钟芝茵；周喆；邢雅玲；赵海豹；马永洁；王晓伟；王升启
目的:构建一种新型的具有更低基础表达的Tet-on调控系统,以用于毒性蛋白及+RNA病毒的真核细胞调控合成.方法:对目前常用的Tet-on系统中的四环素调控蛋白(rtTA、tTS)的表达途径进行改进,使得在非诱导条件下调控蛋白的基础诱导活性进一步降低.结果:相比原有的Tet-on系统,新构建的Tet-on系统非诱导状态下的基础表达值下降了一半以上.结论:成功构建基础表达值更低的Tet-on调控系统,为真核调控表达毒性蛋白或合成+RNA病毒打下了基础.
作者：胡伟；李玉霞；凌焱；毛赟赟；宋兰；高原；段海清；周围；张京生；陈惠鹏；梁龙 刊期： 2008年第04期
目的:研究五酯胶囊对茚地那韦(IDV)药代动力学影响.方法:实验动物为比格犬,本实验采用自身对照法,6只比格犬按单给硫酸茚地那韦片和连续给五酯胶囊后再给硫酸茚地那韦片分为单用茚地那韦组和五酯胶囊组.给药(硫酸茚地那韦片)前禁食不禁水12 h,给药前及给药后按设定时间点于比格犬前肢静脉采血800 μl,分离出血浆,血浆经乙酸乙酯萃取2次,合并上清,氮气吹干,复溶,使用LC/MS/MS法检测比格犬血浆中茚地那韦浓度.结果:IDV在比格犬血浆中的药物浓度线性范围为20～10 000 μg/L,线性关系良好(r>0.99),低定量限为20 μg/L.比较单用硫酸茚地那韦片和连续给药五酯胶囊后给药硫酸茚地那韦片的药代动力学参数,连续给药五酯胶囊7 d后给药茚地那韦片时茚地那韦的AUC0-t及Cmax均有显著性提高.结论:本方法灵敏度高,特异性好,适用于血浆样品检测.结果显示五酯胶囊会影响茚地那韦在比格犬体内药代动力学过程.
作者：赵兰姣；付守廷；张春玲；刘桃云；王晓霞；窦桂芳；孟志云 刊期： 2008年第04期
目的:研究人格拉利素功能肽段一级结构与活性的关系.方法:依据确定的生物学活性,在人格拉利素功能肽段CM19的基础上,利用抗菌肽的特点及已知的抗菌肽构效关系研究结果对CM19进行氨基酸取代、缺失及随机排列设计合成5条肽段,通过试管法和平板法检测相应肽段的抗菌活性.结果:CM19氨基端第一个半胱氨酸在发挥抗菌作用中是必需的;阳性电荷数的增加或者分布不合适不改善抗菌活性;氨基酸的排列顺序明显降低抗菌活性;CM19羧基端7肽无明显的抗菌作用.CM12具有广谱抗菌作用,不但对非耐药菌而且对耐药菌具有同样的作用.结论:氨基酸的取代、缺失及排列对人格拉利素肽段的抗菌功能具有明显的影响.
作者：赵光；沙继斌；尹丽莉；杨超文；郭兆彪；杨瑞馥；赵士富 刊期： 2008年第04期
目的:构建本室新分离的登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,为深入研究登革病毒致病机制奠定基础.方法:根据登革1型病毒广州06株基因组全序列中单一酶切位点设计特异引物,分别扩增并克隆5个病毒亚基因组cDNA片段,将其逐一拼接连入pWSK 29低拷贝质粒载体,获得病毒全长cDNA克隆,并将其体外转录为RNA,再转染细胞获得恢复病毒.进一步通过RT-PCR扩增病毒5′和3′非编码区序列和特异性间接免疫荧光对其恢复病毒进行鉴定.结果和结论:构建获得登革1型病毒广州06株基因组全长感染性cDNA克隆,其恢复病毒与野生型病毒具有相似的生物学特性.
作者：刘然；韩剑峰；陈水平；于曼；姜涛；邓永强；秦成峰；秦鄂德 刊期： 2008年第04期
目的:构建IL-1ra-Fcε融合基因的真核表达载体pCI-neo-IL-1ra- Fcε,研究其在体外的表达情况.方法:利用RT-PCR方法从哮喘大鼠脾细胞中克隆大鼠IgE 恒定区cDNA,同时从载体pBV220-IL-1ra中克隆IL-1ra基因.利用重叠延伸PCR技术合成了IL-1ra-Fcε融合基因.将其克隆入真核表达载体pCI-neo,以脂质体法转染293T细胞,G418筛选稳定表达细胞株.利用Western印迹、RT-PCR验证融合蛋白的表达,并在EL-4/CTLL-2细胞中对融合蛋白活性进行了验证.结果和结论:成功构建了pCI-neo-IL-1ra- Fcε表达载体,Western 印迹、RT-PCR验证融合蛋白在293T细胞得到表达,并获得了稳定表达IL-1ra- Fcε的细胞株.表达的融合蛋白在体外具有拮抗IL-1的功能.为过敏性哮喘基因治疗奠定了基础.
作者：刘中成；王园园；邹民吉；王嘉玺；徐东刚 刊期： 2008年第04期
目的:为实验方法鉴定细菌sRNA靶标和研究sRNA功能提供生物信息学支持.方法:首先以实验证实的132个sRNA与靶标相互作用数据为训练集,其中包含46个阳性数据和86个阴性数据;其次,以实验证实的22个阳性数据和随机生成的1 700个阴性数据为测试集;后以RNA二级结构谱等特征为变量,运用支持向量机(SVM)方法构建sRNA靶标预测数学模型.结果和结论:构建的模型对训练集的敏感性和特异性均为100%,对测试集的敏感性和特异性分别为72.73%和80.65%.所构建的数学模型为实验发现sRNA靶标提供了生物信息学支持.
作者：赵雅琳；李华；侯妍妍；查磊；曹源；王立贵；应晓敏；李伍举 刊期： 2008年第04期
将抗原与抗体的高特异性免疫反应与高灵敏度的化学发光检测技术相结合而形成新的免疫分析技术,即为化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)[1].CLIA通常分为闪光型(flash type)和辉光型(glow type)两种.
作者：沙栩正；王仁芝；邹应全 刊期： 2008年第04期
目的:对华北地区29条军事坑道内32个平均储存20年左右的水库储水进行真菌学及其污染原因分析,为采取预防措施提供依据.方法:用沉降法对坑道空气真菌浓度进行检测.用萨布罗琼脂培养基以倾注法检测储水真菌浓度.对部分检出的空气和储水真菌菌株根据菌落形态特征及显微镜下生长结构进行鉴定.结果:①有散在或连成片状真菌斑膜的占37.5%,有大面积片状真菌斑膜的占25.0%,水面全部被真菌斑膜覆盖的占9.4%.②29条坑道空气真菌浓度平均2 532 CFU/m3.32个水库平均真菌浓度819.9 CFU/ml.③对1 734株空气真菌菌株及1 125株储水真菌菌株鉴定,均以青霉属(45%及46.8%)、曲霉属(12.9%及13.7%)、链格孢属(8.9%及6.8%)为优势菌.结论:储水真菌污染较普遍,污染原因主要是未采取消毒措施,空气中飘浮的真菌通过孔门及缝隙进入水库沉降水面造成污染.如果采取消毒措施,切断传播途径,严格管理制度,可以防止真菌污染,确保储水的卫生质量.
作者：张永良；侯小平；关宏坤；郑铁钢；郑世英 刊期： 2008年第04期
目的:研究3′-二甲氨基亚甲基葛根素在大鼠体内的组织分布与排泄情况,了解药物在动物体内变化过程,为临床试验提供药代依据.方法:大鼠尾静脉注射3′-二甲氨基亚甲基葛根素(生理盐水溶液,剂量50 mg/kg),采用机械匀浆处理组织.排泄实验是在不同时间点收集全部粪、尿、胆汁样品.用经验证的LC/MS/MS联用测定各组织、粪、尿、胆汁中3′-二甲氨基亚甲基葛根素的含量.结果:大鼠给药后,12 d内从粪中收集到给药剂量的(13.6±2.8)%,尿液中回收到(65.4±11.5)%,粪尿合计(79.0±14.3)%,5 d内胆汁中收集到(14.8±4.4)%.3′-二甲氨基亚甲基葛根素在大鼠各组织中均检测到,大肠内容物、小肠内容物和肝中浓度较高.结论:3′-二甲氨基亚甲基葛根素广泛分布于大鼠各组织中,主要以原形经尿和粪便排泄.
作者：高瑛；孟志云；朱晓霞；孙文种；吴卓娜；路金才；窦桂芳 刊期： 2008年第04期
目的:用氧化燃烧炉样品预处理技术研究[3H]-乙酰紫草素在小鼠体内的组织分布、排泄和血中分布.方法:小鼠单次灌服[3H]-乙酰紫草素后,收集组织、血、尿和粪样,氧化燃烧炉法进行样品预处理,液闪计数仪测定放射性水平.结果:小鼠单次灌胃给[3H]-乙酰紫草素(120 mg/kg,2.96×107 Bq/kg)后,放射性主要分布在胃、肠,其次是胆囊、肝、肾、肺,脑和脊髓分布较少.271 h后从粪中收集到给药剂量的(68.5 ± 3.3)%,尿中收集到(17.6± 3.1)%,粪尿合计(86.1 ± 5.5)%.另对乙酰紫草素在血中存在形式、血细胞和血浆中的分配比例以及与血浆蛋白结合的形式、结合率进行了探索性研究.结论:乙酰紫草素吸收较差;组织分布广泛;排泄较完全;1 h血样中没有检测到原形;血浆、血细胞药物含量分配比约为4∶ 1;人血浆蛋白结合率高;血浆蛋白的结合为共价和疏水作用两种形式并存.
作者：孙东晓；田慧芳；孟志云；周佳雨；丁建刚；吴广瑞；窦桂芳 刊期： 2008年第04期
目的:探讨甲状腺转移癌的超声表现及诊断价值.方法:对10例经超声引导下穿刺活检证实为甲状腺转移癌的超声图像特点进行分析.结果:本组甲状腺转移癌超声图像表现为甲状腺内多结节型、孤立结节型、弥漫钙化灶型、回声不均型,7例合并钙化灶,3例无钙化灶,9例病变区血流信号异常增多.结论:甲状腺转移癌超声表现多样,无特征性,确诊需依靠穿刺活检.
作者：白玲；杨涛；唐英；毛京宁；汪伟；陈伟 刊期： 2008年第04期
生物分子调控网络的研究从分子之间相互作用的角度揭示复杂的生命现象,是基因组学、蛋白组学研究的重要内容,也是生物信息学研究的前沿.本文从数据库平台、调控网络特性、构建方法及应用和展望等方面综述了生物分子调控网络研究进展.
作者：高宏生；伍瑞昌；王运斗；王世鑫 刊期： 2008年第04期
肉毒神经毒素(BoNT)是迄今为止所发现的生物毒素中毒性强的物质,能引起人和动物以松弛性麻痹为主症的肉毒中毒,同时也是重要的生物毒素战剂和生物恐怖剂之一.研究和建立BoNT检测与鉴定方法具有十分重要的军事和医学意义.本文综述了近年BoNT检测与鉴定方法的研究进展.
作者：康琳；王景林 刊期： 2008年第04期
呼肠病毒属于呼肠病毒科正呼肠病毒属,是无包膜、有双层蛋白衣壳、分节段的双股RNA病毒,被广泛用于感染动物模型,研究无包膜病毒的致病机制.本文综述了呼肠病毒感染实验动物的致病性研究进展.
作者：左庭婷；端青 刊期： 2008年第04期
核磷蛋白(nucleophosmin,NPM)是一个具有多种功能的重要蛋白,定位于核仁,可在胞核与胞浆之间快速穿梭.NPM基因在多种人类肿瘤中过表达,因此被公认为肿瘤标志物和癌基因.后来研究发现NPM也具有抑制肿瘤的功能,它的缺失、突变甚至重排与多种肿瘤的发生密切相关.这表明NPM的作用及其机制非常复杂,可能通过多种机制调控肿瘤的发生.
作者：徐诚望；杨晓明 刊期： 2008年第04期
目的:利用AdEasy系统构建miR-195的腺病毒表达载体,为研究miR-195的功能提供条件.方法:将miRNA-195前体序列从已构建的pcDNA-miR-195载体中克隆进穿梭载体pAdTrack-CMV,通过与骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中高效同源重组,获得完整的重组腺病毒质粒.利用HEK293细胞包装并扩增重组腺病毒Ad-195.Ad-195感染肺癌细胞A549后,利用miRNA的定量RT-PCR技术检测Ad-195在细胞中表达miR-195情况.随后荧光素酶报告基因实验证明,Ad-195表达的miR-195能够作用于BCL2基因上预测的miR-195靶位点.结果:实时定量PCR检测显示,Ad-195感染肺癌细胞A549后,miR-195表达水平有显著的上调.结论:miR-195的腺病毒表达载体构建成功,能够用于在细胞内过表达具有生物学功能的miR-195.
作者：张浩明；付汉江；铁轶；朱捷；邢瑞云；汪成富；郑晓飞 刊期： 2008年第04期
曲妥珠单抗是靶向人表皮生长因子2(c-erbB-2,HER2)的单克隆抗体,治疗HER2阳性乳腺癌疗效确切,然而其客观反应率并不高,而且多数患者在1年内出现获得性耐药.目前的基础研究初步解释了曲妥珠单抗耐药的分子机制,一些新的治疗策略为曲妥珠单抗耐药患者带来新的希望.本文综述了近年来有关曲妥珠单抗的耐药机制及其应对策略的研究进展.
作者：李晓玲；徐建明；宋三泰 刊期： 2008年第04期
目的:研究复方丹参方中水溶性单体原儿茶醛对血管内皮细胞炎症反应的药理作用及机制.方法:使用脂多糖(LPS,0.5 μg/ml)刺激人脐静脉内皮细胞,造成炎症模型,用原儿茶醛(0.25 mmol/L,0.5 mmol/L,1.0 mmol/L)加以干预;用RT-PCR和ELISA方法检测细胞间黏附分子-1和纤连蛋白的表达水平以及单核细胞趋化蛋白-1的分泌量;用Western印迹方法观察了丝裂原激活的信号转导通路中ERK1/2、JNK和p38的活化情况.结果:原儿茶醛呈剂量依赖性地降低LPS导致的细胞间黏附分子-1及纤连蛋白的高表达,减少了单核细胞趋化蛋白-1的过度分泌,并能抑制ERK1/2、JNK和p38分子的活化.结论:原儿茶醛能通过抑制NF-κB-MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症反应.
作者：邢雅玲；叶志华；钟芝茵；马永洁；周喆；王升启 刊期： 2008年第04期
目的:制备紫杉醇长循环肝靶向脂质体(pac-GLs),并对制备的脂质体的性质进行评价.方法:用薄膜水化-高压均质法制备紫杉醇长循环肝靶向脂质体,纳米粒度测定仪测定其粒径,高效液相法测定其包封率.结果:制备的紫杉醇长循环肝靶向脂质体中的药物浓度为(1.00±0.10)mg/ml,包封率为(94±3)%.结论:本研究制备的紫杉醇长循环肝靶向脂质体包封率较高,质量可控,重复性好.
作者：杨瑞；梅丹宇；杨媛；梅兴国 刊期： 2008年第04期
目的:构建超大容量天然噬菌体抗体库.方法:从正常人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞(>180份),提取RNA,用RT-PCR分别扩增抗体可变区轻重链基因(VH和VL),通过重叠PCR技术将VH和VL连接为单链抗体ScFv形式,克隆插入到pDF噬菌粒载体,转化XL1-Blue细菌得到ScFv初级抗体库,并以高感染复数(MOI≥100)感染Cre+菌株BS1365,利用Cre/LoxP位点特异性重组原理,使VH和VL基因定向同源重组匹配,随后以低感染复数(MOI<1)感染XL1-Blue,获取次级工作库.分别用5种不同抗原进行筛选,所获阳性克隆送测序以获取抗体基因.结果:抗体V区基因得到有效扩增,初级库库容3.6×107,工作库容1.8×1011,5种不同抗原筛选均得到特异性结合噬菌体抗体;测序结果表明,所获取抗体涵盖了不同的基因亚群,进一步证明抗体库具有良好的多样性.结论:经Cre/Loxp定位重组系统成功构建了超大容量天然噬菌体抗体库,初步尝试对5种抗原进行筛选均获成功,提示该抗体库多样性较好,可用于制备人源抗体.
作者：王辉；黄英；王琰；沈倍奋 刊期： 2008年第04期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
