代志瑶；孙宝春；黄莎莎；康东洋；张昕；董敏；袁永一；戴朴
目的：通过构建基因MITF及其突变体表达质粒初步研究其外源性表达和定位表达，为研究Waardenburg综合征（Waardenburg syndrome，WS）发病机制提供一定的实验依据和基础。方法通过分子克隆技术双酶切pCMV-MITF和pCMV-Flag后连接构建MITF基因重组真核细胞表达质粒pCMV-MITF-Flag，以其为模板分别构建MITF基因新发突变R217I和T192fs表达质粒pCMV-R217I-Flag和pCMV-T192fs-Flag，DNA测序鉴定。MITF、R217I和T192fs表达质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞或黑色素瘤UACC903细胞，Western blot和细胞免疫荧光分别检测和观察野生MITF蛋白和突变R217I、T192fs蛋白的表达和分布。结果MITF及其突变体R217I和T192fs表达质粒经DNA测序鉴定序列正确，三者在黑色素瘤UACC903细胞中正确表达，MITF和R217I仅在细胞核中分布，而T192fs仅在细胞质分布。结论成功构建了MITF基因及其突变体真核细胞表达质粒，突变对MITF蛋白的亚细胞定位产生影响，为在体外实验进一步研究国人MITF基因突变致WS发病的分子机制奠定了实验基础。
作者：张华；冯娟；李家大；罗浑金；陈红胜；梅凌云；贺楚峰；冯永 刊期： 2014年第01期
目的：检测GJB2单杂合突变非综合征型耳聋患者GJB2全序列中是否有大片段的碱基插入或缺失，研究GJB2全序列长链PCR方法和电泳方法。方法应用长链PCR方法对201例GJB2单杂合突变非综合征型耳聋患者进行GJB2全序列长度检测，对照组为111例听力正常的成年人。应用两步法PCR，调整加入DNA模板量、PCR延伸时间、循环次数等，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物的长度和量，调整加样槽的宽度、加样量、电泳电压、电流、电泳时间得到清晰条带，若PCR产物存在大片段碱基插入或缺失，用限制性内切酶BamHI进行内切酶反应，初步判断插入或缺失的大致位置。结果201例GJB2单杂合突变患者中，GJB2序列长度未见大片段碱基插入或缺失。对照组GJB2序列长度未见异常。结论 GJB2单杂合突变非综合征型耳聋患者中GJB2序列长度检测未见明显异常。
作者：王辉兵；于飞；戴朴；单希征；袁永一；张昕；康东洋；韩东一 刊期： 2014年第01期
目的：分析两个非综合征型前庭水管扩大耳聋家系的临床特征和SLC26A4基因检测特点。方法对两个非综合征型前庭水管扩大耳聋小家系进行临床表型分析，并对两个家系中的6例耳聋患者、6例听力正常者及1例胎儿进行SLC26A4基因全编码序列的检测。结果第一个家系共3代9人，其中仅第三代2人为耳聋患者，2例均为语后感音神经性聋，颞骨CT显示均为前庭水管扩大，1例胎儿。第二个家系共三代14人，其中4人为耳聋患者，1例为语后感音神经性聋，3例为语前感音神经性聋。颞骨CT显示均为前庭水管扩大。两个家系共发现SLC26A4基因1022delC、c.919-2A>G、p.G497S、p. H723R、p.T410M五种不同的已知致病突变，耳聋患者均为双等位基因突变，1例胎儿为携带者，6例听力正常者为携带者。结论两个家系的6例耳聋患者分别由SLC26A4基因不同复合杂合突变导致前庭水管扩大，1例胎儿为携带者，加强耳聋基因的孕前及产前诊断对防止此类耳聋患儿的出生有重大意义。
作者：田晓丽；崔书平；段乃超；马建刚；蒋新霞；黄爱萍；刘艳平；朱庆文 刊期： 2014年第01期
目的：分析SLC26A4基因突变在中国单侧大前庭水管综合征耳聋患者中的分布，探讨单侧大前庭水管综合征的致病因素。方法回顾性分析行SLC26A4基因全序列分析的17例经颞骨CT和听力学检查确诊为单侧大前庭水管综合征的耳聋患者，基因突变检测分布；447例双侧大前庭水管综合征患者的SLC26A4基因突变分布情况作为对照组。结果单侧大前庭水管综合征患者中SLC26A4基因阳性检出率29.41%（5/17），明显低于双侧大前庭水管综合征患者的检出率95.97%（429/447）（P<0.01）。结论单侧前庭水管扩大的发病可能是与SLC26A4以外的其他因素尚存在联系。
作者：黄莎莎；黄邦清；董敏；孟肖肖；戴朴 刊期： 2014年第01期
目的：基于耳聋患者的临床表现，选定POU3F4基因作为检测对象，为患者提供病因学诊断。方法对先证者进行全面的体格检查，排除其他器官病变，并进行详细的听力学及颞骨CT检查。提取先证者外周血白细胞基因组DNA，运用聚合酶链反应的方法，对先证者POU3F4基因进行扩增，直接测序法对POU3F4基因进行全部编码序列检测。结果先证者表现出极重度感音神经性聋。颞骨CT显示双侧耳蜗分隔不全、前庭发育不良、内听道底膨大、耳蜗和内听道底相通。基因检测发现该患者POU3F4基因存在一个新的突变（c.530C>A（p.S177X）），该位点改变导致终止密码子提前出现，使POU3F4转录因子不能发挥其正常的功能。结论通过对该患者POU3F4基因的序列分析，发现了一个明确致病的新的提前终止的突变位点，丰富了POU3F4基因的突变谱。
作者：黄邦清；曾佳玲；苏钰；黄莎莎；袁永一；王国建；赵辉；戴朴 刊期： 2014年第01期
目的：探讨先天性小耳畸形的耳廓再造与重建方法。方法2003年1月至2012年12月，采用皮肤软组织扩张法，利用健耳相片，通过计算机photoshop软件数字化翻转处理形成即要再造耳廓的相片，然后进行耳廓软骨支架的雕刻，用扩张后的患耳乳突区皮瓣覆盖雕刻的自体肋软骨耳廓支架行耳廓再造。结果1102例（1165耳）经过6个月～10年的随访观察。其中56例（56耳）再造耳廓有不同程度的软骨吸收、变形；2例（2耳）肋软骨支架感染、肋软骨液化、坏死；1044例（1107耳）再造耳廓与健耳匹配，凹凸结构显示清晰，形状相似、逼真，颅耳角的角度与健耳对称。结论用皮肤软组织扩张法行耳廓再造，术中应用数字化技术形成患耳相片指导自体肋软骨耳廓软骨支架的雕刻，效果满意、并发症少，是先天性小耳畸形较好的治疗方法。
作者：苏法仁；丁静华；薄琳；刘新刚 刊期： 2014年第01期
目的：分析GJB2基因的听力学表型与基因型关系。方法2007年4月～2011年3月在解放军总医院就诊的具有完整听力学资料的1481名非综合征性耳聋患者，均进行GJB2编码区测序，并对其GJB2基因突变检出阳性率及与听力学表型关系进行统计学分析。结果1481例患者GJB2基因阳性突变率为20.05%，双耳感音神经性聋组阳性突变率为20.66%，高于单耳耳聋组（2.08%）（P<0.01）。在双耳感音神经性聋组中，极重度聋组中的GJB2阳性检出率高（26.07%），其次是重度（18.12%）、中度（17.4%），轻度组为11.54%，各组间阳性检出率差异有统计学意义（P<0.01）。对297例GJB2基因突变阳性患者听力曲线分型分析中，发现了10例上升型听力曲线（14.93%），但GJB2耳聋听力图仍以残余型（26.27%）、平坦型（25.16%）常见，各组阳性检出率差异有统计学意义（P<0.01）。结论 GJB2基因突变者听力学表型呈多样性，在进行基因检测时，除重视双耳重度、极重度感音神经性聋或听力图为残余型和平坦型的人群外，也应该对单耳耳聋、双耳轻度听力损失或听力图为上升型感音神经性聋患者进行常规耳聋基因检测。
作者：代志瑶；孙宝春；黄莎莎；康东洋；张昕；董敏；袁永一；戴朴 刊期： 2014年第01期
梅尼埃病（MD）是一种特发性内耳疾病。1938年Hallpike和Cairns首次提出本病的病理基础为膜迷路积水，此后这一观点得到许多学者的证实。一直以来，梅尼埃病的诊断主要依靠临床表现和各项听力学前庭功能检查，但缺少影像形态学的客观依据。经典的膜迷路积水的检查方法是通过间接征象推测膜迷路积水及程度，其诊断价值有限。经鼓室注射钆对比剂迷路MR成像通过提高含钆与不含钆组织的成像对比度，能够清晰的显示内耳结构细微的变化，为膜迷路积水的影像学诊断搭建了新的平台，并被广泛用于内耳疾病发病机制、药物治疗等方面的研究，是当今耳科学的研究热点之一。
作者：郝媛媛；孙建军 刊期： 2014年第01期
目的：研究感音神经耳聋GJB2、SLC26A4基因致病性突变与内耳CT表型之间的关系，探讨这两种基因检测在诊断感音神经性耳聋患者是否存在内耳畸形方面的作用。方法按DNA测序的方法检测2686例感音神经性耳聋患者GJB2、SLC26A4基因致病性突变情况，以Sennaroglu分类为标准统计以上患者内耳CT表型情况，分析GJB2、SLC26A4基因型与CT表型之间的关系。结果1、2686例患者中共检出GJB2基因致病性突变429例（双等位基因纯合突变220例、复合杂合突变207例、单等位基因显性突变2例），共检出SLC26A4基因致病性突变596例（双等位基因纯合突变169例、复合杂合突变427例）。2、2686例患者中内耳畸形873例（Mondini畸形371例、单纯大前庭水管338例、其它164例）；内耳CT正常1813例。3、GJB2基因致病性突变99.30%（426/429）在内耳CT正常组中检出，SLC26A4基因致病性突变100%（596/596）在前庭水管扩大相关内耳畸形中检出。结论 GJB2基因致病性突变与内耳正常CT表型密切相关；SLC26A4基因致病性突变与前庭水管扩大相关内耳畸形密切相关。
作者：孙宝春；代志瑶；黄莎莎；韩冰；袁永一；苏钰；康东洋；戴朴 刊期： 2014年第01期
目的：探索超声骨刀应用于颞骨外科的可行性。方法利用超声骨刀Misonix BonescalpelTM E-DC06在颞骨上模拟完壁式乳突根治术，根据不同的骨质调整刀头，轮廓化乳突；模拟切除部分骨质，暴露硬脑膜和乙状窦血管壁，显微镜下观察脑膜和乙状窦血管壁的完整性；记录操作时间。结果应用超声骨刀可以顺利完成乳突轮廓化，未造成面神经、乙状窦血管壁、中颅窝脑膜损伤，易于操控，可以实现精确切削。完成乳突轮廓化的时间为35分钟。结论超声骨刀可以准确切除骨质、保护颞骨周围软组织、操控性好，在颞骨手术中有良好的应用前景，但是刀头形状、工作模式等方面还需要进一步完善。
作者：冯国栋；田旭；高志强 刊期： 2014年第01期
目的：探讨不同材料下（颞肌筋膜、薄层软骨-软骨膜瓣复合物）行改良夹层法鼓膜成形术的疗效。方法对100耳患慢性化脓性中耳炎的鼓膜穿孔患者，随机双盲法行自体颞肌筋膜（对照组）及薄层软骨-软骨膜瓣复合物（研究组）行改良夹层法鼓膜成形术，分别就术后愈合情况、听力效果及鼓室曲线等进行临床观察及统计学分析。结果①鼓膜穿孔者，愈合效果组间无差异（P＞0.05）。②鼓膜大穿孔者，听力及鼓室曲线等研究组优于对照组（P＜0.05）③鼓膜中、小穿孔，听力及鼓室曲线等对照组优于研究组（P＞0.05）。结论修补鼓膜穿孔时，鼓膜愈合情况两组无统计学差异；修补鼓膜大穿孔时，听力及鼓室曲线研究组明显优于对照组，远期听力效果较好，对于鼓膜中、小穿孔，对照组明显优于研究组。
作者：杨引通；段学军；戴朴；高卓平；陈鹏 刊期： 2014年第01期
纳米材料与生物技术的有效结合形成了纳米生物材料，而纳米载体的研究已经成为纳米技术的前沿和热点之一，应用纳米载体携带基因或药物导入为内耳疾病治疗的研究提供了新的工具，具有无毒性及免疫原性的优势，已作为高效阳离子载体用于内耳基因/药物导入研究。本文回顾总结应用纳米载体进行内耳基因/药物递送的相关研究现状，突出其优势和内耳疾病治疗药物输送技术的特点，为未来内耳应用纳米载体进行基因治疗提供新的方向和思路。
作者：陈志婷；杨仕明 刊期： 2014年第01期
自人工耳蜗问世以来，无数耳聋患者通过这一技术回归有声社会并获得了让人满意的言语交流康复效果[1]。然而，人工耳蜗植入者对音乐的感知却并不如像对言语的感知那么理想[2]。由于音乐被看作是一种语言之外的交流手段，给人提供一种特殊的表达方式，并常常附带着人类的情感。对音乐的感知，是评价术后生活质量的一个指标，也成了人工耳蜗植入者术后康复效果评价的一个极其重要的方面。随着人工耳蜗技术的不断发展，以及对诸如心理声学，神经科学等理解的不断加深，人们对此项技术所能达到的听觉效果有了更多的期待。然而，人工耳蜗植入者鲜见能够很好地感知和欣赏音乐，这由许多因素所造成。近些年来，科学家们试图了解为什么人工耳蜗在提供良好的音乐感知上存在明显不足，并做了大量的研究。国内对于人工耳蜗使用者音乐感知的综述多侧重于感知评估方面，本文就目前在电听觉介导音乐感知机理方面的研究情况作一综述。
作者：毛弈韬；聂智樱；谢鼎华；伍伟景 刊期： 2014年第01期
耳聋是影响人类健康和造成人类残疾的常见原因。造成耳聋的原因是多方面的。但是大致可以归为环境因素和遗传因素两大类，遗传因素为主要因素。先天性耳聋的发病率约为1／1000(新生儿)。在我国，每年有30000个患有先天性听力损害的婴儿出生。遗传性耳聋根据是否伴有耳外组织的异常或病变可分为综合征性耳聋(syndromic bearing loss。SHL)和非综合征性耳聋(nonsyndromic hearing loss，NSHL)。在发达国家的语前聋患者中，至少2／3的患者是遗传性耳聋。在遗传性耳聋患者中，NSHL约占70％， SHL约占30％。
作者：辛凤；袁永一；戴朴 刊期： 2014年第01期
转化医学致力于弥合基础研发与临床应用之间的鸿沟，在基础医学与临床医学之间建立起桥梁，是将从基础研究获得的知识、成果快速转化为临床诊断治疗方法的新医学理念。耳聋基因诊断在国内开展已有10余年，为相当部分的耳聋患者（特别是儿童耳聋患者）揭示了分子病因，为耳聋家庭提供了致病基因的携带状况和遗传规律等信息，为耳聋的遗传咨询、产前诊断及出生缺陷预防的临床实践提供了理论基础和技术保障，促进了聋病三级预防的实现。耳聋基因诊断的出现和发展推动了耳聋的诊断由影像和听力学水平跃升至分子水平，也为耳聋基因治疗的基础研究奠定了坚实的基础，是转化医学推动疾病防治的范例，对耳学科、康复科学和优生优育科学的发展起到了积极作用。
作者：袁永一；戴朴 刊期： 2014年第01期
目的：分析耳聋-甲状腺肿综合征（Pendred综合征）的临床特点和分子诊断特征，以加强耳鼻喉科医生对本病的认识，减少漏诊、误诊。方法调查2003年1月~2013年12月在解放军总医院聋病分子诊断中心就诊的前庭水管扩大耳聋患者1745人，对其中体格检查发现甲状腺肿大的患者行甲状腺超声、甲功五项、过氯酸盐释放试验及PDS基因测序。结果共诊断4例Pendred综合征，4例患者甲状腺肿表型均出现于11岁后，甲状腺功能检查无明显异常，B超检查提示甲状腺肿伴甲状腺结节，过滤酸盐释放试验证实3人有甲状腺碘有机化障碍，1人结果在正常范围。接受基因筛查的3人均被证实携带PDS基因双等位基因突变，PDS基因缺陷是其分子病因。结论 Pendred综合征在中国的发病率可能并不低，部分Pendred综合征病人因就诊时甲状腺表型尚未显现或医生经验不足而出现漏诊。对于临床就诊的低龄EVA患者应常规检查甲状腺并告知其随访。基因诊断是Pendred综合征诊断的重要依据，对患者父母再生育前产前诊断及患者本人婚配前遗传咨询具有重要指导意义。
作者：袁永一；黄莎莎；左路杰；张国正；戴朴 刊期： 2014年第01期
目的：利用SNaPshot技术检测线粒体12S rRNA A1555G异质性突变耳聋家系(K-11)母系成员的突变异质率，探讨家系中异质率的分布状况和遗传规律。方法通过家系调查，对线粒体12S rRNA A1555G异质性突变耳聋家系母系成员进行全身系统检查及临床听力学检测；提取基因组和线粒体DNA，针对12S rRNA A1555G突变，设计SnaPshot引物和探针，并对K-11家系母系成员进行异质率检测，分析K-11家系母系成员突变异质率的分布特点和遗传规律。结果 K-11家系共四代，耳聋是此家系的唯一临床表型，家系母系耳聋成员的听力下降时间、程度和听力曲线类型具有明显的个体差异；家系中每位家系母系成员的12S rRNA A1555G突变异质率均不同，低为82.32%，高为94.65%，整体平均异质率为87.99%，个体间异质率传递无明显规律可遵循；按照家系每代间分析，第II-IV间平均异质率分别为88.27%、86.78%和90.31%，每代间平均异质率逐渐增加。结论 K-11家系内部个体间异质率传递具有一定的随机性，每代间的平均异质率呈现逐渐增加的趋势。
作者：朱玉华；翟所强；戴朴 刊期： 2014年第01期
由中山大学孙逸仙纪念医院耳鼻咽喉科、中山大学言语及听力研究所主办的2014年第一届中德咽鼓管功能障碍相关疾病研讨会暨第十三届颞骨解剖及耳显微外科培训班定于2014年5月17-21日在广州召开（咽鼓管功能障碍相关疾病研讨会定于5月17日召开）。本次研讨会特别邀请国内及德国咽鼓管功能障碍及中耳显微手术研究领域的专家进行精彩的专题讲座及手术演示。精彩内容包括：咽鼓管功能障碍相关疾病的基础研究及临床治疗新进展；咽鼓管功能的客观检查方法；咽鼓管球囊扩张技术的临床应用；中耳显微精细外科的技巧培训；中耳外科手术常见并发症的系列处理及预防新进展等。会议授予国家级继续教育I类学分10分。咽鼓管功能障碍相关疾病研讨会会务费为400元；颞骨解剖及耳显微外科培训班学费为1000元（可免费参加咽鼓管功能障碍相关疾病研讨会）；颞骨标本费用为1000元。欢迎广大同道垂询。
作者： 刊期： 2014年第01期
目的：探讨依达拉奉（Edaravone，Ed）对豚鼠声损伤的保护作用。方法清洁级豚鼠30只，雌雄不限，体重200～250g。随机分3组，正常对照组10只,生理盐水组10只,依达拉奉组10只。予白噪声120dB SPL，每天4h，连续4天。噪声前半小时腹腔注射依达拉奉溶液，8.0mg/kg，每天一次，持续给药到噪声完毕后一周。噪声前，噪声后即刻，第3天，第7天行听性脑干反应（ABR）检测，第8天琥珀酸脱氢酶，免疫组化,扫描电镜检测。结果噪声前，3组豚鼠ABR阈值无明显差异（P＞0.05），噪声后即刻生理盐水及依达拉奉组ABR阈值均高于正常对照组，依达拉奉组ABR阈值低于生理盐水组，差异有统计学意义（P＜0.05），3天后，依达拉奉组ABR阈值明显降低，7天后接近正常对照组，而生理盐水组则明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。正常对照组外毛细胞胞质琥珀酸脱氢酶（SDH）着色深，胞核、纤毛排列整齐；光镜下观察生理盐水组底转毛细胞中SDH着色浅，细胞肿胀不规则，依达拉奉组较生理盐水组外毛细胞胞质着色深，细胞形态规则，免疫组化及扫描电镜检测显示正常对照组细胞核纤毛排列整齐，未见缺失，而生理盐水组和依达拉奉组底转毛细胞出现缺失，依达拉奉组较生理盐水组细胞核及纤毛缺失明显减轻。结论结合之前的实验研究，初步推测依达拉奉对噪声性耳聋中产生的自由基具有清除作用。
作者：吴龙军；黄益灯；于宁；夏思文；孙建和；郭维维；李兴启；陈立伟；杨仕明 刊期： 2014年第01期
目的：跟踪某航校飞行学员人群连续两年的高频听力变化，根据结果判断其变化趋势并进行基因组学筛查，探讨mtDNA4977缺失与噪声性听力损失关系。方法随机抽取某航校2009级140名飞行学员进行听力学检测，连续跟踪调研两年，着重观察个体两年间左右耳高频频段4000、6000、8000Hz之间的听阈值及高频听力累加值的变化情况，针对筛查出的听力下降学员进行mtDNA4977片段缺失情况诊断，应用SPSS19.0统计软件进行同一人群配对样本T检验以验证是否具有统计学意义，以X2检验进行组间基因缺失频率的比较。结果在调查的飞行学员人群中，两年间右耳4000Hz频段有明显变化(p＜0.05)，其他各高频频段及高频听力累加值无明显统计学意义（p＞0.05）。两组mtD-NA4977缺失率差异有统计学意义( P＜0.05)。结论在高年级飞行学员人群中存在噪声性听力损失，携带mtDNA4977缺失基因型的个体对噪声性听力损失易感。
作者：李佳；张红蕾；李大鹏；蔡庆；龚维熙；李丽；李平；李娟；郑伟；董晶；郭睿 刊期： 2014年第01期
中华耳科学杂志
主管:解放军总医院
主办：解放军总医院耳鼻咽喉科研究所
