学术投稿

真核表达质粒PIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ的构建及其在COS-7细胞中的表达

杨波;刘辉;吴亮亮;张丽娅;焦顺昌

关键词:转化生长因子, 受体, 全基因合成, 真核表达
摘要:目的:通过oligo化学合成及PCR扩增法合成人显性抑制TGF-βⅡ型受体目的基因,并建立其真核表达载体.方法: 根据Genebank数据库确定显性抑制TβRⅡ目的基因,利用化学合成法进行单链oligo的合成,PCR法将合成的oligo拼接成完整的序列,装入PMD18-T载体并转染感受态细胞DH5 .经XhoI和EcoRI酶切后连接至目的载体PIRES2-AcGFP中,转染COS-7细胞,对此质粒载体进行酶切电泳鉴定和DNA测序鉴定,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测DNTβRⅡ表达.结果: 合成DNA经测序验证与目的基因一致;PIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ转染COS-7细胞,实现了DNTβRⅡ目的基因在COS-7细胞中的体外转染及瞬时表达.结论: 采用oligo化学合成及PCR扩增法成功合成人显性抑制TGF-βⅡ型目的基因并构建了其真核表达载体PIRES2-AcGFP-DNTβRⅡ,为进一步研究过继性免疫细胞治疗奠定了基础.
现代肿瘤医学杂志相关文献
  • 三维适形放疗联合高能聚焦超声治疗局部晚期胰腺癌疗效观察

    目的:观察三维适形放疗(3DCRT)联合高能聚焦超声(HIFU)治疗晚期胰腺癌近期疗效.方法:26例晚期胰腺癌给予3DCRT治疗,同时给予HIFU辅助治疗.结果:26例患者均可评价疗效,临床受益指数达到96.15%.肿瘤体积变化CR 1例、PR 8例、NC 15例、PD 2例.1、2年生存率分别为84.61%、53.85%,中位生存期16.9个月.结论:3DCRT联合 HIFU治疗晚期胰腺癌无痛苦、无创伤,临床受益指数高,生存期延长,无明显的不良反应.

    作者:王继营;李峻;仲荣达;田丹;李崇阳;田雪峰 刊期: 2010年第04期

  • FOLFOX4方案和ECF方案治疗老年晚期胃癌的疗效比较

    目的:比较FOLFOX4方案和ECF方案治疗老年晚期胃癌的疗效及不良反应.方法:将56例经病理确诊的老年晚期胃癌患者随机分为两组.A组29例,采用FOLFOX4方案化疗:草酸铂75mg/m2 ,静脉滴注2h,d1;亚叶酸钙200mg/m2 ,静脉滴注2h,d1-2;氟尿嘧啶400mg/m2 ,静脉推注,d1、d2 ,氟尿嘧啶600mg/m2 ,持续静脉泵输注22h,d1-2.每2周为1周期.B组27例,采用ECF方案化疗:表柔比星45mg/m2 ,静脉推注,d1;氟尿嘧啶675mg/m2 ,持续静脉泵输注120h;顺铂20mg/m2 ,静脉滴注,d1-3 .每3周为1周期.对两组的近期疗效、疾病进展时间、总生存期、生活质量改善情况、不良反应进行比较.结果:A组和B组的有效率分别为41.4% (12/29)和44.4% (12/27),无显著性差异(P=0.8168).A组和B组的中位疾病进展时间4.6月(1-15月 ),4.8个月(1-14月)(P= 0.8899);中位生存时间7月(2-16月),6.9月(2-16月)(P=0.2905).A组和B 组的生活质量改善为65.5% (19/29)和37.0% (10/27)有显著性差异(P=0.0331);两组主要不良反应白细胞减少、腹泻、口腔炎、神经毒性、脱发、心脏毒性等指标的差异具有显著性(P<0.05).结论:FOLFOX4方案和ECF方案治疗老年晚期胃癌近期疗效较好,在生活质量改善以及不良反应方面,FOLFOX4方案优于ECF方案,具有更好的耐受性.

    作者:赵志强;王轶楠;刘卫东;马守东;岳海淑 刊期: 2010年第04期

  • 整合素β1在浸润性乳腺癌中的表达及其意义

    目的:探讨浸润性乳腺癌中整合素β1蛋白的表达及其在乳腺癌侵袭转移过程中的作用.方法: 应用免疫组化Elisivion法检测62例浸润性乳腺癌组织中整合素β1蛋白的表达水平.结果: 腋淋巴结转移者中整合素β1阳性率高于无腋淋巴结转移者(P<0.05);组织学分级Ⅲ级者,整合素β1阳性率明显高于组织学分级Ⅰ、Ⅱ级者(P<0.01).结论: 整合素β1蛋白是乳腺癌浸润和转移过程中的潜在生物学标志,随着整合素β1表达水平的增高,肿瘤细胞的恶性程度增加并且侵袭性增强.

    作者:戴晓晓;陈同钰 刊期: 2010年第04期

  • 埃罗替尼治疗吉非替尼耐药的晚期非小细胞肺癌有效1例

    晚期非小细胞肺癌(NSCLC)预后差,以化疗为主的联合治疗只能降低死亡风险26%-32%[1].近年来,非小细胞肺癌的靶向治疗成为研究热点,其中尤以表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)进展快,其代表药物吉非替尼(gefitinib、iressa)和埃罗替尼(erlotinib、tarceva).我科用埃罗替尼治疗吉非替尼耐药的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)一例取得了较好疗效,现报告如下.

    作者:冯爱武;苗福猛;蔡美华 刊期: 2010年第04期

  • B超引导空芯针穿刺活检对于乳腺肿块诊断作用的分析

    目的:评价B超引导空芯针穿刺活检(core needle biopsy,CNB)在可触及的乳腺肿块中的临床应用价值,同时讲述操作中的技术事项.方法: 回顾分析可触及肿块的乳腺疾病住院患者的临床和病理资料,总结B超引导CNB的适应证、优缺点、注意点.结果:CNB的敏感性为94.85%,假阴性为5.15%;病理低估为5.83%; 诊断符合率为89.32%.14Gauge穿刺针的标本数应该是3根以上的合格标本;行ER、PR、neu检测的患者,需取合格穿刺标本4根以上.结论: 对于临床可触及的乳腺肿块,该检测方法有较高的临床应用价值.B超引导CNB适用于超声发现的乳腺病灶.B超引导的CNB的优点是明显缩短手术时间和避免了手术切除肿块时可能带来的肿瘤播散.从术中冰冻病理到术前明确诊断是一种治疗模式的转变.

    作者:刘小丰;张家新;沈瑾;陈飞;周茜;谢晖;陆澄 刊期: 2010年第04期

  • 不同匹配方式对鼻咽癌IGRT摆位误差的影响

    目的:观察鼻咽癌在IGRT中不同匹配方式对摆位误差的影响.方法: 对同一鼻咽癌患者,在图像采集条件和方法,图像匹配区域,图像重建模式相同的条件下,观察15次治疗重复摆位后用CBCT采集的图像信息,通过XVI系统分别采用骨和灰度两种模式与参考图像匹配,观察两种图像匹配方法对摆位误差的影响. 结果: 用骨匹配的摆位误差结果在 X、Y、Z方向上分别为(0.0693±0.0739)cm、(0.1587±0.061)cm和(0.1907±0.0662)cm ;用灰度匹配的摆位误差结果在X、Y、Z 方向上分别为(0.0533±0.0514)cm、(0.1553±0.053)cm、(0.1807±0.0706)cm.对两种匹配方法分别在X、Y、Z方向上的摆位误差分别进行比较,t检验结果显示X、Y、Z方向上P均大于0.05,无统计学意义.结论: 鼻咽癌行IGRT时采用骨匹配模式进行图像匹配是一种准确、快捷的方法,可以提高IGRT的工作效率.

    作者:王永刚;陈宏;刘跃;刘均 刊期: 2010年第04期

  • 改善胃硬癌预后

    胃癌预后较差,而胃硬癌因其粘膜下弥漫性生长方式导致发现更晚,预后更差.(新)辅助治疗如放疗和(或)化疗的出现为进一步改善预后提供新途径,也成为国内、外研究肿瘤防治的热点.

    作者:李海军;车向明 刊期: 2010年第04期

  • 任意皮瓣局部注射VEGF对其抗菌力影响的实验研究

    目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)对皮瓣抗菌力的影响.方法:选用60只SD大鼠,制作背部6×4cm任意皮瓣的动物模型.术中VEGF组局部注射VEGF 1.0μg/瓣,对照组注射等量生理盐水.术后即刻注射绿脓杆菌.结果:碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的测定:术后第3天皮瓣VEGF组bFGF阳性细胞数较生理盐水对照组相应部位有显著增加,差异有显著意义(P<0.01).琥珀酸脱氢酶(SDH):术后第4天VEGF组中段和远段皮瓣 SDH活力明显高于生理盐水对照组相应部位,差异有显著意义(P<0.01). 电镜观察见VEGF组成纤维细胞和血管内皮细胞形态和功能较生理盐水对照组好.术后第11天IL-1β阳性细胞数VEGF组皮瓣较生理盐水对照组皮瓣低,差异有显著意义(P<0.01).皮瓣在100低倍镜视野计算血管密度VEGF组较生理盐水对照组高,差异有显著意义(P<0.01).结论:VEGF能改善皮瓣微循环、促进血管再生,有明显的促进任意皮瓣成活、抗感染作用.

    作者:程天军;赵辉;张景华 刊期: 2010年第04期

  • 食管鳞癌患者Th1/Th2漂移与临床病理因素之间关系的研究

    目的:探讨食管鳞癌患者Th1/Th2转录因子和细胞因子的表达与临床病理因素之间的关系,为肿瘤免疫治疗提供实验依据.方法: 实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测食管癌患者及正常组外周血单个核细胞(PBMC)中转录因子T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-4、IL-10的表达.结果: 与正常对照比较,食管鳞癌患者PBMC中Th1型转录因子T-bet和血浆中Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2的表达水平显著降低(P<0.01);Th2型转录因子GATA-3和细胞因子IL-4、IL-10的表达水平显著升高(P<0.01),并且Th1/Th2漂移程度与肿瘤的CT分期和病灶长度相关(P<0.05),而与病变的部位、病理分型及分化程度无明显相关性(P>0.05).结论: 食管鳞癌患者体内存在Th1/Th2漂移,这可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸的机制之一.

    作者:王强;陈德玉 刊期: 2010年第04期

  • 鸦胆子油对肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用

    目的:探讨鸦胆子油抑制肝癌细胞生长的机制.方法: 人肝癌细胞SMMC-7721培养于含10%胎牛血清、100 U·ml-1青霉素、链霉素的RPMI1640 培养液中.以不同浓度的鸦胆子油乳加入培养液,作用一定的时间,进行MTT 比色实验,检测生长抑制率及分析细胞周期.结果: MTT比色法测定显示鸦胆子油抑制肝癌细胞的生长,随着浓度增加和作用时间的延长,抑制作用呈现逐渐增加的趋势.细胞周期分析提示:G0-G1期比例逐渐增加,而S期比例逐渐减少,1μg·ml-1组中各时间点及2μg·ml-1组中各时间点均有显著差异(P<0.01).G2-M期细胞比例减少,但差异无统计学意义 (P>0.05).结论: 鸦胆子油抑制体外培养的人肝癌细胞的增殖,机制可能是将肝癌细胞阻滞于G0-G1期.

    作者:田春桃;韩利艳 刊期: 2010年第04期

  • 奈达铂联合诺维本治疗晚期食管癌的临床疗效观察

    目的:观察奈达铂联合诺维本治疗晚期食管癌的疗效和不良反应.方法:晚期食管鳞癌34例,奈达铂80-100mg/m2加入NS 500ml静脉滴注2h以上,第1天;诺维本25mg/m2加入NS 40ml中静脉推注,第1、8天,21天为1周期,连用2个周期后评价疗效.结果:全组 34例均可评价疗效及不良反应,总有效率 58.8%.其中初治21例中,PR 14例,有效率66.7%;复治13例中,PR 6例,有效率46.2%.主要不良反应为骨髓抑制,7例(20.6%)患者出现Ⅲ-Ⅳ度白细胞下降,3例(8.8%)患者出现Ⅲ-Ⅳ度血小板下降.消化道反应轻,未发现肝肾功能损害.结论:奈达铂联合诺维本治疗晚期食管癌疗效肯定,不良反应小,值得临床推广使用.

    作者:王先国;朱红;朱琳 刊期: 2010年第04期

  • ICTP在诊断乳腺癌骨转移中的临床价值

    目的:探讨ICTP在诊断乳腺癌骨转移中的临床价值.方法:用EIA法测定60例乳腺癌患者和23例健康体检者的ICTP血清水平.结果:乳腺癌骨转移患者ICTP血清水平较非骨转移和正常对照组显著升高,其诊断敏感性为77.8%,特异性为91.3%.多处骨转移患者血清ICTP阳性率和血清水平较单处骨转移患者显著升高且随着乳腺癌分期的升高,血清ICTP阳性率和血清水平也升高.结论:ICTP对乳腺癌骨转移患者的早期诊断,病情监测和临床分期判断具有重要意义.

    作者:林莺莺;陈燕;胡敏华;陈岩松 刊期: 2010年第04期

  • tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

    目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系.方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系.结果:HCC组织中tktl1 阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率 (P<0.05).tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.05);而 tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P>0.05). HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关 (P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P>0.05).结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点.

    作者:吴二斌;李莉华;郭子健;宋明旭;丁苏宁;周稀科;刘志辉 刊期: 2010年第04期

  • 原发性肝癌患者血清酶类指标变化的临床价值

    目的:探讨血清a-L-岩藻糖苷酶(AFU)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)和胆碱酯酶(CHE)对原发性肝癌(primary hepatocarcinoma,PHC)的诊断价值.方法:使用全自动生化分析仪对107例原发性肝癌患者血清中AFU、GGT、ALP和CHE进行检测.结果:原发性肝癌患者血清AFU、GGT、ALP和CHE水平及阳性率均明显高于正常对照组及良性肝病组(P<0.01);联合检测的敏感性和诊断准确性均比单项检测高.结论:联合检测血清中AFU 、GGT、ALP和CHE对原发性肝癌诊断具有重要临床价值.

    作者:雷鸣;黄吉敢;胡超杰 刊期: 2010年第04期

  • 三维适形放疗与紫杉醇周方案同步治疗老年Ⅲ期非小细胞肺癌的近期疗效观察

    目的:评估三维适形放疗与紫杉醇周方案化疗同步治疗老年Ⅲ期非小细胞肺癌(NSCLC)的近期疗效.方法:2006年6月-2008年6月收治的62例老年Ⅲ期非小细胞肺癌患者,予以三维适形放疗,放疗剂量为60-70Gy/6-7周,同时行化疗,为紫杉醇周方案:紫杉醇60mg/m2,静脉滴注第1,8,15天,28天为1周期.结果:完全缓解率(CR)20.9%,部分缓解率(PR)62.9%,总有效率(CR+PR)83.8%.不良反应主要为骨髓抑制、消化道反应、放射性肺炎及放射性食管炎.结论:放疗与紫杉醇周方案化疗同步治疗老年Ⅲ期非小细胞肺癌的近期疗效较为满意,不良反应可以耐受.

    作者:唐友明 刊期: 2010年第04期

  • 放射治疗乳腺湿疹样癌1例

    乳腺湿疹样癌病例较少,我科收治一例患者,疗效满意,现报道如下.1 临床资料患者2002年无明显诱因出现左侧乳头搔痒,抓破后有少量液体渗出,后干燥、结痂.症状反复发作,皮损不能完全消退,范围逐渐扩大,于外院就诊,无明确诊断,2006年求诊于我院,行病理检查诊断湿疹伴感染,给予对症治疗后症状有所缓解,但皮疹范围无明显缩小.

    作者:高宏;邵秋菊;周惠敏;吴淑娟 刊期: 2010年第04期

  • FISH技术在恶性淋巴瘤诊断中的应用

    荧光原位杂交( fluorescence in situ hybridization,FISH)已经成为诊断和评估恶性淋巴瘤的一项确定技术,其结果快速准确,较传统的细胞遗传学诊断技术有明显的优越性,在临床应用中有广泛的前景.

    作者:王丽丽;陈云昭;李锋 刊期: 2010年第04期

  • 16排螺旋CT诊断周围型小肺癌的征象分析

    目的:探讨16排螺旋CT对周围型小肺癌的诊断价值.方法:回顾性分析经手术和(或)病理证实的80例有完整资料的周围型小肺癌的16排螺旋CT扫描征象.结果:80例先行CT平扫,结果示深浅分叶征56例,毛刺征46例,空泡征50例,胸膜凹陷征51例,血管纠集征10例,支气管充气征3例.其中54例加做CT强化扫描,其中49例CT值增幅>30Hu,占90%.结论:16排螺旋CT平扫及强化扫描对周围型小肺癌具有较大诊断价值.

    作者:卢叶灿;吴俊兰 刊期: 2010年第04期

  • 36例侵及肠管卵巢癌切除术后消化道功能障碍的诊治与探讨

    目的:探讨侵及肠管卵巢癌切除术后消化道功能障碍的病因、发生机制、诊断和治疗方法.方法:对1998年1月至2008年5月收治的36例侵及肠管卵巢癌切除术后消化道功能障碍的临床资料进行回顾性分析.结果:消化道功能障碍均发生于妇科手术后3-12天.35例(97.2%)经非手术治疗于术后13-48天恢复胃肠动力,痊愈出院.3周内治愈17例(47.2%),4周内治愈32例(88.9%),1例(2.8%)因经济原因放弃治疗而死亡.结论:侵及肠管卵巢癌切除术后消化道功能障碍的病因是多因素的,消化道造影及胃镜检查是诊断胃排空障碍及鉴别机械性梗阻的重要手段.采取非手术疗法可治愈胃排空障碍,应尽量避免再次手术.

    作者:徐萍萍 刊期: 2010年第04期

  • 口腔鳞癌卡铂,平阳霉素,氨甲喋呤术前诱导化疗的临床研究

    目的:探讨卡铂,平阳霉素,氨甲喋呤术前诱导化疗对口腔鳞癌的临床效应.方法:45例32-72岁的口腔鳞癌患者,采用卡铂,平阳霉素,氨甲喋呤术前诱导化疗1个周期,化疗后3-5天,对常规检查正常者再进行手术治疗,对其近期疗效进行评价,随访3-5年.结果:诱导化疗后80%的患者肿瘤缩小50%以上,39 例手术患者近期疗效评价中,完全缓解 1例,部分缓解14例,无效16例;术后3、5年生存率分别为71.2%、66.7%.结论:卡铂,平阳霉素,氨甲喋呤用于口腔鳞癌术前诱导化疗,具有较满意的临床效果,与相应的手术相结合可以提高患者远期生存率.

    作者:郅克谦;李亚军;张密荣;任文豪;荔鹏;李心强 刊期: 2010年第04期

现代肿瘤医学杂志

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主管:陕西省科学技术协会

主办:中国抗癌协会 陕西省抗癌协会 陕西省肿瘤防治研究所 陕西省医学会