酸激酶(CK)的病例进行回顾性分析,为CK-MB活性的临床应用提供参考依据.方法 CK-MB>CK组患者及对照组进行CK-MB、CK项目检测,并对结果进行分析;CK-MB采用免疫抑制法;血清CK采用速率法.结果 CK-MB> CK组血清CK-MB、CK活性显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),且CK-MB>CK组,在统计的7种疾病中,CK-MB超出参考范围至少是5倍以上,CK结果在参考范围上限或轻度升高.其中小儿肺炎和小儿轮状病毒性肠炎比例高,其次是急性脑血管病、恶性肿瘤.结论 血清CK-MB活性大于CK在恶性肿瘤、急性脑血管病、小儿肺炎、小儿轮状病毒性肠炎、带状疱疹、有机磷中毒等疾病中存在.

    作者:朱文秀;杨桂英 刊期: 2017年第01期

  • 黑龙江某院临床分离病原菌的分布及耐药性分析

    目的 回顾性分析黑龙江省某院2016年1月1日至2016年3月31日临床分离病原菌的分布和耐药特点,为临床抗菌药物的使用提供依据.方法 采用H H.CP-01W二氧化碳培养箱及BACT/ALERT 3D全自动血培养仪进行标本培养,使用黑马DL-96鉴定系统进行菌株鉴定和药敏试验.结果 送检的5 285份标本共分离病原菌825株,其中革兰阴性菌496株,占60.1%;革兰阳性菌268株,占32.4%;念珠菌61株,占7.4%.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)占金黄色葡萄球菌56.9%,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCON)占凝固酶阴性葡萄球菌56.0%,未检出对万古霉素和利奈唑胺耐药的阳性菌.结论 严格执行标本的前处理过程有助于提高标本的阳性检出率,临床医师在经验用药的基础上应重视药敏监测结果,严格用药指征,从而做到合理应用抗菌药物.

    作者:栾艳淼;张海云;李庆阳 刊期: 2017年第01期

  • 重庆某二甲医院痰涂片结果与培养结果的分析

    目的 对痰涂片结果和培养结果之间的关系进行分析,提高痰标本合格率和培养阳性率.方法 对2015年该院送检的431份痰标本作革兰染色涂片镜检,并与培养结果进行比较分析.结果 142份合格标本,培养阳性率为67.6%;145份可接受合格标本,培养阳性率49.7%;144份不合格标本培养阳性率27.8%.结论 革兰染色涂片镜检合格的痰标本,病原菌检出率远高于不合格标本;痰涂片提高培养的阳性率,减少培养结果的误差.

    作者:姚蓓;张丽丽 刊期: 2017年第01期

国际检验医学杂志

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主管:重庆市卫生局

主办:重庆市卫生信息中心