学术投稿

血液标本凝块对核酸检测混合加样的影响

钱榕;熊丽红;刘强

关键词:血液标本, 核酸检测, 混合加样
摘要:自开展血液核酸检测工作以来,检测过程中遇到血液标本凝块造成标本混样失败,从而进行重复操作,核酸检测中血液标本凝块不仅严重影响到混样的效率,并且反复离心也对标本造成一定的影响,不仅增加了核酸检测的检测成本,浪费耗材和试剂.也增加了工作人员的工作量,为此我们对标本的前处理进行分析,现报道如下.
中国输血杂志相关文献
  • 类抗-DC自身抗体致配血不合1例

    1 病例简介患者,女,89岁,汉族,无输血史,孕2产2,无新生儿溶血史.2009年因“糖尿病合并左下肢溃疡”在当地社区卫生服务中心治疗,连续服用SMZ 2年余.近期因头晕、恶心、四肢乏力3d来我院就诊,临床诊断为重度贫血(原因待查).入院时外周血常规检查结果:RBC 1.23×1012/L,WBC 7.1×109/L,Plt 145×109/L,Hb 45g/L,Hct 0.117.入院后给予对症治疗(包括输注悬浮红细胞),备血时,血型血清学检测红细胞血型:A型、RhD阳性,抗体筛查阳性;血液交叉配血试验:盐水介质法主侧、次侧均无凝集溶血,凝聚胺介质法主侧、次侧均凝集,进一步检测确认患者血清及放散液中检出类抗-DC类同种特异性自身抗体.

    作者:鲍聿炜;黄崴;吴春芳;胡雷光;向东 刊期: 2012年第06期

  • 类孟买血型鉴定1例

    我们对上海国妇婴保健院ABO定型困难而送检的孕妇血样进行了ABO血型鉴定,发现其为类孟买血型(Bhm),并对其做了进一步的血清学、基因测序及家系调查,现报道如下.1 材料与方法1.1 患者资料 患者,女,32岁,汉族,籍贯上海,无输血史,无药物史.系上海国妇婴保健院妇产科患者,P1G0,怀孕18周到医院检查,检测血型时发现ABO血型正反定型结果不符,遂于2011年6月送至上海市血液中心做进一步鉴定.

    作者:林杰;蔡晓红;范亮峰 刊期: 2012年第06期

  • 标本保存温度、时间和不同采血管对核酸检测结果的影响

    目的 验证不同真空采血管、保存温度、时间等对核酸检测(NAT)结果的影响,为NAT检测的采血管选取、过程控制、检测策略等提供数据支持.方法 进行3个试验:1)标本保存温度、离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果的影响:将含HIV-1( 150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存温度分为30℃组、4℃组,之后依据标本离心前的保存时间不同分为4h,6h,8h,10 h,12 h,24h组,再依据采血管生产厂家不同分为A、B、C组,对所有标本进行NAT联检试验,利用卡方统计分析各因素对NAT联检试验结果的影响;2)标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响:将含HIV-1( 150 IU/ml)或HCV( 60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存时间不同分为0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d组,再依据采血管不同分为采血管A、B、C组,对所有标本进行NAT鉴别试验,利用卡方统计分析标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响;3)保存时间对HCV阳性标本NAT定量结果的影响:选取9份浓度范围在1.04×102 IU/ml ~ 4.86×103 IU/ml之间的弱阳性标本,依据标本在4℃保存时间的长短不同,分为0d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d组,进行定量HCVRNA检测,分析4℃保存条件下保存时间对血浆中HCV RNA浓度的影响.结果 试验1:对于全血标本,4℃或30℃的保存温度,4~24 h的离心前保存时间以及采用不同的采血管对弱阳性标本NAT检出率的影响差异均无统计学意义(P>0.05).试验2:在4℃保存条件下,采用A采血管保存含HIV-1( 150 IU/ml)的弱阳性标本0~7d,保存后d3,d4、d5、d6、d7弱阳性标本的NAT检出率与0d相比,差异具有统计学意义(P<0.01);采用B采血管保存含HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本0~7d,保存后d3和d7此标本的NAT检出率与保存前相比差异有统计学意义(P<0.01);其余各组标本的NAT检出率与保存前相比差异没有统计学意义;试验3:9份HCV弱阳性标本的浓度7d内没有出现明显变化.变化范围均在0.56log之内,且有相同的变化趋势,即在4℃保存2d后,其浓度开始下降.结论 采用Procleix Ultrio Assay和Procleix Ultrio Discriminatory Assay分析系统,在不超过30℃的采血环境中,NAT标本采集后可以在24h内离心处理;为提高鉴别阳性率,建议4℃保存的献血者标本在NAT联检阳性后2d内完成NAT鉴别检测.

    作者:姚凤兰;陈瑜;汪德海;冷婵;查祎;张莉;王中梅;杨海平;郑静;葛红卫 刊期: 2012年第06期

  • 大学生和农民工无偿献血知识和献血动机的调查

    目的 综合评价大学生和农民工无偿献血知识和动机.方法 通过调查石家庄市大学生和农民工无偿献血知识和动机认知现状,对大学生和农民工无偿献血知识和动机作出综合评价.结果 献血反应发生率很小、精神因素是献血反应发生的主要因素、献血是为了尝试体验一下献血过程、献血是迫于无奈或压力等回答正确率不高;免费用血、累计无偿献血达到一定数量者给予奖励、无偿献血不会影响健康和感染疾病以及奉献爱心,帮助需要用血的患者、献血可以体现社会价值、今后享受用血优惠、献血可以减肥等价值取向上,2类人群认知差异有统计学意义(P<0.05).结论 大学生的整体认知水平高于农民工,但2类人群的认知状况有待于进一步提高.

    作者:宋任浩;赵莉华;何路军 刊期: 2012年第06期

  • 无偿献血者检出获得性B抗原1例

    无偿献血者丁某,女,51岁,在本站采血点经健康征询、体检合格后于2012年1月1日献全血400ml,初筛检测血型为AB型,检验科进行血标本检测时发现正定型为AB型,反定型为A型,正反定型不一致,随将标本送至我室,经检测该献血者为A型,红细胞上有获得性B抗原,现将实验情况报道如下.

    作者:张军;李鹏;侯振娇 刊期: 2012年第06期

  • 输血相关HBV风险评估的研究进展

    自1943年美国的Beeson[1]首次报道输血后肝炎病例起,针对于输血传播疾病的风险研究就从未停止过.众所周知,HBV是目前世界范围内为普遍的慢性感染的病原体.全世界近三分之一的人口曾经暴露于HBV,大约有3.5 ~4亿人发生过感染[2].研究表明输血相关HBV风险的大小与所在地区HBV的流行率的高低[3]以及当地采取的血液HBV筛检策略[4]密切相关.尽管各地区HBV流行率不同,血液检测策略也不尽相同,但各国的血液HBV残留风险评估研究得出了相同的结论:与产生严重社会影响的输血传播HIV相比,发生输血相关HBV的风险要高出数倍至数十倍[5].

    作者:邓雪莲;张丽 刊期: 2012年第06期

  • 沈阳地区口腔颌面外科手术临床用血回顾

    目的 评估沈阳地区不同口腔颌面外科手术围术期用血状况,以了解血液保护取得的临床疗效和存在的问题.方法 2005年1月1日~2010年12月31日在本院行口腔颌面部外科手术,且在围术期接受输血患者共421名,采用回顾性研究方法比较不同手术种类不同年份临床输血趋势.结果 6年来红细胞悬液输入量随输血手术例数逐年增多而增多.红细胞悬液的平均输入量呈上升趋势,2010年比2005年红细胞悬液平均输入量增加0.66 U.红细胞悬液输入量的变化趋势与输血手术例数呈明显相关性P<0.05;新鲜冰冻血浆输入量的变化趋势与输血手术例数呈无明显相关性P>0.05.结论 血液保护工作在口腔颌面部外科手术围术期红细胞悬液输入中有一定成效,但对于新鲜冰冻血浆和血小板的合理使用还需要进一步改进.

    作者:张霞;何晓帆;白晓峰;张倩 刊期: 2012年第06期

  • 柳州地区无偿献血者汉族人群Kidd血型分布与输血风险的评估

    目的 无偿献血者汉族人群Kidd血型不配合的输血风险进行评估,构建柳州地区无偿献血者红细胞稀有血型库.方法 根据JK(a-b-)血型人的红细胞对2 mol/L尿素的溶解有抵抗性,我们使用2 mol/L尿素试验筛查JK表型阴性标本.用微量板法检测Kidd血型,将已知微量抗-JKa、抗-JKb分别加入相对应孔,分别检测献血者红细胞上有无JKa或JKb.结果 1 611名汉族无偿献血者Kidd血型基因频率JKa=0.4675、JKb =0.5325.由于调查对象数量较少,未能筛选出JK(a-b-)标本.JKa不配合输血风险为0.1708,JKb不配合输血风险为0.2032,JKa、JKb不配合输血风险合计为0.374.抗-JKa随机输血不配合可能性为70.2%,抗-JKb随机输血不配合可能性为76.7%.结论 使用盐水介质法、快速聚凝胺法或者卡式配血法的同时,结合酶法以及经典的抗球蛋白法,多种配血方法的联合使用,可以避免某些血型系统弱抗体的漏检.

    作者:谭庆芬 刊期: 2012年第06期

  • 2种酶联免疫试剂筛查血液抗-HIV应用比较

    目的 评估使用2种不同酶联免疫(ELISA)试剂对无偿献血者血液抗-HIV检测应用的效果.方法 采用第3代与第4代2种抗-HIV(1+2) ELISA试剂平行检测献血者标本,初筛阳性标本送江门市疾病预防控制中心确证.结果 检测125 245例标本,第3代抗-HIV(1+2) ELISA试剂初筛阳性198例,确证阳性20例,其灵敏性与特异性分别为:100%与99.81%;第4代抗-HIV(1+2) ELISA试剂初筛阳性352例,确证阳性20例,其灵敏性与特异性分别为:100%与99.64%.结论 同时平行使用第3代与第4代2种抗-HIV酶联免疫试剂对献血者血液进行抗-HIV筛查具有较高可靠性,可降低经血源传播HIV的危险性.

    作者:冯健亮;翁远桥;陈日明;梁均和;廖世生 刊期: 2012年第06期

  • 亲和凝胶分离纯化人α1-抗胰蛋白酶的研究

    目的 探索通过免疫亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化人α1-抗胰蛋白酶浓缩物的方法.方法 24℃下,将Cohn氏法组份Ⅳ用Tris缓冲液抽提0.5h后,离心4 750 g×15 min,上清液加入亲水型气相二氧化硅脱脂后,离心6 000 g×15 min,再用1.2 μm的滤膜过滤;通过GE公司新型的Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和凝胶层析柱,对α1-抗胰蛋白酶进行纯化.用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;用SDS-PAGE鉴定α1-抗胰蛋白酶的纯度,并用Western Blot和串联质谱分析鉴定纯化的蛋白;通过发色底物法测定α1-抗胰蛋白酶活性.结果 纯化的α1-抗胰蛋白酶在非还原性SDS-PAGE图谱上呈现1条54 kD左右的蛋白带和1条约140 kD的多聚体蛋白带,经过还原性SDS-PAGE多聚体条带解聚,Western Blot也可以反应相关变化;在经过前处理和亲和层析后,α1-抗胰蛋白酶活性回收率为(60.35±1.39)%,α1-抗胰蛋白酶总活性回收率为(41.88±6.98)%,纯化倍数为(71.68±1.32)倍,比活性大约(1.00~1.05)PU/mg.结论 GE公司Alpha-1 Antitrypsin Select免疫亲和层析亲和层析可以从Cohn氏法组份Ⅳ中特异性捕获α1-抗胰蛋白酶浓缩物.

    作者:张学俊;叶生亮;曹海军;王宗奎;杜晞;谢亦武;李长清 刊期: 2012年第06期

  • 丽水市Rh阴性献血者血清学表型和不规则抗体调查

    目的 了解丽水市无偿献血者Ph阴性的血清学表型和不规则抗体分布情况.方法 应用血清学方法对献血者进行Rh阴性筛选及确认、血清学表型鉴定及抗体筛选抗的检测分析.结果 在38 500人份标本中共确认Rh阴性151例,其中检出血清含有不规则抗体的标本有4例,Rh阴性献血者中ABO血型分布的结果:A型46例(30.4%),B型43例(28.4%),O型55例(36.4%),AB型7例(4.6%)及其血清学表型分布.结论 通过这次的筛查了解丽水市无偿献血者Rh阴性的血清学表型和不规则抗体的初步状况,并掌握丽水市Rh阴性血型频率,血清学表型分布及其不规则抗体的情况.

    作者:庄杰;赵龙友;纪勇平;骆昊翠;孙敏;吴士定 刊期: 2012年第06期

  • 1例ABw表型的血清学和基因型检测

    目的 鉴定对1例ABO疑难血型标本的表型和基因型.方法 1例ABO疑难血型标本用血清学方法做ABO表型检测,用PCR-SSP法做ABO基因鉴定,用直接测序法和克隆测序法对ABO基因的第6、7外显子做序列分析.结果 血清学定型:ABw表型;PCR-SSP法鉴定:AB型;直接测序:A101/B101等位基因杂合,但伴有nt1055的G/A突变;克隆测序:G1055A突变发生在B101等位基因上,该突变产生Bw07等位基因.结论 在中国人群中发现A101/Bw07基因型.

    作者:孟庆丽;高勇;段莹;潘凌子;肖南;于卫建 刊期: 2012年第06期

  • 高通量MLPA基因分型技术在1个Del表型家系基因鉴定中的应用

    目的 对1个Del表型家系作基因鉴定.方法 运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA.运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认.结果 血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体.MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因.结论 高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液.

    作者:姬艳丽;赵阳;王贞;张润青;骆宏;莫春妍;魏玲;罗广平 刊期: 2012年第06期

  • 五常法在血站仓库管理中的应用

    目地 探索“五常法“在血站仓库管理中的应用效果.方法 通过运用”五常法“,将常组织、常整顿、常规范、常清洁、常自律运用于血站仓库管理中.结果 提高了血站仓库物资管理质量,有效的利用了仓储空间,减少物资的积压和浪费,保证了采供血物资的安全性.结论 运用“五常法”对血站仓库进行规范化管理,有利于提高物资质量,保障了原材料及时和充足的供应,物资进仓的合格率达到100%,仓储物资的保管零报废,提高了工作效率.

    作者:杨华 刊期: 2012年第06期

  • 重组人血小板CD36基因真核表达载体的构建及蛋白表达

    目的 制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的纯化表达蛋白胞外区30 ~439氨基酸残基段.方法 提取人肝细胞组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30~Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒.经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 his真核瞬时表达载体.采用lipofectamine 2000 (invitrogen)转染法,将重组质粒转染HEK-293细胞,表达产物经Ni2+ 2NTA柱层析纯化.结果 RT-PCR扩增获得了1.4kb的片段.invitrogen测序,该序列分析结果与Genebank中的NM_001001547.2完全一致.SDS-PAGE证实转染的HEK-293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段.结论 利用构建的真核载体pTE2-s-CD36转染人胚肾细胞(HEK293)可高效表达CD36 Gly30~Asn439,得到纯化蛋白,为人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效影响的深入研究奠定基础.

    作者:付丽辉;张杰;孙春昀;陈麟凤;冯倩;罗圆圆;张晓娟;王可;于洋;汪德清 刊期: 2012年第06期

  • 过期血液中血小板生长因子促细胞增殖作用的初步研究

    目的 探讨过期血液中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用.方法 选取全血和浓缩血小板样品为研究对象,分别采用冻融法和CaCl2法处理保存d1、5、10的血小板,应用ELISA试剂盒测定样品中PDGF-AB、TGF-β1的含量,应用CCK-8试剂盒测定样品的促细胞增殖作用;在全血保存d1、10、21、35、40时取样,离心收集血浆,测定其血小板生长因子含量和促细胞增殖作用.结果 CaCl2法处理的d1、5、10血小板样品中PDGF-AB含量分别为86.56±19.66、76.15±18.55、70.65±24.13 ng/ml,TGF-β1的含量分别为86.40±19.92、79.80±16.54、92.45±17.59 ng/ml;冻融法处理的d1、5、10血小板样品中PDGF-AB含量分别为48.24±3.73、60.91±18.39、69.35±22.29 ng/ml,TGF-β1的含量分别为107.57 +46.48 149.33±24.78 154.26±38.99 ng/ml,同一处理方法d1、5、10血小板样品中生长因子含量无明显差别(P>0.05);同一处理方法不同时间点血小板样品对细胞增殖作用无明显差别(P>0.05);冻融法处理后样品在浓度20%时促细胞增殖率明显下降;不同时间点全血血浆促细胞增殖作用趋势线相近,在样品浓度达到20%时促细胞增殖率均明显下降.结论 过期血小板中血小板生长因子含量及促细胞增殖作用与新鲜血小板无显著差异,过期全血血浆中的血小板生长因子与新鲜全血相比也得到了相似的初步结果.

    作者:于晶晶;王红;刘曦;袁理;刘嘉馨 刊期: 2012年第06期

  • 血站核酸检测实验室人员培训模式探讨

    2010年血站核酸检测(NAT)试点实验室在部分血站开始试运行.在NAT实验室构建过程中,人员培训是检测过程顺利进行,获得高质量、高效率检测工作的重要保证[4,5].也是实验室构建质量体系过程中重要质量活动[6].对此本实验室根据血站实验室的法规要求[1,2],NAT检测技术对操作人员在理论和技能方面的需求,结合血站血液筛查工作的特点,设计了多内容、多模式、多角度的理论培训和实际操作紧密结合的滚动式培训框架.从人员角度保证了核酸检测实验室工作的顺利进行.

    作者:郑静;姚凤兰;冷婵;王中梅;汪德海;杨海平;查祎;葛红卫 刊期: 2012年第06期

  • 济源市临床输血申请单中输血目的调查分析

    目的 分析本市临床输血申请单中输血目的情况,指导临床科学合理用血.方法 对2010年本市24家医疗机构临床医生开出的临床输血申请单进行回顾性调查和分析.结果 调查的5 862份临床输血申请单中输血情况为红细胞类3 693例,血浆类2 169例,其中合并输血1074例,占18.32%;按临床输血申请单中输血目的情况分类:红细胞类用血不合理1 295例,占35.07%,血浆类不合理1 132例,占52.19%;外科系统、内科系统红细胞申请输注目的不合理率分别为52.7%、9.04%;血浆输注目的不合理率分别为55.92%、46.61%.结论 血浆类不合理使用较多,内科系统对除血浆外的血液成分输注适应症掌握较好,而外科系统对输血指征掌握欠佳.应加强对临床医生对科学合理用血知识的培训,制定本市临床用血规程,严格临床输血指征,严格审批,提高血液保护技术,对临床输血进行评价.

    作者:李晓雪;吉素清;葛云萍;齐涛 刊期: 2012年第06期

  • 偏远县市设置献血房车固定献血点对于提高无偿献血采集量的效果评价

    目的 探讨在距中心血站偏远的县市普遍设立献血房车对无偿献血招募的作用.方法 对恩施土家族苗族自治州(恩施州)各县市设立献血房车与否或设立献血房车前后的采血量等数据作分析比较,评估献血房车作为固定献血点的招募效果.结果 2011年7~12月,设立献血房车的6个县市采血量增长4660 U,同比平均增长36.63%(14.98% ~59.62%);未设立献血房车的2个县采量增长225.5 U,同比增长6.15%(5.59% ~6.74%);咸丰县设献血房车后较献血屋采血量增长586.5 U,同比增长35.42%.结论 献血房车停放在人口密集的步行街或广场,能“365天”方便边远县市居民的献血,招募献血者的效果稳定、可靠、高效,有助于老少边穷及交通不便的地区建立无偿献血长效机制.

    作者:陈家学;石思蓉;杨仕坤;杨芸 刊期: 2012年第06期

  • 锡林浩特地区血浆报废原因分析

    目的 了解血浆报废原因,减小血浆浪费.方法 2008~2010年锡林郭勒盟中心血站采集、制备的病毒灭活滤白血浆13 549份进行报废原因统计分析.结果 血浆总报废率为20.44%,报废率占前3位的依次为:脂浆> ALT>过期.结论 脂浆报废率高与锡林浩特地区居民饮食习惯及采血前未对血浆进行肉眼筛查有关;ALT报废与非病理性因素相关;过期报废与本地区基层医疗条件偏低、没有合理使用血浆有关.

    作者:张广礼 刊期: 2012年第06期

中国输血杂志

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主管:中华人民共和国卫生部

主办:中国输血协会 中国医学科学院输血研究所