学术投稿

重组表达幽门螺杆菌致病岛CagL蛋白及其中和抗体初步研究

钟情;邹全明;郭刚;章金勇;张晓丽

关键词:幽门螺杆菌, IV型分泌系统, CagL蛋白, IL-8, 黏附阻断
摘要:目的 重组表达幽门螺杆菌(Helicobacterpriori,Hp)cagL基因,并制备兔抗多克隆抗体及阻断Hp黏附宿主细胞实验.方法 用PCR方法 扩增出cagL基因片段,将目的 基因构建至表达载体pET22b中并诱导表达.采用亲和层析法纯化蛋白,以纯化蛋白为抗原免疫家兔,制备兔抗CagL多克隆抗体血清,并用多克隆抗体血清进行阻断坳黏附宿主细胞实验及细胞因子IL-8活性分析.结果 成功构建表达纯化了CagL重组蛋白,制备CagL蛋白兔抗多克隆血清,并初步验证了多克隆抗体血清在体外和Hp黏附作用的关系.与对照菌相比,重组菌CagL在25 X 103.附近均出现新的蛋白表达条带,且诱导6 h时表达量高.UVP扫描分析目的 蛋白占菌体总蛋白的35%~40%.SDS-PAGE显示重组蛋白CagL主要以包涵体形式存在于超声沉淀中.ELISA结果显示兔抗CagL多克隆抗体的滴度为1:16 000 EU.Giemsa染色后显微镜观察可见坳菌与HeLa细胞呈典型的聚集性黏附,抗体中和后Hp与HeLa细胞未见黏附,加入DH5α的HeLa细胞也未见细菌黏附.结论 多克隆抗体血清对Hp黏附定植有一定阻断作用,并且可以减少Hp促进细胞分泌IL-8的能力.
第三军医大学学报杂志相关文献
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    作者:廖化禹;房殿春;陈磊;孙永刚 刊期: 2009年第02期

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    作者:杨君;唐良萏;王彬 刊期: 2009年第02期

  • 微血管减压术治疗原发性三叉神经痛65例

    原发性三叉神经痛(trJgeminal neuralgia,TN)是一种常见的颅面部疼痛[1],发病机制至今未明.TN可分为原发性和继发性2种.原发性TN治疗方法包括内科治疗和外科治疗,临床上在内科治疗无效或药物不良反应明显时多采用外科治疗,但理想的手术方式尚在进一步研究中.

    作者:王典春;李栋平;朱兴宝;邓询鼎 刊期: 2009年第02期

  • 青春期输卵管扭转保留输卵管治疗成功1例

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    作者:张流;冯惠玲 刊期: 2009年第02期

  • 原发性肝癌患者血清P53蛋白检测的临床意义

    目的 评价血清P53蛋白对原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断的临床价值,分析并探讨血清P53蛋白对HCC动态监测及治疗的临床意义.方法 采用ELISA检测血清P53蛋白的浓度,同时结合Western blot和免疫组化结果分析130例标本P53蛋白的表达情况,利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)比较血清P53蛋白和AFP榆测结果.结果 ELISA检测显示HCC患者血清P53蛋白浓度显著高于健康体检者及肝硬化患者(P<0.05);血清Western blot结果显示在53×103.处可检测到单一的条带,血清P53蛋白浓度升高与Western blot检测的光密度值密切相关.免疫组化检测P53蛋白阳性率为64.62%,血清P53蛋白检测与免疫组化检测结果符合率达84.62%;ROC曲线分析显示血清P53蛋白检测和AFP检测曲线下而积分别为0.910和0.954,二者Kappa:0.657,P=0.000,表明2种方法 的检测结果有止相关关系,检测结果吻合.结论 血清P53蛋白浓度升高能较好地反映p53基因的突变,对肝癌的临床诊断、治疗和动态监测有一定的临床意义,并可作为HCC手术后动态监测和指导临床治疗的一个的生物学指标.

    作者:曹晓静;王东;张沁宏;仲召阳;李增鹏;王阁 刊期: 2009年第02期

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    作者:黄毅;黄旭;崔高宇;冯华 刊期: 2009年第02期

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    作者:胡丹;王长军;胡福泉;王晶;程功;李明;潘秀珍;唐家琪 刊期: 2009年第02期

  • 福辛普利对糖尿病大鼠胰腺组织氧化应激的影响

    目的 研究糖尿病大鼠胰腺绀织氧化应激的情况及福辛普利干预后胰岛功能及胰腺组织的免疫组化改变.方法 21只大鼠分对照组、糖尿病组、福辛普利干预组,糖尿病组用高脂进行喂养制作糖尿病模型,干预组喂以福辛普利(5 mg/kg),在病程小同时点测定血糖、体质量及胰腺组织中硝基酪氨酸的含量,并观察胰腺组织免疫组化改变.结果 糖尿病组0与正常对照组胰腺硝基酪氨酸含量比较明显增高(P<0.01);福辛普利干预组与糖尿病组胰腺中硝基酪氨酸含量比较明显降低,氧化应激水平亦降低(P<0.05).结论 精尿病大鼠胰腺组织的氧化应激存在异常,福辛普利时糖尿病大鼠胰腺氧化应激存在抑制作用.

    作者:闫纪强;刘东方;周厚地;徐鑫 刊期: 2009年第02期

  • shRNA沉默survivin基因对人膀胱移行细胞癌T24细胞生物学行为的影响

    目的 构建survivin特异性短发夹RNA(shRNA)的表达载体,探讨其对人膀胱移行细胞癌T24细胞的生物学行为的影响.方法 将构建survivin特异shRNA表达载体转染T24细胞,RT-PCR、Western blot检测survivin mRNA及其蛋白的表达水平;通过细胞生长曲线、随机运动实验、Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞生长、运动及体外侵袭能力.结果 经EcoR I和Hindm双酶切和测序鉴定,成功筛选含目的 DNA片段的重组载体pshRNA-survivin2,并成功转染T24细胞;转染pshRNA-survivin2后町显著抑制细胞中survivin mRNA及其蛋白的表达,抑制率分别为61.73%和73.27%;pshRNA-sur-vivin2组的细胞侵袭力与运动能力均有明显的下降,第3、5大时肿瘤细胞生长抑制率分别为59.13%、83.86%.结论 应用pTZU6+1质粒载体构建survivin的shRNA表达载体,能有效抑制其survivin mRNA及其蛋白的表达,并可抑制T124细胞的增殖、运动及体外侵袭能力.

    作者:杜虎;吴小候;罗春丽;刘川;曾柯;何云锋;尹志康 刊期: 2009年第02期

  • 丹参诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞的突触功能研究

    目的 探讨由丹参诱导骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)定向分化的神经细胞是否具有突触循环功能.方法 采用优化诱导方案对4~5代状态好的MSCs进行反复多次诱导,终止诱导后分别进行免疫荧光细胞化学、细胞内钙离子流及突触功能检测.以50 mmol/L KCl作为诱发动作电位的刺激因子,采用激光共聚焦显微镜(ISCM)埘Fluo-3/AM和SynaptoRed C-2荧光探针进行荧光激发,检测分化神经细胞存细胞外高钾刺激下细胞内钙流及细胞突触功能.结果 4次诱导5 h后,神经样细胞伸出突起并交互成复杂网状;免疫荧光细胞化学显示4次诱导5 h后TUJ-1表达率为(96.7 ±2.8)%,突触小泡蛋白(synaptophysin)表达率为(96.2 ± 2.1)%;LSCM显示4次诱导5 h后细胞在高钾刺激下细胞内钙流增加,细胞突触发生胞吞胞吐.结论 丹参可高效快速诱导MSCs分化为神经细胞,此细胞具有止常的突触循环功能.

    作者:胡琳燕;余加林;李芳;刘官信;李禄全 刊期: 2009年第02期

  • BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体诱导SGC-7901细胞凋亡

    目的 构建BAG-1、Bcl-2双靶区反义RNA重组载体并初步探讨其对SGC-7901细胞增殖活性的影响.方法 从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增包括全部编码序列的BAG-1和Bcl-2 cDNA,利用生物工程技术,反向插入真核细胞双表达载体pVITR02的多克隆位点中,转染SGC-7901细胞,MTT法检测对细胞增殖的影响,RT-PCR法观察对细胞BAG-1和Bcl-2 mRNA表达水平的变化,流式细胞术检测对细胞周期的影响.结果 限制性内切酶和测序分析表明,双表达质粒pVlTR02-AsBAG-1-Bcl-2构建成功.MTT法检测显示pVITR02-AsBAG-1-Bcl-2载体抑制SGC-7901细胞增殖,并旱时间依赖性,其中以72 h转染组抑制作用显著(P<0.01);与对照组比较,pVITR02-AsBAG-1-Bcl-2组BAG-1和Bcl-2mRNA表达水平下降(P<0.05),细胞捌亡比例升高(P<0.01).结论 成功构建反义双靶区重组载体pVITR02-AsBAG-1-Bcl-2,并发现其能抑制SGC-7901细胞增殖并引起细胞凋亡.

    作者:陈建国;卢天龙;韩跃武;冯惟萍;任慧子 刊期: 2009年第02期

  • Exendin-4对高脂大鼠脂代谢及胰岛β细胞功能的影响

    目的 探讨Exendin-4对高脂喂养的肥胖人鼠胰岛β细胞功能及糖脂代谢的影响.方法 SD大鼠40只用简单随机分组法分为2组,分别给予普通饲料(NC组,10只)及高脂饲料(30只).喂养10蒯后,高脂喂养大鼠分为高脂(HF)组,0.5、2μg/kg Exendin-4治疗高脂组(HFL、HFH组),每组10只.治疗6周后,崩静脉葡萄糖耐量实验(IVGT)和胰岛索耐量实验(ITT)来评价机体的胰岛β细胞功能及机体对胰岛素的敏感性,同时检测基础血脂水平.结果 高脂诱导肥胖大鼠经Exendin-4处理后,lee's指数、空腹血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)明显降低(P<0.01);IVGTT和ITT指标明显改善(P<0.05),胰岛素分泌水平增高(P<0.01),胰岛β细胞功能改善(P<0.05),HFH组较HFL组上述指标改善更为明显.结论 Exendin-4可改善肥胖大鼠的胰岛β细胞功能和糖脂代谢,并可能呈剂量-效应关系.

    作者:谭兴容;王毅;杨刚毅;方超;吴艳;欧阳凌云;李生兵;陈瑜 刊期: 2009年第02期

  • 15例食管癌术后乳糜胸患者的诊断和治疗分析

    食管癌是我国发病率较高的恶性肿瘤之一,手术治疗是其主要治疗手段.乳糜胸是食管癌术后严重的并发症,发病率较低,为0.4%~2.6%.一旦发生,患者体质消耗较大,常危及生命[1].1996年7月至2007年12月,我科经胸手术切除食管癌856例,术后并发乳糜胸15例,发生率为1.75%.现将食管癌术后乳糜胸的诊断和治疗分析报告如下.

    作者:张智;张在空 刊期: 2009年第02期

  • 流式细胞仪检测正常男性精子细胞凋亡

    随着工业化进程加快,人们生活更加方便快捷,生活水平也不断提高,不过人们在享受现代科技成果的同时,也在经受环境污染对健康的危害.特别是大量使用除草剂、杀虫剂、去污剂、洗涤剂等,这些物质被统称为内分泌干扰物(endocrinedisrupting,EDs).它们对男性生殖功能的影响,已引起社会各界的广泛关注[1].

    作者:王芳;罗婧;王丽婷;孙玮;张正治;潘峰 刊期: 2009年第02期

  • Ezrin在UMR106骨肉瘤细胞株移植瘤成瘤及肺转移中的作用

    目的 探讨膜一细胞骨架联接蛋白Ezrin埘骨肉瘤细胞株UMR106成瘤及转移能力的影响.方法 为获得较好的干扰效果,针对大鼠Villin2基因(Ezrin编码基因)没计2个发夹式RNA(shRNA).合成后克隆入载体pGenSil-1,扩增并中量提取质粒,应用脂质体LipofectamineTM2000转染进UMR106细胞.采用逆转录聚介酶链反应(RT-PCR)和West-ern印迹检测Ezrin的表达.选取效果好的shRNA转染UMR106细胞并行G418筛选,传代扩增.扩增后细胞原位接种到SD大鼠胫骨结节,并设立正常细胞组和阴性对照组,观察记录肿瘤彤成和大鼠存活时间,计数肺表面转移灶数目,镜检定位增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)在原发灶和肺转移灶内的表达.结果 ①shRNAI干扰作用明显,下调达90%.②移植时稳定转染细胞数约50%.③实验组与对照组均100%成瘤,成瘤时间正常细胞组为(10.25±1.07)d,阴性对照组为(10.08 ±0.88)d,实验组为(10.30±1.08)d,三者间没有明显差别(P>0.05);实验组存活时间(42.30±17.25)d明显长于正常细胞组(20.60±11.70)d(P<0.01)和阴性对照组(22.40±7.42)d(P<0.01);实验组肺转移灶数目明显低于正常细胞组(P<0.01)和阴性财照组(P<0.01),分别为(39.40±51.86)个、(124.60 ±39.78)个和(117.60±36.48)个;阴件对照组中原发灶和肺转移灶内均有EGFP表达,而实验组肺转移灶内末见EGFP表达.结论 Ezrin蛋白是骨肉瘤肺转移中的一个关键因子,干扰Ezrin蛋白表达能抑制其肺转移的发生,可以作为预防肺转移的靶点.

    作者:王忠良;李旭良;张德文;李明;覃佳强;刘传康;刘星;曹豫江 刊期: 2009年第02期

  • 白内障超声乳化吸出联合房角分离术治疗原发性闭角型青光眼的房角变化

    目的 观察原发性闭角型青光眼(primary angle-closure glaucoma,PACG)合并白内障行白内障超声乳化吸出联合房角分离术(phaeoemulsification combined with goniosynechialysis,Phaco-GSL)后房角形态的变化,评价Phaco-GSL治疗PACG的疗效.方法 观察确诊为PACG合并白内障住院患者50例共50只眼,所有病例房角黏连(peripheral anterior synechiae.PAS)范围>180°.将患者用单盲法随机分为2组,每组各25例25只眼,分别为Phaco-GSL治疗组(A组)和单纯Phaco对照组(B组),用房角镜检查手术后1、3个月房角变化,同时观察手术后1周、1个月、3个月的眼压.结果 ①房角:A组房角开放>180°以上为100%,房角为宽角,能看到小梁网5例(20%)、巩膜突12例(48%)、睫状体带8例(32%):B组手术后1个月房角,旰放>180°为48%,手术后3个月有2例房角再次发生黏连;A组手术后房角开放180°明显优于B组(P<0.05);在2组房角开放的病例中,随着时间推移,色素逐渐变少.②眼压:手术前眼压25~58 mmHg,平均28.67 mmHg.手术后不用降眼压药眼压止常者A组86.67%,B组41.33%,2组有统计学差异(P<0.01).结论 ①对于PACG合并白内障的患者,Phaco-GSL可以使房角重新开放,在重新开放的房角中,房角的虮膜插入位置、房角的度数以及虹膜形态等状态长期稳定,降眼压效果好.②对于PAS>180°的PACG合并白内障的患者,可以通过Phaco-GSL来治疗,不必联合小梁切除.

    作者:曾流芝;刘洪 刊期: 2009年第02期

  • 脑组织正常老化的弥散张量成像研究

    目的 通过核磁共振弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)来反映南于正常老化弓I起的脑组织弥散及各项异性改变.方法 通过对年轻组及其年老组脑组织的弥散张量成像,获得腑组织的平均弥散(average diffusion coeffi-cient,ADC)图及部分各项异性(fractional anisotropy,FA)图,分别测量不同必趣部佗(region of interest,ROI)的ADC值及FA值,通过统计学分析来反映2组相应部位脑组织弥散及各项异性的差异,并探讨引起这种改变的原因.结果 分别对于年轻组和年老组的对称部位而言,左右侧的ADC值及FA值没有差异(P>0.05).除内囊膝部外,年老组各个兴趣区的ADC值均大丁年轻组(P<0.05);而对于FA值而言,所有测茸部位的FA值在年老组均比年轻组低(P<0.05).结论 DTI 可以反映由于止常老化所引起的脑组织弥散、各向异性改变,从而反映腑组织微结构及完整性的改变.

    作者:钟维佳;赵建农;吴伟;陈维娟 刊期: 2009年第02期

  • 重组表达幽门螺杆菌致病岛CagL蛋白及其中和抗体初步研究

    目的 重组表达幽门螺杆菌(Helicobacterpriori,Hp)cagL基因,并制备兔抗多克隆抗体及阻断Hp黏附宿主细胞实验.方法 用PCR方法 扩增出cagL基因片段,将目的 基因构建至表达载体pET22b中并诱导表达.采用亲和层析法纯化蛋白,以纯化蛋白为抗原免疫家兔,制备兔抗CagL多克隆抗体血清,并用多克隆抗体血清进行阻断坳黏附宿主细胞实验及细胞因子IL-8活性分析.结果 成功构建表达纯化了CagL重组蛋白,制备CagL蛋白兔抗多克隆血清,并初步验证了多克隆抗体血清在体外和Hp黏附作用的关系.与对照菌相比,重组菌CagL在25 X 103.附近均出现新的蛋白表达条带,且诱导6 h时表达量高.UVP扫描分析目的 蛋白占菌体总蛋白的35%~40%.SDS-PAGE显示重组蛋白CagL主要以包涵体形式存在于超声沉淀中.ELISA结果显示兔抗CagL多克隆抗体的滴度为1:16 000 EU.Giemsa染色后显微镜观察可见坳菌与HeLa细胞呈典型的聚集性黏附,抗体中和后Hp与HeLa细胞未见黏附,加入DH5α的HeLa细胞也未见细菌黏附.结论 多克隆抗体血清对Hp黏附定植有一定阻断作用,并且可以减少Hp促进细胞分泌IL-8的能力.

    作者:钟情;邹全明;郭刚;章金勇;张晓丽 刊期: 2009年第02期

  • 短发夹RNA干扰胃癌低氧诱导因子-1α表达及其临床意义

    目的 探讨RNA T扰对胃癌细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转录和蛋白表达的作用以及对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建人HIF-1α基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染胄癌细胞BGC-823;采用RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α mRNA、蛋白表达水平;MTT法检测转染后对胃癌细胞生长的抑制;TUNEL法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术分析转染后胃癌细胞的细胞周期和凋亡率.结果 成功构建了pshRNA-HIF-1α1和pshRNA-HIF-1α2重组质粒;转染BGC-823后,与空质粒组相比,pshRNA-HIF-1α1可有效抑制BGC-823细胞HIF-let基因转录和蛋白质表达,抑制率分别可达93.4%和55.7%;MTT法显示转染后细胞生长明显受到抑制;流式细胞术结果表明转染后,其凋亡率明显高于卒质粒绀(P<0.05),BGC-823细胞增殖活性显著降低,G0~G1期细胞比例明显增加,S期与G2.~M期细胞比例减少;TUNEL法显爪转染后细胞核固缩,核染色质聚集或断裂;体内实验显示,pshRNA-HIF-1α1的抑瘤率为41.75%.结论 体内、外初步实验证实pshRNA-HIF-1α1能有效抑制胃癌细胞BGC-823 HIF-1α基因表达,抑制胃癌细胞增殖,诱导其凋亡.

    作者:周炜;姜政;张滨;向廷秀;黄爱龙;王丕龙 刊期: 2009年第02期

第三军医大学学报杂志

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主办:第三军医大学