学术投稿

血液标本凝块对核酸检测混合加样的影响

钱榕;熊丽红;刘强

关键词:血液标本, 核酸检测, 混合加样
摘要:自开展血液核酸检测工作以来,检测过程中遇到血液标本凝块造成标本混样失败,从而进行重复操作,核酸检测中血液标本凝块不仅严重影响到混样的效率,并且反复离心也对标本造成一定的影响,不仅增加了核酸检测的检测成本,浪费耗材和试剂.也增加了工作人员的工作量,为此我们对标本的前处理进行分析,现报道如下.
中国输血杂志相关文献
  • 高通量MLPA基因分型技术在1个Del表型家系基因鉴定中的应用

    目的 对1个Del表型家系作基因鉴定.方法 运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA.运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认.结果 血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体.MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G>A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因.结论 高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液.

    作者:姬艳丽;赵阳;王贞;张润青;骆宏;莫春妍;魏玲;罗广平 刊期: 2012年第06期

  • 血站核酸检测实验室质量监控指标应用

    近年来,对血液检测实验室实施质量监控已经成为实验室的一项重要质量活动.实验室质量监控的要求也更多体现在行业法规中.《血站实验室质量管理规范》[1]规定,血站实验室“必须建立和持续改进实验室质量体系,并负责组织实施和严格监控”.美国临床实验室标准委员会CLSI-GP35的发布,更明确了实验室可采用质量监控指标,对检测过程和检测要素进行量化管理和监控,并将其作为改进和完善实验室质量管理体系的重要依据之一.目前,血站行业正在逐步实施血液核酸检测(NAT),建立核酸检测实验室(NAT实验室).相对于已经建立成熟质量监控指标体系的血清学检测过程,如何应用质量监控指标监控NAT检测过程,尚无报道.我们依据本中心NAT实验室基本状况,从过程分析入手,建立了总体类、过程类、资源类监控指标.用这些指标监控NAT过程和NAT实验室质量体系运行状况,以达到控制检测过程、持续改进质量体系的目的.

    作者:汪德海;王瑞;葛红卫 刊期: 2012年第06期

  • 不同保存条件对丙型肝炎病毒核酸稳定性的影响

    目的 探讨不同温度和时间条件下保存对血液中丙型肝炎病毒核酸( HCV RNA)稳定性的影响.方法 采集12名丙型肝炎患者4ml的外周血,分装、保存在不同温度及相同温度下的不同时间,利用实时荧光定量PCR检测其不同时间点血浆HCV RNA的水平(log IU/ml),并与该血液标本的起始HCV RNA水平做比较分析.结果 当血液标本中的HCV RNA起始水平≥105 IU/ml时,在25℃放置6h后转至4℃保存18 h(a)、25℃放置12 h后转至4℃保存12 h(b)及4℃放置24 h(c)等3种保存条件,24 h时内检测到血液标本的HCVRNA水平105IU/ml组分别为(5.15±0.16)、(5.15±0.15)及(5.16±0.16) IU/ml (P> 0.05),107 IU/ml组分别为(7.45±0.21)、(7.44±0.23)及(7.45±0.24) IU/ml (P>0.05);当血液标本中HCVRNA起始水平在临界范围[(3.38±0.14) IU/ml]时,在条件a、b保存24h血液标本的HCV RNA含量分别为(2.28±1.52) IU/ml、0(均为P<0.01),而条件c保存24h血液标本的HCV RNA含量为(3.28±0.20) IU/ml (P >0.05);当血液标本中HCV RNA起始水平为103 IU/ml时,在4℃保存48h时HCVRNA含量为(2.31±1.54) IU/ml (P<0.01).结论 当血液中HCVRNA起始浓度较低时,HCV RNA的稳定性较差,短时常温保存都会造成病毒核酸的降解.

    作者:熊玉娟;周华友 刊期: 2012年第06期

  • 孕妇体内存在高效价IgG抗-A伴抗-D、抗-E的血清学结果分析

    我们在新生儿溶血病产前检查中发现1名孕妇体内存在高效价IgG抗-A伴抗-D、抗-E的病例,现将检查结果分析报道如下.1 资料与方法1.1 标本来源 孕妇,26岁,“O”型,Rh(D)阴性,孕4流3,3年前曾经因流产大出血输注4URh阴性红细胞(未经测定RhC、c、E、e).产前检查血标本为怀孕3个月进行新生儿溶血病产前检查时抽取的静脉血标本.新生儿血标本为该孕妇进行保胎治疗至足月生产时所留取的脐带血标本.

    作者:段福才;辛喜勤;李大元;张秦永 刊期: 2012年第06期

  • 丽水市Rh阴性献血者血清学表型和不规则抗体调查

    目的 了解丽水市无偿献血者Ph阴性的血清学表型和不规则抗体分布情况.方法 应用血清学方法对献血者进行Rh阴性筛选及确认、血清学表型鉴定及抗体筛选抗的检测分析.结果 在38 500人份标本中共确认Rh阴性151例,其中检出血清含有不规则抗体的标本有4例,Rh阴性献血者中ABO血型分布的结果:A型46例(30.4%),B型43例(28.4%),O型55例(36.4%),AB型7例(4.6%)及其血清学表型分布.结论 通过这次的筛查了解丽水市无偿献血者Rh阴性的血清学表型和不规则抗体的初步状况,并掌握丽水市Rh阴性血型频率,血清学表型分布及其不规则抗体的情况.

    作者:庄杰;赵龙友;纪勇平;骆昊翠;孙敏;吴士定 刊期: 2012年第06期

  • 红细胞贮存损伤研究进展

    随着世界范围内无偿献血的全民普及、血液筛查的严格执行,输血传播疾病的几率越来越小,而输血相关非感染性严重危害(noninfectious serious hazards of transfusion,NISHOTs)却上升为输血的主要并发症,超过输血传播疾病的1000倍(表1)[1].

    作者:王全立 刊期: 2012年第06期

  • 重组人血小板CD36基因真核表达载体的构建及蛋白表达

    目的 制备具有功能活性的重组人血小板表面CD36抗原的纯化表达蛋白胞外区30 ~439氨基酸残基段.方法 提取人肝细胞组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人血小板CD36抗原胞外区(Gly30~Asn439)氨基酸残基cDNA,构建于原核表达载体pMD18并转化大肠杆菌DH5α,筛选获得阳性重组子pMD18-CD36,提取质粒.经序列测定后,将该基因插入到真核细胞瞬时表达载体pTE2上,构建成为pTE2-s-CD36-10 his真核瞬时表达载体.采用lipofectamine 2000 (invitrogen)转染法,将重组质粒转染HEK-293细胞,表达产物经Ni2+ 2NTA柱层析纯化.结果 RT-PCR扩增获得了1.4kb的片段.invitrogen测序,该序列分析结果与Genebank中的NM_001001547.2完全一致.SDS-PAGE证实转染的HEK-293细胞表达了人CD36抗原胞外区蛋白片段.结论 利用构建的真核载体pTE2-s-CD36转染人胚肾细胞(HEK293)可高效表达CD36 Gly30~Asn439,得到纯化蛋白,为人血小板CD36表面抗原对血小板输注无效影响的深入研究奠定基础.

    作者:付丽辉;张杰;孙春昀;陈麟凤;冯倩;罗圆圆;张晓娟;王可;于洋;汪德清 刊期: 2012年第06期

  • 1例ABw表型的血清学和基因型检测

    目的 鉴定对1例ABO疑难血型标本的表型和基因型.方法 1例ABO疑难血型标本用血清学方法做ABO表型检测,用PCR-SSP法做ABO基因鉴定,用直接测序法和克隆测序法对ABO基因的第6、7外显子做序列分析.结果 血清学定型:ABw表型;PCR-SSP法鉴定:AB型;直接测序:A101/B101等位基因杂合,但伴有nt1055的G/A突变;克隆测序:G1055A突变发生在B101等位基因上,该突变产生Bw07等位基因.结论 在中国人群中发现A101/Bw07基因型.

    作者:孟庆丽;高勇;段莹;潘凌子;肖南;于卫建 刊期: 2012年第06期

  • Ael02B亚型1例

    1 病例资料献血者,男,汉族,25岁,无特殊疾病.2008年10月来本站第1次无偿献血,其血型正反定型相符,鉴定为B型;2010年12月第2次无偿献血,其血型正反定型相符,鉴定为B型,2次采集血液均发往临床,未见退血记录.2011年10月第3次无偿献血,街头采血车初筛纸板法正定型为B型,在对血液进行试管法复检时发现正定型为AB型,反定型为B型,正反定型不符,怀疑为表达弱A抗原的AB型.进一步的鉴定证明该献血者ABO血型为Ael02B.

    作者:王成辉;陈远贵;杨清平;刘佳;孙国伟;卜坤 刊期: 2012年第06期

  • 济源市临床输血申请单中输血目的调查分析

    目的 分析本市临床输血申请单中输血目的情况,指导临床科学合理用血.方法 对2010年本市24家医疗机构临床医生开出的临床输血申请单进行回顾性调查和分析.结果 调查的5 862份临床输血申请单中输血情况为红细胞类3 693例,血浆类2 169例,其中合并输血1074例,占18.32%;按临床输血申请单中输血目的情况分类:红细胞类用血不合理1 295例,占35.07%,血浆类不合理1 132例,占52.19%;外科系统、内科系统红细胞申请输注目的不合理率分别为52.7%、9.04%;血浆输注目的不合理率分别为55.92%、46.61%.结论 血浆类不合理使用较多,内科系统对除血浆外的血液成分输注适应症掌握较好,而外科系统对输血指征掌握欠佳.应加强对临床医生对科学合理用血知识的培训,制定本市临床用血规程,严格临床输血指征,严格审批,提高血液保护技术,对临床输血进行评价.

    作者:李晓雪;吉素清;葛云萍;齐涛 刊期: 2012年第06期

  • 儿童手术患者输血相关急性肺损伤调查

    目的 调查输血相关性急性肺损伤(TRALI)在儿童手术输血患者发病情况.方法 对2007年1月~2010年12月期间住院的2 495名手术输血儿童调查,分析发生呼吸窘迫或者肺水肿的患者输血情况,结合临床症状和发病时间判断是否为TRALI.同时分析发生TRALI的临床发病特点、实验室检查、影像检查、治疗措施、预后.结果 2 495名儿童3 423次输血,其中35名患者输血后发生出现呼吸系统疾病,2名符合TRALI的临床表现,这2名患者输注的血液制品为女性献血者新鲜冰冻血浆.结论 儿童手术输血患者发生RALI的率为0.58‰,富含血浆的血液制品是引起儿童手术患者发生TRALI的危险因素.

    作者:王秋实;邢准;孟凌新;杨巧妮 刊期: 2012年第06期

  • 标本保存温度、时间和不同采血管对核酸检测结果的影响

    目的 验证不同真空采血管、保存温度、时间等对核酸检测(NAT)结果的影响,为NAT检测的采血管选取、过程控制、检测策略等提供数据支持.方法 进行3个试验:1)标本保存温度、离心前保存时间及采血管对NAT联检试验结果的影响:将含HIV-1( 150 IU/ml)或HCV(60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存温度分为30℃组、4℃组,之后依据标本离心前的保存时间不同分为4h,6h,8h,10 h,12 h,24h组,再依据采血管生产厂家不同分为A、B、C组,对所有标本进行NAT联检试验,利用卡方统计分析各因素对NAT联检试验结果的影响;2)标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响:将含HIV-1( 150 IU/ml)或HCV( 60 IU/ml)或HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本按照保存时间不同分为0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d组,再依据采血管不同分为采血管A、B、C组,对所有标本进行NAT鉴别试验,利用卡方统计分析标本保存时间、采血管对NAT鉴别试验结果的影响;3)保存时间对HCV阳性标本NAT定量结果的影响:选取9份浓度范围在1.04×102 IU/ml ~ 4.86×103 IU/ml之间的弱阳性标本,依据标本在4℃保存时间的长短不同,分为0d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d组,进行定量HCVRNA检测,分析4℃保存条件下保存时间对血浆中HCV RNA浓度的影响.结果 试验1:对于全血标本,4℃或30℃的保存温度,4~24 h的离心前保存时间以及采用不同的采血管对弱阳性标本NAT检出率的影响差异均无统计学意义(P>0.05).试验2:在4℃保存条件下,采用A采血管保存含HIV-1( 150 IU/ml)的弱阳性标本0~7d,保存后d3,d4、d5、d6、d7弱阳性标本的NAT检出率与0d相比,差异具有统计学意义(P<0.01);采用B采血管保存含HBV(50 IU/ml)的弱阳性标本0~7d,保存后d3和d7此标本的NAT检出率与保存前相比差异有统计学意义(P<0.01);其余各组标本的NAT检出率与保存前相比差异没有统计学意义;试验3:9份HCV弱阳性标本的浓度7d内没有出现明显变化.变化范围均在0.56log之内,且有相同的变化趋势,即在4℃保存2d后,其浓度开始下降.结论 采用Procleix Ultrio Assay和Procleix Ultrio Discriminatory Assay分析系统,在不超过30℃的采血环境中,NAT标本采集后可以在24h内离心处理;为提高鉴别阳性率,建议4℃保存的献血者标本在NAT联检阳性后2d内完成NAT鉴别检测.

    作者:姚凤兰;陈瑜;汪德海;冷婵;查祎;张莉;王中梅;杨海平;郑静;葛红卫 刊期: 2012年第06期

  • 无偿献血纠纷的原因和解决途径

    无偿献血者绝大部分都是为了奉献爱心,是为社会做出自己应有的贡献,同时也存在一些矛盾和纠纷,这些消极的现象和绝大部分正面的积极的结果比起来只是风毛麟角.尽管有些还达到了很严重的程度,但对整个血站的采血工作和良好的工作秩序造成不同程度的影响.下面,我们就针对近年来发生较严重纠纷一些行为表现中存在的实例问题进行探讨和分析.

    作者:薛斌利;叶世辉;宋王洁;洪丙炎;李晓玲;杨华;潘志伟;张建耕 刊期: 2012年第06期

  • 输血相关HBV风险评估的研究进展

    自1943年美国的Beeson[1]首次报道输血后肝炎病例起,针对于输血传播疾病的风险研究就从未停止过.众所周知,HBV是目前世界范围内为普遍的慢性感染的病原体.全世界近三分之一的人口曾经暴露于HBV,大约有3.5 ~4亿人发生过感染[2].研究表明输血相关HBV风险的大小与所在地区HBV的流行率的高低[3]以及当地采取的血液HBV筛检策略[4]密切相关.尽管各地区HBV流行率不同,血液检测策略也不尽相同,但各国的血液HBV残留风险评估研究得出了相同的结论:与产生严重社会影响的输血传播HIV相比,发生输血相关HBV的风险要高出数倍至数十倍[5].

    作者:邓雪莲;张丽 刊期: 2012年第06期

  • 无偿献血者检出获得性B抗原1例

    无偿献血者丁某,女,51岁,在本站采血点经健康征询、体检合格后于2012年1月1日献全血400ml,初筛检测血型为AB型,检验科进行血标本检测时发现正定型为AB型,反定型为A型,正反定型不一致,随将标本送至我室,经检测该献血者为A型,红细胞上有获得性B抗原,现将实验情况报道如下.

    作者:张军;李鹏;侯振娇 刊期: 2012年第06期

  • 无偿献血志愿工作者服务探讨

    随着无偿献血工作的发展,无偿献血志愿工作者服务队在各地悄然兴起,对无偿献血事业的发展起着一定的推动作用.我市于2007年6月成立无偿献血志愿工作者服务队,现有在册志愿者330余人.在这几年运行的过程中,我们不断地探索如何提升无偿献血志愿工作者的服务水平、服务激情以及队伍本身的发展,从而在无偿献血宣传中起到切实的作用,现将一些体会报道如下.

    作者:赖建秀;何燕琴;张学昇;史影 刊期: 2012年第06期

  • 足三里穴位按摩在处理献血不良反应中的应用探讨

    目的 探讨足三里穴位按摩在处理献血不良反应中的治疗方法和效果.方法 将500名发生献血不良反应的献血者随机分为2组,观察组除按常规献血不良反应处理外并进行足三里穴位按摩,对照组仅进行常规献血不良反应处理,必要时给予药物对症治疗.结果 观察组与对照组轻度、中度献血不良反应的献血者在各时间段好转的献血者数差异具统计学意义;重度者差异无统计学意义.结论 在处理献血不良反应中,辅以足三里穴位按摩可明显缩短不适症状持续时间,减少药物的使用:方法简单易行,容易被献血者接受.

    作者:张学昇;赖群英;袁光华;罗曼华;肖国龙 刊期: 2012年第06期

  • 《医疗机构临床用血管理办法》之研读

    卫生部于2012年6月7日公布了《医疗机构临床用血管理办法》(卫生部令第85号)[1](以下简称《临床用血管理办法》),并将于2012年8月1日起施行,同时废止《医疗机构临床用血管理办法(试行)》(卫医发[ 1999]第6号)(以下简称《临床用血办法1999年版》).深入学习、理解和实施《临床用血管理办法》既是医疗机构,也是血站当前的1项重要工作.现将《临床用血管理办法》的研读体会整理如下,与输血界同仁交流并请批评指正.

    作者:郭永建 刊期: 2012年第06期

  • 五常法在血站仓库管理中的应用

    目地 探索“五常法“在血站仓库管理中的应用效果.方法 通过运用”五常法“,将常组织、常整顿、常规范、常清洁、常自律运用于血站仓库管理中.结果 提高了血站仓库物资管理质量,有效的利用了仓储空间,减少物资的积压和浪费,保证了采供血物资的安全性.结论 运用“五常法”对血站仓库进行规范化管理,有利于提高物资质量,保障了原材料及时和充足的供应,物资进仓的合格率达到100%,仓储物资的保管零报废,提高了工作效率.

    作者:杨华 刊期: 2012年第06期

  • 血站核酸检测实验室清洁消毒效果的监控与分析

    目的 对血站NAT检测实验室的清洁消毒过程实施控制,采取监控措施对消毒效果进行评估,以满足核酸检测环境的需求.方法 采用空气下落法和物体表面擦拭法,每月采集NAT实验室工作前消毒后1h的环境和物体表面18个监控点的无菌生理盐水标本47份,以HBV DNA为参照物进行核酸检测并分析检测结果;结合实验室质控结果及NAT单阳性结果,分析检测实验列表有效率、假阳性率与监控结果的相关性.结果 2010年11月至2011年10月,11次清洁消毒监控结果中有2次监控合格率分别为95.5%、97.9%,均发生于NAT检测工作站出风口的监控点,其余均为100%,t=223.83,P<0.05,有统计学意义;跟进消毒措施后,对阳性监控点跟踪监控结果均为阴性.分析检测实验列表有效率和假阳性率与监控结果合格率的相关性x2=0.234,P>0.05,无统计学意义.结论 NAT检测工作站出风口监控点的反应性结果不会造成实验结果假阳性率的增高,设备维护保养中的清洁消毒工作可有效清除污染.NAT实验室现行清洁消毒方法有效,且符合生物安全实验室要求.

    作者:王中梅;冷婵;姚凤兰;汪德海;郑静;杨海平;查祎;王瑞;葛红卫 刊期: 2012年第06期

中国输血杂志

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主管:中华人民共和国卫生部

主办:中国输血协会 中国医学科学院输血研究所