学术投稿

牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因的克隆及表达纯化

刘薇;于飞;陈卫民;何伟

关键词:牙龈卟啉单胞菌, 菌毛蛋白A, 蛋白表达
摘要:目的 克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因并使其在大肠杆菌中正确表达.方法 利用PCR方法克隆牙龈卟啉单胞菌fimA基因,构建其原核表达质粒pT-BAD/fimA,获得其在大肠杆菌中的表达,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定重组蛋白.以不同质量浓度咪唑缓冲液(250、200、150、100、50 μmol·L~(-1))洗脱结合在His-tag纯化柱的目的蛋白,选择佳洗脱质量浓度.结果 克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列呈现99.9%同源性;诱导表达后可观察到相对分子量3.8x10~4的融合蛋白,经MALDI-TOF-MS检测进一步证实为FimA蛋白.100 μmol·L~(-1)咪唑缓冲液洗脱得到的蛋白质纯度高,其纯度为95%.结论 本实验成功克隆了fimA基因,并获得在大肠杆菌中的正确表达,同时得到纯度较高的FimA蛋白,为后续研制增强免疫应答的高效牙周炎真核表达质粒奠定了基础.
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    目的 克隆牙龈卟啉单胞菌菌毛fimA基因并使其在大肠杆菌中正确表达.方法 利用PCR方法克隆牙龈卟啉单胞菌fimA基因,构建其原核表达质粒pT-BAD/fimA,获得其在大肠杆菌中的表达,基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定重组蛋白.以不同质量浓度咪唑缓冲液(250、200、150、100、50 μmol·L~(-1))洗脱结合在His-tag纯化柱的目的蛋白,选择佳洗脱质量浓度.结果 克隆基因测序结果与GeneBank数据库中的序列呈现99.9%同源性;诱导表达后可观察到相对分子量3.8x10~4的融合蛋白,经MALDI-TOF-MS检测进一步证实为FimA蛋白.100 μmol·L~(-1)咪唑缓冲液洗脱得到的蛋白质纯度高,其纯度为95%.结论 本实验成功克隆了fimA基因,并获得在大肠杆菌中的正确表达,同时得到纯度较高的FimA蛋白,为后续研制增强免疫应答的高效牙周炎真核表达质粒奠定了基础.

    作者:刘薇;于飞;陈卫民;何伟 刊期: 2009年第06期

  • 体外磷灰石晶体矿化模型构建及应用的初步研究

    目的 构建磷灰石晶体矿化的体外模型,研究牛血清白蛋白(BSA)和不问浓度的氟离子对磷灰石晶体体外矿化的影响.方法 利用阳离子膜和透析膜建立磷灰石晶体矿化的体外模型.在模型中分别加入去离子水、BSA和不同浓度的氟离子(5、20、100mg·L~(-1)),反应3 d后,扫描电镜(SEM)、X线衍射法检测矿化产物.结果 成功构建了磷灰行晶体体外矿化模型,加入去离子水和BSA后,晶体成分主要为磷酸八钙(OCP),但晶体形态筹异显著.加入氟离子后,形成了柱状、杆状的氟磷灰石(FAP)晶体,且随着氟离子浓度的增加,晶体的尺寸和矿化程度均增加.结论 该体外模犁是检测磷灰石晶体矿化调控因素的有效方法.

    作者:王疆;倪龙兴;王捍国 刊期: 2009年第06期

  • 人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达

    目的 分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),对其进行鉴定,并探讨酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)基因在HUVECs中的表达情况.方法 用胰蛋白酶消化、分离HUVECs并对其进行培养,根据细胞生长特点、形态特征和Ⅷ因子免疫荧光组化技术对细胞进行鉴定.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SABC免疫细胞化学染色对HUVECs中Tie-2 mRNA和蛋白表达情况进行检测.结果 原代培养的HUVECs约于24 h完全贴壁,4~5 d后融合成单层铺路石样结构.Ⅷ因子免疫荧光组化法证实细胞是HUVECs.RT-PCR检测到HuVECs中Tie-2 mRNA条带明显,SABC免疫细胞组化法检测到Tie-2蛋白在HUVECs胞浆、核膜中旱强阳性表达,阳性率为85%以上.结论 胰蛋白酶灌流消化法可获得高纯度的HUVECs,Tie-2在HUVECs中旱强阳性表达.

    作者:吴世卿;郑俊发;曾曙光;陈少鹏;薛国初;章锦才 刊期: 2009年第06期

  • 3个根管的下颌第一前磨牙的根管治疗1例

    3个根管的下颌第一前磨牙极其罕见,本文报道1例3个根管的下颌第一前磨牙的根管治疗,并着重探讨了根管探查和预备的要点.

    作者:安康康;赵守亮 刊期: 2009年第06期

  • 少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建

    目的 克隆少汗型外胚层发育不良症(HED)eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型(M)和野生型(W)的真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础.方法 设计含有BamH Ⅰ和Hind Ⅲ的酶切位点的引物,从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA,利用RT-PCR法克隆eda-A1(M/W)基因cDNA序列;并运用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切pcDNA3.1(-)载体和eda-A1基因片段,将eda-A1(M/W)插入到pcDNA3.1(-)载体中,从而构建新的真核表达载体,命名为pcDNA3.1(-)-eda-A1-M和pcDNA3.1(-)-eda-A1-W.结果 成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因,并发现未见报道过的907位A→C错义突变,导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸;经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证,成功构建了pcDNA3.1(-)-eda-A1-W/M的真核表达载体.结论 成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因(突变型和野生型)真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础.

    作者:雷科;车团结;王锦明;邓旎;张琳;何祥一 刊期: 2009年第06期

  • 赤藓糖醇和木糖醇对变异链球菌生长和产酸作用的对比研究

    目的 对比相同浓度下赤藓糖醇和木糖醇对变异链球菌生长和产酸的影响.方法 分别用含0.5%、1%、2%、4%、8%、12%、16%赤藓糖醇和木糖醇的TPY培养基在厌氧条件下培养变异链球菌,分别于0、2、4、6、8、10、12、18、24h测量液体培养基的光密度值(A值)和pH值,运用SPSS描绘其变化曲线图.结果 在0.5%、1%、2%浓度下,赤藓糖醇培养基的A值较木糖醇培养基高,pH值较木糖醇培养基低,说明变异链球菌在含0.5%、1%、2%赤藓糖醇的培养基内的生长和产酸能力明显较相同浓度木糖醇培养基高.在8%、12%、16%浓度下,赤藓糖醇培养基的A值较木糖醇培养基低,pH值较木糖醇培养基高,说明变异链球菌在含8%、12%、16%赤藓糖醇的培养基内的生长和产酸能力明显较相同浓度木糖醇培养基低.结论 对比木糖醇,低浓度下赤藓糖醇对变异链球菌生长和产酸的抑制作用较弱,高浓度下赤藓糖醇的抑菌效果更强.

    作者:姚军;张佳丽;吴玉琼;卢兆杰 刊期: 2009年第06期

  • 环孢素对大鼠牙龈组织形态影响的定量分析

    目的 定量分析环孢素(CsP)对大鼠牙龈组织形态影响的部位特异性和时间依赖性.方法 将80只7周龄雄性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组又分为10、20、30、40 d亚组.实验组胃饲含CsP的鲜牛奶,对照组胃饲等量鲜牛奶.内固定取材后制作下颌第一磨牙颊舌向石蜡切片,HE染色,利用图像分析系统分别测量颊侧和舌侧牙龈上皮面积、结缔组织面积、长钉突长度,行完全随机分组两因素析因设计资料的方差分析.结果 实验组大鼠牙龈增厚,颊侧附着龈近膜龈联合处上皮钉突明显增生伸长.实验组大鼠颊侧和舌侧牙龈上皮面积和结缔组织面积以及颊侧长钉突长度均显著大于对照组(颊侧P<0.01,舌侧0.01<P<0.05),2组间舌侧长钉突长度差异无统计学意义.各时间点相比,颊侧和舌侧上皮面积、结缔组织面积以及长钉突长度间差异无统计学意义.结论 CsP对大鼠颊侧膜龈联合端附着龈上皮的影响存在部位特异性,对大鼠牙龈的影响无时间依赖性.

    作者:刘培红;马肃;刘薇婷 刊期: 2009年第06期

  • 3例艾滋病患者的口腔表征和诊断

    对3例艾滋病患者的口腔表征进行分析,并对艾滋病的诊断进行探讨,以提高口腔医务工作者对艾滋病的警惕性,做到早发现、早诊断、早治疗,以控制疾病的进一步传播及加强医务工作人员的自身防护.

    作者:李张维;李晓英;刘文钊;王甲一;曾昕 刊期: 2009年第06期

  • 安氏Ⅲ类错(牙合)头颅侧位形态的治疗模板分类研究

    目的 分析安氏Ⅲ类错(牙合)患者的头颅侧位形态特征及其与治疗的关系.方法 收集北京大学口腔医院1997-2000年就诊的安氏Ⅲ类错(牙合)患者472名,通过影像测量及小平方和重叠法(PS)处理获得患者的标准化点坐标值并以此为统计指标对472例患者进行聚类分析和亚型分类,并总结各亚型的治疗方式.结果 472例患者共分成14类亚型,通过计算机绘图形成了各亚型的图形模板,同一类亚型的治疗方式较一致.结论 安氏Ⅲ类错(牙合)具有不同的颅面骨骼分型,这些分型对于治疗方式的选择具有重要的意义.

    作者:李飒;许天民;林久祥 刊期: 2009年第06期

  • 一氧化氮合酶在犬下颌骨牵张成骨过程中的表达和意义

    目的 研究一氧化氮合酶(NOS)在犬下颌骨牵张成骨及骨创伤修复过程的表达和意义.方法 28只犬随机分成牵张组和直接延长组各12只及正常对照组4只,用免疫组化法检测牵张第6天、牵张后固定2周和8周NOS表达水平的变化.结果 牵张第6天牵张组可见牵开区组织内炎性细胞浸润,血管周围和间质内较多红细胞漏出.牵张及固定早期,牵张组和直接延长组诱导型NOS(iNOS)与内皮型NOS(eNOS)阳性表达均明显高于正常对照组,直接延长组的iNOS和eNOS阳性表达低于牵张组,差异均有统计学意义(P<0.05);牵张后固定8周iNOS和eNOS阳性表达3组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 NOS在牵张早期表达升高,结合在牵张早期组织内红细胞漏出,提示牵张成骨过程中存在某种程度的微创伤,这种微创伤可能是牵张成骨的重要启动因素之一.

    作者:周诺;廖妮;韦山良;梁飞新 刊期: 2009年第06期

  • 下颌切牙Empress 2瓷贴面与全瓷冠牙预备体及全瓷修复复合体的抗折裂研究

    目的 比较下颌切牙Empress 2瓷贴面和全瓷冠牙预备体及修复体粘接后复合体的抗折强度.方法 选择人离体下颌切牙50颗,随机分为5组.A组为瓷贴面牙体预备组,B组为全瓷冠牙体预备组,C组为瓷贴面修复组,D组为全瓷冠修复组,E组为完整下颌切牙(对照组).采用标准化牙体预备过程,Empress 2铸瓷系统及树脂粘接技术完成瓷贴面-牙体和全瓷冠-牙体复合体.使用Instron万能试验机测试5组牙齿的抗折裂载荷值,采用方差分析进行统计学分析.结果 A、B、C、D、E组的抗折裂载荷值分别为:(576.11±91.53)、(204.13±85.88)、(451.50±116.81)、(386.16±117.75)、(566.05±121.37)N.经统计学分析,B组抗折裂载荷值低于其他组(P<0.01);A、E组间的差异无统计学意义,其值高,高于其他组(P<0.05);C、D组间的差异也无统计学意义,其值低于A、E组,但高于B组(P<0.05).结论 下颌切牙瓷贴面预备后,牙体抗折能力无明显降低.下颌切牙Empress 2瓷贴面与全瓷冠粘接后,2种复合体的抗折裂能力无明显区别.

    作者:魏煦;李彦 刊期: 2009年第06期

  • 孕妇牙周病中牙龈卟啉单胞菌和血清炎性因子与早产低体重儿的关系

    目的 探讨孕妇牙周病中牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)检出情况、血清炎性因子与早产低体重(PLBW)的关系.方法 通过严格筛查分别选取分娩出早产低体重儿的产妇(PLBW组)和正常分娩的产妇各30例(对照组),对其牙周状况进行检查,记录菌斑指数(PI)、出血指数(BI)、探诊深度(PD)及临床附着丧失水平(CAL),并采集产妇龈下菌斑、静脉血和脐带血,采用16S rRNA PCR法检测菌斑中P.gingivalis,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中自细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素E_2(PGE_2)水平.结果 PLBW组牙周状况较差,P.gingivalis在PLBW组和对照组中检出率分别为56.7%和30.0%,两者差异有统计学意义(P<0.05).牙周病变程度、P.ginsivdis检出率与胎儿孕周和出生体重均呈弱负相关(P<0.05).PLBW组静脉血和脐带血中IL-1β、IL-6、PGE_2水平均较对照组高;PLBW组内患有牙周病者静脉血中IL-1β、PGE_2含量高于牙周健康者(P<0.01).结论 孕妇牙周感染可能是导致早产低体重儿的原因之一.

    作者:林垚;田宗蕊;陈宏柏;台保军;江汉;杜民权 刊期: 2009年第06期

  • 双歧杆菌在儿童口腔的分布及与儿童龋病的关系

    目的 探索一种可以较好地分离口腔双歧杆菌的选择性培养基,以此为基础,检测儿童口腔不同部位双歧杆菌的分布状态,初步探讨口腔双歧杆菌与儿童龋病的发生关系.方法 选择70例3-6岁儿童为研究对象,其中无龋组30例,重症婴幼儿龋(S-ECC)组40例.无龋组收集唾液及唇面、邻面、(牙合)面沟裂的混合菌斑;S-ECC组收集唾液、光滑面菌斑、牙面白垩斑菌斑和深龋龋坏组织.在经过改良的TPY选择性培养基中进行培养,提取细菌总DNA,用双歧杆菌特异性引物进行聚合酶链反应,对其电泳条带进行记录分析.结果 S-ECC组双歧杆菌的检出率为47.5%,无龋组为0,2组间检出率的差异有统计学意义(P<0.05).在S-ECC组儿童口腔的不同部位,双歧杆菌检出率分别为唾液27.5%、光滑面菌斑27.5%、白垩斑菌斑20.0%、龋坏组织22.5%,不同检测部位间检出率的差异无统计学意义(P>0.05).齿双歧杆菌在S-ECC组儿童口腔不同部位的检出率分别为唾液10.0%、光滑面菌斑7.5%、白垩斑菌斑7.5%、龋坏组织10.0%,不同检测部位间检出率的差异也无统计学意义(P>0.05).结论 改良TPY双歧杆菌选择性培养基是一种适合分离口腔双歧杆菌的选择性培养基;双歧杆菌可能与S-ECC的发生相关,但其检出情况与儿童牙面的部位关系不大.

    作者:翟晶晶;邹静;鲁莉英 刊期: 2009年第06期

  • 咬唇颊症2例

    咬唇颊症是长期习惯性咬嚼口腔黏膜所致的口腔黏膜慢性病损,主要表现为黏膜表面上皮呈脱屑样改变,患者可有轻度粗糙感.目前国内尚未见关于咬唇颊症统一的命名、译名及系统介绍,本文报道2例口腔咬唇颊症病例,并复习相关文献,讨论咬唇颊症可能的发病机制、临床表现、病理表现、诊断、鉴别诊断、治疗及预后等.

    作者:王甲一;刘文钊;李晓英;李张维;曾昕 刊期: 2009年第06期

  • 2种石膏基包埋料对铸造精度影响的比较研究

    目的 研究2种商品化包埋料Cristo balite Micro Ⅱ和Cristo Quick的膨胀性能及其对铸件精度的影响.方法 选用传统型石膏基包埋料Cristo balite Micro Ⅱ和快速加热型石膏基包埋料Cristo Quick,按粉液质量比为1:3的比例混合调拌,分别测定2种包埋料的凝固膨胀率和热膨胀率.以预制标记点的圆盘形蜡型为铸件原型,采用0.45 mm陶瓷纤维衬层铸圈,分别用2种包埋料包埋铸造,测量铸件在相应标记点方向上的尺寸变化率.结果 1)Cristo balite Micro Ⅱ的凝固膨胀率、热膨胀率和总膨胀率分别为0.68、1.18和1.86,Cristo Quick则分别为0.94、1.03和1.97.2种材料的凝固膨胀率和热膨胀率的差异有统计学意义(P<0.05),而总膨胀率的差异无统计学意义(P>0.05).2)在衬层厚度相同的情况下,采用2种包埋料铸造的铸件,其尺寸变化率的差异无统计学意义(P>0.05).结论 本研究选择的2种石膏基包埋料膨胀量相同但膨胀特性不同,对铸造精度都没有影响.

    作者:童徐;赵耀;孟玉坤 刊期: 2009年第06期

  • C-反应蛋白影响单核细胞趋化能力的研究

    目的 通过检测不同质量浓度C-反应蛋白(CRP)对体外培养的人单核细胞趋化能力的影响,探讨CRP作为炎症介质联系牙周炎与冠心病的分子机制.方法 采用不同质量浓度CRP作用于体外培养的THP-1单核细胞,采用Transwell趋化实验检测单核细胞被趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)趋化的数量.结果 Transwell趋化实验发现,CRP作用于THP-1单核细胞后可增强其趋化能力.CRP质量浓度为2μg·mL~(-1)时,单核细胞的趋化数量上调(P<0.05);随着CRP质量浓度升高,趋化的单核细胞增多(P<0.05).结论 CRP能增强THP-1单核细胞的趋化能力,且呈剂量依赖性.

    作者:孟姝;张琳;杨禾;吴亚菲;葛颂;赵蕾 刊期: 2009年第06期

  • 钇稳定氧化锆基底材料与饰面瓷结合性能的实验研究

    目的 考察国产氧化钇稳定四方晶体氧化锆(3Y-TZP)与4种氧化锆专用饰面瓷界面的结合性能.方法 粉浆涂塑方法分别将VITA VM9、SHOFU VINTAGE ZR、IPS e.max Ceram、Cereon ceram kiss 4种氧化锆专用饰面瓷烧结在15 min×5 mm×5 mm的3Y-TZP核瓷试件上,另外制作相同尺寸镍铬合金烤瓷试件作为对照,测试界面剪切强度.制作氧化锆基底与饰面瓷双层瓷试件,扫描电镜(SEM)观察结合界面微观形貌;能谱分析(EDS)检测界面元素分布.结果 氧化锆与VITA VM9、SHOFU VINTAGE ZR、IPS e.max Ceram、Cereon ceranl kiss 4种氧化锆专用饰面瓷的剪切强度分别为(18.83±1.77)Mpa、(23.83±7.05)Mpa、(17.87±2.30)Mpa、(22.26±7.45)Mpa,各组与金属烤瓷对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).各3Y-TZP烤瓷组试件破坏模式以界面破坏为主.扫描电镜观察氧化锆和饰面瓷结合界面结合紧密;能谱分析结果显示二者存在化学元素渗透.结论 国产3Y-TZP与饰面瓷材料界面结合良好,可以满足临床需要.

    作者:殷家悦;张忠提;艾红军;司文捷;包扬 刊期: 2009年第06期

  • 序列调(牙合)法治疗运动型食物嵌塞的临床观察

    目的 探讨治疗运动型食物嵌塞的调验方法及效果.方法 选择邻面接触关系正常的食物嵌塞患者36例为研究对象,分析其咬合面形态及咬合关系,采用序列调(牙合)方法进行治疗,并培养合理的饮食习惯.序列调验法包括:调磨并消除对骀杵臼式牙尖、加深(牙合)面发育沟、调磨嵌塞间隙远中牙齿的近中斜面.治疗后1周、2周和6个月复杳食物嵌塞情况.结果 术后1周,36例患者中有32例的食物嵌塞症状消失,4例症状改善;术后2周,所有患者食物嵌塞症状完全消失;术后半年后复查,并无1例发生食物嵌塞.结论 序列调牙(牙合)法是治疗某些运动型食物嵌塞的有效方法.

    作者:徐娟;方碧松;马宏;孙晓强 刊期: 2009年第06期

  • Notch1和表皮生长因子受体在舌鳞癌及癌前病变中的表达

    目的 研究舌鳞癌(TSCC)及癌前病变中Noteh1的表达,探讨其与表皮生长因子受体(EGFR)之间的潜在关系.方法 免疫组化检测41例人TSCC、39例舌黏膜白斑(LP)和7例正常舌黏膜标本中Notch1和EGFR的表达.结果 在正常舌黏膜和LP中,Notch1阳性表达主要位于角化层,部分颗粒层和棘层细胞也有表达,基底层无表达;而EGFB阳性表达主要位于基底层,棘层少见表达,颗粒层和角化层无表达.在TSCC中,Notch1阳性表达多见于癌巢中鳞状化生的角化细胞及类棘层细胞,周边细胞无表达;而EGFR阳性表达主要位于癌巢周边细胞,鳞状化生的角化细胞及类棘层细胞无表达.结论 Notch1在舌黏膜上皮中促进细胞分化,在TSCC中起抑癌作用;而EGFR的表达可能抑制Notch1的表达,以维持细胞增殖,并促进TSCC发生发展.

    作者:黄红杰;平飞云;胡济安;赵士芳 刊期: 2009年第06期

  • 应用微创理念构建老年龋病防治方案(一)

    随着我国步入老龄化社会,老年人口占总人口的比例逐步升高.近年来,随着老年口腔医学的不断发展与普及,我国老年人口内存留牙数不断增多,过去患龋率较低和需行大面积修复治疗的老年人群的龋病发生率有所提高,口腔医生在老年龋病防治工作中面临新的挑战.微创牙科治疗(MID)是一种全新的齿科医学理念,着眼于疾病的早发现、早诊断、早治疗,强调病症早期的微创(甚至分子水平)治疗以及发生不可逆性损伤时以患者为本的治疗方案.本文主要阐述了MID理念在老年龋病预防中的应用,主要内容包括患龋风险评估、龋病早期诊断(未形成龋洞前)、促进牙体外部和窝涧内部的再矿化,体现了MID在老年龋病早期诊断、早期治疗以及控制龋病进程中的重要作用.

    作者:储冰峰;张鹰;刘洪臣 刊期: 2009年第06期

华西口腔医学杂志

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主办:四川大学