陈乐天；段婷；宋淑菊
目的 构建携带大鼠血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因的重组腺病毒表达载体并确定其对INS-1细胞的感染效率.方法 采用RT-PCR方法,从大鼠肾脏组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,将ACE2基因定向克隆到穿梭质粒载体pShuttle-GFP-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdxsi载体同源重组后得到携带大鼠ACE2基因的重组腺病毒(pAdxsi-GFP-CMV-ACE2),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.体外转染INS-1细胞,绿色荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blotting检测ACE2蛋白的表达.结果 克隆得到大鼠ACE2基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染INS-1细胞.结论 成功构建了表达ACE2的复制缺陷型重组腺病毒,为深入研究ACE2基因在胰岛细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础.
作者：方红娟；杨金奎 刊期： 2009年第04期
目的 探索联合激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM) 与基因芯片技术在大鼠脊髓背根神经节的感觉神经元基因表达研究中的可行性.方法 取大鼠L4、L5、L6节段脊髓背根神经节,用LCM技术获取神经细胞,提取总RNA,甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA质量,检测纯度和产量,并以实时RT-PCR方法进行验证.结果 总RNA的完整性较好,经单轮T7线性扩增后得到足量的 aRNA,可用于实时RT-PCR研究和进一步基因芯片杂交实验.结论 结合有效的RNA保护方法和线性扩增,LCM可以分离出纯净的背根神经节的感觉神经元,满足下游基因芯片研究的要求.
作者：徐敏；贾建平；耿志伟；宋珏娴；吴忧；李浩；刘璐；刘芳艳 刊期： 2009年第04期
目的 总结卵巢早衰的临床资料,评价性激素替代治疗(hormone replacement treatment,HRT)对卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)患者的疗效,探讨卵巢早衰的治疗方法.方法 对2002年1月至2008年1月38例卵巢早衰患者的临床资料进行分析,行HRT共3个月～1年,观察服药前后临床症状、盆腔超声相、血清生殖激素变化.结果 25例患者经性激素替代治疗临床症状明显缓解,治愈率为13.2%,有效率为65.8%,与服药前比较雌激素水平(E2 estradiol)明显升高,血清卵泡激素(serum follicle hormone,FSH)水平明显下降(P＜0.01),血清黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平显著下降(P＜0.05).双侧卵巢无显著变化(P＞0.05),子宫内膜明显增厚(P＜0.01).服药期间无肝肾功能的损伤及其他不良反应.结论 卵巢早衰是一种多因素引起的疾病,治疗较困难,尽早行性激素替代治疗可使临床症状缓解,血清FSH、LH水平降低,预防合并症的发生.
作者：孙敏玲 刊期： 2009年第04期
目的 研究凉血解毒方含药血清对模拟银屑病病理状态的T淋巴细胞增生、活化及释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为阐明凉血解毒类中药治疗银屑病血热证的作用机制和临床治疗提供实验依据.方法 选用Jurkat E6-1 T淋巴细胞株为研究材料,以不同剂量的凉血活血胶囊药物粉末灌服大鼠,制备大鼠含药血清.将含药血清预先与细胞孵育3 h,用多克隆刺激剂佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)活化T淋巴细胞.采用CCK-8比色法检测含药血清对活化及正常的T淋巴细胞增生的影响;采用流式细胞术观察药物对T淋巴细胞早期活化标志分子CD69表达的影响;采用酶联免疫夹心法(ELISA)检测药物对T淋巴细胞所释放TNF-α含量的影响.结果 低、中、高3种剂量的凉血解毒方含药血清均可使活化的T淋巴细胞数量明显下降,且排除药物毒性作用.不同剂量的药物均可显著降低T淋巴细胞早期活化标志分子CD69的表达,不同浓度的药物均可抑制T细胞分泌TNF-α.结论 临床用于治疗银屑病的常用有效方剂凉血解毒方能显著抑制T淋巴细胞增生、活化及炎性反应细胞因子的释放.
作者：刘欣；李萍；赵京霞；梁代英；王燕 刊期： 2009年第04期
目的 观察不同证型银屑病患者血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的差异及理血解毒类方对银屑病患者血清VEGF的调节作用,探讨银屑病的病机基础及中医药作用机制.方法 采用酶联免疫吸附法检测105例寻常型银屑病(血热型、血燥型、血瘀型) 患者口服凉血解毒汤、养血解毒汤和活血解毒汤前后血清VEGF水平.结果 银屑病组患者治疗前血清VEGF水平较正常对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),治疗前血热型银屑病组患者血清VEGF显著高于血燥型组,差异有统计学意义(P<0.05);与血瘀型组相比差异无统计学意义;血燥型银屑病组患者与血瘀型组患者相比血清VEGF差异亦无统计学意义.与治疗前比较,血热型和血燥型银屑病组经中药治疗后血清VEGF均明显降低(P<0.05),血瘀型银屑病组患者经中药治疗后血清VEGF与治疗前相比较差异无统计学意义.结论 VEGF的变化与银屑病之间具有疾病特异性,而证候及发展阶段的特异性不明显.抑制血管新生可能是凉血解毒方、养血解毒方治疗血热型和血燥型银屑病的机制之一.
作者：赵京霞；李萍；刘欣；王萍；张蕾；王丽华；周冬梅；陈维文 刊期： 2009年第04期
目的 研究N1-核糖肌苷衍生物的合成反应.方法 用丙叉保护肌苷2′,3′-OH,单甲氧基三苯甲基保护5′-OH,在碳酸钾、18-冠醚-6作用下与2,3,5-O-三苄基-1-溴代核糖反应.结果 反应得到N1-核糖肌苷衍生物.结论 用酰基做保护基易发生酰基重排反应,改用丙叉保护肌苷2′,3′-OH,再用单甲氧基三苯甲基保护5′-OH与2,3,5-O-三苄基-1-溴代核糖在碳酸钾18-冠醚-6作用下得到目的 物N1-(2,3,5-O-三苄基-D-核糖)-2′,3′-O-异亚丙基-5′-O-单甲氧基三苯甲基肌苷.
作者：张建伟 刊期： 2009年第04期
目的 比较脂质体介导法和裸质粒直接转染法导入CYP2J3基因表达的效率.方法 将CYP2J3真核表达质粒导入原代培养大鼠平滑肌细胞,用半定量RT-PCR方法检测CYP2J3 mRNA表达,Western blotting方法测定CYP2J3蛋白表达,高效液相色谱法测定培养液11,12-EET含量.实验分为裸质粒转染组(2J3)、脂质体介导转染组(L2J3)和对照组,转染后24 h和48 h收集细胞.结果 转染后24 h,2个转染组CYP2J3 mRNA表达均较对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);L2J3组蛋白含量较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01),2J3组蛋白含量较L2J3组高,差异有统计学意义(P<0.05).培养液11,12-EET含量在3组间差异无统计学意义.转染后48 h 2个转染组CYP2J3 mRNA表达较24 h时弱,但仍较对照组高,脂质体转染组较裸质粒转染组CYP2J3 mRNA表达增强;2J3组及L2J3组蛋白含量均较对照组低,差异有统计学意义(P<0.01);2个转染组培养液中11,12-EET浓度较对照组高,脂质体转染组表达高于裸质粒转染组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 裸质粒直接转染能成功导入CYP2J3基因并表达产物.
作者：常静；曾翔俊；王红霞；穆晶；刘琨；王瑛；李珊珊；张立克 刊期： 2009年第04期
目的 以1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)为工具药处理MN9D细胞,建立帕金森病(Pakinson's disease,PD)的细胞模型,观察褐藻多糖硫酸酯对细胞的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法 用不同浓度(25、50、100、200 μmol/L)的 MPP+处理MN9D细胞 36 h,50 μmol/L MPP+处理 MN9D细胞,时间分别为12、24 36、48 h,建立细胞损伤模型.用0.01、0.1、1 g/L褐藻多糖硫酸酯预孵育MN9D细胞1 h后,加入50 μmol/L MPP+共同作用36 h以探讨褐藻多糖硫酸酯的保护作用.MTT法检测细胞活力、生化法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,并采用二氯荧光素乙二酯(DCF-DA)染色法检测细胞内的氧化应激水平.结果 随着MPP+浓度增加或作用时间延长,MN9D细胞MTT值逐渐降低.50 μmol/L MPP+ 处理细胞36 h,MTT值明显下降,LDH释放量增加.而0.1、1 g/L的褐藻多糖硫酸酯预孵育1 h,可明显减轻MN9D细胞的损伤,提高 MTT 值并降低LDH 释放量,细胞形态学改变与生化实验结果一致.50 μmol/L MPP+作用12 h,可使MN9D细胞的氧化应激水平明显升高,而0.1、1 g/L的褐藻多糖硫酸酯预处理 1 h,可以拮抗MPP+引起的细胞内氧化应激水平增高.结论 褐藻多糖硫酸酯可以有效拮抗 MPP+ 对 MN9D 细胞的损伤作用,其机制可能与褐藻多糖硫酸酯具有抗氧化活性有关.
作者：罗鼎真；崔艳秋；王晓民 刊期： 2009年第04期
目的 探讨高敏C反应蛋白(high sensitive c-reactive protein,hs-CRP)在急性冠脉综合症患者中的改变以及在急性心肌梗死患者中随发病时间的变化趋势.方法 采用免疫比浊法对126例急性心肌梗死患者和135例不稳定型心绞痛患者进行hs-CRP检测,并按照常规方法测定白细胞、中性粒细胞及血脂水平.同时对22例急性心肌梗死患者进行发病12 h之内、24 h、48 h、72 h时和7 d的hs-CRP检测,进行两两比较.结果 急性心肌梗死组hs-CRP水平(6.26±5.60 mg/L),明显高于不稳定型心绞痛对照组(3.52±4.34 mg/L),2组间差异有统计学意义(P=0.000).2组间的白细胞和中性粒细胞差异有统计学意义,而总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和三酰甘油2组间差异无统计学意义(P>0.05).22例急性心肌梗死患者发病48 h(13.05±3.89)mg/L或72 h(13.04±3.98)mg/L的hs-CRP水平较发病12 h内(5.34±5.45)mg/L明显增高.结论 hs-CRP在急性心肌梗死患者比不稳定型心绞痛患者明显增高.急性心肌梗死发病48 h或72 h的hs-CRP较发病12 h内更能反映急性冠脉事件的严重程度.
作者：杨敬；华琦；徐东；谭静 刊期： 2009年第04期
刻苦勤奋,硕果累累庄辉教授主要从事病毒性肝炎研究.现任北京大学医学部基础医学院病原生物学系教授、博士生导师、世界卫生组织西太区消灭脊髓灰质炎证实委员会委员、世界卫生组织西太区控制乙型肝炎专家委员会委员、世界肝炎联盟公共卫生专家、国家药典委员会委员、中华预防医学会副会长、中华医学会理事、中华医学会肝病学会名誉主任委员及 <中华肝脏病杂志>等十余种期刊的名誉总编、总编、常务编委或编委.
作者： 刊期： 2009年第04期
目的 探讨咪唑安定和异丙酚用于后颅窝手术后带气管插管患者镇静时对血流动力学的影响.方法 将60例择期全麻后颅窝肿瘤手术后带气管插管躁动的患者用随机数字表法随机分为2组,咪唑安定组M组(n=30),异丙酚组P组(n=30).分别首先给予咪唑安定0.05 mg/kg或异丙酚0.5 mg/kg静脉推注,再给予咪唑安定(0.05～0.2)mg/(kg·h),异丙酚(0.5～3)mg/(kg·h)持续微量泵泵入,维持Ramsay镇静评分2～3级,于镇静前、镇静后10 min、30 min,1 h、2 h、4 h、8 h记录Ramsay镇静评分、用药量、心率(heart rate,HR)、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)、平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),用胸阻抗法监测血流动力学参数心排血量(cardiac output,CO)、心脏指数(cardiac index,CI)、每搏输出量(stroke volume,SV)、体循环阻力(systemic vascular resistance,SVR).结果 静脉注射负荷剂量的异丙酚和咪唑安定后,病人的心率均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05),SBP、DBP、MAP、CO和CI在镇静阶段均降低但差异无统计学意义,SV和SVR均升高但差异无统计学意义,组间比较差异无统计学意义.结论 咪唑安定和异丙酚用于后颅窝术后带气管插管患者镇静时对血流动力学的影响很小且二者作用相当.
作者：赵立红；石广志；郑一；徐明；周建新 刊期： 2009年第04期
现在我国已进入了老龄化社会,随着老年人口的增加,老年宫颈癌也相应增加[1],有报道[2]宫颈癌的发病年龄高峰为35～39岁和60～64岁.
作者：贺昕红；蔺莉 刊期： 2009年第04期
目的 探讨团体心理干预对青少年网络成瘾的效果.方法 将2008年3月1日-2008年7月31日收入北京军区总医院成瘾医学治疗中心的51例14～25岁的网瘾青少年作为研究对象,根据随机化原则选取28名网瘾青少年作为实验组,参加本研究设计的团体心理干预,余23例为对照组未参加该团体心理干预.实验组成员参加本研究设计的团体心理干预至少6次,实验组与对照组成员均参加治疗中心的其他治疗.采用戴维斯在线认知量表(OCS)、家庭功能评定量表(FAD)、领悟社会支持量表(PSSS)、马氏量表IV版本1(Mach Scale IV version1),分别对2组研究对象作干预前、干预后即时、干预后1个月和干预后3个月情况的测查.结果 1)实验组OCS中各维度及总分、FAD中沟通、角色、情感反应、总的功能分量表、PSSS总分和马氏量表IV版本1总分在干预前、后的组间差异均有统计学意义,且干预前与干预后3个时相两两比较差异也有统计学意义;2)对照组仅OCS各维度及总分在干预前、后的组间差异有统计学意义,且干预前与干预后3个时相两两比较差异有统计学意义;3)实验组与对照组的OCS总分及社交安慰维度、FAD角色及总的功能分量表和PSSS总分在干预后3个月的得分差异有统计学意义.结论 本研究设计的团体心理干预不仅对网络成瘾青少年成瘾总体情况和社交安慰方面有显著改善,而且对家庭功能的角色、总的功能及领悟社会支持方面的情况均有显著改善作用.
作者：钟欣；陶然；祖思；沙莎；杨凤池 刊期： 2009年第04期
目的 构建人源性Notch1跨膜段(notch1 transmembrane domain,NTM)真核表达载体pcDNA3-NTM,并观察其在真核细胞中的表达.方法 通过反转录-聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系BxPC3细胞中获得编码Notch1跨膜段的cDNA,定向克隆至C端带flag蛋白标签序列的真核表达载体pcDNA3中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体法转染HeLa细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内Notch1跨膜区的表达.结果 构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,将其转染HeLa细胞48 h后,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Notch1跨膜段的表达显著增高.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3-NTM,为研究Notch信号的活化机制及其在胰腺癌发生发展中的作用奠定了基础.
作者：张凯举；余和芬；张玉祥 刊期： 2009年第04期
目的 了解透明质酸(HA)片段是否促进人胚胎肺成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs),探讨HA与细胞的相互作用对胶原收缩和降解的影响,初步研究HA与肺成纤维细胞作用的受体途径.方法 1)取人胚胎肺组织块进行肺成纤维细胞培养;2)实验分为5组:CD44抗体组(C组)、整合素β1(Integral β1)抗体组(B组)、IgG1对照抗体组(I组)、HA组(H组)和蒸馏水对照组(M组);3)肺成纤维细胞分别与CD44抗体、Integral β1抗体或IgG1抗体孵育30 min;4)将细胞悬液与胶原溶液、透明质酸溶液(200 000、0.1 g/L)混匀,共同孵育,待形成凝胶后将凝胶漂浮于培养液中,连续培养72 h;5)每24 h记录凝胶面积,留取第1个24 h的培养上清液应用酶联免疫吸附法检测MMPs,72 h后收集凝胶,应用分光光度测定法进行羟脯氨酸检测;6)应用免疫细胞化学法检测肺成纤维细胞透明质酸CD44受体.结果 1) 5个组的凝胶面积均随时间的推移而逐渐变小,C组和B组的凝胶面积在各个时间点与I组和H组比较都有显著增加,差异有统计学意义(P=0.000),与对照组比较差异无统计学意义.2)肺成纤维细胞胶原凝胶中羟脯氨酸的含量以C组和M组高,2组与B组、I组及H组比较差异有统计学意义(P＜0.05).3)肺成纤维细胞C组和B组MMP-9的水平明显低于H组和I组(P＜0.05),与M组比较差异无统计学意义;C组MMP-1的水平明显低于B组、H组和I组(P＜0.05),与M组比较差异无统计学意义.4)HA可促进肺成纤维细胞CD44受体的表达,以相对分子质量为200 000的片段作用强.结论 HA对人肺成纤维细胞MMPs的分泌有促进作用,加剧了胶原凝胶的收缩和降解,这种作用可被CD44抗体所抑制,也可被Integrin β1抗体部分抑制.
作者：杨汀；王辰；庞宝森；代华平；何培英 刊期： 2009年第04期
目的 探讨针对早期糖尿病视网膜病变的治疗药物和敏感的监测方法.方法 选择40～70岁的2型糖尿病合并非增生性糖尿病视网膜病变的患者,共82例,分为罗格列酮钠组和二甲双胍组,各41例.均强化控制血糖治疗,随访1年.研究前及6个月、12个月检测体质量指数、血压、临床生化指标、糖化血红蛋白、眼底荧光造影检查及多焦视网膜电图检查.每月访视1次,监测血压、血糖;3个月检测1次糖化血红蛋白.结果 多焦视网膜电图检查P1波振幅12个月时2组各环均明显改善,与基线值比较差异有统计学意义(P＜0.01),且罗格列酮钠组优于二甲双胍组,差异具有统计学意义(P<0.05).眼底荧光造影检查,观察前后及组间对照差异无统计学意义(P＞0.05).结论 罗格列酮钠对非增生性糖尿病视网膜病变具有独特的治疗作用,多焦视网膜电图检查对早期糖尿病视网膜病变检测更敏感.
作者：李红兵；杨金奎；李毅斌；石敬；冯建萍；潘素芳；王光璐 刊期： 2009年第04期
目的 观察高磷条件体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)是否发生钙含量的变化及其电镜下的微观表现.方法 应用大鼠原代血管平滑肌细胞进行体外实验,将培养细胞分为对照组和高磷组.在培养的10 d内观察细胞的形态学变化,并应用原子分光光度计检测细胞钙含量,应用电镜观察细胞的微观变化.结果 对照组细胞VSMCs钙含量在10 d内无明显增加,高磷组VSMCs钙含量在培养第8天后明显增加,与换液当天比较差异有统计学意义(P<0.01).2组细胞电镜下第10天VSMCs细胞外基质中均可见大量胶原纤维,高磷组还可见高密度电子致密物呈颗粒状沿胶原纤维沉积.结论 高磷条件可诱导体外培养的大鼠VSMCs细胞钙含量增加.电镜下高密度电子致密物呈颗粒状并沿胶原纤维沉积.
作者：王英；王梅 刊期： 2009年第04期
目的 观察益气养阴活血法对再灌注治疗后急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者进行干预的临床疗效,探讨其对梗死部位心肌组织微循环血流的作用.方法 103例接受急诊直接经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗后的AMI患者(Killip Ⅰ-Ⅲ),按照随机、对照、双盲的原则分为2组,治疗组(51例)在西药常规治疗基础上加用益气养阴活血的丹参和西洋参制剂,对照组(52例)在西药常规治疗基础上加用安慰剂,观察2组在治疗3个月后心肌微循环血流灌注的变化.结果 在治疗3个月后,多巴酚丁胺负荷状态下,治疗组左心室射血分数(LVEF)增至68.40%±10.01%,正常心肌百分比(NCMP)增至89.61%±12.00%,A值显著改善的室壁节段数(NA)增至11.53±3.16,组间比较,治疗组LVEF、NCMP、NA均较对照组显著增加(P<0.05);2组治疗前后自身比较,治疗组LVEF值较治疗前增加显著(P<0.05);治疗前后组间比较,治疗组LVEF值与NA值增加大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 益气养阴活血法可以有效改善AMI患者直接PCI术后的心肌微循环血流灌注,对心肌收缩储备改善有一定作用.
作者：仇盛蕾；金玫；朱天刚；权欣；梁燕；史大卓；李永强；易京红；刘红旭 刊期： 2009年第04期
目的 了解健康体检妇女宫颈人乳头瘤状病毒(human papillomavirus,HPV)感染状况和亚型分布,为宫颈癌的防治提供理论依据.方法 对体检女性宫颈脱落细胞应用基因芯片技术进行HPV亚型检测并分析其感染率及年龄分布.结果 400例女性中共检出HPV阳性68例,占总检测人数17.0% .68例中高危型HPV感染者42例,占61.8%;低危型HPV感染者15例,占22.1%;高低危混合HPV感染者11例,占16.1%.阳性患者中高危型以16型为主,占23.5%;其次为66型,占8.8%;低危型以43和11型为主,分别占13.2%和8.8%.在各年龄组中,20～34岁妇女HPV感染率高,为18.2%,≤19岁、≥35岁患者的HPV感染率依次为15.4%和12.7%,受检者各年龄组之间HPV感染率差异无统计学意义.结论 健康体检女性中有相当的比例感染HPV,尤其是高危型.对体检女性进行HPV DNA检测及分型有重要意义.
作者：伍星蓉；朱威；张海萍；连石 刊期： 2009年第04期
目的 观察毫针治疗慢性紧张型头痛的临床疗效.方法 应用随机数字表法将研究对象分为治疗组、对照组共纳入50例病人,治疗组27例,对照组23例,完成随访46例.治疗组针刺头部和辨证远端穴位,对照组接受安慰针刺加服艾司唑仑.针刺治疗每周3次,连续治疗4周,艾司唑仑0.5 mg每晚睡前服用,连续4周.16周后进行随访.结果 治疗组随机分组后第4周、16周时,在头痛天数变化率、头痛天数、头痛时间方面疗效优于对照组(P<0.05),在生活质量改善方面,治疗组仅在2个维度(社会功能、健康状况)得分上优于对照组(P<0.05),在头痛程度、情绪及生活质量等其他6个维度的改善方面组间差异无统计学意义.结论 针刺治疗慢性紧张型头痛安全、不良反应小,疗效优于安慰针刺加服小剂量艾司唑仑.
作者：张路；张琰；刘慧林；刘红；王麟鹏 刊期： 2009年第04期
首都医科大学学报杂志
主管:北京市教育委员会
主办：首都医科大学
