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蛇毒心脏毒素诱导肺癌A549细胞的凋亡机制研究

李凤君;袁进;韩丽萍;蒋琳兰;李玉华

关键词:A549细胞, 眼镜蛇蛇毒, 心脏毒素, 凋亡
摘要:目的:研究眼镜蛇心脏毒素(CTX)诱导肺癌A549细胞凋亡的机制.方法:MTT法测定CTX体外细胞毒性作用;吉姆萨染色法观察CTX对A549细胞形态学的影响;线粒体膜电位(JC-1)法检测CTX诱导A549细胞后细胞JC-1的变化;流式细胞仪检测CTX对A549细胞凋亡的影响;Western blot法测定细胞色素C、凋亡蛋白酶前体(Procaspase)-3、Procaspase-9的表达;通过S180小鼠肉瘤模型检测CTX体内抗肿瘤活性.结果:CTX作用于A549细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.770 μg/ml;0.5、1.0、2.0 μg/mlCTX可引起A549细胞明显缩小,在高倍镜下可观察到胞核皱缩,形成染色质边集等形态学改变;流式细胞仪检测到CTX使A549细胞出现凋亡,并且具有量效关系;5 μg/ml CTX作用于A549细胞0.5 h可使细胞JC-1降低;胞浆中检测到细胞色素C时,Procaspase-9的含量没有明显变化,随后逐渐减少,CTX诱导细胞凋亡具有时效关系;体内抑瘤实验显示在剂量为0.5、1.0、2.0 mg/kg时CTX对A549细胞有明显的抑制作用.结论:CTX对A549细胞有细胞毒性,可以使线粒体内细胞色素C释放,并激活Procaspase-9和Procaspase-3诱导A549细胞的凋亡.
中国药房杂志相关文献
  • 白术茯苓汤中用生白术或熟白术对湿困脾阻模型大鼠的影响

    目的:研究白术茯苓汤中用生白术或熟白术对湿困脾阻模型大鼠的影响.方法:复制大鼠湿困脾阻模型.50只SD大鼠分为正常对照(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、白术茯苓汤(生,8 g/kg)组、白术茯苓汤(熟,8gag)组、平胃散(8g/kg)组.测量大鼠体质量、腹围、腿围、平均进食量、饮水量,检测大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性,神经降压素(NT)、P物质(SP)、血管活性肠肽(vIa)含量.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠体质量减少,腹围、腿围增加,平均进食量、平均饮水量减少,差异有统计学意义(P<0.05);大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性减弱,SP含量减少,NT、VIP含量增加,差异有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,白术茯苓汤(生)组大鼠体质量增加、腹围减少,平均进食量、平均饮水量增加,差异有统计学意义(P<0.05);大鼠血清Na+-K+-ATP酶活性增强,NT、VIP含量减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:生白术之白术茯苓汤对湿困脾阻模型大鼠的保护作用较熟白术之白术茯苓汤为好,其作用机制可能是通过同时调节Na+-K+-ATP酶、NT及胃肠激素(SP、VIP)的分泌而达到治疗湿困脾阻的目的,白术茯苓汤中的生白术不可用熟白术替代.

    作者:吴慧;赵文龙;单国顺;贾天柱 刊期: 2014年第07期

  • 木瓜总黄酮抗肿瘤活性研究

    目的:研究木瓜总黄酮抗肿瘤活性.方法:通过乙醇-正丁醇萃取方法提取木瓜总黄酮;通过分子药物筛选模型、酶联免疫法检测木瓜总黄酮对免疫共刺激分子程序性死亡因子(PD)-1与其配体(PD-L1)结合的抑制作用.通过H22肿瘤细胞模型小鼠,观察木瓜总黄酮对模型小鼠体内肿瘤体积与存活时间的影响;流式细胞仪测定小鼠腹水中肿瘤细胞及淋巴细胞表面相关分子的表达.结果:正丁醇馏分中木瓜总黄酮占85%.木瓜总黄酮具有抑制PD-1和PD-L1结合的作用,且抑制效率具有剂量依赖性.木瓜总黄酮在复制模型10d后对模型小鼠体内肿瘤有明显抑制作用;对S180细胞表面PD-L1表达具有明显抑制作用,对体内淋巴细胞侵润有明显增强作用.结论:木瓜总黄酮可以抑制PD-1与PD-L1的结合,同时可降低肿瘤细胞表面PD-L1的表达从而促进机体对肿瘤的免疫应答,终达到抑制肿瘤生长,提高肿瘤鼠存活率的作用.

    作者:刘爱华;田慧群;覃晓琳;覃玉娥 刊期: 2014年第07期

  • 羟丙基-β-环糊精对二氢杨梅素增溶作用的研究

    目的:研究羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)对二氢杨梅素(DMY)的增溶作用.方法:采用摩尔比率法和相溶解度法测定HP-β-CD与DMY在水溶液中的包合比及包合过程中热力学参数的变化.结果:DMY的溶解度随HP-β-CD浓度的增加而呈线性增加趋势,相溶解度图显示,二者可形成包合比为1∶1的包合物;热力学参数显示,该包合反应可自发进行,且为放热反应,升温对包合不利,包合后体系更加有序.结论:HP-β-CD可增加DMY的溶解度,适当的温度和pH对包合反应至关重要.

    作者:高梦;刘建兰;郑红岩;刘同方;于华忠 刊期: 2014年第07期

  • 多波长HPLC法同时测定复方黄白胶囊中3种成分的含量

    目的:建立同时测定复方黄白胶囊中绿原酸、栀子苷和芍药苷3种成分含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为ZORBAX Eclipse SB-C8(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-2‰磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,柱温为30℃,绿原酸、栀子苷和芍药苷的检测波长分别为327、240和232 nm.结果:绿原酸、栀子苷和芍药苷的进样量分别在0.02~0.19、0.09~0.84和0.11~1.01 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r分别为0.999 7、0.999 8、0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3%;平均加样回收率分别为99.6%、101.0%和100.2%,RSD分别为1.3%、0.7%和1.4%(n均为6).结论:所建方法可用于复方黄白胶囊中3种成分的含量测定.

    作者:方芳;王晶;方舟;雷力力;孟繁颍;方洪壮 刊期: 2014年第07期

  • 响应面分析法优选南方红豆杉中多糖的提取工艺

    目的:优选南方红豆杉中多糖的提取工艺.方法:以多糖提取率为评价指标,以pH、提取时间、提取温度、液料比为考察因素,采用单因素试验与响应面分析相结合的方法,优选南方红豆杉中多糖的提取工艺.结果:佳提取工艺为设定pH为5,提取时间为20 min,提取温度为60℃,液料比为30∶1(V/V);在该工艺条件下,多糖提取率为0.68%.结论:所选工艺合理、可行,可用于南方红豆杉中多糖的提取.

    作者:孔繁晟;李日许;蔡焕哲;陈泽丹;洪锐涛 刊期: 2014年第07期

  • 液固压缩技术对α-细辛脑溶出的影响

    目的:探讨液固压缩技术对α-细辛脑溶出的影响.方法:采用液固压缩技术制备α-细辛脑液固压缩片(液体赋形剂为吐温80或聚乙二醇400,载体材料为PH-101微晶纤维素,涂层材料为微粉硅胶200),与市售细辛脑片在片剂质量和溶出度方面进行比较.结果:α-细辛脑液固压缩片中α-细辛脑在短时间内迅速溶出,5 min时达到80%以上,是市售细辛脑片溶出度的3倍,且崩解时限均<100 s.结论:液固压缩技术对难溶性药物α-细辛脑的溶出有一定帮助.

    作者:赵许杰;闫雪生 刊期: 2014年第07期

  • 丹参的药理作用研究新进展

    目的:为进一步研究丹参的药理作用提供参考.方法:查阅2010-2013年国内关于丹参药理作用的文献,从药理作用及其机制等方面进行归纳、总结.结果与结论:丹参在改善脑缺血再灌注损伤、改善血液流变学及血小板功能、保护心血管系统、保护听力等方面有多环节、多途径、多靶点的作用.但是目前的研究主要集中在丹参中单体成分方面,今后可在中医辨证论治、整体观念指导下,对丹参中各成分间相互作用作进一步研究.

    作者:马丙祥;董宠凯 刊期: 2014年第07期

  • 正交试验优选白芷中总香豆素的超声提取工艺

    目的:优选白芷中总香豆素的超声提取工艺.方法:以香豆素得率和香豆素纯度为指标,以超声功率、提取时间、提取温度、占空比和液固比为考察因素,采用正交试验优选白芷中总香豆素的超声提取工艺.结果:优选工艺为超声功率800W,提取时间20 min,提取温度50℃,占空比5∶1,液固比40∶1(ml/g);在该工艺条件下,香豆素得率为0.236%,纯度为11.69%.结论:所选工艺稳定、可行,可用于白芷中总香豆素的超声提取.

    作者:邱婧然;王志祥;周黎明 刊期: 2014年第07期

  • 注射用姜黄素温敏凝胶体内外抗肿瘤实验研究

    目的:研究注射用姜黄素温敏凝胶体外对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCA-F)增殖的抑制作用和体内对移植瘤模型小鼠的保护作用.方法:培养HCA-F细胞株,MTT法测定10、25、50、75、100 μg/ml注射用姜黄素温敏凝胶、氟尿嘧啶、姜黄素混悬液对HCA-F细胞增殖的抑制作用.抽取腹水型肝癌模型小鼠腹水接种于小鼠腋下以复制小鼠移植瘤模型.50只小鼠随机均分为模型(等容生理盐水)组、空白温敏凝胶(ETH,0.05 ml/cm3))组、无水乙醇(0.05 ml/cm3)组、姜黄素混悬液(0.05 ml/cm3)组、注射用姜黄素温敏凝胶(0.05 ml/cm3)组,瘤内注射给药,每隔5d1次,连续2次.测定小鼠瘤体增长体积、瘤质量、抑瘤率,HE染色检测肿瘤细胞凋亡情况.结果:培养细胞48h时,25、50、75、100 μg/ml注射用姜黄素温敏凝胶对HCA-F细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05);培养细胞72 h时,10、25、50、75、100 μg/ml注射用姜黄素温敏凝胶对HCA-F细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05).与模型组比较,注射用姜黄素温敏凝胶组小鼠瘤体体积增长程度明显减小,瘤质量明显减轻,抑瘤率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);注射用姜黄素温敏凝胶组小鼠肿瘤细胞凋亡情况明显改善.结论:注射用姜黄素温敏凝胶在体外对HCA-F增殖具有一定的抑制作用,且体内效果与无水乙醇相当,但小鼠的顺应性较无水乙醇好.

    作者:高萌;蒋妮;徐红;张成鸿;关欣;李磊;李镇;田燕 刊期: 2014年第07期

  • 木犀草素对肝星状细胞迁移和增殖的影响

    目的:研究木犀草素对肝星状细胞迁移的影响.方法:体外培养肝星状T6(HSC-T6)细胞,细胞计数Kit8(CCK-8)法检测0、10、20、40 μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞增殖的影响;通过划痕实验、Transwell实验观察0、10、20、40 μmol/L木犀草素对HSC-T6细胞迁移能力的影响;蛋白印迹法检测木犀草素对细胞外信号调节激酶(ERK)5蛋白磷酸化水平的影响.结果:20、40 μnol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05);10、20、40 μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞划痕的修复(P<0.05);10、20、40 μmol/L木犀草素能明显抑制HSC-T6细胞穿膜(P<0.05);10、20、40 μmol/L木犀草素能明显抑制细胞中由血清诱导的去磷酸化(p)-ERK5表达(P<0.05).结论:木犀草素呈浓度依赖性抑制HSC-T6细胞的增殖和迁移,其机制可能与抑制ERK5蛋白磷酸化水平有关.

    作者:李婕;李星霞;霍炎;杨全军;郭澄 刊期: 2014年第07期

  • 百合皂苷的提取工艺与抗抑郁作用研究

    目的:研究百合皂苷的提取工艺与抗抑郁作用.方法:以乙醇体积分数、乙醇用量、提取时间为考察因素,以百合皂苷提取率为指标,通过L9(34)正交试验优选百合皂苷提取工艺.将小鼠分为正常对照(等容生理盐水)组、氟西汀(0.004 g/kg)组与百合皂苷高、中、低剂量(0.100、0.050、0.025g/kg)组.悬尾实验和强迫游泳实验均记录小鼠4min内不动时间;拮抗利血平降低小鼠体温实验中记录复制模型4h后小鼠体温.结果:百合皂苷佳提取工艺为加入l倍量的70%乙醇,提取3h.与正常对照组比较,百合皂苷提取物高、中剂量组小鼠4min内悬尾不动时间、游泳不动时间均缩短,差异均有统计学意义(P<0.05);复制模型4h后小鼠体温变化减小,差异有统计学意义(P<0.05).结论:百合皂苷具有一定的抗抑郁作用.

    作者:王瑛 刊期: 2014年第07期

  • 清开灵注射液溶血实验新方法与传统方法的比较研究

    目的:寻找一种更客观反映清开灵注射液溶血情况的方法.方法:通过体外肉眼观察(传统方法)与体内溶血实验(新方法)比较,评价9个生产企业18批清开灵注射液溶血情况.结果:体外肉眼观察法下18批供试品结果均为阴性,体内溶血实验下18批供试品中15批为阴性结果,3批为可疑阳性结果.体内、外溶血实验方法的结果一致率达83.3%.结论:清开灵注射液体内溶血实验结果与体外肉眼观察法结果存在相关性,且体内法优于体外法.

    作者:樊华;康强;林鹏;王秀英 刊期: 2014年第07期

  • 正交试验优选小豆蔻挥发油的提取及β-环糊精包合工艺

    目的:优选小豆蔻挥发油的提取及β-环糊精包合工艺.方法:采用水蒸气蒸馏法进行提取,以粉碎粒度、加水量、蒸馏时间为考察因素,以挥发油质量分数为评价指标;包合工艺以β-环糊精与挥发油配比(g∶ml)、包合温度、包合时间为考察因素,以包合物收得率、挥发油包合率为评价指标,均采用正交试验优选工艺.结果:优选的提取工艺为小豆蔻饮片直接加10倍量水,提取6h;包合工艺为挥发油∶β-环糊精=1∶6(ml∶g),包合温度为60℃,包合时间为2h.结论:所选工艺合理、可行,可用于提取小豆蔻中挥发油以及挥发油与β-环糊精的包合.

    作者:常占瑛;刘桂花;高晓黎;寇耀红 刊期: 2014年第07期

  • 余甘子醇提物不同萃取部位对人消化道常见菌的抑制作用研究

    目的:研究余甘子醇提物4种不同萃取部位对人消化道常见菌的抑制作用.方法:采用管碟法进行余甘子醇提物及醇提物中石油醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、水部位对大肠杆菌的抑菌试验,测量其抑菌圈直径以确定佳抑菌部位,二倍稀释法测定低抑菌浓度(MIC).采用宏量肉汤稀释法(试管法)进行余甘子醇提物佳抑菌部位对消化道菌群的抑菌试验,测定其MIC.结果:余甘子醇提物对大肠杆菌的MIC为0.625 mg/ml.余甘子醇提物乙酸乙酯部位为佳抑菌部位,其对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、变形杆菌、沙门氏菌的MIC均为2.5 mg/ml,对肺炎链球菌的MIC为0.625 mg/ml,对大肠杆菌和产气荚膜杆菌的MIC均为1.25 mg/ml,对破伤风杆菌的MIC为0.156 mg/ml.结论:余甘子醇提物乙酸乙酯部位对消化道常见菌群有较强的抑制作用.

    作者:罗兰;余阿妹;林坤鑫 刊期: 2014年第07期

  • 蛇毒心脏毒素诱导肺癌A549细胞的凋亡机制研究

    目的:研究眼镜蛇心脏毒素(CTX)诱导肺癌A549细胞凋亡的机制.方法:MTT法测定CTX体外细胞毒性作用;吉姆萨染色法观察CTX对A549细胞形态学的影响;线粒体膜电位(JC-1)法检测CTX诱导A549细胞后细胞JC-1的变化;流式细胞仪检测CTX对A549细胞凋亡的影响;Western blot法测定细胞色素C、凋亡蛋白酶前体(Procaspase)-3、Procaspase-9的表达;通过S180小鼠肉瘤模型检测CTX体内抗肿瘤活性.结果:CTX作用于A549细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.770 μg/ml;0.5、1.0、2.0 μg/mlCTX可引起A549细胞明显缩小,在高倍镜下可观察到胞核皱缩,形成染色质边集等形态学改变;流式细胞仪检测到CTX使A549细胞出现凋亡,并且具有量效关系;5 μg/ml CTX作用于A549细胞0.5 h可使细胞JC-1降低;胞浆中检测到细胞色素C时,Procaspase-9的含量没有明显变化,随后逐渐减少,CTX诱导细胞凋亡具有时效关系;体内抑瘤实验显示在剂量为0.5、1.0、2.0 mg/kg时CTX对A549细胞有明显的抑制作用.结论:CTX对A549细胞有细胞毒性,可以使线粒体内细胞色素C释放,并激活Procaspase-9和Procaspase-3诱导A549细胞的凋亡.

    作者:李凤君;袁进;韩丽萍;蒋琳兰;李玉华 刊期: 2014年第07期

  • 正交试验优选甘草酸的复合酶法提取工艺

    目的:优选复合酶法提取甘草酸的工艺条件.方法:在单因素试验基础上,以甘草酸提取率为指标,采用正交试验以酶解pH、酶解时间、酶的用量和酶解温度为考察因素优选酶解工艺;采用单因素试验考察浸提工艺中料液比、浸提次数、浸提时间、浸提液pH、浸提温度、乙醇体积分数、氨水体积分数对甘草酸提取率的影响;再采用正交试验以酶解温度、酶的用量、浸提时间、浸提液pH、浸提温度、乙醇体积分数、氨水体积分数为考察因素优选复合酶法提取工艺.结果:优选的提取工艺为40g甘草粉末加入250ml复合酶,40℃下进行酶解,在按料液比为1∶20(m/m)加入70%乙醇,溶剂中氨水的体积分数为0.6%,调pH为8,浸提1.5h,在45℃下浸提3次(溶剂体积比为5∶5∶4).在该工艺条件下,甘草酸提取率可达85.02%.结论:所选工艺操作简单、节约能源,且提取率高,可用于甘草酸的提取.

    作者:龙佳朋;陈振斌;刘晓娇;杜雪岩 刊期: 2014年第07期

  • 小叶莲提取物抗乳腺肿瘤活性研究

    目的:研究小叶莲提取物抗乳腺肿瘤活性.方法:培养人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231,每孔分别加入1、25、50、100μg/ml小叶莲乙醇提取物(X1)、乙酸乙酯提取物(X2)、正丁醇提取物(X3),6.25、12.5、25、50、100 μmol/L 8,2’-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚(S1)、槲皮素(S2),测定各成分对癌细胞的抑制率.裸小鼠腋下注射MCF-7人乳腺癌细胞以复制荷瘤小鼠模型.模型小鼠分别灌胃给予等容生理盐水(模型组)、15 mg/kg环磷酰胺(环磷酰胺组)、500 mg/kgX1(X1组)、500 mg/kg X2(X2组)、500 mg/kgX3(X3组),每天1次,连续15d,测定小鼠体质量、瘤质量,计算瘤质量抑制率.模型小鼠分别灌胃给予等容生理盐水(模型组)、15mg/kg环磷酰胺(环磷酰胺组)、15 mg/kg S1(S1组)、15 mg/kg S2(S2组),每天1次,连续9d,测定小鼠瘤体积,计算瘤体积抑制率.结果:1、25、50、100 μg/ml X1、X2与12.5、25、50、100 μrnol/LS1、S2对MCF-7人乳腺癌细胞有较强抑制作用;各成分对MDA-MB-231细胞抑制作用均较弱.与模型组比较,X1组、X2组、X3组小鼠瘤质量抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).与模型组比较,S1组、S2组小鼠瘤质量抑制率、瘤体积抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:小叶莲提取物有一定的抗乳腺肿瘤活性.

    作者:郭帅;王璐;苏丹;孔越;尚明英;蔡少青 刊期: 2014年第07期

  • 板蓝根多肽对流感病毒感染小鼠抗病毒作用的研究

    目的:研究板蓝根多肽对流感病毒感染小鼠的抗病毒作用.方法:以4倍半数致死量的流感病毒H1N1 (A/PR8/34)液滴鼻感染以复制小鼠流感病毒感染模型.小鼠均分为正常对照(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、利巴韦林(腹腔注射,40 mg/kg)组与板蓝根多肽高、中、低剂量(灌胃给药,200、100、50 mg/kg)组,连续给药7d.测定小鼠死亡率、生存时间、肺指数、病毒滴度与T、B淋巴细胞增殖情况.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠死亡率升高,生存时间缩短,肺指数升高,T、B淋巴细胞减少,差异有统计学意义(P<0.01).与模型组比较,板蓝根多肽高、中剂量组小鼠死亡率降低,生存时间延长,感染第5天肺指数降低,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);板蓝根多肽高剂量组小鼠感染第3天病毒滴度降低,差异有统计学意义(P<0.05);板蓝根多肽高、中、低剂量组小鼠T、B淋巴细胞增加,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论:板蓝根多肽具有明显的抗病毒和促进免疫的作用.

    作者:刘西京;林素静 刊期: 2014年第07期

  • HPLC法同时测定蒙药菟丝草中3种成分的含量

    目的:建立同时测定蒙药菟丝草中槲皮素、金丝桃苷和山柰酚3种成分含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Hypersil ODS-2(300 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(58∶42,V/V),检测波长为281 nm,柱温为30℃,流速为1.0 ml/min.结果:槲皮素、金丝桃苷和山柰酚的质量浓度分别在10~50、2.5~30、2.5~30 μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 7、0.999 5、0.999 6);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%;平均加样回收率分别为98.90%、97.60%、97.39%,RSD分别为1.23%、1.37%、1.40%(n均为6).结论:该方法简便、快速、准确,可为蒙药菟丝草的质量评价提供依据.

    作者:娜仁高娃;王青虎;那音台;吉日嘎拉图 刊期: 2014年第07期

  • 333例儿童临床使用痰热清注射液的安全性分析

    目的:了解痰热清注射液儿科临床使用的安全性.方法:用SPSS13.0软件统计分析哈尔滨市儿童医院2011年1月至2012年9月使用痰热清注射液的儿科住院患儿临床使用该药品安全性的主动集中监测数据.结果:使用痰热清注射液的333例患儿均有合并用药现象,其中98%与抗菌药合并使用.痰热清注射液的不良反应均发生在3岁以下的儿童,发生率为1.2%,未见与其不良反应肯定的关联性.结论:3岁以下患儿临床使用痰热清注射液应慎重.

    作者:张丽;方芳;李百强;李嗣东;张嫣;杨欣燕;梁喆;赵红丽;于晓华 刊期: 2014年第07期

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