蔡瑜；刘萱；杨尧；李平；曹诚；张部昌
目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌EHEC O157:H7新预测毒力蛋白Z3672,以进一步开展其结构与功能的研究.方法:利用PCR方法从EHEC O157:H7基因组中扩增出基因z3672,构建重组表达质粒,经测序证实后,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用质谱分析法和Western印迹试验进行鉴定,通过洗涤包涵体纯化目的蛋白.结果:构建了pET-24a-z3672重组质粒,经酶切及测序鉴定与预期序列一致,实现了目的蛋白的融合表达,并且对蛋白条带的质谱分析证实了表达蛋白即为Z3672蛋白.纯化后目的蛋白的纯度90%.结论:得到了新预测的毒力蛋白Z3672,为下一步研究蛋白功能,并进一步研究EHEC O157:H7的致病机制奠定了基础.
作者：高原；马延；毛赟赟；李玉霞；凌焱；张京生；周围；梁龙 刊期： 2009年第03期
随着人们自我保健意识不断提升,来医院自觉进行年度健康体检的人员日趋增加.现对我院2007年度接受健康体检中资料完整的2 876例受检人员的健康状况进行分析.
作者：韩莉；黄慧敏；钱瑞华；陈刚；龙云 刊期： 2009年第03期
造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)是研究早和为深入的干细胞.众所周知,HSCs可以分化为各种成熟的血细胞,并能重建经致死剂量照射损伤的造血系统,在临床治疗多种造血系统疾病中具有重要的意义.
作者：陆颖；王全立；王立生；吴祖泽 刊期： 2009年第03期
布鲁菌是引起人畜共患传染性布鲁菌病的病原体.基因分型作为布鲁菌病溯源的主要方法,目前以多位点VNTR分析技术备受关注,其他分型技术如随机扩增多态性和扩增片段长度多态性、多位点序列分型等也在布鲁菌基因分型中得到应用,本文综述了近年来布鲁菌基因分型的研究进展.
作者：何斌；朱虹；端青 刊期： 2009年第03期
糖尿病患者20%～40%合并高血压[1],病程长者易并发肾脏损害出现继发性高血压.这类患者有明显的代谢紊乱和较严重的靶器官损害,降压药的疗效降低,控制血压的能力受影响,构成一种特殊类型的高血压[2].积极控制血压能明显减少糖尿病患者高血压的靶器官损害及病死率.
作者：曹子敬 刊期： 2009年第03期
乙酰肝素酶(heparanase,HPA)是一种内源性β-葡萄糖醛酸酯酶,为迄今发现的唯一作用于细胞外基质多聚糖硫酸乙酰肝素蛋白多糖的内切酶[1].它能够特异性地识别硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)结构,并能将其降解为含10～20个糖单位的寡糖链[2,3].
作者：高红伟；田曙光；李素波；崔真源；刘至玄；李宫锋 刊期： 2009年第03期
目的:研究扛板归(Polygonum perfoliatum L.)的化学成分.方法:利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱等方法对扛板归进行分离纯化,根据理化性质、波谱数据(质谱、核磁共振谱)鉴定化合物的化学结构.结果:分离鉴定出12个单体化合物,分别为槲皮素(quercetin, 1)、异鼠李素(isorhamnetin,2)、金丝桃苷(hyperrosid,3)、槲皮苷(quercitrin,4)、原儿茶酸(protocatechuic acid,5)、没食子酸(gallic acid,6)、鞣花酸(ellagic acid,7)、3,3'-二甲氧基-鞣花酸(3,3'-di-O-methyl ellagic acid,8)、1-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖(1-O-galloyl-B-D-glucose,9)、黏酸二甲酯-2-O-没食子酰基(mucic acid dimethyl ester-2-O-gallate,10)、咖啡酸乙酯(ethyl caffeate,11)、黏酸二甲酯(mucic acid dime-thyl ester,12).结论:化合物10和12首次从该属植物中分离得到,化合物2、3、7、8和9首次从扛板归中分离得到.
作者：汪琼；陈立；田瑛；李彬；孙启鸿；董俊兴 刊期： 2009年第03期
目的:构建红色糖多孢菌突变菌株,生物合成酮内酯类抗生素.方法:利用反向PCR技术,扩增红色糖多孢菌KR6酮还原酶基因突变DNA片段SP(KR6酶中Gly1141 Ala1142替换成ScrPro),克隆于pWHM3上构建染色体同源重组质粒pWHM3-SP.通过PEG介导原生质体转化,将pWHM3-SP导入红色糖多孢菌中.经染色体二次重组后,筛选出1株红色糖多孢菌KR6酶突变菌株A226-SP.结果:DNA序列分析表明,A226-SP染色体上编码KR6酶中Gly1141Ala1142序列GGTGCG突变成SerPro编码序列AGCCCT.HPLC-HRMS分析证实A226-SP菌株合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B(DOEB),同时检测到其中间产物C18H34O6,但没有发现红霉素产物.结论:Gly1141 Ala1142位于KR6酮还原酶的重要功能位点,红色糖多孢菌A226-SP突变体可以合成酮内酯类化合物.
作者：刘道琴；黄训端；孔小卫；马树梅；刘惠；张部昌 刊期： 2009年第03期
真核生物翻译起始因子5A(eIF5A)是公认的维持细胞活性必不可少的翻译起始因子,其序列从古细菌到哺乳动物都是高度保守的.eIF5A是唯一的发生依赖多胺精胺翻译后修饰[生物学上称为羟腐胺赖氨酸作用(hy-pusination)过程]的真核生物细胞内蛋白质.本文主要着眼于eIF5A的结构特征和生物学功能,综述了eIF5A和hypusination在各种组织中控制细胞循环和凋亡的过程及eIF5A新的研究结果.
作者：袁金桥；颜贤忠 刊期： 2009年第03期
目的:获得重组人半乳糖凝集素-1(galectin-1)蛋白,并分析其生物学活性.方法:PCR方法扩增目的基因,将其克隆到原核表达载体pET21a(+),获得重组质粒pET-galectin;将其转化至表达宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导,获得目的蛋白的表达;采用Ni-NTA亲和层析柱对目的蛋白进行纯化,用红细胞凝集试验分析其生物学活性.结果与结论:成功构建重组原核表达质粒pET-galectin,目的蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,经Ni-NTA亲和层析柱一步纯化后,得到的蛋白纯度可达80%以上.红细胞凝集试验结果表明获得的重组蛋白具有较好的生物学活性,可进一步用于半乳糖凝集素-1功能研究.
作者：易绍琼；任声权；于婷；张晓艳；刘树玲；陈薇 刊期： 2009年第03期
目的:分析C基因及其编码蛋白突变对登革病毒RNA复制的影响.方法:利用融合PCR方法在登革病毒复制子中引入C基因相应部位的缺失突变,将复制子RNA转染细胞后,利用报告基因活性分析、间接免疫荧光及实时定量PCR等方法分析其复制水平.结果:获得了含有不同α螺旋缺失突变的C基因的复制子质粒,并发现△α1复制子复制水平明显下降.结论:登革病毒C蛋白α1螺旋或其编码序列对病毒RNA复制具有重要作用.
作者：刘忠钰；于学东；赵慧；刘然；尉雁；李晓峰；邓永强；姜涛；于曼；秦成峰；秦鄂德 刊期： 2009年第03期
目的:为探索乙酰胆碱酯酶(AChE)活性中心狭隙与其水解底物高效性相适应的可能机制,研究胆碱类底物对AChE四聚体(AChE G4)亚分子结构的影响.方法:冰浴超声法制备磷脂膜,囊泡融合技术将AChE重组到以云母为支撑的磷脂膜上,原子力显微技术(AFM)观察AChE分别与乙酰胆碱(ACh)和丁酰胆碱(BCh)作用前后的亚分子结构.结果:单个AChE G4颗粒是表面光滑、中间突出的椭圆形结构,亚基排列紧密,平均大小为[(89±7)nm×(68±9)nm×(6±3)nm,长×宽×高,n=100].与底物反应后,可清楚地看到亚基排列松散,酶蛋白是由4个亚基组成,亚基之间形成一个无阻碍空间,这与X线晶体学和分子动力学研究结果相一致.与S-ACh反应后,单个AChE G4颗粒平均大小为[(104±7)nm×(91±5)nm×(8±2)nm,长×宽×高,n=100],无阻碍空间大小为[(60±5)nm×(51±9)nm,长×宽,n=30];与S-BCh反应后,酶的大小为[(100±5)nm×(87±6)nm×(7±3)nm,长×宽×高,n=100],无阻碍空间大小为[(38±4)nm×(35±2)nm,长×宽,n=30].结论:胆碱类底物对AChE G4亚分子结构具有明显影响,酶亚分子结构变化与其水解底物的高效性是一致的.
作者：姜爽；张英鸽；张飒 刊期： 2009年第03期
目的:研究CPNE5对TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性的影响,并探讨其作用机制.方法:用10 ng/mlTNF-α处理转染了pcDNA3.1或pcDNA3.1-CPNE5的HEK293细胞,用双荧光素酶报告基因实验检测不同转染组NF-κB的转录激活活性;Western印迹和细胞免疫荧光技术检测CPNE5表达上调对NF-κB入核的影响;凝胶阻滞实验研究CPNE5表达上调对NF-κB DNA结合能力的影响.结果:CPNE5可以显著抑制TNF-α对NF-κB的转录激活活性(P<0.0001);CPNE5不影响TNF-α诱导的NF-κB(P65)入核;CPEN5过表达降低了TNF-α诱导的NF-κB与DNA结合的能力.结论:CPNE5通过抑制NF-κB的DNA结合活性抑制TNF-α诱导的NF-κB转录激活活性.
作者：吴彦瑞；王晓文；靳雁斌；丁学峰；刘淑红；吴燕；范文红；范明 刊期： 2009年第03期
目的:改进β-苯甲酰氨基类肿瘤坏死因子转化酶(TACE)抑制剂重要中间体4-[(2-甲基-4-喹啉基)-甲氧基]苯甲酸的合成工艺.方法:以2-甲基喹啉为起始原料,经过羟甲基化、氯代、威廉姆森成醚反应、水解得到目标化合物.结果与讨论:目标化合物和中间体的结构经1HNMR和FAB-MS确证.该路线优化了合成工艺,收率高,原料易得,成本低廉,操作简单,总收率约为47.5%.
作者：孙宇；李行舟；钟武；李松 刊期： 2009年第03期
胸部肿瘤患者在接受放射治疗过程中,常发生放射性肺损伤(放射性间质性肺炎和肺纤维化),严重影响其生活质量.因此,放射性肺损伤的发病机制及防治研究对于肿瘤的放射治疗具有重要意义.本文就其研究进展进行综述,以期为进一步研究提供理论基础.
作者：王芳；侯春梅；袁顺宗；张伟京 刊期： 2009年第03期
目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定.方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因.将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E. coli B121感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化.通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析.结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达.表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性.
作者：刘昊；史晶；蔡昆；高翔；侯晓军；王慧 刊期： 2009年第03期
目的:纯化细胞色素氧化酶P450(CYP4F3A)以及测定酶促反应动力学参数.方法:应用免疫共沉淀技术纯化CYP4F3A酶,通过LTB4降解实验测定其米氏常数.结果:纯化的CYP4F3A浓度为0.12 mg/ml,Km=2.643±0.106 μmol/L,Vmax=24.97±1.163 nmol/(min·nmol).结论:获得从哺乳动物细胞中纯化的CYP4F3A具有较强LTB4降解活性,并通过测定其酶动力学常数,为研究CYP4F3A活性调节机制打下基础.
作者：蔡瑜；刘萱；杨尧；李平；曹诚；张部昌 刊期： 2009年第03期
目的:调查、评价我军炮兵部队膳食情况.方法:选择南京、北京、沈阳、广州四军区炮兵部队伙食单位作为调查对象,采用称重法进行为期5 d的膳食调查,同时采用军人食物定量、军人营养素供给量标准和膳食平衡指数法评价膳食结构存在的问题.结果:调查单位膳食结构不尽合理,谷类、豆类及其制品、蔬菜、水产品等摄入不足较普遍;猪肉、食用油的消费较高;奶类、蛋类、牛羊肉等摄入量则参差不齐.人均能量和大部分营养素摄入量基本达到军人营养素供给量规定水平;脂肪产能过高,达到34%～46%;钙摄入不足较突出;维生素A、维生素B1、维生素B2缺乏比较普遍.结论:我军膳食结构存在一定问题,应用膳食平衡指数评价军人膳食结构简便易行,但需要针对部队实际情况进行完善.
作者：吴健全；郭长江；韦京豫；杨继军；高蔚娜；蒲玲玲 刊期： 2009年第03期
目的:研究Pten基因及其介导的PI3K/AKT信号通路在骨代谢平衡过程中的作用并建立相应的骨代谢疾病小鼠动物模型.方法:在利用Cre-LoxP系统获得成骨细胞特异性Pten基因敲除小鼠的基础上,利用X线摄影术、骨密度分析及组织学染色方法分析Pten基因敲除小鼠较野生型小鼠的骨量变化情况,进一步提取2种基因型小鼠骨组织RNA,通过实时定量PCR分析成骨细胞的标志基因如胶原Ⅰ、碱性磷酸酶、骨钙素等标志分子的表达情况.结果:获得了成骨细胞特异性Pten基因敲除小鼠,Pten基因敲除后小鼠的体型较野生型小鼠没有明显改变,但X线片、骨密度及组织学分析均表明Pten敲除小鼠骨量明显增加,发生了与人类骨质硬化症相类似的表型:此外,实时定量PCR的分析结果显示,成骨细胞的标志基因如胶原Ⅰ、碱性磷酸酶、骨钙素等标志分子的表达都有明显的升高.结论:成功地建立了Pten基因敲除骨质硬化症小鼠动物模型.
作者：毛峰峰；翁土军；程萱；杨冠；李六金；杨晓 刊期： 2009年第03期
目的:探讨高功率脉冲微波(hish power pulse microwave,HPPM)辐射对小鼠脑、肝、脾氧化应激效应及巨噬细胞氧耗的影响.方法:雄性昆明小鼠30只,随机分为3组(每组10只):正常对照组(A),辐射1次组(B),辐射3次组(C).采用S波段HPPM,平均表面功率10 mW/cm2;照射时间2 min/次,隔日辐射1次.末次辐射完毕,立即处死小鼠,取脑、肝、脾、心、肾脏制作匀浆.采用比色法测定脏器匀浆的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量.收集大鼠腹腔巨噬细胞,调整浓度为1×107/ml,将细胞悬液分为两组(n=12):对照组和HPPM组.微波辐射持续时间15 min.结果:HPPM作用后,与辐射1次组和对照组比,辐射3次组脑组织SOD活性、GSH含量明显降低.有统计学差异,而CAT、GSH-px活性变化不明显.脾组织GSH含量在HPPM作用后均明显降低,其中HPPM辐射1次组降低程度较HPPM辐射3次组更为明显,脾组织SOD活性变化不明显.肝组织SOD活性、GSH含量在HPPM作用后均呈辐射剂量依赖性降低,CAT活性变化不明显.而心、肾组织在辐照前后各指标均无显著性变化.巨噬细胞在HPPM作用15 min后,氧耗明显增加.结论:高功率脉冲微波辐射可以引起小鼠脑、肝、睥等脏器产生氧化应激的改变,体外巨噬细胞氧耗增加.
作者：丛建波；张清俊；王长振；先宏；吴可 刊期： 2009年第03期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
