北京地区180名汉族新生儿HLA-G多态性分析

单细胞克隆小鼠胚胎干细胞系的建立

目的:建立胚胎干细胞的培养系统及培养方法.方法:用免疫溶解法(immunosurgery)分离3.5 d的129SvJ系小鼠囊胚内细胞团,在γ射线照射的胎鼠成纤维细胞饲养层上培养,胰酶消化传代.用组织化学法、免疫组织化学方法识别细胞表面标志,常规G带法行染色体核型分析,在体、离体分别观察细胞的多向分化能力.结果:得到一个单细胞克隆129系小鼠胚胎干细胞系G11能长期稳定增殖不分化,具有正常40XY核型,碱性磷酸酶阳性、SSEA-1阳性,在体和离体条件下可分化为多种细胞.结论:以小鼠为模型成功建立了哺乳动物胚胎干细胞的培养方法和培养系统.

作者：彭红梅；陈贵安 刊期： 2004年第04期

加强国际交流,促进我国介入性肺病学的发展

作者： 刊期： 2004年第04期

一种高灵敏度的SARS病毒检测技术--增强型real-time PCR

作者： 刊期： 2004年第04期

妊娠滋养细胞肿瘤中细胞的增殖与凋亡

妊娠滋养细胞肿瘤(gestational trophoblastic tumor,GTT)是一组以滋养细胞异型增生为特征的疾病,多于妊娠流产或正常产后发生,是妇科常见的疾病.GTT包括部分性葡萄胎(partial hydatidiform mole,PM)、完全性葡萄胎(complete hydatidiform mole,CM)、侵袭性葡萄胎(invasive hydatidiform mole,IM)、绒毛膜上皮癌(choriocarcinoma,CCA)和胎盘部位滋养细胞肿瘤(placenta site trophoblastic tumor,PSTT).

作者：胡建功；李民；宋立刚；金小平；赵晓明；高子芬 刊期： 2004年第04期

白细胞介素-9在慢性阻塞性肺病发病中的作用

目的:探讨白细胞介素-9(IL-9)在慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)气道炎症中的作用.方法:分别对30例COPD稳定期患者(A组)、31例哮喘缓解期患者(B组)、15例正常对照者(C组)进行诱导痰检查,用夹心酶联免疫吸附法测定诱导痰上清液IL-9、IL-5、IL-8浓度;采用免疫组织化学SP法染色及图象分析技术测定IL-9阳性细胞百分数及含量.结果:A、B组IL-9浓度与C组差异有显著性.IL-9阳性细胞主要分布在巨噬细胞的胞浆内,A、B组IL-9阳性细胞百分数与C组差异有显著性(x2=20.821、19.908,P均<0.001).A组中性粒细胞百分数、IL-8水平明显高于B、C组;A组IL-9与巨噬细胞呈正相关(r=0.407,P=0.039).结论:IL-9在COPD患者较正常人明显增高,且与气道内的巨噬细胞、IL-8水平有关,可做为COPD气道炎症的又一检测指标.

作者：刘政；姚婉贞；陈燕；丁艳苓 刊期： 2004年第04期

替加色罗抑制内脏高敏大鼠直肠扩张反应和脊髓神经元性一氧化氮合酶的表达

目的:观察应用5-HT4受体部分激动剂替加色罗(tegaserod)对大鼠直肠扩张反应的影响和脊髓神经元性一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化,探讨替加色罗对内脏感觉的影响机制.方法:应用新生大鼠(生后第8～21天)醋酸灌肠建立慢性内脏高敏模型为H组;生理盐水灌肠为C组.H组又分为H-saline、H-vehicle、H-Teg 0.1、H-Teg 0.3和H-Teg 1.0组;C组分为C-saline和C-Teg 1.0组.H-saline和C-saline组腹腔注射生理盐水,H-vehicle组注射溶剂+蒸馏水,H-Teg0.1、H-Teg0.3和H-Teg 1.0组分别注射替加色罗0.1 mg/k、0.3 mg/kg、1.0 mg/kg,C-Teg1.0组注射替加色罗1.0 mg/kg,10 min后直肠扩张观察腹部撤离反射(abdominal withdrawal reflex,AWR),并用NADPH-d黄递酶法观察腰骶髓(L6～S1)nNOS的表达.结果:替加色罗明显抑制高敏组AWR,但在对照组的作用不明显.1.2 mL扩张时,替加色罗(1.0 mg/kg)使高敏组AWR积分低于对照组AWR积分.替加色罗(1.0 mg/kg)可以明显减少高敏组脊髓nNOS阳性细胞总数(减为H-saline的40%,P<0.01),在背角nNOS减少的明显(为H-saline的31%).替加色罗(0.1 mg/kg)不影响脊髓nNOS总数,但可以使中央管区nNOS减为H-saline的79%(P<0.01).结论:替加色罗可抑制内脏高敏大鼠直肠扩张反应,并呈剂量依赖性减少腰骶髓nNOS的表达,尤其是在脊髓背角和中央管区作用更明显,提示脊髓nNOS可能参与了替加色罗对内脏敏感性的调节作用.

作者：焦红梅；谢鹏雁 刊期： 2004年第04期

血脑屏障体外实验模型的建立

目的:应用培养的CBA/J小鼠脑血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVEC)构建血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的体外实验模型.方法:将BMVEC种植在明胶包被的24孔板细胞插入器的微孔滤膜上培养至汇合状态,通过4 h液面渗漏实验、扫描和透射电镜、血脑屏障形成前后膜两侧的电阻以及辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的通透性和RMP-7对血脑屏障通透性的调控作用来证实BBB的形成.结果:BMVEC培养至汇合后,4 h液面渗漏实验成为阳性;扫描电镜显示细胞形成单层,透射电镜证实细胞间形成紧密连接;跨细胞电阻(the transendothelial electrical resistance,TEER)分别为汇合前和人脐静脉内皮细胞的3.2倍和7.7倍;对HRP的通透率分别为前对照组的13.4%和6.7%;RMP-7处理使HRP在BBB的通透率增加了2.7倍.结论:构建的BBB体外模型在形态学、电阻和通透性方面具备了BBB的基本特性,适用于中枢神经系统药物跨BBB能力的研究.

作者：谢英；叶丽亚；张小滨；侯新朴；娄晋宁 刊期： 2004年第04期

7种吸收促进剂的鼻黏膜毒性及评价方法

目的:考察常用吸收促进剂的鼻黏膜毒性.方法:采用测定黏膜纤毛持续运动时间、测定黏膜纤毛输送速率和考察黏膜形态3种方法评价了7种[十二烷基硫酸钠(SDS),去氧胆酸钠(SDC),苄泽35(Brij35),吐温80(Tween 80),乙二胺四乙酸钠(EDTANa2),2-羟丙基-β-环糊精(2-Hp-β-CD),卵磷酯(lecithin)]常用的吸收促进剂的鼻黏膜毒性.结果:对纤毛持续运动时间的影响1%SDS>1%SDC>1%Brij35>5%Tween80>0.1%EDTA>5%HP-β-CD>1%lecithin.对纤毛输送速率的影响1%Brij35>1%SDC>1%SDS>0.1%EDTA>1%lecithin>5%Tween80>5%HP-β-CD.黏膜形态学考察毒性1%SDS≈1%SDC≈1%Brij35>5%Tween80>0.1%EDTA≈5%HP-β-CD≈1%lecithin.以上浓度均为质量分数.结论:3种评价鼻黏膜毒性方法之间具有很好的相关性.

作者：赵莹；张大卫；郑爱萍；于少云；武凤兰 刊期： 2004年第04期

北京大学第一医院皮肤科成功实施Mohs显微外科手术

作者： 刊期： 2004年第04期

5-氟尿嘧啶胃漂浮滞留缓释片的制备

目的:以5-氟尿嘧啶(5-Fu)为模型药物,制备一种漂浮性能不受胃中酸度影响的漂浮缓释片剂.方法:根据流体动力学原理,采用漂浮层和载药层分别制粒再一起压片的方法,制备5-Fu双层漂浮型胃内滞留缓释片,并测定其在不同酸度介质中的漂浮动力学及药物释放规律.结果:以优化配方所制备的双层漂浮缓释片在pH 2～7的介质中漂浮性能良好,药物的体外释放可以通过辅料成分的变化进行调节;100 r/min转速下,在0.1 mol/L HCl中,体外药物释放符合一级动力学规律.结论:本研究制备的胃内漂浮滞留缓释片的漂浮性能不因胃内酸度的变化而改变,有希望通过胃内滞留时间的延长在临床用于胃癌的辅助治疗.

作者：魏振平；黄蕾；韩静；李勇 刊期： 2004年第04期

MBTTM托槽系统矫正病例支抗磨牙的三维位置变化

目的:研究经MBTTM托槽系统矫正病例的支抗牙--上颌第一磨牙的三维位置变化;比较一步滑动法和两步滑动法对治疗后牙齿的轴倾度、转矩度和扭转的影响;比较横腭杆(TPA)对矫正后上磨牙轴倾度、转矩度和扭转的影响.方法:对37例上颌后牙需大支抗的患者应用MBTTM托槽系统进行矫正,其中19例应用一步滑动法,18例应用两步滑动法.所有的病例均采用口外弓加强支抗,其中21例还使用了TPA;利用YM-2115三维测量仪和三维测量软件对患者治疗前后的上颌模型进行测量和重叠测算,得出牙齿矫正后空间位置变化.结果:矫正后上第一磨牙平均前移(4.5±1.1)mm,伸长(1.5±0.9)mm;近中舌向扭转(3±7).(一步滑动法和两步滑动法间差异无显著性;TPA组和非TPA组间差异有显著性);近中倾斜(6±4).(一步滑动法大于两步滑动法,差异有显著性);上磨牙平均发生(3±6).冠颊向转矩(一步、两步滑动法间差异无显著性).结论:应用MBTM托槽系统行拔牙矫治后,上磨牙出现冠颊向转矩、近中扭转和近中倾斜的趋势.矫治过程中,一步滑动法比两步滑动法更容易造成上磨牙的近中倾斜.TPA对抗磨牙扭转的作用较其它作用更为明显.

作者：张晓芸；张静；贾绮林；许天民 刊期： 2004年第04期

用MAPs制备新肿瘤相关基因1A6/DRIM的多克隆抗体

目的:获得1A6/DRIM的N端特异性抗体并对其在细胞内的定位进行分析.方法:针对1A6/DRIM的N端多肽用多通道同步固相全自动合成系统合成,以无免疫原性的赖氨酸结构为核心偶联,将此多聚抗原肽(mutiple antigenic peptides,MAPs)免疫新西兰大白兔,从免疫兔血清中获得1A6/DRIM的多克隆抗体.结果:用Western Blot技术证明了1A6/DRIM的N端抗体,与C端特异性单克隆抗体识别相同的1A6/DRIM基因表达的310 000蛋白条带,经过Western Blot和免疫荧光的方法初步证实1A6/DRIM在多种胃癌细胞系、乳腺癌细胞系以及肝癌细胞系中表达,免疫荧光显示1 A6/DRIM主要定位在细胞核内.结论:对于用谷胱苷肽巯基转移酶(Glutathion-S-transferase,GST)融合蛋白方法不能诱导表达的蛋白,可利用合成MAPs制备抗原的方法获得抗体.本研究用此方法制备的抗体特异性识别1A6/DRIM蛋白产物并证明该基因主要在多种肿瘤细胞的核内表达.

作者：黄莹莹；武晓楠；杜晓娟；宁涛；李宁；朱军；柯杨 刊期： 2004年第04期

北京大学人民医院血管外科完成主动脉瘤腔内隔绝术突破百例

作者： 刊期： 2004年第04期

乙酰胆碱对大鼠海马神经细胞内钙信号及细胞间通讯的影响

目的:探讨乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对大鼠海马细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的影响.方法:原代混合培养海马细胞;利用激光共聚焦扫描显微镜观察Ach作用后细胞内游离钙的变化;用荧光染料的刮除负载法检测Ach作用后GJIC的变化.结果:Ach(0.05～0.10 mmol/L)可引起海马细胞内钙离子浓度变化.共聚焦扫描显微镜观察显示Ach作用后细胞内钙离子浓度升高,该变化大小依赖于Ach浓度,并能被东莨菪碱拮抗.荧光染料的刮除负载法检测发现细胞与0.05 mmol/L Ach共同孵育60h后GJIC明显增强.结论:Ach使细胞间由缝隙连接介导的细胞间通讯明显增强.

作者：王丽珺；胡白和；何其华；樊景禹 刊期： 2004年第04期

合欢皂苷及苷元的分离鉴定

目的:研究合欢皮的化学成分.方法:用色谱法分离合欢皂苷及皂苷元,用化学和波谱法鉴定结构.结果:分离并鉴定了一个三萜皂苷(1)和四个三萜皂苷元(2～5),化合物1的结构为3-0-[β-D-吡喃木糖(1→2)-β-D-吡喃呋糖(1→6)-β-D-葡萄糖]-21-0[(6S)-2-反式-2羟甲基-6-甲基-6-O-β-D-吡喃鸡纳糖-2,7-辛二烯酸]-金合欢酸-28-β-D-吡喃葡萄糖(1→3)-[o-L-呋喃阿拉伯糖(1→4)]-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖酯,化合物2,3,4,5的结构分别为金合欢苷元B,合欢三萜内酯甲,剑叶沙酸内酯,金合欢酸甲酯.结论:化合物1为首次从合欢皮中分离得到,即合欢皂苷Prosapogenin-10.

作者：郑璐；吴刚；王邠；吴立军；赵玉英 刊期： 2004年第04期

稀土离子La3+、Ce3+、Tb3+、Y3+对肌醇磷脂信号系统中蛋白激酶C的作用

以往的研究证明稀土离子(Ln)具有类似磷脂酶C(PLC)的作用[1,2],促进肌醇磷脂(PIP2)水解产生三磷酸肌醇(IP3)和甘油二酯(DAG).已知IP3和DAG分别激活肌醇磷脂信号系统中的IP3/Ca2+和DAG/蛋白激酶C(PKC)两条信号传递途径.DAG激活PKC转位,以磷酸化形式对许多蛋白质和酶类进行修饰,从而调节和控制一系列生理反应.本工作以大鼠肝脏、人红细胞以及K562细胞为研究对象,采用免疫组织化学方法、酶联免疫法(ELISA)以及激光扫描共聚焦显微镜技术(LSCM)研究稀土离子La3+、Ce3+、Tb3+和Y3+对PKC的含量、分布和转位的影响.

作者：李霞；刘会雪；杨晓达；刘湘陶 刊期： 2004年第04期

新型气体信号分子硫化氢对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用.方法:24只Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、低氧组(8只)和低氧+NaHS组(8只).以化学分光光度法测定血浆H2S含量;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Fas和caspase-3表达,并进行定位和半定量分析.结果:低氧组与对照组比较,低氧组大鼠血浆中H2S含量下降36%,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少52.9%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达增高123.9%,Fas蛋白表达减弱45%,caspase-3表达与对照组差异无显著性;低氧组与低氧+NaHS组比较,低氧+NaHS组大鼠血浆中H2S含量升高65%,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高62.5%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达减弱36.4%,Fas和caspase-3蛋白表达分别增高84.8%、34.5%;结论:低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,H2S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达、增加Fas和caspase-3蛋白表达,促进低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡.

作者：陈晓波；杜军保；张春雨；唐朝枢；周伟仅 刊期： 2004年第04期

硬膜外麻醉能保护术后患者的纤溶功能

目的:研究不同麻醉方式对应激反应、凝血和纤溶功能的影响.方法:实施全子宫切除的30例患者随机分为3组:连续硬膜外麻醉组(组E,n=10),硬膜外麻醉联合全身麻醉组(G+E,n=10)和单纯全麻组(G组,n=10).硬膜外麻醉的阻滞平面采用7.5g/L的布比卡因维持在T6到L3,术后行患者自控硬膜外镇痛(PCEA),全身麻醉采用常规方法完成,术后行患者自控性镇痛(PCA).分别在麻醉前(T0)、术毕(T1)和术后第24小时(T2)、第72小时(T3)采集血样测定儿茶酚胺浓度、凝血和纤溶参数.结果:E组和G+E组患者的去甲肾上腺素(NE)水平在围术期没有明显变化,但在G组患者却显著高于基线值(P<0.01)和其它两组患者(P<0.05).在T1时,3组患者的肾上腺素水平均明显高于T0并达到峰值(P<0.01),然后在T3恢复正常.3组患者的纤维蛋白原水平(FIB)在T1明显降低(P<0.01),但术后快速升高并在T3达到高(P<0.01).在T3时G+E组和G组患者的FIB水平明显高于E组患者(P关键词：麻醉硬膜外全身子宫切除术应激血液凝固纤维蛋白溶解

作者：王天龙；齐琰琴；杨拔贤；赵磊 刊期： 2004年第04期

术中自体血液回收对红细胞体内半衰期的影响

目的:观察在非体外循环冠状动脉旁路移植术中使用国产自体-3000型血液回收机(北京京精医疗设备公司)回收处理后的红细胞体内半衰期的变化.方法:选取2003年11月至2004年1月期间20例在我科连续行择期非体外循环冠状动脉旁路移植手术的患者随机分为实验组(血液回收组)和对照组(非血液回收组).实验组患者术中使用国产自体-3000型血液回收机回收术野失血,在血液回收处理完毕后立即取血样.对照组患者在麻醉诱导成功后经中心静脉导管取血样作为对照.使用核素51Cr标记法测量红细胞的体内半衰期.结果:实验组经血液回收处理的红细胞和对照组未经血液回收处理的红细胞在体内半衰期差异无显著性.结论:在非体外循环冠状动脉旁路移植术中,使用国产自体-3000型血液回收机(北京京精医疗设备公司)回收处理后的红细胞体内半衰期没有显著的变化.

作者：李西慧；张明礼；张春丽；崔虎军；宋乃庆；杜迎利；肖锋 刊期： 2004年第04期

PDCD5蛋白在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变和宫颈癌中的表达

目的:了解凋亡基因PDCD5在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithe1ial neoplasia,CIN)和宫颈鳞癌中的表达,分析PDCD5在宫颈癌的发病中所起的作用.方法:采用免疫组织化学的方法,对93例宫颈组织(其中包括正常宫颈18例,CIN I级19例、CINⅡ级18例、CINⅢ级20例、宫颈癌18例)的组织切片进行PDCD5的免疫组化染色.采用人工阅片评分及计算机辅助染色强度判定2种方法判断宫颈组织PDCD5的染色阳性率及染色强度.采用单因素方差分析法判断PDCD5的表达与正常宫颈、CIN、宫颈鳞癌的相关性.结果:免疫组织化学的结果显示,在正常宫颈及CIN I级组织中,PDCD5表达多呈强阳性,CINⅡ级以上及宫颈癌组织表达呈递减趋势.正常宫颈组织、CIN各级及宫颈癌组织之间PDCD5的平均光密度值分别为0.322、0.366、0.287、0.252和0.206,各级病变之间差异均有显著性.在整体上说,PDCD5的表达在CIN I级较正常升高,在CINⅡ级以上随宫颈病变的进展呈下降趋势.结论:PDCD5可能在不同程度上参与了宫颈细胞从CIN至宫颈癌进程中的调控.

作者：刘朝晖；张岱；李克敏；廖秦平 刊期： 2004年第04期