学术投稿

细胞原代培养实验教学的实践与思考

陈萍;郭威;刘丹;刘枫;郑立红

关键词:细胞原代培养, 实验教学, 肾间质成纤维细胞, 实验课, 实验效果, 操作过程, 学生, 无菌操作技术, 离体时间, 细胞生物学, 遗传性状, 形态特征, 细胞形态, 细胞类型, 问题, 体内, 适应性强, 染色, 动手能力, 老师
摘要:所谓原代培养,是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养,也叫初代培养.原代培养离体时间短,遗传性状和体内细胞相似,适于做细胞形态、功能和分化等的研究.我院在大学一年级第1学期细胞生物学实验课中开设细胞原代培养课程,培养小鼠肾间质成纤维细胞.成纤维细胞具有较强的分裂增生能力,适应性强,是容易培养的动物细胞类型之一.一般情况下,只要取材得当,杜绝污染,都能培养成功.虽然成纤维细胞较易培养,但在大学一年级开设细胞原代培养,学生普遍对无菌操作技术较为陌生,动手能力相对较弱,而原代培养操作过程又比较烦琐,学生要在老师的讲授和演示后自己完成整个无菌操作过程,所应用的器材多、步骤多、难度大,不易取得良好的实验效果[1].同时由于学生才学习显微镜的使用不久,观察染色标本尚可,而要观察未经染色的活细胞,难度较大;而实验课的课时又有限,老师没有时间一一指导,有的同学实验课结束后仍不能掌握成纤维细胞的形态特征.在现有条件下,如何在实验课有限的时间内取得良好的实验效果和观察效果,成为实验教学中急需解决的问题.针对教学中所出现的问题,我们进行了有益的尝试,取得了良好的效果.
医学研究杂志相关文献
  • 高年级医学生作为外科标准化病人的培训

    标准化病人又称为模拟病人、病人演员或病人指导者,是指那些经过训练的,以能复制的方式准确地表现实际病人问题的人.它于1968 年早由Barrow(美国) 提出,以后逐渐推广开来,主要用于临床技能的教学与考试,已经成为西方各国医学院校中十分流行的一种教学与考核形式.加拿大、美国及日本等国已经或将在医师执照考试中,在临床技能测试部分使用标准化病人(SP)[1].标准化病人在我国应用还不太广泛,目前仍处于早期探索实践阶段.

    作者:姜秀峰;王志农;刘建民;卓冬兰;徐逸萍;胡小吾 刊期: 2009年第06期

  • 中西医结合治疗病毒性心肌炎的临床观察

    目的 探讨中西医结合治疗病毒性心肌炎的疗效.方法 36例病毒性心肌炎患者随机分为治疗组和对照组.对照组极化液(5%葡萄糖500ml+门冬氨酸钾镁注射液30ml+胰岛素8 U),能量合剂(10%葡萄糖30ml+ATP 20mg+CoA 100 U+维生素C500mg)静脉滴注,每日1次.治疗组在西医常规治疗下,加服中药.结果 治疗组有效率为89.5% , 对照组为76.4% , 两组比较差异有显著性(P<0.05),同时亦观察到治疗组在心肌酶方面显著优于对照组(P<0.05,0.01).结论 中西医合对病毒性心肌炎有较好疗效.

    作者:贾勤 刊期: 2009年第06期

  • 36例肺曲菌球成因、X线分型和临床诊断的探讨

    目的 探讨肺曲菌球的成因、X线分型特征及临床诊断方法.方法 回顾性调查了36例肺曲菌球患者,分析其疾病演变过程、影像学特征和临床诊断技术.结果 全部病例均手术治愈,术后病理证实,诊断符合率77.8% (28例),误诊率22.2%(8例),其中误诊为肺癌4例,肺结核3例,肺炎1例.结论 肺曲菌球病多为继发性疾病,典型的影像学表现有助于明确诊断,确诊需要受累及感染部位的病理学证据和活检标本中培养分离出曲霉菌.

    作者:张卫国;周清华 刊期: 2009年第06期

  • 中西医结合治疗糖尿病肾病的临床观察

    目的 观察中西医结合治疗糖尿病肾病的疗效.方法 45 例糖尿病肾病患者随机分成治疗组和对照组.对照组给厄贝沙坦150mg/d 口服,同时给阿托伐他汀20mg/d 口服;治疗组加服中药.两组均随访3 个月.结果 两组治疗后血肌酐(Scr) 、尿清蛋白排泄率(UAER) 均有改善(对照组P<0.05 ,治疗组P<0.01) ,治疗组效果优于对照组(P<0.05).结论 中西医结合治疗糖尿病肾病能并发挥抗炎作用、减少尿蛋白排泄、改善肾功能、延缓肾功能衰竭的发生.

    作者:王杰方 刊期: 2009年第06期

  • 磷霉素对葡萄球菌生物被膜作用的形态学研究在胸外科的价值

    目的 通过体外葡萄球菌生物被膜(BF)的培养、诱导和观察,研究磷霉素(FOS)对BF的作用.方法 选取临床分离葡萄球菌和质控菌株ATCC25922,ATCC25923采用胰酶肉汤培养基(TSB-teflon)系统和生理盐水(NS-teflon)系统进行BF的培养、诱导和聚焦显微镜观察BF、琼脂二倍稀释法分别测定药物的低抑菌浓度(MIC).结果 经过1、3、7天的孵育,临床分离菌的生物被膜的堆积随着时间的延长而增多;加入磷霉素后生物被膜的生长受到抑制.有无生物被膜组、有无磷霉素组MIC差别显著(P<0.05).结论 磷霉素在体外对葡萄球菌BF有抑制作用.

    作者:于振国;刘洪;袁淦宁;李炽峰;刘小军 刊期: 2009年第06期

  • 麻醉深度指数(CSI)用于老年患者喉罩全麻麻醉深度监测的研究

    目的 研究麻醉深度指数(CSI)复合喉罩技术用于老年患者下腹部手术静脉复合全麻的可行性.方法 择期行经膀胱前列腺电切的老年患者24例,随机分为两组,Ⅰ组通过维持CSI值于40~60左右来调节异丙酚的靶浓度值;Ⅱ组仅凭临床经验来调节异丙酚的靶浓度值.观察记录诱导前(T0)、诱导后喉罩置入前(T1)、喉罩置入时(T2)、电切镜置入时(T3)、手术进行30min时(T4)、术终患者改良镇静清醒评分(OAA/S)≥4分时(T5)6个时间点的心率(HR)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MAP)和CSI.记录异丙酚和舒芬太尼的用量以及麻醉清醒时间,即停用异丙酚至术终患者改良镇静清醒评分(OAA/S)达4分时的时间.结果Ⅰ组平均清醒时间为(9±3)min,Ⅱ组平均清醒时间为(15±6)min,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).Ⅰ组异丙酚的实际用量明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).T3、T4时点Ⅰ组的CSI值明显高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅱ组的SBP、DBP、MAP明显较Ⅰ组低.结论 通过CSI为麻醉深度监测提供量化指标,可有效应用于喉罩通气时的老年患者短小手术静脉复合麻醉,减少麻醉药物的过量使用.

    作者:杨占民;卢兰生;边磊 刊期: 2009年第06期

  • 63例单纯冠状动脉心肌桥临床资料分析

    目的 通过对63例单纯冠状动脉心肌桥的临床资料进行分析,了解心肌桥的临床意义,以便更好地指导诊断和治疗.方法 选择63例单纯心肌桥患者以及63例冠脉造影阴性患者,对两组病例的症状、心电图、运动试验、冠脉造影、治疗情况以及治疗前后C反应蛋白(CRP)变化进行对比分析.结果 心肌桥患者的症状主要表现为胸闷、胸痛多见,心肌耗氧量增加时,症状加重;大部分患者心电图及运动试验阳性,但与桥血管狭窄程度没有明确关系;心肌桥多发现在左前降支;心肌桥治疗方法目前主要以药物为主;经过积极的药物治疗后血清CRP有明显的降低.结论 心肌桥是有重要临床意义的解剖异常,需要正确处理,CRP也同样可以作为心肌桥患者治疗效果的预测指标.

    作者:宗刚军;王霄;吴刚勇;夏阳;张丽;陈满清;陈景开 刊期: 2009年第06期

  • 大剂量沐舒坦在合并COPD患者腹部手术术后的应用

    目的 探讨大剂量沐舒坦在合并COPD患者腹部手术术后的应用价值.方法 60例合并COPD行腹部手术术后的患者随机分成两组,治疗组(n=30)静脉泵注大剂量沐舒坦(330毫克/次,3次/天,连续5天);对照组(n=30)静脉泵注常规剂量沐舒坦(30毫克/次,3次/天,连续5天).比较两组患者给药前及给药后第5天氧合指数、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平、总抗氧化能力(T-AOC);观察记录药物不良反应和肺部术后并发症.结果 治疗组与对照组在给药前及给药后第5天氧合指数、SOD活性、MDA、T-AOC、肺部并发症方面没有显著性差异(P>0.05);对于给药前氧合指数<200mmHg亚组的病人,给药后第5天治疗组(n=10)与对照组(n=8)比较,氧合指数改善明显(P<0.05),SOD活性、MDA、T-AOC等氧化应激指标有显著性差异(P<0.05).结论 在合并COPD病人腹部手术后应用大剂量沐舒坦未能显示明显益处,但对于术后氧合指数低于200mmHg的亚组患者大剂量沐舒坦可以改善氧合,减轻氧化应激.

    作者:陈雷;寇秋野;欧海燕;胡文利 刊期: 2009年第06期

  • 人体寄生虫学实验教学改革与探索

    人体寄生虫学是研究与人类疾病相关的寄生虫的形态结构、生存繁殖规律等的病原生物学科[1],是介于基础医学与临床医学之间的桥梁课程和应用课程,与日常生活联系密切.寄生虫学实验教学目的是培养学生的动手实践能力、严谨的科学作风及提高综合素质等,是寄生虫学教学的重要组成部分.因寄生虫学为非主干学科,学时少而内容多,且我校所处地域寄生虫病相对较少,学生对其重视程度不够,实验教学效果相对不够理想.为提高实验教学质量,针对这种现象并结合近年来现代医学教育技术的发展,笔者及所在教研室尝试对寄生虫学实验教学方式、内容、方法、手段进行改革,取得较好效果.

    作者:全芯 刊期: 2009年第06期

  • 左右背侧丘脑卒中后认知功能障碍比较研究

    目的 比较左右背侧丘脑卒中病人认知功能差异.方法 连续收集2006年6月~2007年6月大连大学中山医院及解放军210医院神经科住院背侧丘脑缺血卒中患者46例为观察组,健康老人46例为对照组.认知心理评估,采用一般情况调查表、韦氏成人智力量表(WAIS)、韦氏记忆量表(WMS)、威斯康星卡片(WCST)、工作记忆课题(trail making test A和test B)等.结果 (1)背侧丘脑卒中组的执行完成分类数(Cc)、执行错误应答数(Re)、执行非持续性错误数(nRpe)、连线作业A、理解记忆得分高于正常对照组(t1~5, -2.455~-10.605;P1~5, 0.000~0.0017).(2)左侧丘脑卒中患者的执行错误应答数(Re)、执行非持续性错误数(nRpe)、连线作业A、理解记忆分值高于正常组( t1~4, -3.423~-5.672;P1~4, 0.000~0.001.(3) 右侧卒中组的执行完成分类数(Cc)、执行错误应答数(Re)、执行非持续性错误数(nRpe)、连线作业A、理解记忆显著高于对照组(t1~5, -2.791~-7.780; P1~5, 0.000~0.020.(4) 词汇测试、理解记忆左侧组高于右侧组(t1=2.603,t2=2.306;P1=0.022,P2=0.038);而倒背右侧高于左侧(t=-0.779;P=0.045).(5) 损伤体积与执行错误应答数(Re)及执行非持续性错误数(nRpe)正相关(r1=r2=0.436, P1=P2=0.037).结论 背侧丘脑卒中引起了执行功能、理解记忆、工作记忆障碍.左右丘脑执行着不同功能.

    作者:王久武;孙月吉;单颖;李倩;郇明明;季晓飞;曲芳;刘辉 刊期: 2009年第06期

  • 食管癌颈部吻合口瘘与感染关系的研究

    目的 探讨导致食管癌颈部吻合口瘘发生的主要原因.方法 为预防颈部切口感染对围手术期的处理进行改进.设定改进前为污染组,改进后为清洁组.两组吻合口瘘发生率的比较采用χ2检验.结果 污染组发生率为12.5%,清洁组发生率为2.4%,χ2=9.258,P=0.002,差异有显著性.结论 颈部切口感染是食管癌颈部吻合口瘘发生的主要原因.

    作者:韩利勋;吉占全 刊期: 2009年第06期

  • 川穹茶调饮联合尼莫地平治疗偏头痛的临床研究

    目的 探讨中西药治疗偏头痛的意义.方法 治疗组54例采取尼莫地平及中药川芎茶调饮加减,采用观察治疗前后4周头痛天数及头痛指数评价治疗前后变化.结果 治疗组显效39例,有效12例,无效3例,总有效率94%,无1例出现头晕、胸闷等症状;对照组显效11例,有效7例,无效9例,总有效率66.7%,7例出现恶心、呕吐症状,9例出现头晕、心慌症状,12例血压在原基础上下降,经统计学处理,两组疗效比较有显著差异(P<0.05).结论 中西药结合治疗偏头痛疗效十分显著,不良反应小,提高了病人日常生活质量.

    作者:郭旭先;陈方焘 刊期: 2009年第06期

  • 宫颈癌患者自然杀伤细胞活性受体NKG2D及其配体MICA表达的初步研究

    目的 研究宫颈癌、CIN及子宫肌瘤患者与正常人外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达及局部组织中相应配体MICA的表达情况,初步探讨NKG2D-MICA在宫颈癌中的抗肿瘤机制和肿瘤免疫逃逸机制.方法 采用流式细胞术检测宫颈癌、CIN及子宫肌瘤患者组与宫颈组织正常组外周血NK细胞NKG2D的表达状况,RT-PCR技术检测各组组织标本中MICA的表达.结果 宫颈癌、CIN及子宫肌瘤患者组与宫颈组织正常组外周血NK细胞受体NKG2D的表达分别为(76.87±9.39)%、(81.84±7.94)%、(86.77±8.68)%、(93.968±4.9)%,各病例组与正常对照组相比,均有统计学意义,但各病例组之间的两两比较无统计学意义.相应配体MICA mRNA的表达率在宫颈癌组织中明显高于正常组和子宫肌瘤组,其差异有统计学意义,而各病例组与对照组相比均有统计学差异. 结论 宫颈癌患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一.NKG2D的配体MICA基因在宫颈癌组织中的表达上调,且随着病变进展其表达有升高趋势,可能与宫颈鳞状上皮损伤向宫颈癌的转化有一定的相关性,宫颈癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MICA的表达升高有关.

    作者:黄瑞;邵淑丽;孙俊宁 刊期: 2009年第06期

  • 体外MTT药敏试验在指导原发性肝癌化疗中的作用

    目的 探讨3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)药敏试验法在指导临床原发肝癌化疗中的作用.方法 45例原发肝癌标本制成单细胞悬液,分为MTT敏感组及经验对照组分别进行细胞培养,MTT敏感组按MTT试验药敏检测结果组成化疗方案给药,经验对照组凭经验及文献用药.计算各药物对肿瘤细胞相对抑制率IR及敏感率,分析结果.结果 (1)肝癌细胞对不同化疗药物的敏感性不同.(2)MTT敏感组肝癌细胞对化疗药物的敏感率明显高于经验对照组肝癌细胞对化疗药物的的敏感率.结论 MTT法对原发性肝癌的评估能为原发性肝癌的个体化疗提供参考.

    作者:张凤梅;李胜水;许华;李双标;刘岩 刊期: 2009年第06期

  • 血小板和同型半胱氨酸与中青年缺血性脑血管病相关性研究

    目的 探讨中青年缺血性脑血管疾病与血小板和血浆同型半胱氨酸(HCY)水平的关系.方法 对82例中青年血小板增多患者分两组,其中48例合并缺血性脑血管疾病、36例无合并症,另有30例为健康对照组,检测其HCY、血小板值、红细胞体积,对结果进行比较分析.结果 脑血管疾病组的同型半胱氨酸水平高于无脑血管疾病组及健康人组,统计学上有显著性差异.结论 对于血小板增多的中青年患者,监测HCY水平,有助于早期诊断和监测中青年缺血性脑血管疾病.

    作者:秦福丽 刊期: 2009年第06期

  • NKT细胞与免疫耐受的研究进展

    自然杀伤T细胞(nature killer T cells, NKT细胞)是一类新型的免疫调节细胞,不仅具有NK细胞的自然杀伤功能,也具有T细胞的免疫调节作用,因此已成为现代免疫学的研究的热点之一.尽管NKT细胞在体内数量相对较少,但种类复杂,功能多样.近年来研究发现,NKT细胞在免疫耐受中也扮演着重要的角色,如可以防止母体妊娠时对胎儿的免疫排斥、抑制自身免疫病的发生、介导器官移植免疫耐受的形成等.本文将对NKT细胞在免疫耐受中的作用的研究进展做一综述.

    作者:芦丽淦;王军朋;卫琮玲 刊期: 2009年第06期

  • 组织胚胎学与临床病例相结合教学改革的实践

    素质教育要求着重培养学生的创新能力和实践能力等各种能力.如何在组织学与胚胎学教学中培养学生的创新性能力等综合能力,以适应迅速发展的社会的需要,是医学教育工作者应该认真思考和研究的重要课题.以问题为基础的学习(problem based learning,PBL)[1],是目前国际公认的能够培养创新性人才的教学模式,在当今世界上一些发达国家(加拿大、美国等)和地区(香港)被广泛应用.组织学与胚胎学是借助于显微镜观察正常人体微细结构的一门重要的基础医学课程.微观形态肉眼看不见,摸不着,名词多、抽象、呆板、难以记忆与掌握,学习难度大;加之传统灌输式的教学,导致学生普遍对学习本课程的积极性不高,兴趣不大,死记硬背,应付考试;因而,教学效果差,直接影响后期课程的学习,更重要的是不利于培养学生的观察力、注意力、思维力和创造力等综合能力[2].为了引导学生明确学习本课程的目的及对学习其他医学课程的重要性,调动学生学习的积极性,提高学习兴趣,激发他们的求知欲.在2006级临床医学专业随机选择1个小班共32人中尝试性的应用了组织胚胎学与临床病例相结合的教学方法.

    作者:李林 刊期: 2009年第06期

  • 住院病人抗菌药物使用状况分析

    目的 调查了解我院住院病人抗菌药物的应用状况,指导临床合理应用抗菌药物.方法 对我院2004年1月~2006年12月全部出院病历抗菌药物使用情况制表分析,采用统计学的方法进行回顾性的调查.结果 共调查病历4003份,其中使用抗生素的有2756例,应用率为68.85%,联合用药1103例,联合用药率为40.02%,手术科室Ⅰ类切口占90.89%,术后用抗菌药物5~7天者占78.85%.在选择用药方面,主要以经验用药为主,占93.72%,不合理用药占25.90%.结论 我院临床抗菌药物使用率明显低于全国平均水平,但还存在用药不规范、超标准超范围用药等现象.

    作者:汪晖;周诗晶;邹本胜;邹本勤 刊期: 2009年第06期

  • 大肠癌靶向治疗进入个体化时代

    一、大肠癌高危人群大肠癌是高危害的消化道恶性肿瘤,发病率已占到常见肿瘤的第4位.2008年大肠癌居上海市恶性肿瘤发病率的第2位.近年来,大肠癌发病率上升趋势十分明显,据统计,我国发病的上升速度远远超过2%的国际水平,直逼5%,每年新发病例高达40万,这其中很多都是30~40岁的中年人.大肠由直肠、升结肠、横结肠、盲肠、降结肠等几个部分组成.大肠癌的发生与环境和个体因素密切相关.在环境因素方面,重要的一个就是饮食习惯,长期食用高脂肪食物会造成大肠癌发病率升高.美国食物中脂肪含量为41%,日本的食物脂肪含量为12%.研究发现,日本人移民到美国之后的第2代和第3代,其大肠癌发病率和当地美国人是一样的,说明大肠癌与人种无关.

    作者:孙燕;沈琳;叶颖江 刊期: 2009年第06期

  • 教学型医学院校学生科研能力培养的探索

    教学型院校多指我国一般的本专科院校,尤其指近年来新建、组建、升格的地方普通本科高校.教学型大学的特色在于应用,在于实践,需要为学生进入社会就业或创业做好准备.教学型本科院校的培养目标,应是面向一线工作的高级应用型人才.

    作者:何浪;王丹;张涛 刊期: 2009年第06期

医学研究杂志

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