李飞;李德新;周广朋
目的:建立实时定量PCR方法检测同一个体两条不同的HLA-C等位基因的表达水平。方法:构建HLAⅠ类等位基因外显子2和3数据库,设计等位基因特异性系列引物,建立等位基因定量PCR方法;在数据库和835例汉族人外周血标本中对方法进行理论和实验验证;检测并比较20对肝癌和癌旁组织标本中HLA-C等位基因的表达水平。结果:本实验设计的20对引物能检测23种杂合基因型中不同的HLA-C等位基因,覆盖汉族人群中出现频率大于0.96%的个体;55%(11/20)的肝癌组织中HLA-C位点两条等位基因表达水平变化不一致。结论:成功建立了针对汉族人群的HLA-C等位基因表达水平的检测方法;肝癌组织中普遍存在着两条HLA-C等位基因表达水平变化不一致的现象。
作者:王文君;陆森;吴士超;缪凤琴;潘宁;张建琼 刊期: 2016年第08期
目的:探讨支原体肺炎患儿外周血CXCL8及其mRNA表达的临床意义。方法:收集2013年10月~2015年3月淮南市妇幼保健院收治的支原体肺炎患儿48例,其中重症12例,轻症36例,以ELISA法检测患儿血清CXCL8含量,PCR法检测患儿外周血单个核细胞内CXCL8 mRNA水平。以GAPDH为参照,以lgcDNA/lgGAPDH比值代表其终mRNA水平。结果:支原体肺炎患儿外周血血清CXCL8含量及外周血单个核细胞内CXCL8 mRNA水平分别为(298.917±51.860) pg/ml、(1.848±0.525)lgcDNA/lgGAPDH,与正常对照相比差异均有显著统计学意义(P<0.05)。进一步观察发现,重症患儿外周血CXCL8及其mRNA进一步升高,与轻症组相比,血清CXCL8含量差异无显著统计学意义统计学意义( P>0.05),而CXCL8 mRNA水平差异有显著统计学意义(P<0.05)。急性期以红霉素静脉注射7~10 d,使患儿病情得以明显控制,咳嗽症状减轻,肺部炎症逐渐改善,病情得到有效控制,再以阿奇霉素序贯治疗2~3周,患儿病情逐步由急性期转为恢复期,此时患儿外周血CXCL8及其mRNA水平明显降低,与急性期相比,差异有显著统计学意义( P<0.05)。结论:支原体肺炎患儿外周血CXCL8及其mRNA表达水平增高,并与病情的严重程度相关。 CXCL8参与支原体肺炎的发病过程,并对病情的轻重程度和转归有一定的提示作用。阿奇霉素可通过抑制肺炎支原体增殖途径降低患儿血清中CXCL8含量、下调CXCL8 mRNA的表达,逐渐抑制由肺炎支原体介导的免疫损伤。
作者:卜小芳;王健;倪宁;田恒忠;祁庆松;孔占一 刊期: 2016年第08期
目的:比较分析磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体的检测结果。方法:分别采用磁微粒化学发光法( A方法)和酶联免疫吸附法( B方法)对166例自身免疫病患者血清、50例健康者血清中抗PR3抗体、抗MPO抗体进行定量检测,对检测结果进行统计分析。结果:A方法测定高、中、低质控血清的批内和批间重复性优于B方法,A、B方法测定质控血清的准确度均符合要求;A、B方法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体临床样本的线性相关系数r分别为0.9878,0.9896;A、B方法的检测结果采用kappa分析,kappa系数分别为0.897和0.882。结论:磁微粒化学发光法( A方法)测定抗PR3抗体、抗MPO抗体优于酶联免疫吸附法( B方法),更符合临床应用要求。
作者:张立娟 刊期: 2016年第08期
沙门菌( Salmonella )属于肠道致病菌,是一种重要的食物源性病原体,其具有广泛感染的宿主谱,在公共卫生方面具有重要的意义。用沙门菌作为重组疫苗的载体具有安全、免疫方式类似自然感染等无可比拟的优越性。弱毒的沙门菌活疫苗可以经口服途径表达传递重组的抗原到机体的黏膜表面,从而诱导机体产生保护性的免疫应答来对抗病原体的感染。近年来,出现的许多令人振奋的医学新发现和新技术都是以减毒的沙门菌作为载体来实现的。本文结合国内外近年来构建的一些沙门菌减毒菌株进行说明,为进一步研制安全高效的沙门菌弱毒疫苗以及将其用作活载体表达外源基因的研究奠定基础。
作者:陈松彪;张春杰;程相朝 刊期: 2016年第08期
目的:观察氯化甲基汞对发育大鼠小脑中 PKCδmRNA及蛋白表达的影响。方法:建立发育大鼠小脑甲基汞损伤实验模型。采用核酸原位杂交方法( In Situ Hybridization , ISH )检测δ型蛋白激酶C( PCKδ) mRNA表达。采用Western blot方法检测PKCδ蛋白表达。结果:实验组和对照组仔鼠在出后就即可检测到小脑蒲肯野细胞PKCδ表达,且随生后时间延长表达水平虽有增高但幅度很小。各实验组仔鼠脑汞含量明显高于对照组,且实验组小脑蒲肯野神经元PKCδmRNA表达阳性率及小脑组织胞浆和胞膜PKCδ蛋白表达水平显著升高( P<0.05)。结论:氯化甲基汞以剂量依赖方式和时间依赖方式促进仔鼠小脑蒲肯野细胞PKCδmRNA及蛋白表达。PKCδ亚类可能是甲基汞介导神经毒作用的关键靶分子。
作者:张宏宇;刘忠山;王铁君;李志超;郭杰 刊期: 2016年第08期
目的:探讨二乙基二硫代氨基甲酸酯( DDC)对婴儿双歧杆菌超氧化物歧化酶( SOD)活性的作用。方法:采用厌氧活化扩增法培养婴儿双歧杆菌,根据绘制出的适生长曲线,在平台生长期内加入不同浓度(200、1000μmol/L)的DDC作用一段时间(0、0.5、1、2、4、24 h),然后离心收集细菌、进行超声破碎,测定细菌裂解液中SOD的活性。作为阳性对照,我们也检测了DDC对小鼠肠道裂解液中SOD活性的影响。结果:我们发现上述不同浓度的DDC作用于婴儿双歧杆菌一定时间后,对其SOD活性无显著影响。动物实验表明DDC作用于小鼠一定时间后,与对照组相比,其SOD 活性显著降低( P<0.01)。结论:DDC影响小鼠体内SOD活性,但不影响婴儿双歧杆菌SOD的活性。推断婴儿双歧杆菌SOD抑制剂不是DDC, SOD抑制剂尚需进一步研究。
作者:罗燕;葛兰;陈红兵;杨平常;刘志刚;杨波 刊期: 2016年第08期
目的:探讨TLR7激动剂(Toll like receptor 7 agonist,Tlr7a)替代IFN-γ体外培养细胞因子诱导杀伤性细胞( Cytokine-induced killer cell ,CIK)抗肿瘤的免疫效应。方法:分离健康人外周血单个核细胞,在体外诱导CIK。分两组:CIK组和Tlr7a-CIK组。对各组分别进行免疫杀伤性研究,检测细胞免疫表型并分析对K562肿瘤细胞的杀伤活性。结果:CD56+细胞在Tlr7a-CIK组显著增加(P<0.05),Tlr7a-CIK组杀伤活性较CIK组显著增强(P<0.05)。结论:Tlr7a可以替代IFN-γ促进CIK细胞杀伤肿瘤。
作者:李旺;陈艳媛;魏志璋;王宇环;罗晓玲;高东 刊期: 2016年第08期
目的:分析中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA-A、HLA-B、HLA-C 基因频率以及HLA 基因分型与疾病进展关系。方法:序列特异性引物的PCR 扩增(PCR-sequence specific primer typing,PCR-SSP)对310 名随机中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA-A、HLA-B、HLA-C 基因进行分型,采用HIV Molecular Immunology Database 中HLA Analysis Tools 方法计算等位基因频率。结果:在北京男男同性恋艾滋病感染者队列中,HLA-A*1101(34.52%)基因频率高,其次为HLA-A*0201(31.94%)、HLA-C*0102(27.10%)以及HLA-A*2402(26.45%)。根据艾滋病感染者1 年内CD4 细胞计数变化来判断感染者是否为快速进展者,结果发现快速进展者134 例,非快速进展者176 例。快速进展者中存在低水平的HLA-B*4403(快速进展者1.12%,非快速进展者为4.27%,P =0.0276),HLA-B*1511(非快速进展者5.98%,快速进展者2.25%,P =0.0282),HLA-B*5701(非快速进展者2.56%,快速进展者0.37%,P=0.0491)表达,而HLA-C*0304 则在快速进展者中高表达(非快速进展者4.56%,快速进展者8.96%,P=0.0319)。结论:本研究获得了中国北京男男同性恋艾滋病感染者HLA-A、HLA-B、HLA-C 基因的等位基因分布频率数据,并发现HLA-B*4403、HLA-B*1511、HLA-B*5701 与延缓艾滋病疾病进展有关,而HLA-C*0304 则与加速艾滋病疾病进展相关。
作者:孙坚萍;孙焕芹;刘宁;刘桂海;丛佳;张永宏 刊期: 2016年第08期
作者:《中国免疫学杂志》编辑部 刊期: 2016年第08期
目的:探讨夏天无注射液参与脑缺血再灌注大鼠神经保护的NF-κB介导机制。方法:随机将雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、夏天无注射液1.0 ml/kg的低剂量组、2.5 ml/kg 的中剂量组、5 ml/kg 的高剂量组及NF-κB 抑制剂(BAY11-7082)组。脑缺血再灌注24 h后,2,3,5氯化三苯基四唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死重量百分比;免疫组织化学技术及Western blot技术检测各组的磷酸化NF-κB表达变化。结果:TTC发现:不同剂量的夏天无注射液及BAY可以减轻脑梗死的总量,其中,高剂量组、中剂量组及抑制剂组之间效果无差异,但三者效果均较低剂量组明显;免疫组化发现:主要在模型组中的海马CA1区细胞核中发现磷酸化NF-κB 表达,而CA3区的表达量较少。 Western blot 检测发现:不同剂量的夏天无注射液可以模拟BAY11-7082的作用,降低磷酸化NF-κB蛋白的表达量。结论:夏天无注射液可能减轻大鼠脑缺血再灌注后梗死程度,其机制可能是通过抑制NF-κB的过度磷酸化。
作者:徐祖才;张莎莎;梁涛;王静;彭燕;张骏 刊期: 2016年第08期
目的:研究生脉注射液联合去甲肾上腺素对多器官功能障碍综合征大鼠细胞免疫的影响。方法:选取40只健康雄性大鼠,通过应用酵母多糖腹腔注射致MODS模型,采用数字表法随机分为对照组、生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及生脉注射液联合去甲肾上腺组,每组10只。用药后6、24、48 h检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-12和IL-2的浓度,免疫组化检测大鼠脾脏caspase-3、caspase-8、caspase-9活性,流式细胞技术测定淋巴细胞凋亡情况及Th1/Th2。结果:①与对照组相比,生脉注射液组、去甲肾上腺组以及联合用药组,TNF、IL-1β浓度上升不是很明显,且随着治疗时间的延长,治疗各组TNF、IL-1β浓度逐渐下降,联合用药组TNF、IL-1β基本趋于正常;而IL-12、IL-2趋势则相反,治疗各组较对照组血清IL-12、IL-2浓度明显升高,联合用药组升高更加明显。②与对照组相比,生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及联合用药组caspase-3、caspase-8、caspase-9表达均显著减少,且联合用药组凋亡蛋白的表达下降更明显,差异有统计学意义( P<0.05)。③生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及联合用药组淋巴细胞凋亡的阳性细胞数比率较对照组明显减少,联合用药组淋巴细胞凋亡的阳性细胞数减少较生脉注射液组以及去甲肾上腺素组更明显;相比于对照组,生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及联合用药组Th1/Th2比率明显增高,联合用药组增高更明显,差异有统计学意义( P<0.05)。结论:生脉注射液联合去甲肾上腺素对多器官功能障碍大鼠具有减轻炎症反应和改善免疫功能的作用。
作者:杨玲;尹春元;吕欣;张贵晨 刊期: 2016年第08期
医学免疫学作为一门重要的基础医学课程,既是生命科学领域的前沿学科,也是一门实践性、综合性很强的临床应用学科[1],其理论和技术已渗透并融入医学各个学科及领域,因此学好免疫学对于医学生来说至关重要。但是免疫学理论抽象、难懂,知识前后交叉,使学生对知识的理解、记忆困难,不易系统全面的掌握,所以被认为是难学的课程之一。而以教师讲授为主的传统教学模式常常使学生出现厌学情绪甚至放弃的想法,那么如何提高教学效果,激发学生学习兴趣,变被动学习为主动学习,是免疫学教学改革亟待解决的问题。
作者:单颖;姜东 刊期: 2016年第08期
目的:探讨木犀草素( Luteolin)的抗I型变态反应的作用机制。方法:通过建立DNP-BSA-IgE激发致敏的大鼠RBL-2H3细胞模型,分别采用MTT法检测不同浓度(5、15、25μmol/L)Luteolin对RBL-2H3肥大细胞活性的影响;ELISA法检测不同浓度Luteolin对RBL-2H3细胞分泌β-hexosa minidase(β-HEX)及细胞因子TNF-α影响;Flou-4AM荧光探针检测细胞内Ca2+浓度变化;Western blot检测AKT,P-AKT的表达。结果:成功建立致敏的细胞模型,低浓度的Luteolin对RBL-2H3细胞活性无明显影响;不同浓度Luteolin刺激RBL-2H3细胞后,对β-HEX和TNF-α的释放抑制作用呈线性相关,且细胞内Ca2+明显减少;Western blot结果显示随着Luteolin浓度的增加AKT磷酸化水平明显下降。结论:Luteolin呈剂量依赖性抑制RBL-2H3肥大细胞脱颗粒,且通过调节细胞内Ca2+浓度与AKT活性参与其中。
作者:余洁;骆晓蓉 刊期: 2016年第08期
目的:检测microRNA-634(miR-634)在肝癌中的表达水平及其对肝癌细胞常见生物学行为的调控作用。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肝癌细胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)、69例肝癌组织及匹配癌旁组织中miR-634的相对定量,分析miR-634表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、Child-Pugh分级、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移的关系,同时构建miR-634的真核表达载体并转染肝癌细胞系,采用活细胞计数试剂盒CCK-8、流式细胞仪Annexin V/PI双染法和Transwell侵袭实验检测转染miR-634对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果:与正常人肝细胞系 L-02相比,肝癌细胞的 miR-634水平均降低( P<0.05),表达量依次为 HepG2>SNU739>Bel7402>Bel7404>SMMC7721;69例肝癌组织的miR-634水平为(0.253±0.019),低于匹配癌旁组织( P<0.05),且与肿瘤直径、分化程度、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移均有关(P<0.05)。过表达组转染24~96 h后的miR-634水平持续升高,与对照组和空转染组的差异有统计学意义( P<0.05);与对照组和空转染组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率均升高,但穿膜细胞数降低,差异有统计学意义( P<0.05)。结论:miR-634在肝癌组织和细胞中均为低表达,且与临床病理参数有关,上调其水平可抑制肝癌细胞增殖及侵袭并诱导凋亡,对于肝癌防治有重要借鉴价值。
作者:李飞;李德新;周广朋 刊期: 2016年第08期
目的:检测前列腺癌患者miRNA-15a的表达情况,探讨其在前列腺癌诊断的意义。方法:选择2014年1月至2015年1月本院泌尿外科收治的前列腺癌患者血清及肿瘤组织36例,良性前列腺增生患者(Prostatic hyperplasia,BPH)血清40例,健康对照血清40例。 miRNA-15a表达采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测。结果:miRNA-15a在前列腺癌患者、良性前列腺增生患者和健康对照血清的表达量分别为(0.193±0.081)、(0.359±0.04)和(0.376±0.037),miRNA-15 a在前列腺癌患者血清中的表达量显著低于良性前列腺增生患者和健康对照( P<0.05),在BPH组和对照组中的表达差异无统计学意义( P>0.05),前列腺癌患者血清miRNA-15 a表达在不同PSA表达水平、Gleason评分、临床分期、有无远处转移之间差异有统计学意义(P<0.05),与其他病理因素无关(P>0.05);前列腺癌患者肿瘤组织中的miRNA-15a的表达与PSA表达水平、Gleason评分、临床分期、有无远处转移之间差异有统计学意义( P<0.05),与其他病理因素无关( P>0.05)。结论:miRNA-15 a低表达参与了前列腺癌的发生、发展过程,是前列腺癌辅助诊断及治疗的潜在的指标。
作者:姚春红;袁新初;刘冲;邓建平 刊期: 2016年第08期
目的:探讨ADAM33基因多态性与青岛地区汉族成人哮喘的相关性。方法:采用SNaPshot方法检测研究对象ADAM33基因rs2280090、rs487377、rs2787094共3个位点的基因多态性。结果:rs2280090、rs487377和rs2787094基因型频率在哮喘组与对照组间差异无统计学意义( P>0.05)。结论:ADAM33基因rs2280090、rs487377和rs2787094多态性与青岛地区汉族成人哮喘无相关关系。
作者:薛卫林;周兆山;王燕青;吉中强;张小燕;梁文华 刊期: 2016年第08期
目的:比较三种不同β受体阻滞剂对小鼠血管瘤(EOMA 细胞)细胞体内外的影响,初步探讨普萘洛尔对小鼠血管瘤的治疗作用及可能机制,为β受体阻滞剂治疗婴幼儿型血管瘤提供参考。方法:体外培养EOMA 细胞,用不同浓度美托洛尔、普萘洛尔、布托沙明作用EOMA 细胞,作用24 h。应用MTT 法检测细胞存活率、吖啶橙染色检测细胞凋亡情况,观察美托洛尔、普萘洛尔、布托沙明对EOMA 细胞体外增殖和凋亡的影响。体内实验将EOMA 细胞移植裸鼠,待肿瘤体积生长至100 mm3 ,将动物随机分为4 组,分别为对照组、美托洛尔组、布托沙明组和普萘洛尔组,药物组按2 mg/(kg?d)灌胃给药,对照组给予等体积的生理盐水(NS),每两天测量肿瘤体积大小。实验结束时收集血清,酶联免疫吸附实验检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达水平。结果:体外实验显示,普萘洛尔作用24 h 后,EOMA 细胞存活率随剂量增加逐渐下降, 50 μmol/L 时有显著差异(P<0.05),药物增加至800 μmol/L,细胞存活率接近10%。吖啶橙染色显示50 μmol/L 时凋亡细胞显著增多。美托洛尔、布托沙明作用24 h 后, 100 μmol/L 时细胞存活率与对照组相比有显著差异(P<0.05), 800 μmol/L 时细胞存活率下降至20%,明显高于相同浓度的普萘洛尔组,存在显著性差异(P<0.05)。吖啶橙染色亦出现相似的规律。体内实验显示,实验结束时美托洛尔、布托沙明小鼠和普萘洛尔药物组的肿瘤体积分别为(1 642.8±89.3)、(1 529.3±119.1)和(752.7±46.5) mm3 ,与对照组小鼠的肿瘤体积(2 023.3±123.07) mm3 相比明显减少(P<0.001)。美托洛尔、布托沙明小鼠和普萘洛尔药物组血清中VEGF 分别水平为(606.5±105.8)pg/ml、(534.3±243.2)pg/ml 和(420.1±123.7) pg/ml,明显低于PBS 对照组的[(825.8±145.7) pg/ml,(P<0.05)],TNF-α结果依次是(301.3±62.3) pg/ml、(305.1±53.8) pg/ml 和(288.8±59.5) pg/ml,明显低于正常对照组[(444±100.4) pg/ml,(P<0.05)]。结论:三种β受体阻滞剂均可在体外有效抑制小鼠血管瘤EOMA 细胞的增殖并促进细胞凋亡普萘洛尔的这一作用较布托沙明和美托洛尔明显。三种β受体阻滞剂不同程度的抑制小鼠血管瘤的生长,其中普萘洛尔的抑制作用明显强于美托洛尔和布托沙明。三种β受体阻滞剂均可降低体内VEGF 和TNF-α的水平。提示普萘洛尔对小鼠血管瘤的作用可能与β1 和β2 受体协同作用有关,其治疗血管瘤的机制可能与VEGF 和TNF-α有关。
作者:徐仙赟;谢琼珺;彭威;宁慧婷;温俊程;王涛;马靓雯;郝彦斌;刘潜 刊期: 2016年第08期
高迁移率族蛋白B1( High mobility group box 1, HMGB1)是20世纪70年代发现的一种蛋白质,因其在电泳时迁移率高而得名[1]。 HMGB1是一种高度保守的单链多肽,含215个氨基酸残基,分子量约30 kD,普遍存在于哺乳动物细胞中。早期研究表明,HMGB1是一种非组蛋白核蛋白,在核内能够识别和结合DNA,参与DNA的转录、复制、修复以及细胞运动等[2]。近年来研究认为, HMGB1还是一种重要的胞外损伤相关分子( Damage-associated molecular pattern,DAMP),在细胞外发挥细胞因子的功能[3],可以启动固有和适应性免疫应答,参与神经系统炎症、肿瘤和自身免疫病等急慢性炎症的发生过程[4-6] 。
作者:张国俊;于莉莉;宋向凤 刊期: 2016年第08期
IL-37作为白细胞介素-1( IL-1)家族的新成员,与IL-1家族成员拥有类似的β链结构。重组IL-37前体通过蛋白酶-1剪切处理后可以转化为成熟的IL-37。 IL-37是目前唯一没有发现鼠同系物的IL-1家族成员。研究人员在骨髓、肝脏、胸腺、肺等组织中均检测到IL-37的表达,并且发现其参与了多种炎症性疾病和免疫性疾病的发生发展。 IL-37对多种类型细胞的免疫反应也发挥了抑制作用。本文将结合近关于IL-37的功能和生物学研究进展,就IL-37在各种疾病中的作用进行综述。
作者:吴万通;丁红梅;冯晓明 刊期: 2016年第08期
医学免疫学是基础医学的重要组成部分,是我国高等医学院校的专业必修课。作为生命科学的前沿学科,医学免疫学的理论和技术发展日新月异,并不断向临床医学和预防医学等多学科渗透,已逐步成为沟通基础医学和临床医学的重要桥梁学科。尽管具有重要的学科地位,但医学免疫学具有理论性强,内容抽象、枯燥等特点,大部分学生认为它是一门让人头疼的学科,大量的免疫学概念,免疫分子、免疫细胞之间的相互作用,以及它们与临床疾病之间的关系,使学生们感到非常难以理解和记忆,因此大部分学生对这门课程都持有一定的恐惧心理,缺乏学习的积极性和主动性,常常靠死记硬背来应付考试。这样的教学效果可想而知,考试结束后很快就把所学知识都还给老师了。因此,在医学免疫学教学中迫切需要寻找适用的教学方法,以提高教学效果。
作者:温伟红;王涛;庄然;宋朝君;马樱;金伯泉;杨琨;杨安钢 刊期: 2016年第08期