呼守舫;从丽娴
目的:研究丹参酸乙(salvianolic acid B,SAB)的抗氧化作用对大鼠肝星状细胞(hepatic stallate cells,HSC)增生周期的影响.方法:采用原位灌注法消化大鼠肝脏,108g@L-1nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞,分别以不同浓度的SAB或MDA/SAB处理细胞,3H-TdR掺入法观察细胞的增生能力,流式细胞术分析细胞周期各时相变化及凋亡情况.结果:1和10 tanol@L1SAB可显著抑制HSC的增生(2862±123M&2988±407 vs 4986±727,P<0.05,P<0.01),这种作用主要是抑制了细胞周期过程中G期向S期的过渡;1和10 pmol@L1SAB均可抑制MDA刺激的HSC增生(3067±73l&3042±321vs4007±587,P<0.05,P<0.01);两组剂量的SAB均不促进HSC的凋亡.结论:丹参酸乙可抑制体外培养HSC的增生,这种抑制作用与SAB的抗氧化作用有一定的关系.
作者:崔云华;王晓玲;刘晴;刘平 刊期: 2002年第03期
目的:探讨苯丙素甙对肿瘤细胞端粒酶活性的调控作用.方法:应用端粒酶PCR ELISA法,Sourthern blot杂交及流式细胞技术对苯丙素甙(verbascoside)在体外作用MKN45细胞的端粒酶活性、端粒长度及细胞周期进行检测分析.结果:苯丙素甙在一定浓度范围内(12.5-27mg@L-1)抑制端粒酶活性,但不能直接抑制细胞上清中的端粒酶活性.用端粒酶半抑制浓度剂量作用细胞后,细胞出现端粒长度缩短(约1.1 kb)、G1亚u倍体峰(0.25)及G2/M阻滞(0.08).结论:苯丙素甙诱导肿瘤细胞分化、凋亡可能是受端粒-端粒酶-细胞周期的依赖性调节,提示端粒酶抑制、端粒缩短及G2/M阻碍滞可作为肿瘤抑制靶向筛选的重要指标.
作者:张方信;贾忠健;邓芝云;樊俊杰;陈嘉屿;吴汉平;赵春玲;魏亚明 刊期: 2002年第03期
目的:研究鸡腿蘑多糖(CCP)对肝癌细胞体外增生的抑制作用和对小鼠Slso腹水瘤与实体瘤的抑制作用.方法:人肝癌SMMC-7721细胞与CCP共培养后,MTF比色分析法检测活细胞数;显微镜直接计数法测定CCP对小鼠S180腹水瘤细胞有丝分裂指数的影响;腹腔注射CCP,用ANAE法测定CCP对T淋巴细胞增生的作用;观察不同浓度的CCP对肝癌SMMC-7721细胞及小鼠S180腹水瘤、实体瘤生长的影响.结果:CCP对人肝癌SMMC-7721细胞的体外增生有一定抑制作用,在50-200mg@L-1范围中作用与浓度呈正相关(r=0.8,P<0.01);显著抑制小鼠S180实体瘤和腹水瘤的生长(P<0.05),治疗组50mg@kg-1的CCP对小鼠移植性实体瘤抑瘤率达59%;能明显降低腹水瘤有丝分裂指数(P<0.05),50mg@kg-1的CCP可使小鼠S180水瘤有丝分裂指数从3.4%降低到1.5%;50mg@kg-1的CCP使T淋巴细胞数量增长35.38%(P<0.05),通过上调T细胞数量进一步调节细胞免疫,增强机体对肿瘤的免疫能力.结论:鸡腿蘑多糖(CCP)能抑制肿瘤的生长,具有预防和治疗癌症的潜在价值.
作者:崔晻;张好建;安利国 刊期: 2002年第03期
目的:研究热休克蛋白70(HSP70)与MHC-I类抗原(HLA-A/B/C)在人原发性肝细胞癌(HCC)组织中的表达并探讨二者与肿瘤生物学行为的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测了10例正常肝组织、40例HCC肿瘤组织及癌旁组织中HSP70及MHC-I类抗原的表达.结果:HSP70在正常肝脏、癌旁组织、HCC中的阳性表达率分别为10%(1/10)、45%(18/40)、80%(3/40),HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常肝脏(Xl2=10.45,X22=14.49,P<0.05).HLA-A/B/C在正常肝脏、癌旁组织、HCC中的阳性表达率分别为100%(10/10)、95%(38/40)、55%(22/40),其在癌组织阳性表达率明显低于癌旁组织和正常肝脏组织(x12=5.21,X22=17.06,P<0.05).HSP70表达与癌周淋巴细胞浸润(X2=1.4,P>0.05)和转移(X2=1.9,P>0.05)无关,但与癌组织分化程度有关,HSP70在高、中、低分化肝癌中的阳性表达率分别为50%(5/10)、78.6%(11/14)、100%(16/16),中、低分化肝癌中的阳性表达率高于高分化肝癌(X2=9.40,P<0.05).HSP70+HSP70+HLA-A/B/C+者,高、中、低分化HCC所占比例分别为22.2%(4/18)、50%(9/18)、27.8%(5/18).HSP70与HLA-A/B/C其一或二者均为阴性时,高、中、低分化HCC所占比例分别为18.2%(4/22)、22.7%(5/22)、59.1%(13/22).前者分化程度高于后者(X2=8.13,P<0.05).结论:HSP70在HCC中表达增高,HSP70可作为判断HCC分化程度的指标;HSP70与MHC-I类抗原均为阳性者HCC分化程度较高,二者在HCC的演变过程中可能发挥作用.
作者:吴胜利;潘承恩;杨威;牛新捷;耿志敏 刊期: 2002年第03期
目的:探讨bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的调控作用.方法:健康♂Wistar大鼠,进腹,游离出胆总管,于肝门部结扎胆总管并切断,远端再予以结扎.进腹后不结扎切断胆总管作为阴性对照.结扎后3,7,14,21 d处死大鼠,每组8只.采用胶原酶原位肝灌注法获取体外培养正常大鼠及阻塞性黄疸大鼠肝细胞.分别收取正常大鼠及胆总管结扎大鼠肝细胞1×109/L-1,用Trizol试剂盒一步法提取大鼠肝细胞总RNA,行RT-PCR扩增;用PCR扩增bcl-2和对照β-actin基因片段;分离的正常大鼠及胆总管结扎14 d大鼠的肝细胞行原代培养,培养板内置小飞片,使用100μamd.L-1甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法分析肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测.结果:体外培养正常大鼠及结扎3 d大鼠肝细胞bel-2 mRNA的表达为阴性,仅见β-actin条带;胆总管结扎大鼠体外培养肝细胞在结扎后7 d即可见肝细胞内bel-2 mRNA的表达,其吸光度A值为O.13±0.15;结扎后14、2l d也可检测其表达,bcl-2 mRNA吸光度在结扎14 d达高峰,为O.56±0.21,且与结扎7、2l d相比,两者差异有显著性(P<0.05);100tanol@L-1的G,CDC作用正常大鼠肝细胞后,凋亡明显增加,凋亡率为34.9±2.9%;胆总管结扎14d大鼠的肝细胞凋亡比率为15.6±2.1%,100μanol@L-1的GCDC作用胆总管结扎14 d大鼠肝细胞后,凋亡率无明显增加,为17.3±1.1%,两者差异无显著性(P>0.05);GCDC作用的两组大鼠肝细胞凋亡率差异有显著性(P<0.05).结论:阻塞性黄疸大鼠肝细胞有bcl-2基因的表达,正常大鼠肝细胞则无表达;在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达bcl-2来抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用.
作者:王剑明;邹声泉 刊期: 2002年第03期
近几年来我国脂肪肝的发病率呈上升趋势,酒精的消耗也在逐年上升,而酒精是导致脂肪肝的重要因素之一,其危害性已经引起人们的关注.但由于其发病机制的复杂性,其治疗效果并不尽人意.可以说,酒精性脂肪肝的治疗进展就是其发病机制研究进展的一个重要体现.因此,深入研究脂肪肝的发病机制将会极大地促进临床治疗以及对于该病的防治.目前,国内对酒精性脂肪肝的研究多偏向于中医药,中医对该病的病机演变、辨证论治等进行了研究和论述,并取得了一定进展.本文将从乙醇和乙醛、氧应激与脂质过氧化、β-内啡肽、铁、炎症递质与细胞因子、免疫学等方面阐述酒精性脂肪肝的发病机制.
作者:冯志强;沈志祥;谭诗云 刊期: 2002年第03期
目的:比较无血清培养基和含血清培养基培养乳猪肝细胞的效果,以寻找一种用于生物人工肝猪肝细胞无血清培养的良好培养基.方法:采用改良原位两步胶原酶灌注法分离乳猪肝细胞.将肝细胞以5×108@L-1分别培养在无血清培养基和含血清培养基中,动态观察培养7 d中肝细胞活率、蛋白质和葡萄糖合成功能、G6-Pase活性、安定转化功能及LDH漏出量.结果:无血清培养的猪肝细胞各项指标除G-6-Pase活性在0,1,2 d较低、葡萄糖合成功能在2,7 d较低外,其余与含血清培养基培养的肝细胞无显著差异.肝细胞活率随着培养时间的延长而下降,但均高于88%;无血清培养的肝细胞的蛋白质合成功能在培养7 d中保持稳定.安定转化功能在培养2,3 d强(安定浓度2d时为75±4pg@eell-1,3 d时为77±5pg@cell-1);葡萄糖合成功能从1 d时1.00±0.15 nmol@cell-1下降到2 d时0.71±0.02nmol@cell-1;G-6-Pase活性从0d时1290±30zmol@cell-1下降到ld时306±38amaol@cell-1,然后维持在较低水平;LDH漏出量在2,3 d较高.结论:无血清培养基可用于生物人工肝中猪肝细胞的培养.
作者:陈钟;丁义涛;张鹤云 刊期: 2002年第03期
目的:对食管良性狭窄金属内支架介入治疗后进行随访.方法:75例食管良性狭窄患者,其中永久性金属支架扩张组(A组)25例;暂时性部分带膜金属支架扩张术组(B组)50例.在X线引导下,A组25例安放部分带膜金属支架15只,不带膜金属支架10只;B组50例安放部分带膜金属支架50只,在支架术后3~7 d由胃镜取出.所有患者,治疗前食管管腔窄处直径0.5~8.3 mm,吞咽困难评分2~4级;治疗后食管管腔窄处直径8.7~21.0mm,吞咽困难评分0~1级.所有患者术后随访6~54mo[平均(23.3±15.2)mo]不等.结果:A组术后并发症发生率为疼痛40%(10/25)、反流60%(15/25)、出血12%(3/25)、支架移位16%(4/25);超过6mo的随访患者中20%(5/25)复发吞咽困难,超过1 a的随访患者中25%(2/12)复发吞咽困难,超过3 a的随访患者中60%(3/5)复发吞咽困难.B组术后并发症发生率为疼痛40%(20/50)、反流20%(10/50)、出血14%(7/50);超过6mo的随访患者中l4%(7/50)复发吞咽困难,超过h的随访患者中15%(6/40)复发吞咽困难,超过3 a的随访患者中16%(4/25)复发吞咽困难.结论:暂时性部分带膜金属支架扩张术是食管良性狭窄金属内支架介入治疗中远期疗效中首选方法.
作者:陈维雄;程英升;杨仁杰;李明华;尚克中;庄奇新;陈尼维 刊期: 2002年第03期
1 病例报告男,50岁,1994年右中趾黑色肿物,诊断恶性黑色素瘤并行右中趾切除术.1998年1-3mo先后于右小腿、右大腿及右腹股沟淋巴结复发转移行局部切除术.1998-08-28因上腹部疼痛1wk,行胃镜检查发现:胃窦后壁7 x 8 cm肿物,带蒂,蒂长2.0 cm,表面不光滑,呈浅紫色,表面附有黏液及污苔.胃蠕动时肿物被推向幽门,造成幽门阻塞.活检病理诊断:恶性黑色素瘤.经给予全身化疗后,9 m行胃大部切除术,术中探查肝、脾、盆腔未见异常.10mo,腹痛加重并伴有呕吐,而后腹部出现肌紧张、压痛、反跳痛,再次手术,术中见小肠系膜及根部布满黑色素瘤转移结节,空肠套叠,肠管坏死达70 cm.手术后病情继续恶化,1998-10-21抢救无效死亡.
作者:吴志强;殷健;唐晓兰 刊期: 2002年第03期
目的:通过观察大肠腺瘤、腺癌和正常大肠组织中的细胞凋亡、细胞增生及其调控基因Bcl-2,BcI-Xl,C-myc和核因子-κB的表达状态,探讨核因子-κB在大肠癌发病过程中的作用.方法:利用DNA缺口末端标记技术和NF-кB,Bcl-2,Bcl-Xl,C-myc,PCNA蛋白免疫组化染色,原位检测30例大肠腺瘤和30例大肠腺癌中凋亡细胞、细胞增生和NF-кB,Bcl-2,Bel-Xl,C-myc阳性表达细胞的密度和分布,以10例正常大肠组织作对照.结果:NF-fcB,Bcl-2,Bcl-Xl,C-myc蛋白的表达率和表达强度腺癌和腺瘤高于正常组织(70.9±7.2vs 54.0±4.5 vs 30.6±2.4;78.2±8.3 vs 55.6±6.5 vs 11.0±1.9;77.3±6.5 vs 56.4±4.7vs 9.3±1.1;70.3±6.7 vs 50.1±4.2vs14.2±1.7,P<0.01),腺癌高于腺瘤(70.9±7.2vs54.0±4.5;78.2±8.3vs 55.6±6.5;77.3±6.5 vs 56.4±4.7;70.3±6.7vs 50.1±4.2,P<0.01).腺瘤和腺癌中的凋亡细胞指数均高于正常组织(105.9±6.1 vs31.5±3.7vs 10.0±1.5,P<0.01),腺瘤高于腺癌(105.9±6.1vs 31.5±3.7,P<0.01).腺癌和腺瘤中的细胞增生高于正常组织(75.4±5.6 vs 50.7±4.9vs 29.6±3.0,P<0.01),腺癌高于腺瘤(75.4±5.6 vs 50.7±4.9,P<0.01).结论:NF-κB在大肠肿瘤中促进细胞增生、抑制细胞凋亡,在其发病过程中发挥重要作用.
作者:於亮亮;于皆平;冉宗学;于红刚 刊期: 2002年第03期
肝干细胞的存在与否曾是一个争议性问题,目前则趋于肯定,并取得重要研究进展.肝干细胞有肝源性和非肝源性两类,前者包括胆管源性卵圆细胞和分化肝细胞,后者包括胚胎干细胞(ES细胞)、骨髓/血液干细胞及胰腺上皮细胞等.肝干细胞受多种细胞因子调节;卵圆细胞可通过流式细胞仪分离,经特殊培养液培养条件及遗传学改造等进行长期培养;肝干细胞与肝坏死后的再生及增生有关,也和肝细胞癌变有关.已在动物中成功进行了肝源性和非肝源性肝干细胞移植.肝干细胞是研究肝细胞发育、生长、增生、再生、纤维化及癌变等生理和病理生理过程中不可缺少的关键角色,并可能通过肝细胞移植、体外生物人工肝及肝导向基因治疗,在多种肝病及肝脏相关疾病中发挥重要作用.
作者:王宇明;陈耀凯 刊期: 2002年第03期
目的:探讨非甾体类抗炎药(nonstemidal anti-imqammatory drugs,NSAID)对体外培养的胃癌细胞SGC7901生长及环氧合酶活性的作用.方法:用MTT法观察阿司匹林、尼美舒利对胃癌细胞SGC7901生长的影响;免疫细胞化学方法检测Ki-67及COX-2蛋白表达;采用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平.结果:阿司匹林和尼美舒利呈时间、剂量依赖性方式抑制细胞增生,减少Ki-67蛋白表达.胃癌细胞SGC7901COX-2蛋白表达阳性,并伴有PGE2释放,尼美舒利可减少PGE2产生,但对COX-2蛋白表达无影响.结论:阿司匹林和尼美舒利均可抑制COX-2表达阳性的胃癌细胞SGC790l生长,尼美舒利通过抑制COX-2酶活性而减少PGE2释放,该研究提示COX-2可能在胃癌细胞SGC7901增生中起重要作用.
作者:李建英;于皆平;罗和生;余保平;黄杰安 刊期: 2002年第03期
目的:探讨胃癌及癌前病变中端粒酶逆转录酶(hTERT)基因和c-myc蛋白的表达及相互关系.方法:以41例胃癌和25例相应非癌组织为研究对象,采用免疫组化和原位杂交方法检测c-myc蛋白、hTERT蛋白和hTERTmRNA,并对各指标阳性表达率和相关性进行比较分析.结果:正常胃黏膜-肠型化生-异型增生-胃癌中,c-myc蛋白的阳性率分别为0,30%,53%,59%;hTERTmRNA的阳性率为10%,39%,67%,85%;hTERT蛋白为0,30%,60%,78%.三者在异型增生、胃癌中分别与正常组相比差异有显著性,而且肠化与胃癌组比较也分别具有显著性(P<0.05).胃癌中,c-myc和hTERT蛋白的表达在低未分化、进展期、有淋巴结转移和浸润至浆膜层的肿瘤中显著增高(P<0.01~0.05).而hTERTmRNA的表达仅与肿瘤分期有关.肠化、异型增生和胃癌三组中,c-myc和hTERTmRNA及hTERTmRNA和蛋白间分别具有显著性正相关(rs=0.504~0.696,P<0.05).结论:c-myc和hTERT的过表达是胃癌发生中的早期事件,其表达水平随着胃癌恶性程度的增加而增加;c-myc在转录水平上激活hTERT的表达,可能是胃癌发生发展的重要阶段.
作者:王维;罗和生;余保平 刊期: 2002年第03期
作者: 刊期: 2002年第03期
目的:研究胰岛素样生长因子I型受体(insulin-lik growth factor-I receptor,IGF-IR)反义基因对SMMC-7721肝癌细胞株形态学的影响,为肝癌的发病机制提供理论基础.方法:构建IGF-I R正、反义基因真核表达载体,脂质体介导将其转入SMMC-7721肝癌细胞株,HE染色、电镜检查肝癌细胞株形态学的变化,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡.结果:HE染色IGF-I R反义细胞与正义细胞、7721细胞无明显变化.扫描电镜:IGF-I R正义细胞异形性明显,微绒毛较反义细胞、7721细胞显著.透射电镜:7721细胞大小不等,细胞器增多,核浆比例增大.IGF-工R反义细胞胞质内可见微腺腔、灶性坏死、髓鞘样结构.流式细胞仪检测IGF-I R反义细胞G1期细胞明显增加(0.64),S期细胞减少(O.19),而且凋亡增加(0.06).IGF-IR正义细胞S期细胞增加(0.35),凋亡减少(0.01).反义细胞与正义细胞、7721细胞比较有非常显著性差异(P<0.01).结论:反义细胞中出现的异常形态学改变可能与IGF-I R反义基因抑制细胞增生、促进细胞凋亡有密切关系.
作者:周平;周子成;陈文生;刘为纹;房殿春;杨建民 刊期: 2002年第03期
Cajal间质细胞(interstifial cells of cajal,ICc)是分布在消化道自主神经末梢与平滑肌细胞之间一类特殊细胞.目前认为Icc是胃肠道运动的起博细胞,他不仅能产生节律性慢波电活动,ICC细胞膜上还存在多种神经递质受体,这些受体使ICC能调节神经递质传递,并作为神经输出与平滑肌之间的中介.近来还发现许多胃肠道运动疾病与ICC的异常密切相关.本文收集国内外近期文献,对ICC的位置、形态和功能以及其相关疾病的研究进展作一综合复习.
作者:龙庆林;房殿春 刊期: 2002年第03期
钙粘蛋白复合体是近10 a来发现的细胞信号转导系统,他与细胞间紧密连接的建立、细胞极性的维持、伤口的愈合以及肿瘤的发生和发展等多种生理和病理过程有着密切的关系.此复合体中的α-连环素对其有独立的调控作用,其表达情况是反映此复合体功能的敏感指标.检测肿瘤组织中α-连环素的表达有助于对肿瘤的生物学表型作出判断,对患者预后的估计也有帮助.本文综述了近年来关于α-连环素的生物学性质、功能调控、α-连环素在胃肠道肿瘤中的表达特点以及α-连环素的检测方法.
作者:陈国裕;陈锡镁 刊期: 2002年第03期
目的:cagA+Hp的感染与胃癌的相关性在亚洲有不同报道,本研究应用重组幽门螺杆菌毒素相关抗原A(cagA)建立检测血清中抗CagA抗体的方法,以探讨本地区cagA+Hp的感染与胃癌的相关性.方法:构建表达幽门螺杆菌Cagg抗原的表达载体,工程菌经IPIG诱导,表达的CagA包含体经Ni柱纯化,变性、复性、透析并经活性鉴定后,抗原被点在硝酸纤维素膜上或用以包被ELISA板,建立检测正常人及胃癌患者血清抗Cag3抗体的DIGFA(斑点金免疫渗滤试验,简称滴金法)和ELISA法.结果:重组克隆pltSETcagA的工程菌可表达M36000的目的蛋白,表达形式为包含体;CagA包含体经纯化后SDS-PAGE显示纯度达98%以上,活性经ELISA证实;正常人64例及胃癌患者血清50例中,cagA+Hp的感染率分别为29.7%和62%,胃癌患者cagA+Hp的感染率明显高于正常人(P<0.01).结论:我们建立的检测血清抗CagA抗体的DIGFA和ELISA均具有良好的可重复性;胃癌患者cagA+Hp的感染比例明显高于正常人,CagA阳性幽门螺杆菌的感染与胃癌有关,CagA可作为制备防治caen+Hp感染的疫苗的后备抗原.CagA可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原,检测患者血清幽门螺杆菌CagA抗体,有可能为胃癌的发生提供预警作用.
作者:李君;阎小君;刘智广;苏成芝 刊期: 2002年第03期
目的:研制含有靶向配基、DNA聚合亚基、溶酶体活性成分及聚乙二醇等多种组分的肝靶向的DNA给药系统.方法:分别制备As0R-PL偶合物及PEG-PEI偶合物.然后按照不同的比例先后与报告基因DNA形成复合物,再进行Huh-7细胞的体外转染试验和静脉给药后小鼠体内的表达试验.结果:AsOR-Pt/PFG,-PEt/DNA复合物对受体阳性的Huh-7细胞具有较高的转染效率;小鼠尾静脉给药后能够在肝脏特异性表达.结论:含有靶向配基、DNA聚合亚基、溶酶体活性成分及聚乙二醇等多种组分的载体系统能将DNA选择性的投放于小鼠肝脏,显示了较好的应用前景.
作者:靳雪源;张玲霞;楼敏;谢建芳 刊期: 2002年第03期
食管静脉曲张出血(EVB)是肝硬化患者死亡的重要原因之一.首次和再次静脉曲张出血病死率均为30~50%.采用内镜治疗EVB止血率可达85%以上,食管静脉曲张消失率达83%,出血死亡率可下降至10%左右.急诊内镜控制EVB效果远优于三腔二囊管和血管加压素,并可减少早期再出血率.然而活动性出血时内镜视野欠清晰,且ELS和EVL治疗后,曲张静脉闭塞消失之前,仍有一定的再出血率,并可出现溃疡、穿孔、吞咽困难、食管狭窄等并发症.内镜治疗联合应用血管收缩剂、β-受体阻滞剂、钙离子拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、抑酸剂、止血剂等药物,可降低内镜治疗过程中注射拔针时针孔喷血和涌血发生率,减少活动性出血,使视野变清晰.可降低急诊手术率、休克发生率,提高内镜治疗的安全性和成功率.此外,能减少输血需求量,降低近期再出血率,预防再次出血或减少再出血,推迟曲张静脉再破裂出血时间,并能明显减少吞咽困难和食管狭窄的形成,促进硬化治疗后,食管或胃底溃疡的愈合.联合治疗可使患者从中获得诸多益处.
作者:常丽丽;任锡玲;高富贵;刘玉珍 刊期: 2002年第03期