学术投稿

人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化

贾维茜;赵玉鸣;葛立宏

关键词:牙髓干细胞, 人重组转化生长因子β1, 成牙本质细胞, 分化
摘要:目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factor β1, rhTGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用.方法: 分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1 μg/L、6 μg/L、10 μg/L的rhTGF-β1,CCK-8(cell counting kit-8)法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)光密度值,二喹啉甲酸(bicinchoninic acid, BCA)蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标.茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rhTGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用.结果:牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6 μg/L rhTGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6 μg/L rhTGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6 μg/L rhTGF-β1组总蛋白含量为(2 775.46±83.54) mg/L,对照组为(1 432.20±110.83) mg/L (P<0.05);ALP相对光密度值,6 μg/L rhTGF-β1组较对照组提高了6倍.茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6 μg/L rhTGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05, P<0.05.结论: 6 μg/L rhTGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用.
北京大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 跨膜蛋白CMTM2在人睾丸和精子中的表达及定位

    目的:通过研究跨膜蛋白CMTM2在睾丸和精子中的表达来探讨CMTM2蛋白在男性生殖系统中潜在的功能.方法:Western blot方法检测CMTM2在人睾丸及精子中的表达,免疫组织化学及组织免疫荧光方法检测CMTM2在人睾丸组织中的定位,TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位.结果:CMTM2在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中CMTM2定位于各级生精细胞的细胞膜,睾丸组织冰冻切片免疫荧光检测的结果与免疫组织化学一致,进一步证实CMTM2存在于睾丸各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近.以TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位,在顶体反应前后,CMTM2在人精子的定位及表达量未发生改变.结论:CMTM2在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和精卵融合过程中发挥作用,是男性不育研究的靶基因.CMTM2在男性生殖系统中的表达呈现细胞与生精区域的特异性,提示其高度参与生精功能,但目前针对CMTM2在男性生殖系统与精子生成过程中的作用仍未明确,今后可以采用体外受精-胚胎移植等技术进一步研究CMTM2的作用.

    作者:张晓威;兰轲;杨文博;李清;赵永平;殷华奇;Kite Brandes;白文俊;徐涛 刊期: 2017年第04期

  • 同期同胞人类白细胞抗原全相合与亲缘间单倍体相合外周血造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病的对比观察

    慢性移植物抗宿主病(chronic graft versus host disease, cGVHD)是异基因造血干细胞移植(allogenic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)后的晚期主要并发症,也是严重影响患者生活质量甚至导致患者移植后疾病非复发死亡的主要原因之一.随着同胞全相合、非血缘全相合、亲缘间单倍体相合allo-HSCT,尤其是异基因外周血造血干细胞移植(allogeneic peripheral blood stem cell transplantation, allo-PBSCT)在临床中的应用,以及非清髓移植后或复发后供者淋巴细胞输注,使得cGVHD的发生率呈上升趋势.

    作者:高峰;冯术青;李晓宇;胡永超;薛慧;姚艳红 刊期: 2017年第04期

  • 北京大学第三医院张幼怡团队研究应激性心脏损伤取得新进展

    2017年5月26日,北京大学第三医院心血管内科张幼怡研究员团队在心血管领域顶级期刊European Heart Journal在线发表新研究成果(肖晗助理研究员与李昊博士为该文章的共同第一作者).此研究围绕交感神经系统过度激活所致心脏损伤机制展开,是从临床问题出发、在基础研究上取得的重要进展.

    作者:肖晗 刊期: 2017年第04期

  • 3D打印间接粘接托槽精度

    目的:基于数字化正畸诊断设计流程进行间接粘接转移托盘模型的设计和3D打印,对关键性的托槽打印精度进行检验,以期对数字化正畸的临床应用有所帮助.方法: 从2014年至2015年于北京大学口腔医院正畸科就诊的错牙合畸形患者中选取14例为研究对象,其中拔牙8例,不拔牙6例.所有患者牙周洁治后进行口内牙列扫描和锥形束CT(cone-beam computed tomography,CBCT)拍摄,所得STL数据与DICOM数据在自编软件中进行数据分割融合和配准、数字化矫治设计和计算机软件自动排牙、托槽虚拟定位、错牙合模型坐标还原,终输出3D打印模型数据用于间接粘接转移定位托盘的制作.3D打印输出模型,经过后处理由水枪及超声震荡去除周围支撑材料,使用数字游标卡尺对所有样本牙颌模型上的左侧上下颌托槽及颊面管进行长度和宽度的测量,检验测量结果.测量值比较采用独立样本t检验,与托槽及颊面管设计尺寸进行比较.结果: 在19个测量分析项目中有13个项目的测量均值与检验标准值间的差异有统计学意义,差异范围在0.04~0.17 mm,且除左下第二前磨牙的托槽长度外均大于检验值.结论: 虽然托槽的宽度和颊面管的长度和宽度上大多稍大于检验值,但这不一定对临床上间接粘接转移托盘的制作造成影响,0.04~0.17 mm的差异是否会影响托槽实际的固位和定位有待进一步的研究证实.

    作者:张达;王林川;周彦恒;刘晓默;李晶 刊期: 2017年第04期

  • 生物活性玻璃用于缓解活髓牙全冠预备后敏感的效果评价

    目的:评价45S5型生物活性玻璃粉末缓解活髓牙预备后敏感的临床疗效.方法:按照临床试验纳入标准和排除标准招募受试者,纳入活髓牙需行全冠修复患者18例,共31颗牙齿.采用自身前后对照、单盲的研究方法,先后涂布安慰剂(氧化锌粉末)和45S5型生物活性玻璃脱敏剂于受试牙上,并在基线时和应用安慰剂及生物活性玻璃粉末后,分别采用压力敏感探针法和冷空气喷吹法测量牙齿敏感程度,同时记录患者牙齿敏感的Tactile值、患者主观视觉模拟评分量表(visual analogue scale,VAS)数值和术者客观Schiff评分.结果:基线时和应用安慰剂及生物活性玻璃后测量到的Tactile值分别为(29.03±9.44) g、(29.68±9.48) g和(44.19±11.19) g,冷空气刺激VAS值分别为(50.79±22.92) mm、(46.63±22.06) mm和(30.90±20.30) mm,术者Schiff评分分别为2.13±0.67、1.97±0.66和1.42±0.56.统计分析结果表明,应用生物活性玻璃粉末后的Tactile值、冷空气刺激VAS值、术者Schiff评分与基线时和应用安慰剂后差异均有统计学意义(P<0.05),而基线时和应用安慰剂后Tactile值、冷空气刺激VAS值、术者Schiff评分差异无统计学意义(P>0.05),Schiff评分的差异与性别、牙位、是否二次备牙相关.结论:45S5型生物活性玻璃粉末对于活髓牙预备后的牙齿敏感有缓解作用.

    作者:李皓;刘玉华;罗志强 刊期: 2017年第04期

  • 人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化

    目的:研究人重组转化生长因子β1(recombinant human transforming growth factor β1, rhTGF-β1)对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用.方法: 分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1 μg/L、6 μg/L、10 μg/L的rhTGF-β1,CCK-8(cell counting kit-8)法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)光密度值,二喹啉甲酸(bicinchoninic acid, BCA)蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标.茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rhTGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用.结果:牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6 μg/L rhTGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6 μg/L rhTGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6 μg/L rhTGF-β1组总蛋白含量为(2 775.46±83.54) mg/L,对照组为(1 432.20±110.83) mg/L (P<0.05);ALP相对光密度值,6 μg/L rhTGF-β1组较对照组提高了6倍.茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6 μg/L rhTGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05, P<0.05.结论: 6 μg/L rhTGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用.

    作者:贾维茜;赵玉鸣;葛立宏 刊期: 2017年第04期

  • 肾蒂旋转法辅助治疗后腹腔镜下腹侧肾肿瘤的肾部分切除术

    目的:为降低后腹腔镜入路的腹侧肾部分切除术手术难度,减少手术风险,总结归纳并发展后腹腔镜入路肾部分切除术的肾蒂旋转法及相关技术.方法:总结归纳并发展一整套针对腹侧肾门区肾肿瘤的肾蒂旋转法操作技术,包括肾蒂旋转、双层缝合、早期开放动脉等.该技术有助于实施后腹腔入路的肾部分切除术,手术效果的评价由手术时间、热缺血时间、术中出血量、手术切缘、术后肾功能、手术并发症等组成.本研究回顾性分析中南大学湘雅医院28例腹侧肾肿瘤患者资料,其中15例为较复杂的肾门区肿瘤.结果:平均肿瘤大小为(3.8±0.5) cm,平均R.E.N.A.L评分为8(范围7~9).手术中平均热缺血时间(23.8±4.7) min,缝合时间(26.2±6.5) min,估计失血量(139.1±54.0) mL,手术时间(124.1±12.1) min,中位住院天数为4 d.7例患者出现Clavien Dindo Ⅰ~Ⅱ级并发症,所有患者病理检查均示切缘阴性,中位随访7个月无局部复发或远处转移.结论:对于腹侧肾肿瘤,尤其是位于肾门区的肾肿瘤,利用肾蒂旋转法行后腹腔镜下肾部分切除术是安全有效的;短时间随访结果较乐观,但需长时间随访.

    作者:梁银华;祖雄兵;程序;刘龙飞 刊期: 2017年第04期

  • 小鼠不同部位体内前列腺癌骨转移模型的建立及方法改进

    目的:构建并改进前列腺癌(prostate cancer,PCa)体内股骨及脊柱转移动物模型,为不同部位的PCa骨转移的诊治及骨应力改变的研究提供工具.方法: 将不同浓度的PCa细胞(RM-1)注射到小鼠(C57BL/6)股骨骨髓腔和腰椎内,观察记录小鼠活动变化、成瘤情况,测定瘤体大小及记录存活时间.取模型的双侧股骨组织,进行影像学检查后测算灰度值(骨密度), 并行组织病理学检查,确定建模情况及成瘤类型.结果:各细胞浓度梯度小鼠均成瘤,各股骨转移模型的肿瘤发生时间、生长速度同组间无差别(P>0.05),病理学检测结果证实所有股骨骨髓腔和腰椎内PCa骨转移模型构建成功,且较低RM-1细胞浓度构建的PCa骨转移动物模型生存时间较前期构建的动物模型明显延长(约1倍,至少2周).结论: 成功用同一PCa细胞株构建了不同部位(四肢骨和中轴骨)的PCa骨转移体内动物模型,经股骨骨髓腔穿刺注射肿瘤细胞建立PCa骨转移动物模型成瘤率高,肿瘤生长迅速,且可稳定复制,为进一步PCa骨转移的骨应力改变及防治的研究提供平台.

    作者:毕永祥;肖民辉;张宁南;李晓云;毛晓鹏;张科;章卓睿;赵良运 刊期: 2017年第04期

  • 经皮肾镜碎石术治疗儿童上尿路结石的进展、安全性和有效性的分析

    目的:探讨经皮肾镜碎石术(percutaneous nephrolithotomy,PNL)治疗儿童上尿路结石的进展、安全性和有效性.方法:回顾性分析自2005年1月至2016年12月北京大学人民医院泌尿外科应用微通道及标准通道的PNL治疗儿童上尿路结石患者77例的临床资料,共87侧上尿路结石,其中肾结石69侧,上段输尿管结石6侧,肾合并上段输尿管结石12侧;单发结石35侧,多发结石43侧,鹿角型结石9侧,统计并分析患儿基本情况、术前及术后临床指标并复习相关文献,研究目前儿童PNL的进展、疗效,并利用Clavien分级系统研究PNL并发症.结果:77例患儿共行PNL 手术87例次.单通道PNL 81例次(93.1%),2通道5例次(5.7%),3通道1例次(1.2%).平均手术时间(77.0±29.8) min.一期手术清石率:单发结石为100%,多发结石与鹿角型结石为71.2%,5例(5.8%) 再次接受后续治疗清除残余结石,终清石率88.5%.儿童PNL的并发症主要是发热,术后中等发热(38~39 ℃)16例次(18.4%),高热(39~40 ℃)5例次(5.7%),无败血症、感染中毒性休克等感染严重并发症.术后血红蛋白下降(10.3±16.1) g/L,术后血肌酐升高(7.0±13.3) μmol/L.术后残石堵塞输尿管接受输尿管镜碎石手术解除梗阻1例次(1.2%).无毗邻脏器损伤,无腹膜后尿外渗病例.根据手术并发症Clavien分级系统评估87例次儿童PNL手术的术后并发症,总体并发症22例次(25.3%), 其中Ⅰ级并发症14例次(16.1%),Ⅱ级并发症7例次(8.0%),Ⅲ级并发症1例次(1.2%),无Ⅳ级、Ⅴ级并发症病例.结论:PNL治疗儿童上尿路结石是有效的,根据Clavien分级系统分析PNL并发症均为轻度并发症,PNL治疗儿童上尿路结石是安全的.

    作者:于路平;徐涛 刊期: 2017年第04期

  • 晚期结直肠癌患者一线应用FOLFOX方案化疗引起中性粒细胞减少的预后价值

    目的:探讨一线应用奥沙利铂联合氟尿嘧啶、亚叶酸钙(FOLFOX)方案化疗的晚期结直肠癌患者中性粒细胞减少(chemotherapy-induced neutropenia,CIN)与预后的关系.方法: 回顾性分析一线应用FOLFOX方案化疗的晚期结直肠癌患者158例,根据患者化疗后3周期内低中性粒细胞数与化疗前比较分为CIN程度大的组(较化疗前降低大于等于1.0×109)和程度小的组(较化疗前CIN降低小于1.0×109)以及无明显变化组,分析其与预后的关系.结果:CIN降低程度是患者预后指标无进展生存(progression free survival, PFS)和总生存(overall survival, OS)的独立影响因素.根据COX多因素回归分析,CIN程度大的组(large,L)较无明显变化组(absent,A)死亡风险降低31%(HR=0.687,95% CI: 0.381~0.812,P=0.016);CIN程度小的组(slight,S)较无明显变化组死亡风险降低18%(HR=0.817,95% CI: 0.527~0.939,P=0.027).无明显变化组 (A)患者的中位OS为12.9个月,CIN程度少的组(S)患者的中位OS为17.3个月,CIN程度大的组(L)患者的中位OS为20.8个月(S vs.L, P=0.018;L vs.A, P=0.009;S vs.A, P=0.011).结论:CIN程度是晚期结直肠癌化疗判断预后的独立影响因素,监测并根据CIN程度及时调整化疗药物剂量,或许有助于改善预后.

    作者:陈杨;王艳荣;石燕;戴广海 刊期: 2017年第04期

  • 完全性雄激素不敏感综合征合并膀胱瘘1例报道及文献回顾

    雄激素不敏感综合征(androgen insensitivity syndrome,AIS)是一种罕见遗传病.由于雄激素受体(androgen receptor,AR)基因的突变导致其对雄激素产生抵抗及不应答,男性生殖系统出现不同程度异常发育并呈现出女性表型.手术切除隐睾及不同类型成形术可纠正畸形,激素替代治疗也是术后康复的关键.本文报告1例43岁患者,社会性别为女性,初因反复腹水及间断腹痛原因待查收入消化内科.体格检查、超声、核型分析、激素水平等检验检查符合完全性AIS.转入泌尿外科行隐睾切除术,术中发现膀胱顶壁紧邻脐中韧带与膀胱交界处有一瘘道,遂明确腹水原因,予切除并送病理.病理结果提示睾丸组织Sertoli细胞腺瘤及Leydig细胞巢状增生,膀胱瘘口周围组织非典型增生.出院后予雌激素替代治疗.睾丸切除术后雄激素合成障碍导致促性腺激素、雌孕激素水平发生变化,后续雌激素替代治疗联合心理辅导可稳定激素水平并提高生活质量.患者有可疑家族史,系谱图分析为X连锁隐性遗传,但尚不能明确.对于膀胱顶壁瘘的成因本文提出3种假说:直接手术损伤、癌症局部复发以及脐尿管异常发育,但脐尿管发育异常与本病是否存在相关性仍需进一步研究.

    作者:花克涵;杨磊;张晓威;白文俊;李清;徐涛 刊期: 2017年第04期

  • 一种基于曲率连续算法的冠、根三维数据融合方法

    目的:探索一种光学扫描牙冠三维模型和锥形束CT(cone beam CT,CBCT)重建牙根三维模型的数据融合方法,实现不同来源冠、根模型的自然过渡融合.方法: 选取临床口腔正畸下颌牙列轻度拥挤患者1例,应用Mimics 17.0软件对患者CBCT数据重建带有牙根的牙列三维模型,并在Geomagic Stuido 2012软件中与患者高精度解剖形态的光学扫描牙列模型进行模型配准.对配准后的三维模型进行精确冠、龈边界线提取,边界线根向偏置及投影,冠、根边界线生成及模型剪裁等操作,并通过曲率连续算法实现不同来源冠、根模型的自然过渡缝合,完成冠、根三维融合模型的构建.结果:本研究基于商业化的软件平台,初步实现了针对光学扫描三维牙冠数据与CBCT三维牙根数据的曲率移形过渡融合方法,应用该方法完成了正畸临床10例牙列轻度拥挤患者冠、根三维融合模型的构建,融合模型由高年资医师主观打分评价,平均满意度8.6分(0~10分),初步验证了该方法的可行性和有效性.结论: 本研究的冠、根三维数据融合方法可获得逼近真实生理解剖形态的完整牙齿及牙列三维模型,其对复杂牙列拥挤及错颌畸形患者的适应性有待进一步研究.

    作者:赵一姣;刘怡;孙玉春;王勇 刊期: 2017年第04期

  • 结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs和正常细胞株TSC2+/+MEFs微小RNA表达谱的差异分析

    目的:结节性硬化症是由于TSC1和TSC2基因突变导致累及多个器官、系统的常染色体显性遗传疾病,TSC2突变更为常见而且临床表型更为严重.为探讨结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs与正常细胞株TSC2+/+ MEFs中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的差异,以进一步研究相关miRNA在结节性硬化症发病机制中的作用奠定基础.方法:体外培养结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs和正常细胞株TSC2+/+ MEFs,各选取3个样本分别作为实验组和对照组.用TRizol法提取细胞的总RNA,以紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳对RNA进行质量检测.采用miRNA芯片筛选两者之间差异表达的miRNA,样品间表达变化标准以上调至原2倍或下调至原1/2作为阈值范围,并以实时定量PCR验证miRNA芯片结果的可靠性.CCK-8法测定细胞增殖活性. 结果:在结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs中,上调≥原2倍差异表达的miRNA分子有14个,下调≤原1/2差异表达的miRNA分子有26个.miRNA-199a-5p在TSC2-/-MEFs显著低表达,过表达miRNA-199a-5p可显著抑制TSC2-/-MEFs细胞增殖.结论:结节性硬化症细胞株TSC2-/-MEFs和正常细胞株TSC2+/+ MEFs存在差异表达miRNA分子.miRNA-199a-5p参与结节性硬化症的发生、发展,可能是防治结节性硬化症的重要分子靶点.

    作者:蔡燚;郭浩;李汉忠;王文达;张玉石 刊期: 2017年第04期

  • 膀胱癌的淋巴结清扫范围

    膀胱癌在我国是常见的泌尿生殖系恶性肿瘤之一,严重威胁着人类的生命健康.目前,根治性膀胱切除术(radical cystectomy, RC)和盆腔淋巴结清扫术(pelvic lymph node dissection , PLND)是肌层浸润性膀胱癌和高危非肌层浸润性膀胱癌的标准治疗方式[1],其中,PLND所起到的分期和治疗作用已得到公认,然而其清扫范围尚没有统一的标准.笔者结合PLND的研究进展及中山大学孙逸仙纪念医院泌尿外科的实践经验,就膀胱癌PLND展开讨论.

    作者:林天歆 刊期: 2017年第04期

  • 异位促肾上腺皮质激素综合征的外科治疗

    目的:探讨异位促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone,ACTH)综合征的诊断与外科治疗.方法:对1996 年1月至2016年12月北京协和医院收治的异位ACTH综合征57例的临床资料进行总结,其中男32例、女25例,年龄11~68岁,平均32岁.血ACTH显著升高,平均77.6 pmol/L(16.5~365.6 pmol/L,正常值为<10.1 pmol/L),垂体MRI未见占位,CT检查双侧肾上腺均有不同程度弥漫性或结节样增生.按照不同治疗方案选择分为3组:A组25例,未发现异位肿瘤的异位ACTH 综合征,行双侧或单侧肾上腺切除的手术治疗;B组16例,发现异位肿瘤行肿瘤根治性切除术;C组16例,非手术治疗.分析不同治疗方法疗效及预后.结果:57例患者中有40例随访6个月至10 年,A组因病情凶险程度不同、术中情况各异,采取的治疗方式也有差别,部分为分期双侧肾上腺切除或仅行单侧肾上腺切除术,其中4例死于严重库欣综合征(Cushing''s syndrome)导致的糖尿病、肺部感染,18例存活至今,3例失访,存活率为81%(18/22).B组16例行异位肿瘤根治性切除者,5例术后0.5~6.0年死于肿瘤复发, 3例存活至今,8例失访,存活率为37.5%(3/8).C组4例放射疗法加化学药物治疗者1年内均死于肿瘤转移、糖尿病或肺部感染, 6例单纯化学药物治疗者均于1年内死于肺部感染,另6例失访,无1例存活.结论:异位ACTH 综合征的治疗难度大,靶腺切除是有效的治疗方法,尤其适用于库欣综合征临床症状严重而原发肿瘤无法定位者.

    作者:樊华;李汉忠;徐维锋;纪志刚;张玉石 刊期: 2017年第04期

  • 核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节

    目的:探讨位于雄激素受体(androgen receptor, AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor, NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制.方法:绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)融合蛋白表达载体pEGFP-AR(1-918aa),pEGFP-NESAR(743-817aa),pEGFP-NAR (1-665aa)和pEGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体(赖氨酸K突变为精氨酸R)pEGFP-NESAR K776R,pEGFP-NESAR K807R和pEGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节.结果:在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平.在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h.融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加.GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照.赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基.结论:核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解.本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控.

    作者:巩艳青;张崔建;何世明;李学松;周利群;郭应禄 刊期: 2017年第04期

  • 单中心14年B超引导下经皮肾肿物穿刺活检经验

    目的:评价B超引导下经皮肾肿物穿刺活检(renal masses biopsy, RMB)的诊断效果、安全性及在中晚期肾癌患者中的临床应用价值.方法:回顾性分析2001年4月至2014年12月在北京大学第一医院行B超引导下肾肿物穿刺活检的75例患者的临床病理资料,总结肿瘤大小、病理分型和分级、穿刺部位、穿刺针数以及诊断效果等数据,分组统计分析.结果:北京大学第一医院14年来B超引导下RMB数量呈明显增加趋势.共75例患者纳入本研究,确诊64例(85.3%),包括60例恶性肿瘤,4例良性病变;非诊断性穿刺11例(14.7%).60例恶性肿瘤中,肾细胞癌37例(61.7%),尿路上皮癌13例(21.7%), 其他肿瘤10例(16.7%).37例肾细胞癌中明确诊断病理学亚型33例(89.2%),无法明确病理学亚型4例(10.8%).75例患者中,集合管癌占肾癌10.8%,鳞癌占尿路上皮癌23.1%,比例均高于已报道流行病学数据(2%,9.9%).75例患者中,13例行手术治疗并取得术后病理,穿刺活检结果与术后病理结果相比,肿物良恶性、病理学亚型及病理分级诊断的准确率分别为100%、81.8%和60.0%.75例患者中1例(1.3%)出现轻微血尿,未出现其他相关并发症.结论:B超引导下RMB可准确诊断肾癌病理学亚型,指导晚期肾癌患者靶向治疗;RMB可较准确判断恶性程度较高的集合管癌、尿路上皮鳞癌,可为制定合理的治疗方案提供参考.

    作者:张玉祥;蒙学兵;姚林;张崔建;宋刚;蔡林;张争;李学松;龚侃;李淑清;山刚志;何群;杨新宇;何志嵩;周利群 刊期: 2017年第04期

  • 肾癌根治性切除加癌栓取出术治疗MayoⅢ级下腔静脉癌栓的手术技术及临床经验

    目的:探讨肾癌根治性切除加下腔静脉癌栓取出术治疗Mayo Ⅲ级下腔静脉癌栓(inferior vena cava tumor thrombus,IVCTT)的有效性和安全性,总结手术技术及临床经验.方法:回顾性分析2014年10月至2016年9月北京大学第三医院泌尿外科收治的8例肾癌合并Mayo Ⅲ级(美国Mayo医学中心分级法)IVCTT患者的临床资料.8例患者中男性3例,女性5例,年龄18~77岁,平均(58.0±18.7)岁,体重指数(body mass index,BMI)为15.2~30.8 kg/m2,平均(22.7±4.4) kg/m2.8例患者的肿瘤均位于右侧,肿瘤直径(7.9±2.5) cm.行开放肾癌根治性切除加下腔静脉癌栓取出术者5例,行腹腔镜下肾癌根治性切除加下腔静脉癌栓取出术者3例,其中1例患者行中转开放手术.结果:8例患者手术均顺利完成,无围术期死亡病例.手术时间272~567 min,平均(370.3±101.6) min.下腔静脉阻断时间17~55 min,平均(41.0±12.1) min.术中出血量200~3 000 mL,平均(1 181.3±915.7) mL.术中输注悬浮红细胞者5例,输入量800~2 000 mL,平均(850.0±783.8) mL.术中输注血浆者3例,输入量400~1 000 mL.术后住院时间9~23 d,平均(14.1±4.0) d.8例患者中4例因术中发现癌栓侵犯下腔静脉壁而行下腔静脉壁切除术.8例患者术前血肌酐值60~101 μmol/L,平均(76.4±15.3) μmol/L,术后1周血肌酐值74~127 μmol/L,平均(100.8±21.1) μmol/L.术后组织病理检查诊断为肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCC)6例,肾乳头状腺癌(papillary adenocarcinoma)1例,Fuhrman分级为Ⅲ级6例、Ⅳ级1例,尤文肉瘤(Ewing''s sarcoma)1例.8例患者中,5例发生术后早期并发症,均为ClavienⅡ级并发症,未见严重并发症发生.8例患者均获随访,随访时间2~24个月,平均11.3个月.术前未发现远处转移的7例患者中,出现远处转移1例,为肺转移.结论:肾癌根治性切除加下腔静脉癌栓取出术治疗Mayo Ⅲ级下腔静脉癌栓较为有效、安全.Ⅲ级静脉癌栓延伸范围广,手术技术难度较大,充分的术前准备、丰富的解剖学知识和手术操作经验可提高手术安全性.

    作者:刘茁;马潞林;田晓军;王国良;侯小飞;张树栋;邓绍晖 刊期: 2017年第04期

  • 输尿管镜活检可协助上尿路尿路上皮癌危险分层

    目的:分析输尿管镜活检对上尿路尿路上皮癌(upper tract urothelial carcinoma,UTUC)患者肿瘤级别、肌层浸润以及多灶性诊断的准确性,分析术后肿瘤级别及肌层浸润的相关因素,探讨输尿管镜活检对UTUC患者术前危险分层的可行性与必要性.方法:回顾性分析北京大学第三医院泌尿外科2014年1月至2016年12月间输尿管镜活检后行肾、输尿管全长及膀胱输尿管口袖状切除术患者的临床资料.结果:患者76例,男性31例(40.8%)、女性45例(59.2%),平均年龄64.5岁(31~88岁).肿瘤位于左侧35例、右侧41例,肾盂39例、输尿管37例,症状为肉眼血尿者51例.术后病理提示低级别21例(27.6%)、高级别51例(67.1%),未确定级别4例(5.3%);非肌层浸润27例(35.5%)、肌层浸润47例(61.9%),无法确认是否浸润2例(2.6%);术后病理均为UTUC.在50名输尿管镜活检可判断肿瘤级别的患者中,活检病理对低级别尿路上皮癌诊断的敏感性、特异性和准确性分别为88.2%、69.7%和76.0%,阳性和阴性预测值分别为60.0%和92.0%.在27例活检病理可以判断是否有肌层浸润的患者中,5例活检报告为肌层浸润的UTUC患者术后病理结果均有肌层浸润,22例报告为非肌层浸润的患者术后肌层浸润和非肌层浸润各占50%,总准确性为59.3%.输尿管镜活检对于肿物多灶性诊断的准确性为61.0%.单因素分析显示,输尿管镜活检级别与术后UTUC级别相关(P=0.001),而性别、年龄、边侧、体重指数(body mass index,BMI)、血尿、术前肾小球滤过率估计值(estimated glomerular filtration rate,eGFR)、泌尿系积水、肿瘤大小、位置、多灶性及是否有蒂均与术后UTUC级别无显著相关性.输尿管镜活检病理高级别(P=0.02)、术前eGFR<90 mL/(min·1.73 m2)(P=0.025)以及病变位于肾盂(P=0.049)与肌层浸润显著相关,性别、年龄、边侧、BMI、血尿、泌尿系积水、肿瘤大小、多灶性及是否有蒂与其无显著相关性.结论:输尿管镜活检可协助对UTUC患者进行危险分层.

    作者:马闰卓;邱敏;何为;杨斌;夏海缀;邹达;陆敏;马潞林;卢剑 刊期: 2017年第04期

  • 尿脱落细胞荧光原位杂交检查阳性在尿路上皮癌中的临床价值

    目的:分析尿脱落细胞荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)检查阳性的临床病理特点,评估FISH诊断尿路上皮癌(urothelial carcinoma, UC)的临床应用价值.方法:对北京大学第一医院泌尿外科2012年4月至2015年9月收治的271例FISH检查阳性患者的临床资料进行回顾性研究分析.通过与尿脱落细胞学、膀胱镜和输尿管镜检查相比较,总结分析FISH阳性病例的临床病理特点,采用卡方检验对肿瘤的分期和分级进行比较.结果:在FISH检查阳性的病例中,FISH诊断尿路上皮癌的阳性预测值(positive predict value, PPV)为76.4%,其95%可信区间(confidence interval, CI)为71.3%~81.5%,与尿脱落细胞学检查结果(PPV 86.8%,95% CI: 78.5%~95.0%)相近,而低于膀胱镜及输尿管镜检查结果(PPV 96.1%,95% CI: 91.7%~100.0%).FISH的PPV显著高于国外报道(53.9%), 差异有统计学意义(χ2=33.048, P<0.001).尿脱落细胞学检查阳性组和阴性组在尿路上皮癌的肿瘤大小、病理分期和分级方面差异没有统计学意义.FISH检测阳性的输尿管癌中,高级别尿路上皮癌占92.3%,与国内的相关报道相比差异有统计学意义.结论:FISH的PPV相对较高,有助于尿路上皮癌的诊断,FISH检查阳性的输尿管癌临床病理分级更高,可考虑行根治性手术并加强术后的随访监测.

    作者:柳家园;彭翔;宁向辉;李腾;彭双鹤;王江宜;刘圣杰;丁义;蔡林;龚侃 刊期: 2017年第04期

北京大学学报(医学版)杂志

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