范雪营
目的 建立24个血清型的肺炎链球菌(简称肺炎球菌)免疫血清库,为肺炎球菌疫苗中各型多糖含量准确测定提供可靠保障.方法 ①制备肺炎球菌各型免疫血清:用肺炎球菌菌株制备免疫原,按免疫程序接种青紫蓝兔,将符合规定的免疫血清合并、除菌、分装后建档;②鉴定肺炎球菌各型免疫血清:全程采用速率散射比浊法进行鉴定.首先确定肺炎球菌免疫血清工作浓度,再通过特异性和线性对免疫血清进行初步筛查(将筛查出有交叉反应的免疫血清进行吸收),然后用血清交叉试验进行再次筛查,后通过绘制反应曲线(截取多糖质量浓度1.0～5.0μg/mL的线段)对免疫血清进行线性评定;③肺炎球菌免疫血清库的应用:用建成的肺炎球菌免疫血清库中各型免疫血清和丹麦国家血清研究所的诊断血清,检测5个厂家的23价肺炎球菌多糖疫苗的各型多糖含量,对比结果.结果 建成的肺炎球菌免疫血清库各型免疫血清效价较高;初步筛查出的有交叉反应的免疫血清,经吸收后交叉反应消失且线性良好(R2＞0.98);通过血清交叉试验再次筛查,未见有交叉反应的免疫血清;反应曲线线段(多糖质量浓度1.0 ～5.0μg/mL)线性良好(R2＞0.98);应用两套血清检测23价肺炎球菌多糖疫苗的多糖含量,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功建立了肺炎球菌免疫血清库,且各型免疫血清稳定、无交叉反应,可用于肺炎球菌疫苗及其疫苗血清型多糖的各项免疫学检测.
作者：刘倩；张丽芝；张新庄；任克明；陈晓航；王剑虹；张钦；沈荣 刊期： 2017年第05期
目的 分析滨州市2008-2016年疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的发生特征,评价AEFI监测系统的运转情况,为进一步完善AEFI监测工作提供依据.方法 通过中国AEFI信息管理系统,收集滨州市2008-2016年报告的AEFI个案数据,采用描述流行病学方法对其进行分析.结果 滨州市2008-2016年共报告AEFI 3052例,报告发生率为35.07/10万剂次,全市所辖7个县(区)均有AEFI数据报告;其中一般反应报告占94.20％、异常反应报告占4.59％、偶合症报告占1.21％,无疫苗质量事故和接种事故报告.48 h内报告率为98.39％,48 h内调查率为94.29％.各月均有AEFI报告,邹平县位居报告例数首位占18.12％.男女性别比为1.32:1,且病例主要集中在≤1岁儿童,占48.92％;87.75％发生在接种后≤1d.所涉及的34种疫苗中,无细胞百白破疫苗AEFI发生率高;有95.31％的AEFI病例均治愈.结论 滨州市2008-2016年AEFI监测系统运转良好,及时报告率与调查率均较高;一类疫苗不良反应报告发生率均在预期范围内,安全性良好.今后应提高AEFI监测和处置能力,加强督导,确保AEFI监测质量.
作者：王飞；李阳；梁燕鲜 刊期： 2017年第05期
人肠道病毒(human enteroviruses,HEVs)感染人类并造成严重的健康问题.目前缺乏针对HEVs的特异性抗病毒药物,且预防HEVs感染的疫苗的种类有限.HEVs的基因组结构简单且保守,故基于病毒基因组结构的病毒复制子已成为研究HEVs的重要工具,可用于病毒的分子生物学特性、病毒与宿主的关系及抗病毒药物的筛选及疫苗的研发等方面.现就HEVs复制子的研究进展作一综述.
作者：熊庆 刊期： 2017年第05期
质粒作为染色体外的遗传物质存在于大多数衣原体中,它们不但能调节染色体基因的表达,同时可编码衣原体相关毒力因子,影响衣原体自身的生长周期.因此,研究衣原体质粒对于进一步了解衣原体的致病机制,预防控制衣原体感染具有重要意义.现就衣原体质粒的生物学特征和主要功能进行概述.
作者：罗瑛 刊期： 2017年第05期
进入21世纪,一系列微生物学和分子生物学的进步允许用于新疫苗的抗原被明确地鉴定、设计、生产和投递,旨在优化诱导对明确的免疫原的保护性免疫应答.有关免疫系统正常工作和宿主-病原体相互作用的新认识促进了疫苗设计的合理性.疫苗的设计工具箱包括用全病原体、蛋白亚单位、多糖和病原体样颗粒来制备的疫苗,病毒/细菌载体的使用,加上以增强和扩展免疫应答的免疫佐剂和结合技术,诸如DNA重组的这一类技术可以简化制造的复杂性,并可以促进大量抗原的一致性生产.
作者：张轶 刊期： 2017年第05期
目的 评价四价流感病毒裂解疫苗的稳定性,为疫苗的有效期提供依据.方法 分别将A1(H1N1)、A3(H3N2)、B/Victoria和B/Yamagata等4株毒株制备单价原液,生产6批疫苗(不含硫柳汞),评价疫苗分别在(37±2)℃、(25±2)℃和(6±2)℃条件下的稳定性.结果 四价流感病毒裂解疫苗在(37±2)℃保存10 d、在(25±2)℃保存3个月、在(6±2)℃保存15个月,疫苗各项指标均符合企业注册标准和《中华人民共和国药典》2015版(三部)的要求.结论 四价流感病毒裂解疫苗具有良好的稳定性,在(6±2)℃可稳定保存15个月.
作者：蒋正东；李振辉；陈科；帅旗；李岳勇；赵越；吴建华；王斐；赵静；余军 刊期： 2017年第05期
抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)是一种固有免疫和适应性免疫相结合的免疫学效应.ADCC效应主要是通过效应细胞膜表面的受体IgG Fc受体(Fc receptor,FcR)如FcγRⅢa (CD16)、FcγRⅡc(CD32)、Fc γ RI (CD64)识别靶细胞膜表面抗原,结合相应IgG抗体的Fc段而促发效应细胞脱颗粒和细胞因子分泌的一类细胞毒效应.对人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染已有研究证实了,ADCC效应在控制HIV感染中发挥着重要作用.现对ADCC效应在抗HIV感染中的作用作一综述.
作者：范雪营 刊期： 2017年第05期
在发展中国家,戊型肝炎病毒是引起成人散发型肝炎和造成孕妇高死亡率的水源性流行病的优势病原体.疫苗的研发主要关注病毒开放阅读框-2的结构衣壳蛋白.作者成功地评价了小鼠和恒河猴体内的以脂质体为佐剂的重组中和表位蛋白,即开放阅读框-2的一部分的免疫原性,它编码458～607位氨基酸.用5μg/次的剂量肌注小鼠两次,分别比较佐剂、中和表位蛋白、添加脂质体佐剂/明矾佐剂的免疫效应.
作者： 刊期： 2017年第05期
目的 将铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)中的调控蛋白LasR在原核系统中进行表达,制备LasR抗血清,为PA中las调控系统的研究奠定基础.方法 以PA模式菌株PAO1全基因组为模板,PCR扩增lasR基因,PCR产物用BamHI/EcoRI双酶切连接至pGEX-4T-1载体,获得重组表达载体pGEX-4T-1-lasR;PCR产物经NcoI/XhoI双酶切连接至pET28a载体,获得重组表达载体pET28a-lasR.将重组表达载体分别转化至大肠杆菌感受态细胞BL21中,分别以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达GST-LasR和His-LasR蛋白,通过GST或Ni2+亲和层析纯化重组蛋白.将纯化后的His-LasR蛋白免疫新西兰大白兔,制备LasR抗血清;纯化后的GST-LasR蛋白用于LasR抗血清ELISA效价的检测.结果 lasR基因序列大小为717 bp;成功构建pGEX-4T-1-lasR和pET28a-lasR表达载体.构建的工程菌能够有效表达目的蛋白His-LasR和GST-LasR,蛋白纯度大于95％;LasR抗血清的效价为1∶60 000.结论 在原核系统中成功表达了可溶性LasR重组蛋白,并获得高效价的LasR抗血清,为PA中las调控系统的研究奠定了基础.
作者：訾静；王军；高磊；张琨；张绪；万一 刊期： 2017年第05期
百日咳呼吸道感染模型是研究百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)致病机制及百日咳疫苗评价的重要手段.人是百日咳鲍特菌的唯一自然宿主,由于受伦理学限制及志愿者重症感染等风险,使人百日咳呼吸道感染模型研究受限.近年来,百日咳呼吸道感染动物模型取得了明显进展.目前,应用于百日咳研究的动物模型主要包括小鼠、小型猪和狒狒等.现就百日咳呼吸道感染模型在百日咳疫苗临床前研究及有效性评价的进展作一概述.
作者：高晶晶 刊期： 2017年第05期
获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),即艾滋病,是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)引起的一种致死率极高的慢性传染病.如何有效控制和预防AIDS已成为全球共同面临的严峻挑战.HIV DNA整合在CD4+T细胞基因组中形成HIV储存库,使部分HIV逃避了宿主免疫清除和抗病毒药物的治疗作用.如何彻底清除患者体内HIV储存库成为功能性治愈艾滋病的重大障碍.了解HIV储存库的病毒学特征及其检测方法,是目前HIV研究的热点之一.现对HIV储存库特征及其主要检测方法作一综述.
作者：朱丽妍 刊期： 2017年第05期
酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)是一项应用广泛的固相酶免疫测定技术.抗原或抗体等反应物的固相化在ELISA检测系统中有着十分重要的作用,可直接影响检测结果.应用稳定性好、固相化物质变性率低及固定效率高的ELISA操作体系,可显著提高检测分析的灵敏性、特异性和可靠性.现就ELISA技术中不同固相介质和固相化方法作一概述.
作者：毛依阳 刊期： 2017年第05期
目的 检测多重耐药铜绿假单胞菌(multi-drug resistant pseudomonas aeruginosa,MDRPA)携带Ⅰ类整合子-基因盒,分析其与耐药表型的相关性.方法 使用K-B纸片扩散法(简称K-B法)进行药敏试验,确定菌株耐药表型;用PCR扩增Ⅰ类整合酶基因及可变区的基因盒,并进行测序及序列分析.结果 23株MDRPA中19株检出Ⅰ类整合酶基因,其中15株携带基因盒,基因盒结构共有6种.其中6株携带aadA4a、3株携带aacA4-catB8-aadA1、1株携带aac(6’)lai-orfv-aadA1-qacE△1-sul、3株携带bla IMP-6-qnr-aacA4-blaOXA-1-aadA1-qacE△1-sul、1株携带permease of ABC transporter gene、1株携带bacteriophage protein gene.在15株携带Ⅰ类整合酶基因盒的可变区中,检出8种耐药基因和2种新型基因盒.结论 MDRPA携带的Ⅰ类整合子-基因盒结构具有多样性,与菌株的多重耐药表型密切相关;检出两种新型基因盒,分别是ABC转运系统蛋白和噬菌体蛋白的编码基因.这两种新型基因盒的功能尚不清楚,特别是它们与菌株耐药性的关系,有待进一步研究.
作者：黄娟；王欣；吴志毅；杨维青 刊期： 2017年第05期
目的 建立EDTA络合滴定法,测定A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗中残留钙离子含量,为疫苗的质量控制提供依据.方法 在pH ＞12的条件下,用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)滴定液测定C群脑膜炎球菌多糖疫苗原液中的残留钙离子,并对该方法的线性范围、准确性和重复性进行验证及初步应用.结果 钙离子质量浓度在0.200 2 ～1.602 0 mg/mL范围内,钙离子含量与消耗滴定液的体积呈现良好的线性关系,r＞o.99;在对照实验碳酸钙和无水氯化钙中,钙离子的回收率分别为100.9％和100.3％,相对标准偏差(RSD)分别为0.35％和0.21％;C群多糖原液加标回收实验中钙离子的回收率为99.7％ ～ 101.2％,RSD≤0.77％;测定6批C群脑膜炎球菌多糖原液中的钙离子浓度,RSD均≤5.6％.结论 建立的EDTA络合滴定法简便、快速、准确,适用于A群C群多糖疫苗原液中钙离子含量的快速测定.
作者：侯风萍；梁莉；慕艳红；裴钰；傅元欣；魏然；高雪军 刊期： 2017年第05期
哮喘(asthma)是一种以气道高反应性、慢性气道炎症、气道重塑和可逆性的气流受阻为特征的常见慢性呼吸系统疾病.近年来,研究发现气道上皮细胞在霉菌、尘螨、花粉、病毒感染、空气污染物等各种损伤因素的作用下,可释放细胞因子白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)、白细胞介素-25(interleukin-25,IL-25)和胸腺基质淋巴细胞生成素(thymie stromal lymphopoietin,TSLP),这些细胞因子不仅可作用于2型辅助性T细胞(type 2 helper T cells,Th2cells),同时也可作用于固有淋巴样2型细胞(group 2 innate lymphoid cells,ILC2s),通过释放Th2型细胞因子,参与哮喘的发生与发展.尽管这3种细胞因子在哮喘的发生与发展中均起到重要作用,但其在哮喘病理、生理学效应及作用方式上并非完全相同.现就这3种上皮源性细胞因子IL-33、IL-25和TSLP在哮喘发病机制中的作用作一概述.
作者：张鑫 刊期： 2017年第05期
目的 研究清开灵注射液(简称清开灵)体外抗2型登革病毒(dengue virus 2,DENV2)的作用.方法 ①稀释清开灵至不同质量浓度(72.000、63.000、54.000、45.000、22.500、11.250 mg/mL),同时稀释利巴韦林注射液(简称利巴韦林,12.500、6.250、3.125、1.563、0.781、0.391 mg/mL)作为阳性对照,生理盐水为空白对照,利用MTT比色法分别检测上述药物对人肝癌细胞HepG2株的细胞毒性作用,并确定各药物的大无毒质量浓度;②分别稀释清开灵和利巴韦林并与DENV2(MOI =0.5)等体积混合孵育30 min后,接种于HepG2细胞,于2、8、24 h后取细胞上清,利用间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测阳性细胞率和实时定量聚合酶链反应(realtime quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测DENV2基因组表达水平,验证清开灵对DENV2的直接灭活作用;③稀释清开灵或利巴韦林并与DENV2(MOI =0.5)等体积混合后接种于HepG2细胞,2h后收获细胞,利用IFA验证清开灵对DENV2的抑制作用;④DENV2(MOI=0.5)感染HepG2细胞1h后,弃上清加入含清开灵或利巴韦林的维持液,于感染后2、8、24 h收获细胞上清,利用IFA和qPCR验证清开灵直接给药的抗病毒作用;⑤用清开灵或利巴韦林预处理HepG2细胞2h,加入DENV2(MOI=0.5)孵育1h弃上清,再次相应加入清开灵和利巴韦林(维持治疗),于感染后2、8、24 h收获细胞上清,IFA和qPCR验证清开灵预给药联合维持治疗的抗病毒作用.结果 ①清开灵的大无毒质量浓度为11.250 mg/mL,利巴韦林的大无毒质量浓度为1.563 mg/mL;②直接灭活:2、8、24 h,清开灵和利巴韦林检测水平均优于空白对照(P＜0.01),而且清开灵在2h和24h的IFA检测水平均优于利巴韦林(P＜0.01),以及8h和24 h的qPCR检测水平均优于利巴韦林(P＜0.01);③抑制病毒进入:清开灵与利巴韦林的IFA检测均优于空白对照(P＜0.01);④直接给药:药物作用2、8、24 h后,清开灵和利巴韦林不同时相点检测水平均优于空白对照(P＜0.01);⑤预给药联合维持治疗:药物作用2、8、24 h后,清开灵和利巴韦林不同时相点检测水平均优于空白对照(P＜0.01),而且清开灵的不同时相点的IFA检测水平均优于利巴韦林(P＜0.01).结论清开灵具有明显的体外抗DENV2的作用,且以预给药联合维持治疗的给药方式抗病毒作用佳.
作者：范东瀛；高娜；安静；王蕾；王培刚；吴娜 刊期： 2017年第05期
老年人群对肺炎球菌疫苗的免疫应答不同于婴幼儿,在对老年人群肺炎球菌疫苗免疫原性的研究中,临床试验设计和判定标准均有所不同.现将美国13价肺炎球菌结合疫苗(13-valent conjugated vaccine,PCV13)在老年人群免疫原性研究的临床资料进行归纳和分析,为国内肺炎球菌疫苗在老年人群中的临床研究提供参考.
作者：乔瑞洁 刊期： 2017年第05期
目的 通过检测W135群脑膜炎球菌结合物(简称W135群结合物)小鼠免疫血清中IgG抗体亚类及IgG抗体亲合力,判断W135群结合物的免疫应答特征.方法 ①免疫血清的制备:将NIH雌性小鼠随机分为3组(A组、B组、对照组),每组30只.A组采用含2.5 μg多糖的PSW135CNBr-TT分别于0、2、4、8周腹股沟皮下注射小鼠;B组采用含2.5 μg多糖的PSW135CNBr-TT分别于0、4、8周腹股沟皮下注射小鼠;对照组采用含2.5 μg多糖的PSW135分别于0、2、4周腹股沟皮下注射小鼠.分别于每次免疫7d后,经小鼠眼眶静脉采血,分离血清备用;②IgG抗体亚类和亲合力的检测:采用间接ELISA分析各组免疫血清中IgG抗体及IgG抗体亚类含量;采用单一浓度的硫氰酸钾溶液作为洗脱液,用间接ELISA测定免疫血清中IgG相对亲合力.结果 A组和B组获得的小鼠免疫血清,IgG抗体均以IgG1为主(占总IgG抗体的80％以上),IgG抗体及其亚类抗体含量均呈典型的剂次加强效应;对照组各针次免疫血清中的IgG3抗体含量所占比例高,未见免疫剂次加强效应.A组IgG抗体的相对亲合力分别是46.6％、25.4％、17.6％和47.6％,B组IgG抗体的相对亲合力分别是46.6％、23.6％和48.3％,对照组IgG抗体的相对亲合力分别是92.4％、81.9％和81.0％.结论 W135群结合物小鼠免疫血清呈现典型的胸腺依赖性(thymus dependent,TD)抗原的免疫应答特征.
作者：袁菲；李献林；王晶；孔素娟；胡浩；罗树权；李燕婷；王欣茹；刘方蕾；沈荣 刊期： 2017年第05期
微生物学免疫学进展杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会 兰州生物制品研究所
