高明；王海平；王燕宁；周勇；王全立
网格技术使网络上各种资源的整合成为可能,这是继Internet之后又一次重大的科技进步.本文阐明了网格的概念和分类,介绍了新的网格体系结构OGSA及其支撑技术,以及网格在生命科学领域中的应用,并对网格技术在生命科学研究中的应用进行了探讨.
作者：李琳；赵东升；周士波 刊期： 2004年第06期
目的:制备包含肉豆蔻酸异丙酯(IPM)的紫杉醇长效缓释微球,并对制备工艺及体内外缓释效果进行评价.方法:使用改良的单乳溶剂蒸发法制备紫杉醇长效缓释微球.通过分析粒径分布、突释、体外释放及体内的抑瘤效果等指标,对其进行评价.结果:所得微球平均粒径小于10 μm,外观圆整,具有良好的体外释放曲线.含有30%IPM的微球体内抑瘤效果明显.结论:使用改良的单乳溶剂蒸发法制备的微球,可以达到缓释效果,体外释放4周的微球对小鼠体内的固体肿瘤有良好的抑制效果.
作者：王辰允；刘燕；曲恒燕；张舜欣；梅兴国 刊期： 2004年第06期
α-半乳糖苷酶(EC3.2.1.22)属外切糖苷酶类,可特异性水解多糖、糖脂、糖蛋白中糖链末端的α-半乳糖苷键. α-半乳糖苷酶被广泛应用于农产品加工、人B→O血型改造、异种移植、清除异种抗原以及治疗遗传性疾病法布莱病等[1～3].然而,用生化提取技术无法获得高产量、高纯度的酶.利用DNA重组技术,制备可表达α-半乳糖苷酶的工程菌株是解决这一问题的有效方法[4].为了满足临床和科研工作对α-半乳糖苷酶的需求,本室已构建了高效表达α-半乳糖苷酶的工程菌pPIC9K-Gal/GS115[5,6].为了研究该菌株的稳定性,按照国家SDA对基因重组产品的要求,我们对该菌株在传代过程中的生长特性、遗传和表达稳定性等进行了鉴定.
作者：高红伟；徐莉娟；田曙光；李素波；王颖丽；宫锋；章扬培 刊期： 2004年第06期
目的:检测B→O血型改造制备通用型血过程中的残留工具酶-α-半乳糖苷酶.方法:血清学反应确定α-半乳糖苷酶残酶量安全值,用SDS-PAGE银染法和酶活性检测法测定通用型血中微量残留工具酶量.结果:确定了α-半乳糖苷酶残酶量安全值为10 ng/ml,建立了检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法.确定经过6～7次洗涤后,残留酶量可达到安全水平.结论:本研究为B→O血型改造制备的通用型血进一步的临床应用奠定了基础.
作者：王颖丽；由英；高红伟；宫锋；章扬培 刊期： 2004年第06期
目的:检测Cre重组酶在软骨组织特异性Cre重组酶转基因小鼠(Col2al-Cre)表达的时空分布.方法:将Col2a1-Cre转基因小鼠和ROSA26报告小鼠杂交,得到的双转基因小鼠中表达Cre重组酶的部位将表达LacZ基因.通过LacZ染色可直接观察不同发育阶段转基因小鼠中Cre重组酶表达的组织特异性.结果:LacZ染色结果显示,骨骼发育早期间充质细胞聚集时Cre重组酶已经在表达Ⅱ型胶原的软骨细胞中行使功能.胚胎期13.5 d小鼠的前肢、后肢、脊椎和梅克尔软骨部位LacZ染色阳性.在新生小鼠可见由软骨内成骨形成的骨骼内软骨组织LacZ染色阳性.从新生小鼠的胫骨显微切片可以看到,生长板各区软骨细胞、软骨膜细胞和紧邻生长板干骺端的成骨细胞LacZ染色阳性.结论:我们研制的Col2a1-Cre转基因小鼠中Cre重组酶在软骨内成骨过程中所有的软骨细胞中表达,是一种理想的研制软骨组织特异性剔除基因小鼠的工具.
作者：张继帅；谭晓红；王友亮；程萱；高翔；杨晓 刊期： 2004年第06期
肝脏在遭受部分切除或毒素损伤后,具有极强的再生能力,其本质在于残余肝细胞重新进行有丝分裂增殖.再生过程中肝细胞增殖受到多种血源性因子和胞内信号分子的调节和控制.研究人员通过建立动物肝脏再生模型和肝细胞原代培养模型,逐渐发现多种效应因子.鉴于肝脏再生机制的复杂性,新兴的蛋白质组学技术成为研究肝脏再生的首选技术.
作者：孙言伟；姜颖；贺福初 刊期： 2004年第06期
目的:建立CHO/dhfr-细胞的定点整合和表达系统.方法:利用常规分子生物学方法,构建了一个新的高效筛选表达载体,该载体含有一个由FRT(flp recombination target)位点、报告基因(LacZ)及筛选基因(zeocin)三片段构成的融合基因,而且该基因的表达受一个弱化的SV40启动子的控制.借助于随机整合及高效筛选,实现FRT位点在CHO/dhfr-细胞基因组中转录活跃区的整合,然后利用该位点介导的特异性重组实现了目的基因(单链抗体-尿激酶融合基因)的定点整合和有效表达,而且随后通过DHFR/MTX系统的加压扩增,以提高单链抗体-尿激酶融合基因在宿主细胞中的表达水平.结果与结论:获得了能够实现外源基因在基因组中定点整合和有效表达的CHO/dhfr-细胞系,并利用该细胞系实现了单链抗体-尿激酶融合基因的高表达,表达量达到5 μg/(106细胞·24 h).
作者：刘志刚；林建波；许凌峰；徐桂清；俞炜源 刊期： 2004年第06期
目的:研究PI3K信号通路对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的调控作用.方法:首先通过Western印迹试验检测到PI3K信号通路参与成骨细胞分化的调控.应用PI3K激酶的特异性抑制剂LY294002药物阻断PI3K信号通路的活化,通过碱性磷酸酶(ALP)和von Kossa染色观察成骨前体细胞MC3T3-E1分化的改变.结果:Western印迹试验显示,成骨细胞分化过程中PI3K信号通路明显活化.阻断该信号通路的活化显著抑制成骨细胞碱性磷酸酶的活性,同时降低成骨细胞体外形成骨结节结构的能力.结论:PI3K信号通路参与了成骨细胞分化的调控,而这种调控作用是成骨细胞分化所必需的.
作者：陈小三；于晓妉；王生余；张明伟；毛宁 刊期： 2004年第06期
目的: 研究BALB/c小鼠I-Ad αβ链和恒定链Ii分子p41在COS-7细胞中的定位,探索抗原提呈的分子规律.方法:构建了带有红色荧光蛋白标签的I-Ad αβ链真核双顺反子表达载体pRed-IRES-I-Ad和带有绿色荧光蛋白标签的恒定链真核表达载体pEGFP-Ii,使用Lipofectamine 2000转染COS-7细胞,用激光共聚焦显微镜观察2个外源蛋白在细胞中的共定位. 结果:I-Ad αβ分子在COS-7细胞中能够形成聚集状态,并且和Ii链共同定位于细胞的内膜系统.结论:小鼠mIip41能够和I-Ad αβ分子在COS-7细胞中形成聚集体结构,mIip41分子的导向肽并不具有选择性导向作用,聚集体向细胞膜表面的移动很可能是通过胞吐的方式进行.
作者：高明；王海平；王燕宁；周勇；王全立 刊期： 2004年第06期
YopM蛋白是致病性耶尔森菌的毒力因子之一,本文介绍了其结构、定位及功能等方面的研究进展.YopM蛋白是一个亮氨酸丰富区(LRR)蛋白质家族的成员,其晶体结构提示它可作为蛋白质骨架与其他蛋白质相互作用.早期研究认为YopM可结合α-凝血酶,抑制凝血酶引起的血小板聚集.后来发现YopM-CyaA融合蛋白可通过Ⅲ型分泌系统定向进入真核细胞.免疫荧光定位显示YopM不但可进入宿主细胞质,而且通过小泡相关通路进入细胞核.在哺乳动物细胞内,YopM与2种靶物质PRK2和RSK1形成一种新的蛋白复合体,并激活PRK2和RSK1的激酶活性.YopM在耶尔森菌感染中的功能和致病机制有待进一步研究.
作者：邱茂锋；杨瑞馥 刊期： 2004年第06期
目的:将基于连接反应的可环化探针(circularizable oligonucleotide probe, C-probe)技术用于基因芯片对单碱基突变的检测.方法:可环化探针是一种检测核酸分子中单碱基突变的线性寡核苷酸分子,中间部分是通用引物结合区(约40 mer),5′端与3′端是两段与待检测的DNA分子中靶序列互补的目标序列识别区(各约20 mer).与靶序列互补结合后,可环化探针的两个末端在空间靠近并在DNA连接酶的作用下连接形成环状分子,利用荧光分子标记的通用引物对连接产物进行PCR扩增,再利用基因芯片检测荧光标记的PCR产物,从而确定所检测的核苷酸位点的性质.本实验以检测CYP3A4基因外显子5中14 026位点的单核苷酸多态性为例,优化了连接反应、荧光标记通用引物的PCR扩增以及探针杂交检测等条件,并用该方法对合成模板和人基因组DNA标本进行检测.结果:以合成的寡核苷酸序列为模板进行10倍系列稀释,确定可环化探针的检测灵敏度,PCR产物的凝胶电泳结果表明,检测灵敏度达到103拷贝;可环化探针对合成的野生型和突变型模板具有良好的区分效果.用该方法检测人基因组DNA标本,芯片检测结果与测序结果符合,证实了该方法的可行性.结论:连接反应是具特异性的酶促反应,将其与基因芯片技术结合用于单碱基突变检测,有助于简化荧光标记过程,提高检测结果的准确性.
作者：文思远；张敏丽；陈苏红；王升启 刊期： 2004年第06期
目的:观察纳米活性炭(activated carbon nano-particles, ACNP)对丝裂霉素C(mitomycin C, MMC)的吸附与缓释性能.方法:用紫外分光光度法检测ACNP对MMC的吸附性能,并与市售微米粒子活性炭(activated carbon micro-particles, ACMP)比较.反复更换溶剂,观察ACNP吸附MMC的缓释性能.结果:ACNP对MMC的饱和吸附量(Xm)为132.45 mg/g,ACMP的Xm为117.51 mg/g.每132.45 mg MMC加入1 g ACNP,溶液中94.0%的MMC吸附在ACNP上.每次更换溶剂,均释放出一定量MMC.结论:ACNP对MMC的吸附性能优于ACMP,同时具有良好的缓释性能.
作者：曲秋莲；张英鸽；孙岚 刊期： 2004年第06期
目的:观察不同恶性级别脑胶质瘤中端粒酶活性及P-gp糖蛋白表达的相关性.方法:采集手术中切除的不同级别脑新鲜胶质瘤标本26例,脑外伤内减压脑组织8例,用TRAP法及免疫荧光染色流式细胞仪法检测不同级别脑胶质瘤端粒酶活性以及P-gp糖蛋白表达. 结果:端粒酶活性阳性表达率为88.5%,P-gp糖蛋白阳性表达率为65.4%;端粒酶活性阳性病例中,P-gp糖蛋白阳性表达率69.6%(16/23),端粒酶活性阴性病例中P-gp糖蛋白阳性表达率33.3%(1/3),两者差异具有显著性(P<0.05).对照组脑组织端粒酶活性及P-gp糖蛋白阳性表达均为阴性. 结论:脑胶质瘤中,端粒酶活性和P-gp糖蛋白阳性表达具有相关性,可将二者结合起来评估脑胶质瘤恶性程度和预测化疗效果.
作者：王建奇；卢洪流；韩燕华；柯以铨；徐如祥 刊期： 2004年第06期
目的:建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法:利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论:制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.
作者：江涛；王玉平；韩春卉；宫慧之；计融 刊期： 2004年第06期
离子淌度质谱是离子淌度分离与质谱联用的一种新型二维质谱分析技术,离子淌度分离原理是基于离子在飘移管中与缓冲气体碰撞时的碰撞截面不同,离子可按大小和形状进行分离.经过30多年的发展,离子淌度质谱已配有多种新的离子源及质量分析器,理论研究也日渐成熟,并在蛋白质、多肽及复杂化合物异构体分析方面越发显示出独特的优势,正在发展成为一种新型的重要分析工具.
作者：王海龙；魏开华 刊期： 2004年第06期
微生物法医学的概念是因生物恐怖出现而提出,并在已有学科基础上发展起来的,其内容包括传统的微生物学、微生物基因组学、系统发生学和信息学,并汲取了人类DNA法医学和法医信息学的经验.微生物法医学的核心是检测和鉴定生物犯罪中使用的微生物并追踪其来源,提供快速、准确的生物恐怖情报,从而更好地完成预测,做出反应,有效地预防和阻止生物犯罪.
作者：刘海洪；杨瑞馥 刊期： 2004年第06期
融合技术是指纳米技术、生物技术、信息技术和认知科学4种科学领域的有机结合.它被认为是下世纪的主要研究领域,将对人类的发展产生积极重大的影响.融合技术将在治疗、增强技能和进化设计等领域取得巨大的成果,并使人类社会产生革命性的变化.
作者：王海涛；吴乐山；毛军文 刊期： 2004年第06期
目的:在酵母系统中实现A型肉毒毒素(BoNTa)Hc基因的可溶性分泌表达.方法:将Hc基因克隆入表达载体pPIC9K,用SacⅠ将重组质粒线性化,电转化巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115细胞,筛选G418抗性阳性整合子,进行Mut+表型株甲醇快速利用诱导.结果:经过体外高拷贝整合子的筛选和诱导表达条件的优化,毒素Hc在pH 6.5培养基 BMMY中实现稳定的分泌表达,终筛选到蛋白表达量占上清蛋白10%的分泌高表达株.免疫印迹和酶联免疫检测结果显示,重组BoNTa Hc可以识别特异抗肉毒马血清并具良好的特异结合活性,可以诱导小鼠产生特异性抗体.结论:酵母系统来源的具有良好免疫原性的重组BoNTa保护性抗原可以作为有效的候选重组疫苗分子.
作者：王慧；荫俊 刊期： 2004年第06期
目的:研究亚甲蓝/光化学灭活病毒技术对人血浆中抗体活性的影响.方法:将不同浓度的亚甲蓝分别加入含有特种抗体的血浆中,经JY-I型血浆病毒灭活仪处理后取样,用ELISA等方法检测血浆中的抗体活性.结果: 在光照度40 000 lx条件下,经1 μmol/L亚甲蓝作用30 min,人血浆中的抗体活性未见明显改变,但随着亚甲蓝浓度的升高和光照时间的延长,血浆中的抗体活性略有下降.结论: 本研究的亚甲蓝/光化学灭活病毒技术对血浆中的抗体活性影响较小,可用该技术对康复期的SARS患者血浆进行病毒灭活处理,保证该血浆临床应用的安全性.
作者：马平；周锡鹏；张艳宇；吕丽萍；姜升阳；许金波 刊期： 2004年第06期
目的:对高效表达的重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白进行包涵体的分离、变性与复性以及纯化.方法:对表达菌体进行超声破碎、洗涤、氧化还原法变性及复性,经离子交换层析.结果:工程菌HB101/pE01T的表达产物是以包涵体形式存在,菌体的破碎以高渗蔗糖溶液进行预处理后,再超声破碎效果好;包涵体的洗涤则先用Triton-X-100洗2次,再用8 mol/L尿素洗涤一次效果更优;佳变性条件为在7 mol/L盐酸胍中加入 0.065 mmol/L的DTT和0.2 mol/L的盐酸精氨酸;佳复性条件为在10℃复性保持24 h,蛋白浓度保持在30～ 80 μg/ml,并需加入0.2 mol/L盐酸精氨酸;利用谷胱甘肽的氧化还原法,当氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽的浓度比在 2∶ 1时所获得的活性成分得率高;利用强弱离子交换结合的方法能获得纯度为95%的目的蛋白,所得融合蛋白可与IL-6及PEA抗体相结合并能特异性地杀伤高表达IL-6R的人多发性骨髓瘤细胞.结论:本研究获得重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白包涵体的分离、变性与复性条件和一条能获得大量高纯度该融合蛋白的纯化路线.
作者：崔建武；奚永志；刘楠；梁飞；郭斯启；孙玉英 刊期： 2004年第06期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
