安文华；钟玉绪；应翔宇
离子淌度质谱是离子淌度分离与质谱联用的一种新型二维质谱分析技术,离子淌度分离原理是基于离子在飘移管中与缓冲气体碰撞时的碰撞截面不同,离子可按大小和形状进行分离.经过30多年的发展,离子淌度质谱已配有多种新的离子源及质量分析器,理论研究也日渐成熟,并在蛋白质、多肽及复杂化合物异构体分析方面越发显示出独特的优势,正在发展成为一种新型的重要分析工具.
作者：王海龙；魏开华 刊期： 2004年第06期
目的:观察纳米活性炭(activated carbon nano-particles, ACNP)对丝裂霉素C(mitomycin C, MMC)的吸附与缓释性能.方法:用紫外分光光度法检测ACNP对MMC的吸附性能,并与市售微米粒子活性炭(activated carbon micro-particles, ACMP)比较.反复更换溶剂,观察ACNP吸附MMC的缓释性能.结果:ACNP对MMC的饱和吸附量(Xm)为132.45 mg/g,ACMP的Xm为117.51 mg/g.每132.45 mg MMC加入1 g ACNP,溶液中94.0%的MMC吸附在ACNP上.每次更换溶剂,均释放出一定量MMC.结论:ACNP对MMC的吸附性能优于ACMP,同时具有良好的缓释性能.
作者：曲秋莲；张英鸽；孙岚 刊期： 2004年第06期
肝脏在遭受部分切除或毒素损伤后,具有极强的再生能力,其本质在于残余肝细胞重新进行有丝分裂增殖.再生过程中肝细胞增殖受到多种血源性因子和胞内信号分子的调节和控制.研究人员通过建立动物肝脏再生模型和肝细胞原代培养模型,逐渐发现多种效应因子.鉴于肝脏再生机制的复杂性,新兴的蛋白质组学技术成为研究肝脏再生的首选技术.
作者：孙言伟；姜颖；贺福初 刊期： 2004年第06期
目的:研究胃星星秘方对实验性胃溃疡的防治作用.方法:采用吲哚美辛(消炎痛)致胃溃疡、幽门结扎型胃溃疡、应激性胃溃疡、醋酸性胃溃疡等大鼠胃溃疡模型,观察胃星星秘方对胃溃疡防治作用的影响,并与胃苏颗粒、三九胃泰、法莫替丁的疗效进行比较.结果:胃星星秘方对大鼠吲哚美辛性胃溃疡和幽门结扎型胃溃疡预防效果好,与盐水对照组有显著差别(P＜0.01),效果优于或相当于对照药,溃疡抑制率＞60%,对大鼠醋酸性胃溃疡和应激性胃溃疡基本无效.结论:胃星星秘方对动物实验性胃溃疡具有一定的预防作用,药效与胃苏颗粒、三九胃泰相当.
作者：孙建慧；柳用绍；宫泽辉 刊期： 2004年第06期
目的:检测Cre重组酶在软骨组织特异性Cre重组酶转基因小鼠(Col2al-Cre)表达的时空分布.方法:将Col2a1-Cre转基因小鼠和ROSA26报告小鼠杂交,得到的双转基因小鼠中表达Cre重组酶的部位将表达LacZ基因.通过LacZ染色可直接观察不同发育阶段转基因小鼠中Cre重组酶表达的组织特异性.结果:LacZ染色结果显示,骨骼发育早期间充质细胞聚集时Cre重组酶已经在表达Ⅱ型胶原的软骨细胞中行使功能.胚胎期13.5 d小鼠的前肢、后肢、脊椎和梅克尔软骨部位LacZ染色阳性.在新生小鼠可见由软骨内成骨形成的骨骼内软骨组织LacZ染色阳性.从新生小鼠的胫骨显微切片可以看到,生长板各区软骨细胞、软骨膜细胞和紧邻生长板干骺端的成骨细胞LacZ染色阳性.结论:我们研制的Col2a1-Cre转基因小鼠中Cre重组酶在软骨内成骨过程中所有的软骨细胞中表达,是一种理想的研制软骨组织特异性剔除基因小鼠的工具.
作者：张继帅；谭晓红；王友亮；程萱；高翔；杨晓 刊期： 2004年第06期
微生物法医学的概念是因生物恐怖出现而提出,并在已有学科基础上发展起来的,其内容包括传统的微生物学、微生物基因组学、系统发生学和信息学,并汲取了人类DNA法医学和法医信息学的经验.微生物法医学的核心是检测和鉴定生物犯罪中使用的微生物并追踪其来源,提供快速、准确的生物恐怖情报,从而更好地完成预测,做出反应,有效地预防和阻止生物犯罪.
作者：刘海洪；杨瑞馥 刊期： 2004年第06期
目的:研究特异识别已分化PC12细胞的ssDNA适体的二级结构及截短前后的适体与已分化PC12细胞的结合能力.方法:利用RNA structure 3.5软件对截短前后的适体的空间结构进行模建,体外合成这些截短适体,利用流式细胞术和荧光显微镜研究适体与已分化PC12细胞的结合能力.结果:单茎环结构是适体与已分化PC12细胞结合的二级结构;截短后的适体与已分化PC12细胞的结合能力明显大于与未分化PC12细胞结合能力;AP17-38与已分化PC12细胞结合的荧光强度明显大于与未分化PC12细胞结合的荧光强度;截短前后的适体均能够特异识别混合物中已分化PC12细胞.结论:截短后的适体能够保留适体的空间结构,而且与已分化PC12细胞的亲合力不会降低.
作者：王成龙；邵宁生；张明；杨光；张达矜；丁红梅；王会信 刊期： 2004年第06期
目的:在酵母系统中实现A型肉毒毒素(BoNTa)Hc基因的可溶性分泌表达.方法:将Hc基因克隆入表达载体pPIC9K,用SacⅠ将重组质粒线性化,电转化巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115细胞,筛选G418抗性阳性整合子,进行Mut+表型株甲醇快速利用诱导.结果:经过体外高拷贝整合子的筛选和诱导表达条件的优化,毒素Hc在pH 6.5培养基 BMMY中实现稳定的分泌表达,终筛选到蛋白表达量占上清蛋白10%的分泌高表达株.免疫印迹和酶联免疫检测结果显示,重组BoNTa Hc可以识别特异抗肉毒马血清并具良好的特异结合活性,可以诱导小鼠产生特异性抗体.结论:酵母系统来源的具有良好免疫原性的重组BoNTa保护性抗原可以作为有效的候选重组疫苗分子.
作者：王慧；荫俊 刊期： 2004年第06期
网格技术使网络上各种资源的整合成为可能,这是继Internet之后又一次重大的科技进步.本文阐明了网格的概念和分类,介绍了新的网格体系结构OGSA及其支撑技术,以及网格在生命科学领域中的应用,并对网格技术在生命科学研究中的应用进行了探讨.
作者：李琳；赵东升；周士波 刊期： 2004年第06期
目的:研究亚甲蓝/光化学灭活病毒技术对人血浆中抗体活性的影响.方法:将不同浓度的亚甲蓝分别加入含有特种抗体的血浆中,经JY-I型血浆病毒灭活仪处理后取样,用ELISA等方法检测血浆中的抗体活性.结果: 在光照度40 000 lx条件下,经1 μmol/L亚甲蓝作用30 min,人血浆中的抗体活性未见明显改变,但随着亚甲蓝浓度的升高和光照时间的延长,血浆中的抗体活性略有下降.结论: 本研究的亚甲蓝/光化学灭活病毒技术对血浆中的抗体活性影响较小,可用该技术对康复期的SARS患者血浆进行病毒灭活处理,保证该血浆临床应用的安全性.
作者：马平；周锡鹏；张艳宇；吕丽萍；姜升阳；许金波 刊期： 2004年第06期
磷酸苯丙哌林(benproperine phosphate)是一种具有中枢与末梢双重抑制性作用的镇咳药[1].本研究以羟丙基甲基纤维素和乙基纤维素为骨架材料,将部分磷酸苯丙哌林制成缓释层颗粒,维持血药浓度平稳持久.另外,为了服药后能迅速发挥药效,达到有效血药浓度,将一部分药品制成速释颗粒,再将缓释颗粒和速释颗粒压制成双层片,从而达到起效迅速且药效维持时间长的目的.
作者：付桂英；李三鸣；温明铃；郭华；高远征 刊期： 2004年第06期
本文介绍了近年来芥子气(sulfur mustard,HD)中毒抗毒药物的研究进展,阐述了HD清除剂、聚二磷酸腺苷聚合酶抑制剂、钙调节剂、抗炎药物、精氨酸类似物及其他相关药物的作用机制和应用概况.这些研究进展对芥子气抗毒药物研究有着积极的意义.
作者：安文华；钟玉绪；应翔宇 刊期： 2004年第06期
目的:为了检测细胞转染了带绿色荧光蛋白(GFP)标记的融合基因后细胞周期的改变,以研究目的基因与细胞周期的关系,建立GFP/DNA双标记流式细胞技术.方法:①以小鼠脾细胞为模型,以不同浓度的多聚甲醛(PFA)预固定细胞不同时间,再换用70%乙醇固定细胞24 h以上,观察不同固定方法对细胞周期检测的影响;②以Ad-EGFP感染的Hep-2细胞为模型,观察不同固定方法对细胞周期、GFP阳性细胞检出率和GFP的荧光强度的影响;③用佳固定方法观察转染p21/WAF1/CIP1-EGFP融合基因的293细胞的细胞周期,以验证方法的可靠性.结果:0.5%PFA预固定60 min,再换用70%乙醇固定细胞,不影响细胞周期检测,而且GFP荧光强度和转染效率的检测佳.以此方法固定细胞,GFP/DNA双标记流式细胞技术检测了转染p21/WAF1/CIP1-EGFP融合基因的293细胞的细胞周期,可观察到p21表达阳性的细胞发生了G0/G1期阻滞.结论:优化的细胞固定方法可以有效地阻止GFP从细胞内流出,建立的GFP/NDA双标记流式细胞技术可以用于研究带GFP标签的基因表达蛋白与细胞周期的关系.
作者：董波；饶亚岚；鲁茁壮；王澜；从玉文；陈肖华；张军权；高荣莲；王治东；毛秉智 刊期： 2004年第06期
YopM蛋白是致病性耶尔森菌的毒力因子之一,本文介绍了其结构、定位及功能等方面的研究进展.YopM蛋白是一个亮氨酸丰富区(LRR)蛋白质家族的成员,其晶体结构提示它可作为蛋白质骨架与其他蛋白质相互作用.早期研究认为YopM可结合α-凝血酶,抑制凝血酶引起的血小板聚集.后来发现YopM-CyaA融合蛋白可通过Ⅲ型分泌系统定向进入真核细胞.免疫荧光定位显示YopM不但可进入宿主细胞质,而且通过小泡相关通路进入细胞核.在哺乳动物细胞内,YopM与2种靶物质PRK2和RSK1形成一种新的蛋白复合体,并激活PRK2和RSK1的激酶活性.YopM在耶尔森菌感染中的功能和致病机制有待进一步研究.
作者：邱茂锋；杨瑞馥 刊期： 2004年第06期
目的:观察不同恶性级别脑胶质瘤中端粒酶活性及P-gp糖蛋白表达的相关性.方法:采集手术中切除的不同级别脑新鲜胶质瘤标本26例,脑外伤内减压脑组织8例,用TRAP法及免疫荧光染色流式细胞仪法检测不同级别脑胶质瘤端粒酶活性以及P-gp糖蛋白表达. 结果:端粒酶活性阳性表达率为88.5%,P-gp糖蛋白阳性表达率为65.4%;端粒酶活性阳性病例中,P-gp糖蛋白阳性表达率69.6%(16/23),端粒酶活性阴性病例中P-gp糖蛋白阳性表达率33.3%(1/3),两者差异具有显著性(P<0.05).对照组脑组织端粒酶活性及P-gp糖蛋白阳性表达均为阴性. 结论:脑胶质瘤中,端粒酶活性和P-gp糖蛋白阳性表达具有相关性,可将二者结合起来评估脑胶质瘤恶性程度和预测化疗效果.
作者：王建奇；卢洪流；韩燕华；柯以铨；徐如祥 刊期： 2004年第06期
目的:进一步了解乳癌易感基因BRCA1与FHL2相互作用对FHL2转录激活功能的影响,为揭示BRCA1在肿瘤发生发展中的作用提供依据.方法:将BRCA1 C端缺失突变体BRCA1(△1443～1863 aa)和BRCA1 (△908～1863 aa)按正确读框插入到pCR3载体中,并在293T细胞中表达.利用GAL4荧光素酶报告基因检测野生型BRCA1以及肿瘤易感突变体BRCA1(P1749R),BRCA1(Y1853insA),BRCA1(△1443～1863 aa)和BRCA1(△908～1863 aa)对FHL2转录激活活性的调节作用.结果:野生型BRCA1能增强FHL2转录激活活性,且具有剂量依赖性.而4种肿瘤易感突变体增强FHL2转录激活活性的能力明显减弱.结论: BRCA1与FHL2相互作用可能对基因转录调节以及肿瘤发生、发展中起着重要作用.
作者：严景华；叶棋浓；方言；朱建华；吕秋军；黄翠芬 刊期： 2004年第06期
目的:将基于连接反应的可环化探针(circularizable oligonucleotide probe, C-probe)技术用于基因芯片对单碱基突变的检测.方法:可环化探针是一种检测核酸分子中单碱基突变的线性寡核苷酸分子,中间部分是通用引物结合区(约40 mer),5′端与3′端是两段与待检测的DNA分子中靶序列互补的目标序列识别区(各约20 mer).与靶序列互补结合后,可环化探针的两个末端在空间靠近并在DNA连接酶的作用下连接形成环状分子,利用荧光分子标记的通用引物对连接产物进行PCR扩增,再利用基因芯片检测荧光标记的PCR产物,从而确定所检测的核苷酸位点的性质.本实验以检测CYP3A4基因外显子5中14 026位点的单核苷酸多态性为例,优化了连接反应、荧光标记通用引物的PCR扩增以及探针杂交检测等条件,并用该方法对合成模板和人基因组DNA标本进行检测.结果:以合成的寡核苷酸序列为模板进行10倍系列稀释,确定可环化探针的检测灵敏度,PCR产物的凝胶电泳结果表明,检测灵敏度达到103拷贝;可环化探针对合成的野生型和突变型模板具有良好的区分效果.用该方法检测人基因组DNA标本,芯片检测结果与测序结果符合,证实了该方法的可行性.结论:连接反应是具特异性的酶促反应,将其与基因芯片技术结合用于单碱基突变检测,有助于简化荧光标记过程,提高检测结果的准确性.
作者：文思远；张敏丽；陈苏红；王升启 刊期： 2004年第06期
融合技术是指纳米技术、生物技术、信息技术和认知科学4种科学领域的有机结合.它被认为是下世纪的主要研究领域,将对人类的发展产生积极重大的影响.融合技术将在治疗、增强技能和进化设计等领域取得巨大的成果,并使人类社会产生革命性的变化.
作者：王海涛；吴乐山；毛军文 刊期： 2004年第06期
α-半乳糖苷酶(EC3.2.1.22)属外切糖苷酶类,可特异性水解多糖、糖脂、糖蛋白中糖链末端的α-半乳糖苷键. α-半乳糖苷酶被广泛应用于农产品加工、人B→O血型改造、异种移植、清除异种抗原以及治疗遗传性疾病法布莱病等[1～3].然而,用生化提取技术无法获得高产量、高纯度的酶.利用DNA重组技术,制备可表达α-半乳糖苷酶的工程菌株是解决这一问题的有效方法[4].为了满足临床和科研工作对α-半乳糖苷酶的需求,本室已构建了高效表达α-半乳糖苷酶的工程菌pPIC9K-Gal/GS115[5,6].为了研究该菌株的稳定性,按照国家SDA对基因重组产品的要求,我们对该菌株在传代过程中的生长特性、遗传和表达稳定性等进行了鉴定.
作者：高红伟；徐莉娟；田曙光；李素波；王颖丽；宫锋；章扬培 刊期： 2004年第06期
目的:对高效表达的重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白进行包涵体的分离、变性与复性以及纯化.方法:对表达菌体进行超声破碎、洗涤、氧化还原法变性及复性,经离子交换层析.结果:工程菌HB101/pE01T的表达产物是以包涵体形式存在,菌体的破碎以高渗蔗糖溶液进行预处理后,再超声破碎效果好;包涵体的洗涤则先用Triton-X-100洗2次,再用8 mol/L尿素洗涤一次效果更优;佳变性条件为在7 mol/L盐酸胍中加入 0.065 mmol/L的DTT和0.2 mol/L的盐酸精氨酸;佳复性条件为在10℃复性保持24 h,蛋白浓度保持在30～ 80 μg/ml,并需加入0.2 mol/L盐酸精氨酸;利用谷胱甘肽的氧化还原法,当氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽的浓度比在 2∶ 1时所获得的活性成分得率高;利用强弱离子交换结合的方法能获得纯度为95%的目的蛋白,所得融合蛋白可与IL-6及PEA抗体相结合并能特异性地杀伤高表达IL-6R的人多发性骨髓瘤细胞.结论:本研究获得重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白包涵体的分离、变性与复性条件和一条能获得大量高纯度该融合蛋白的纯化路线.
作者：崔建武；奚永志；刘楠；梁飞；郭斯启；孙玉英 刊期： 2004年第06期
军事医学杂志
主管:军事医学科学院
主办：军事医学科学院
