刘来成；王淑玲；卢贤瑜；曾佑群；吴扬；张鹏辉
患者男性,35岁,于2010年4月18日因健康体检描记心电图时发现肢体导联T波电压高耸,此前一月来无服药及饮酒史.查:血压16/9.2 kPa,心脏听诊无异常发现,四肢无功能性障碍,血钾、血脂、超声心动图及脑部检查均正常.心电图示:窦性心律,心率100次/min;T波振幅为19 mm和17mm,两肢对称,呈箭头样改变.几分钟后,做平静仰卧心电图,T波恢复正常,QRS电压,时限不变.因怀疑脑血管疾病行脑电图及脑部CT检查未见异常.次日及1周、1月、6月后复查心电图均正常,随访1年,无器质性病变.
作者：张同利；李超民 刊期： 2011年第11期
目的:探讨重组人骨形态发生蛋白-7( rhBMP-7)对NIH3T3增殖和骨向分化的影响.方法:向培养的成纤维细胞NIH3T3中加入不同浓度的rhBMP-7,观察NIH3T3增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量的变化.结果:rhBMP-7在一定浓度范围内可以明显促进NIHh3T3细胞增殖、提高ALP活性与OCN水平.结论:rhBMP-7可以刺激NIH3T3细胞增殖,诱导NIH3 T3细胞向成骨细胞表型分化.
作者：王国栋；吴少云；韩金祥；张翠；王世立 刊期： 2011年第11期
目的:制备副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)单克隆抗体(mAb)并进行鉴定.方法:用灭活的副溶血弧菌免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备副溶血弧菌mAb.用间接ELISA法对mAb的效价进行测定.结果:获得4株能稳定分泌副溶血弧菌mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E3、5F12、5D8、6H9.经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价分别为1×10-4～1 ×10-7.4株杂交瘤细胞系所分泌的mAb亚类分别是:IgG2b,IgG2a,IgG2b,IgG3.交叉反应试验显示,mAb 5D8与弧菌属其他几种细菌均不起反应,特异性强.副溶血弧菌生长抑制及动物保护实验结果表明4株mAb均能不同程度地抑制副溶血弧菌的生长并对动物具有保护作用,其中5F12保护效果强.结论:成功地制备能稳定分泌副溶血弧菌mAb的杂交瘤细胞株,为建立该病的免疫学诊断及防治的奠定了基础.
作者：张星；赵锋；金晓航；王芳；黄威权 刊期： 2011年第11期
目的:研究结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后氮氧化物的产生及细胞因子的分泌和表达情况.方法:结核杆菌H37Ra感染RAW264.7巨噬细胞株24h后收集上清液,用Griess法检测一氧化氮(NO),化学法检测过氧化氢(H2O2)的产生,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测感染后巨噬细胞IL-12和TNF-α mRNA的表达,ELISA法检测细胞因子IL-12和TNF-α的含量.结果:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后产生的NO和H2 O2水平均显著升高,同时IL-12和TNF-α的分泌和表达也明显增加(P＜0.05).结论:结核杆菌H37Ra感染巨噬细胞后能产生大量的氮氧化物和抗结核细胞因子,从而产生有利于宿主的抗结核免疫应答.
作者：刘来成；王淑玲；卢贤瑜；曾佑群；吴扬；张鹏辉 刊期： 2011年第11期
目的:合成25-羟基维生素D3人工完全抗原,并制备抗25-羟基维生素D3的特异性抗体.方法:将25-羟基维生素D3进行化学修饰加入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯.采用碳二亚胺法,将25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,合成人工完全抗原25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯-BSA和25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯-OVA.通过紫外吸收光谱,SDS-PAGE和MALDI-TOF进行偶联鉴定.用25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯-BSA免疫小鼠,获得抗25-羟基维生素D3抗体免疫血清.结果:25-羟基维生素D3-半琥珀酸酯与BSA的偶联比为(12 +0.16):1,免疫小鼠后获得高效价(效价为6.25×10-4)的抗体,且标准品浓度在37.5～600 ng/mL范围具有显著的竞争性线性关系,检测的灵敏度为37.5 ng/mL.结论:成功合成了25-羟基维生素D3人工完全抗原,制备出25-羟基维生素D3的抗体且其线性关系显著,灵敏度较高,为进一步研制检测25-羟基维生素D3的试剂盒奠定了基础.
作者：万巍巍；张换敬；叶辉铭；万丽琴；蔡良良；郑立谋；曾骥孟 刊期： 2011年第11期
转移因子(transfer factor,TF)早由Lawrence[1]于1949年发现,作者从对某一特定抗原有明显皮肤反应的供体采集白细胞并制备白细胞抽提液,然后将抽提液注入无皮肤反应或免疫抑制的受试者,而受试者随即出现强烈的皮肤反应,这一实验结果很有力的证明了个体间的全身性和特异性免疫可以发生转移,因此实现这种转移功能的白细胞抽提物被称为转移因子.目前,TF被用于治疗病毒、寄生虫、真菌、自身免疫及恶性失调等引起的疾病.按性质TF可以分为特异性转移因子( specific TF,STF)与非特异性转移因子(non-specific TF,NSTF).肿瘤特异性转移因子(tumor specific transfer factor,TSTF)是指用肿瘤组织作抗原免疫健康动物(如羊、猪、兔等)后,取动物的血液、脾脏和淋巴结组织,采用非特异性TF的常规方法而获得的提取物的小分子生物活性物质[2].相对分子质量(Mr)为3000～5000,对热不稳定,但耐低温,在4℃保存1年仍有稳定的免疫活性[3].
作者：范林妮；尹志勇；王文勇 刊期： 2011年第11期
目的:探讨白介素-6(IL-6)基因启动子区- 597G/A(rs1800797)、- 572C/G( rs1800796)和- 174G/C(rs1800795)三个单核苷酸多态性位点(SNP)和乳腺痘易感性的关联性.方法:按照诊断标准,入组女性乳腺癌患者176例及年龄、体重指数等相匹配的健康女性200例.提取外周静脉血DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测IL-6基因启动子区- 597G/A、- 572C/G和- 174 G/C三个SNPs位点的基因型.利用SPSS11.5软件进行x2检验,比较乳腺癌患者各位点基因型、等位基因频率与健康女性之间的差异,分析各位点多态性与乳腺癌发病风险的关联性.结果:IL-6基因- 572C/G位点的基因型及等位基因频率分布在乳腺癌组与健康组之间存在显著性差异(P＜0.05),乳腺癌组- 572C/G位点的等位基因G频率显著高于健康组(x2=15.438,P＜0.0001,OR =2.017,95％CI=1.417 ～2.870).结论:IL-66基因- 572C/G位点多态性与乳腺癌易感性相关联,携带有- 572G/C多态性位点G等位基因的女性罹患乳腺癌的风险要高于非携带女性.
作者：何凯亮；李永平；吕勇刚；张丹杰；王辉 刊期： 2011年第11期
目的:原核表达空肠弯曲菌CjaA蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb).方法:克隆目的基因并将其构建到pGEX-6p-1和pET30a(+)表达载体,分别以变复性纯化后的rGST-caA、rHis-cjaA蛋白为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性.结果:成功构建pET30a(+ )-cjaA和pGEX-6p-1-cjaA重组原核表达质粒,并融合表达rHis-cjaA和rGST-cjaA蛋白,Western blot试验显示全菌多抗血清能与体外表达的蛋白呈现特异性反应,表明表达蛋白具有免疫原性.筛选获得3株稳定分泌抗CjaA的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2B6、3C2、4F11,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1∶1×105、1∶2×105和1∶4×105；Western blot试验显示,3株mAb均能与表达rHis-CjaA重组蛋白的细菌发生特异性反应；Dot-ELISA试验表明,3株mAb均能与不同来源的空肠弯曲菌分离株发生特异性反应.结论:本研究制备的mAb有较高特异性,具有良好的应用价值.为进一步研究空肠弯曲菌CjaA蛋白的生物学特性、致病机制,以及建立快速检测技术奠定基础.
作者：黄金林；尹衍新；胡元庆；张弓；刘秀梵；焦新安 刊期： 2011年第11期
目的:构建含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)及删除了c/e1表位的截短型HBcAg基因的原核表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白C-ABCSP-Aβ15-c形成的病毒样颗粒,检测其免疫原性,为多表位AD基因工程疫苗的研究奠定基础.方法:PCR扩增含APPβ位点裂解肽ABCSP、β-淀粉样肽氨基段15肽(Aβ1-15)的基因,连接于HBcAg的1～71的3’端,再将HBcAg的88～144位氨基酸的基因片断连接于Aβ1-15的基因的3’端,构建重组质粒pUC/c-ABCSP-Aβ15-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET/c-ABCSP-Aβ15-c,IPTG诱导表达.用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色,观察重组基因的表达.透射电镜观察融合蛋白形成的病毒样颗粒.融合蛋白经腹腔注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗-ABCSP、抗-Aβ抗体的滴度.结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,重组基因位于表达质粒之中,其大小、序列与理论设计相符.诱导表达后,SDS-PAGE显示,在细菌裂解液的上清和沉淀中均可见到表达蛋白条带,且以沉淀中为多,约占沉淀总蛋白的40％.纯化后的融合蛋白形成电镜下可观察到的病毒样颗粒.昆明小鼠经融合蛋白免疫5次后,其血清中抗-ABCSP抗体的滴度可达1∶5 000,抗-Aβ抗体的滴度可达1∶10 000,检测不到抗-HBc抗体.结论:c-ABCSP-Aβ15-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性.
作者：冯改丰；王军阳；靳辉；王唯析；钱亦华；杨维娜；王全颖；杨广笑 刊期： 2011年第11期
目的:制备人原癌基因HER2/neu的细胞外区域(ECD)基因修饰的重组生孢梭菌,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础.方法:利用SOE-PCR将HER2/neu ECD基因连接到厌氧菌的内β1,4-葡聚糖酶的启动子和信号肽基因(eglAp)下游,构建融合基因eglAp-HER2/neu；将其插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,构建重组质粒；首先将重组质粒导人大肠杆菌DH5α内并进行鉴定；然后用电穿孔法将重组质粒导人生孢梭菌.利用红霉素抗性筛选重组生孢梭菌；采用菌液PCR鉴定阳性克隆.结果:酶切和测序结果显示,插入质粒pIMP1内的eglAp-HER2/neu融合基因序列及读框正确.菌液PCR结果表明,重组质粒pIMP1-eHER2/neu成功转化生孢梭菌；经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带pIMP1-eHER2/neu.结论:成功制备了重组质粒pIMP1-eHER2/neu生孢梭菌的稳定转化株,为其进一步的抗肿瘤作用研究奠定基础.
作者：张艳丽；张文卿；王秋波；丁守怡；吕锐；孟林 刊期： 2011年第11期
目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析.方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在.再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析.结果:利用P1与P2引物对从人脑库扩增出1条约1 500 bp的条带,而利用P3与P4引物对则得到2条明显电泳带,通过测序表明其中1条包含TRAF2的第6外显子,另1条缺失了TRAF2的第6外显子.通过对新剪切体TRAF2Δ6与全长剪切体TRAF2的表达量比较表明在T47D中全长剪切体表达占优势；而在Hep3B、GC-1与MCF7中TRAT△6剪切体表达占优势；在HepG2、HBL100、A549与HeLa细胞中未发现两种剪切体的明显表达；在PANCI与SW480中两种剪切体表达量相近.在胎大脑与一级神经胶质瘤中TRAF2Δ6表达占优,而二级与三级神经胶质瘤中则全长剪切体TRAF2表达占优势.结论:人体TRAF2基因除可表达全长TRAF2 mRNA外,还可通过可变剪切表达缺失第6外显子的TRAF2Δ6 mRNA.而且这两种剪切体的表达存在细胞与组织特异性.
作者：罗红雨；张波；严杰；李玲；尹抗抗；韩梅 刊期： 2011年第11期
目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(M.tb)吞噬和杀伤功能的影响.方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素( FTTC)标记的M.tb共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对M.tb的吞噬率；结核病患者和正常人外周血均加入2'7’二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加M.tb共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量；不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对M.tb吞噬率,活化率及产生ROS的变化.结果:结核病患者和正常人PMN对M.tb吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)％高于正常人(47.20±4.26)％(P＜0.05)；IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异.结论:结核病患者外周血PMN对M.tb的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高.IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力.
作者：姜丽娜；姚春艳；金齐力；贺文欣；李柏青 刊期： 2011年第11期
目的:研制特异性鼠抗人PD-L1单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性.方法:以高表达人PD-L1分子的基因转染细胞L929/PD-L1为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以L929/PD-L1细胞为抗体筛选细胞,L929/mock细胞为对照细胞,经选择性克隆化培养及流式细胞术(FCM)分析,筛选稳定和持久分泌鼠抗人PD-L1 mAb的杂交瘤细胞株；采用Ig亚型快速定性试纸法、Western blot、间接免疫荧光法和竞争结合抑制实验等方法对mAb进行生物学特性鉴定；继而体外实验分析mAb对T细胞增殖的影响.结果:成功获得3株鼠抗人PD-L1mAb,分别命名为11G8,2G5和5C3；对其生物学功能的研究结果显示,3株mAb均能识别活化T细胞表面PD-L1分子,和在体外显著促进T细胞的增殖.结论:获得的3株鼠抗人PD-L1功能性mAb,通过阻断PD-1/PD-L1抑制途径能够有效增强T细胞体外增殖,这为进一步研究PD-1/PD-L1信号通路提供了物质基础.
作者：周莹；陈永井；白利雄；朱耿超；王雪峰；张学光 刊期： 2011年第11期
目的:观察ING4对人脑胶质瘤细胞株U251增殖及迁移的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:以Ad-INC4及腺病毒空载体转染U251细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达.用MTT试验检测ING4对于U251细胞增殖的影响,通过Boyden Chamber试验检测其对U251细胞侵袭能力的影响.并用免疫印迹方法检测NGF、TrkA的表达变化,通过pull-down试验检测活性RhoA表达.结果:U251细胞感染Ad-ING4 48 h后,RT-PCR结果显示ING4在U251中过表达,且U251细胞的增殖及迁移能力受到明显抑制.免疫印迹方法显示感染AdING4的U251细胞中TrkA和NGF的表达降低,pull-down试验结果显示活性RhoA表达降低.结论:Ad-ING4可以抑制胶质瘤细胞株U251的增殖和迁移,这一作用可能是通过抑制NGF、TrkA和活性RhoA的表达实现的.
作者：湛利平；李巧玉；张焱；张铁军；袁志诚；陆培松 刊期： 2011年第11期
目的:构建人源性抗HER2单链抗体(scFv)/精氨酸九聚体(9R)融合蛋白基因,在大肠杆菌里表达纯化并检测该融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv-9R,将获得的基因克隆入原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,通过Ni-NTA螯合层析纯化,透析复性,超滤浓缩.ELISA分析scFv-9R融合蛋白抗原亲和活性,凝胶迁移实验检测scFv-9R融合蛋白与siRNA结合活性.结果:成功构建了人源性抗HER2 scFv-9R融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达.表达的目的蛋白scFv-9R能与HER2抗原结合,同时具有siRNA结合能力.结论:scFv-9R具有结合抗原与siRNA双重活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础.
作者：姜扩；陈锐；王立锋；马琼；孟艳玲；杨安钢；马保安；裘秀春 刊期： 2011年第11期
目的:通过RNA干涉下调CD44在脑胶质瘤细胞U87中的表达,观察CD44的表达抑制对胶质瘤增殖、迁移和侵袭的影响.方法:根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段(CD44-siRNA)转染U87细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化；Western blot 检测CD44蛋白水平的变化；MTT法检测U87细胞增殖；单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的迁移与侵袭能力变化.结果:CD44-siRNA下调了U87细胞中CD44mRNA水平与蛋白水平的表达,转染细胞的增殖和迁移侵袭能力下降.结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制U87脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的脑胶质瘤基因治疗奠定基础.
作者：董超；任君琳；张雷鸣；杨双武；方丹东；杨韬；孟艳玲；杨安钢；张剑宁 刊期： 2011年第11期
目的:研究重组热休克蛋白65通过鼻黏膜免疫途径对NOD小鼠胰腺炎和糖尿病发生的影响.方法:通过PCR方法克隆出结核分枝杆菌的热休克蛋白65的基因序列,构建了pET28a-HSP65高效表达载体,在大肠杆菌中高效可溶性表达,利用阴离子交换柱层析分离纯化.在不添加佐剂的情况下以纯化的HSP65通过3次鼻黏膜免疫非肥胖型1型糖尿病模型动物(NOD)小鼠,每月采集小鼠的血清,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测血清中抗体的产生,利用自动生化分析仪检测血糖浓度.结果:通过鼻黏膜免疫途径可成功诱导小鼠产生特异的抗HSP65抗体,组织病理学分析也显示HSP65通过鼻黏膜免疫能降低NOD小鼠胰腺病变的产生.结论:HSP65通过鼻黏膜免疫能预防NOD小鼠糖尿病的发生,证实了HSP65经鼻黏膜免疫能降低和自身免疫性糖尿病有关的炎症过程的严重性,对1型糖尿病的治疗提供了一个新的途径.
作者：朱爱华；金亮；刘景晶；刘美艳；吕爱军；郑元林 刊期： 2011年第11期
T辅助细胞9(Th9)是近发现的Th细胞新亚群,其主要分泌白细胞介素-9(IL-9),具有重要的免疫调节作用.IL-9介导JAK/STAT信号通路,在自身免疫病(AID)中的作用受到关注.因此对Th9细胞特点的掌握有助于更加深入的认识自身免疫病的发病机制,有助于寻找新的治疗药物.Th9细胞可能作为一个新的治疗靶点,用于改善机体的高反应性、阻止AID的进展.
作者：汪庆童；魏伟 刊期： 2011年第11期
目的:评价脑源性神经营养因子(BDNF)对雪旺细胞(SCs)增殖、分泌功能的影响.方法:取新生SD大鼠双侧臂丛神经,用双酶消化法体外培养SCs,并检测特异性标志蛋白S-100的表达.按培养基中BDNF终浓度的不同将所培养的SCs设立0、10、20、50、100 ng/mL组,共5组培养2周,每2d用MTT法测细胞活力.并对不同浓度BDNF处理的SCs培养24h后,取上清液,ELISA法测细胞分泌神经生长因子( NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)水平.结果:培养出的细胞呈S-100阳性,为SCs.与0ng/mLBDNF组比较,终浓度为50、100ng/mLBDNF组的SCs细胞活力明显高于0 ng/mL组(均P＜0.05),而浓度为10、20 ng/mL时虽有差异但无统计学意义(均P＞0.05).SCs能分泌NGF和FGF；其中终浓度为50 ng/mLBDNF组的SCs分泌NGF和FGF水平高(P＜0.05).结论:BDNF对SCs的增殖和分泌功能有促进作用,终浓度为50 ng/mL时,SCs的活力与分泌能力佳.
作者：衣婷婷；梁庆成；吴云 刊期： 2011年第11期
目的:研究干细胞表面标志物SOX2基因在鼻咽癌中的表达,探讨对鼻咽癌诊断及治疗的潜在意义.方法:应用PCR及荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测33例鼻咽癌和21例鼻咽炎组织中SOX2基因的表达.以鼻咽炎组作为参照,对两组荧光定量PCR数值△Ct差异进行t检验,应用Li-vak( 2-△ΔCt)法进行相对定量分析,计算鼻咽癌中SOX2基因的表达水平.结果:78.8％( 26/33)鼻咽癌和38.1％ (8/21)鼻咽炎组织中存在SOX2基因的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).鼻咽癌中57.6％( 19/33)的SOX2基因表达水平比炎症组高,差异具有统计学意义(P＜0.05),21.2％ (7/33)鼻咽癌组织中SOX2基因表达水平比对照组低,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:鼻咽癌组中SOX2基因处于一个较高的表达水平,提示SOX2基因在鼻咽癌中出现了异常表达,是鼻咽癌肿瘤干细胞存在的一个间接证据,为从肿瘤干细胞水平上的诊断及治疗提供一个潜在的靶点.
作者：裴根旺；党华；乐雍建；杨培州；甘嘉裕；陈志强；常弘 刊期： 2011年第11期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
