薛卫林;周兆山;王燕青;吉中强;张小燕;梁文华
目的:探讨支原体肺炎患儿外周血CXCL8及其mRNA表达的临床意义。方法:收集2013年10月~2015年3月淮南市妇幼保健院收治的支原体肺炎患儿48例,其中重症12例,轻症36例,以ELISA法检测患儿血清CXCL8含量,PCR法检测患儿外周血单个核细胞内CXCL8 mRNA水平。以GAPDH为参照,以lgcDNA/lgGAPDH比值代表其终mRNA水平。结果:支原体肺炎患儿外周血血清CXCL8含量及外周血单个核细胞内CXCL8 mRNA水平分别为(298.917±51.860) pg/ml、(1.848±0.525)lgcDNA/lgGAPDH,与正常对照相比差异均有显著统计学意义(P<0.05)。进一步观察发现,重症患儿外周血CXCL8及其mRNA进一步升高,与轻症组相比,血清CXCL8含量差异无显著统计学意义统计学意义( P>0.05),而CXCL8 mRNA水平差异有显著统计学意义(P<0.05)。急性期以红霉素静脉注射7~10 d,使患儿病情得以明显控制,咳嗽症状减轻,肺部炎症逐渐改善,病情得到有效控制,再以阿奇霉素序贯治疗2~3周,患儿病情逐步由急性期转为恢复期,此时患儿外周血CXCL8及其mRNA水平明显降低,与急性期相比,差异有显著统计学意义( P<0.05)。结论:支原体肺炎患儿外周血CXCL8及其mRNA表达水平增高,并与病情的严重程度相关。 CXCL8参与支原体肺炎的发病过程,并对病情的轻重程度和转归有一定的提示作用。阿奇霉素可通过抑制肺炎支原体增殖途径降低患儿血清中CXCL8含量、下调CXCL8 mRNA的表达,逐渐抑制由肺炎支原体介导的免疫损伤。
作者:卜小芳;王健;倪宁;田恒忠;祁庆松;孔占一 刊期: 2016年第08期
目的:探讨TLR7激动剂(Toll like receptor 7 agonist,Tlr7a)替代IFN-γ体外培养细胞因子诱导杀伤性细胞( Cytokine-induced killer cell ,CIK)抗肿瘤的免疫效应。方法:分离健康人外周血单个核细胞,在体外诱导CIK。分两组:CIK组和Tlr7a-CIK组。对各组分别进行免疫杀伤性研究,检测细胞免疫表型并分析对K562肿瘤细胞的杀伤活性。结果:CD56+细胞在Tlr7a-CIK组显著增加(P<0.05),Tlr7a-CIK组杀伤活性较CIK组显著增强(P<0.05)。结论:Tlr7a可以替代IFN-γ促进CIK细胞杀伤肿瘤。
作者:李旺;陈艳媛;魏志璋;王宇环;罗晓玲;高东 刊期: 2016年第08期
目的:通过构建青霉素诱导的大鼠癫痫动物模型,探讨STAT3及IL-6在青霉素诱导的癫痫大鼠模型中的表达。方法:腹腔注射不同剂量的青霉素,制备癫痫动物模型,观察各组大鼠脑电图及行为学,荧光定量PCR方法检测各组动物IL-6及STAT3的mRNA表达量;ELISA法检测血清中IL-6的分泌量; Western blot检测各组动物STAT3的蛋白表达。结果:500 U/kg和800 U/kg青霉素腹腔注射均出现癫痫行为学发作症状及典型的癫痫脑电波,癫痫发作率为100%;和对照组比较,模型组大鼠IL-6以及STAT3 mRNA水平明显升高,血清中IL-6分泌增加,STAT3蛋白表达水平无显著性差异,但p-STAT3蛋白表达水平显著增加。结论:在青霉素诱导的大鼠癫痫模型中,STAT3及IL-6起着重要的作用。
作者:陈恩;林琳;吕赛平;陈杰妮;陈纯静;邹学森 刊期: 2016年第08期
目的:考察黄连解毒汤含药血清对RAW264.7巨噬细胞自噬的影响,初步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用大、中、小剂量黄连解毒汤水煎剂灌胃干预SD大鼠,制备含药血清;经MTT法观察含药血清对细胞增殖的影响后,选择各剂量浓度为20%的含药血清干预体外培养的巨噬细胞,采用荧光定量PCR方法检测自噬相关基因Beclin1和mTOR的mRNA表达水平;Western blot检测Beclin1、p-mTOR蛋白的表达变化。结果:与正常对照组血清相比,黄连解毒汤含药血清干预后诱导了Beclin1 mRNA及蛋白的表达,抑制了mTOR mRNA及p-mTOR蛋白的表达。结论:黄连解毒汤含药血清可诱导RAW264.7巨噬细胞自噬相关基因Beclin1的表达、抑制mTOR的表达,这可能是该方抗动脉粥样硬化作用的重要机制之一。
作者:于红红;吴玛莉;张智伟;陈瑞;吴云;段智璇;田维毅 刊期: 2016年第08期
作者:《中国免疫学杂志》编辑部 刊期: 2016年第08期
红细胞渗透脆性试验( RBC fragility test )是利用不同浓度的低张氯化钠(Sodium chloride,NaCl)溶液来测定红血球细胞膜渗透压的耐受性。当红血球处于低张溶液中时,水分会移入细胞内,使得红血球膨胀,随着NaCl浓度降低,红血球逐渐胀大破裂而释出血红素,出现溶血( Hemolysis )现象。然而,红血球细胞膜渗透压的耐受性跟细胞表面积与体积比( Surface area to volume ratio ,S/V)有关,S/V 比值较大之红血球对低张溶液的耐受性较高,相反地,比值较小者对低张溶液的耐受性较低,容易导致红血球破裂,即红细胞渗透脆性增加[1,2]。
作者:程群英;邹春标 刊期: 2016年第08期
医学免疫学作为一门重要的基础医学课程,既是生命科学领域的前沿学科,也是一门实践性、综合性很强的临床应用学科[1],其理论和技术已渗透并融入医学各个学科及领域,因此学好免疫学对于医学生来说至关重要。但是免疫学理论抽象、难懂,知识前后交叉,使学生对知识的理解、记忆困难,不易系统全面的掌握,所以被认为是难学的课程之一。而以教师讲授为主的传统教学模式常常使学生出现厌学情绪甚至放弃的想法,那么如何提高教学效果,激发学生学习兴趣,变被动学习为主动学习,是免疫学教学改革亟待解决的问题。
作者:单颖;姜东 刊期: 2016年第08期
目的:获得特异性检测复合前列腺特异性抗原(c-PSA)的单克隆抗体配对,建立基于化学发光c-PSA 免疫定量试剂。方法:利用市购c-PSA 抗原免疫6 周龄雌性BALB/c 小鼠,间接法ELISA 差异筛选抗c-PSA、游离前列腺特异性抗原(f-PSA)、总前列腺特异型抗原(t-PSA)的抗体,抗体配对后化学发光定量检测血清中c-PSA 蛋白。结果:获得抗体配对1A10/7D6-SAE,经c-PSA 标准品及临床血清样本初步筛选,该抗体配对适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;血清阳性样本与阴性样本检测结果显示具有统计学意义(P<0.000 1);阳性样本定量结果与Siemens 公司复合前列腺特异性抗原测定试剂盒(直接化学发光法)的相关系数为0.97;线性范围为0.1 ~100 ng/ml;检测灵敏度为0.005 ng/ml。结论:成功筛选获得特异性检测c-PSA 的抗体配对,并开发c-PSA 化学发光免疫定量试剂,其检测能力与国际主流试剂相当。
作者:詹炉停;温桂平;赵敏;依含;刘江武;郭小怡;林海军;黄刘女;夏宁邵;郑子峥 刊期: 2016年第08期
目的:探讨二乙基二硫代氨基甲酸酯( DDC)对婴儿双歧杆菌超氧化物歧化酶( SOD)活性的作用。方法:采用厌氧活化扩增法培养婴儿双歧杆菌,根据绘制出的适生长曲线,在平台生长期内加入不同浓度(200、1000μmol/L)的DDC作用一段时间(0、0.5、1、2、4、24 h),然后离心收集细菌、进行超声破碎,测定细菌裂解液中SOD的活性。作为阳性对照,我们也检测了DDC对小鼠肠道裂解液中SOD活性的影响。结果:我们发现上述不同浓度的DDC作用于婴儿双歧杆菌一定时间后,对其SOD活性无显著影响。动物实验表明DDC作用于小鼠一定时间后,与对照组相比,其SOD 活性显著降低( P<0.01)。结论:DDC影响小鼠体内SOD活性,但不影响婴儿双歧杆菌SOD的活性。推断婴儿双歧杆菌SOD抑制剂不是DDC, SOD抑制剂尚需进一步研究。
作者:罗燕;葛兰;陈红兵;杨平常;刘志刚;杨波 刊期: 2016年第08期
目的:研究生脉注射液联合去甲肾上腺素对多器官功能障碍综合征大鼠细胞免疫的影响。方法:选取40只健康雄性大鼠,通过应用酵母多糖腹腔注射致MODS模型,采用数字表法随机分为对照组、生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及生脉注射液联合去甲肾上腺组,每组10只。用药后6、24、48 h检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-12和IL-2的浓度,免疫组化检测大鼠脾脏caspase-3、caspase-8、caspase-9活性,流式细胞技术测定淋巴细胞凋亡情况及Th1/Th2。结果:①与对照组相比,生脉注射液组、去甲肾上腺组以及联合用药组,TNF、IL-1β浓度上升不是很明显,且随着治疗时间的延长,治疗各组TNF、IL-1β浓度逐渐下降,联合用药组TNF、IL-1β基本趋于正常;而IL-12、IL-2趋势则相反,治疗各组较对照组血清IL-12、IL-2浓度明显升高,联合用药组升高更加明显。②与对照组相比,生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及联合用药组caspase-3、caspase-8、caspase-9表达均显著减少,且联合用药组凋亡蛋白的表达下降更明显,差异有统计学意义( P<0.05)。③生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及联合用药组淋巴细胞凋亡的阳性细胞数比率较对照组明显减少,联合用药组淋巴细胞凋亡的阳性细胞数减少较生脉注射液组以及去甲肾上腺素组更明显;相比于对照组,生脉注射液组、去甲肾上腺素组以及联合用药组Th1/Th2比率明显增高,联合用药组增高更明显,差异有统计学意义( P<0.05)。结论:生脉注射液联合去甲肾上腺素对多器官功能障碍大鼠具有减轻炎症反应和改善免疫功能的作用。
作者:杨玲;尹春元;吕欣;张贵晨 刊期: 2016年第08期
高迁移率族蛋白B1( High mobility group box 1, HMGB1)是20世纪70年代发现的一种蛋白质,因其在电泳时迁移率高而得名[1]。 HMGB1是一种高度保守的单链多肽,含215个氨基酸残基,分子量约30 kD,普遍存在于哺乳动物细胞中。早期研究表明,HMGB1是一种非组蛋白核蛋白,在核内能够识别和结合DNA,参与DNA的转录、复制、修复以及细胞运动等[2]。近年来研究认为, HMGB1还是一种重要的胞外损伤相关分子( Damage-associated molecular pattern,DAMP),在细胞外发挥细胞因子的功能[3],可以启动固有和适应性免疫应答,参与神经系统炎症、肿瘤和自身免疫病等急慢性炎症的发生过程[4-6] 。
作者:张国俊;于莉莉;宋向凤 刊期: 2016年第08期
目的:探究前期合成的含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂CH2b 对葡萄糖-6-磷酸异构酶( Glucose-6-phosphate isomerase,GPI)混合肽段诱导的类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)小鼠发病的影响。方法:hGPI325-339、hGPI469-483多肽片段与完全弗氏佐剂充分乳化后,于DBA/1小鼠尾根部多点皮下注射,并用百日咳毒素加强免疫。然后分别用α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)和CH2b对模型小鼠进行干预,监测各组小鼠体重变化和足踝关节肿胀变化情况,关节组织苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色法观察炎细胞浸润情况,流式细胞技术(Fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测全血中iNKT细胞频率变化,微量样本多指标流式蛋白定量技术(Cytometric bead array,CBA)检测血清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-4、IFN-γ水平。结果:与GPI混合肽段诱导的模型组相比,α-GalCer和免疫调节剂CH2b均可显著改善模型小鼠的体重增长缓慢、关节肿胀情况(P<0.05);炎性细胞浸润减少;且二者均可以显著提高RA小鼠体内iNKT细胞的频率,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);α-GalCer、CH2b组可以降低模型小鼠炎症高峰期TNF-α、IL-6、IFN-γ水平,两组结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:免疫调节剂CH2b通过激活iNKT细胞影响炎性细胞因子的分泌,缓解GPI混合肽段诱导的关节炎。
作者:刘嘉琳;张雪娇;杨飞;娄永富;孟明;陈冬志 刊期: 2016年第08期
目的:探讨淫羊藿和女贞子提取物对骨质疏松症( OP)大鼠性激素功能水平的影响。方法:50只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、提取物低剂量组、提取物中剂量组、提取物高剂量组共5组,每组10只,除正常组外,其他4组以维甲酸灌喂15 d制作OP模型,造模成功后正常组和模型组灌服生理盐水,提取物低剂量组、中剂量组和高剂量组分别按50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg灌服淫羊藿和女贞子提取物混合物,均持续3周。测量各组骨密度(BMD),左侧股骨切片采用苏木精和伊红( HE)染色观察股骨病理学改变并测定骨小梁组织形态相关参数,免疫组织化学分析激素受体蛋白表达。结果:正常组股骨全部、股骨上端、股骨下端BMD显著高于模型组,提取物中剂量组和高剂量组股骨全部、股骨上端、股骨下端BMD显著高于模型组,提取物低剂量组股骨全部BMD显著高于模型组,差异均有统计学意义( P<0.05或P<0.01);与模型组比较,提取物各组骨小梁数量有了显著增加,完整性、连续性明显好转,相关参数比较结果显示,正常组Tb.N、Tb.Ar、Tb.Th显著大于模型组,Tb.Sp显著小于模型组,提取物中剂量组和高剂量组Tb.N、Tb.Ar、Tb.Th显著大于模型组,Tb.Sp显著小于模型组,提取物低剂量组,Tb、Ar、Tb、Th显著大于模型组,差异均具有统计学意义( P<0.05或P<0.01);正常组AR、ER蛋白表达量明显高于模型组,而提取物高剂量组AR、ER蛋白表达量较模型组显著上升,差异有统计学意义( P<0.05或P<0.01)。结论:淫羊藿和女贞子提取物能够增加维甲酸诱导的OP大鼠BMD,逆转骨组织病理结构,上调性激素受体蛋白表达,对维甲酸诱导的OP大鼠具有潜在的保护作用。
作者:李凝旭;涂艳;沈莹;覃艳琼;雷超;柳湘洁 刊期: 2016年第08期
目的:观察氯化甲基汞对发育大鼠小脑中 PKCδmRNA及蛋白表达的影响。方法:建立发育大鼠小脑甲基汞损伤实验模型。采用核酸原位杂交方法( In Situ Hybridization , ISH )检测δ型蛋白激酶C( PCKδ) mRNA表达。采用Western blot方法检测PKCδ蛋白表达。结果:实验组和对照组仔鼠在出后就即可检测到小脑蒲肯野细胞PKCδ表达,且随生后时间延长表达水平虽有增高但幅度很小。各实验组仔鼠脑汞含量明显高于对照组,且实验组小脑蒲肯野神经元PKCδmRNA表达阳性率及小脑组织胞浆和胞膜PKCδ蛋白表达水平显著升高( P<0.05)。结论:氯化甲基汞以剂量依赖方式和时间依赖方式促进仔鼠小脑蒲肯野细胞PKCδmRNA及蛋白表达。PKCδ亚类可能是甲基汞介导神经毒作用的关键靶分子。
作者:张宏宇;刘忠山;王铁君;李志超;郭杰 刊期: 2016年第08期
医学免疫学是基础医学的重要组成部分,是我国高等医学院校的专业必修课。作为生命科学的前沿学科,医学免疫学的理论和技术发展日新月异,并不断向临床医学和预防医学等多学科渗透,已逐步成为沟通基础医学和临床医学的重要桥梁学科。尽管具有重要的学科地位,但医学免疫学具有理论性强,内容抽象、枯燥等特点,大部分学生认为它是一门让人头疼的学科,大量的免疫学概念,免疫分子、免疫细胞之间的相互作用,以及它们与临床疾病之间的关系,使学生们感到非常难以理解和记忆,因此大部分学生对这门课程都持有一定的恐惧心理,缺乏学习的积极性和主动性,常常靠死记硬背来应付考试。这样的教学效果可想而知,考试结束后很快就把所学知识都还给老师了。因此,在医学免疫学教学中迫切需要寻找适用的教学方法,以提高教学效果。
作者:温伟红;王涛;庄然;宋朝君;马樱;金伯泉;杨琨;杨安钢 刊期: 2016年第08期
目的:建立实时定量PCR方法检测同一个体两条不同的HLA-C等位基因的表达水平。方法:构建HLAⅠ类等位基因外显子2和3数据库,设计等位基因特异性系列引物,建立等位基因定量PCR方法;在数据库和835例汉族人外周血标本中对方法进行理论和实验验证;检测并比较20对肝癌和癌旁组织标本中HLA-C等位基因的表达水平。结果:本实验设计的20对引物能检测23种杂合基因型中不同的HLA-C等位基因,覆盖汉族人群中出现频率大于0.96%的个体;55%(11/20)的肝癌组织中HLA-C位点两条等位基因表达水平变化不一致。结论:成功建立了针对汉族人群的HLA-C等位基因表达水平的检测方法;肝癌组织中普遍存在着两条HLA-C等位基因表达水平变化不一致的现象。
作者:王文君;陆森;吴士超;缪凤琴;潘宁;张建琼 刊期: 2016年第08期
目的:研究HSP70-TKD诱导的自然杀伤细胞( NK)体外对细胞表面HSP70表达不同的胰腺癌细胞和结肠癌细胞的迁移作用差异。方法:用干细胞培养基富集人外周血单个核细胞( Peripheral blood mononuclear cell ,PBMC)至第10天加入2μg/ml TKD,4 d后用流式细胞仪检测NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达情况;应用流式分选将胰腺癌细胞系Colo357和结肠癌细胞系CW2分为HSP70高表达细胞亚系Colo+、CW2+和HSP70低表达细胞亚系Colo-、CW2-;Transwell小室实验检测HSP70-TKD诱导的NK细胞对这4种细胞的迁移能力,MTT法检测HSP70-TKD诱导的NK细胞对这4种细胞的杀伤活性。结果:流式结果显示 NK细胞在干细胞培养基中培养14天可大量增殖,细胞纯度高达(92.50±1.25)%;经HSP70-TKD诱导后,NK细胞表面杀伤性受体CD94/NKG2C的表达明显增加;经流式分选后,Colo+、Colo-细胞表面HSP70的表达分别为(78.2±2.2)%和(27.3±1.2)%,而CW2+、CW2-细胞表面HSP70的表达分别为(91.1±2.5)%和(18.2±1.0)%;HSP70-TKD诱导的NK细胞对Colo+迁移率为(68.6±2.8)%,明显高于对Colo-的迁移率(22.8±1.5)%,NK细胞对CW+迁移率为(73.5±2.7)%,明显高于对CW2-的迁移率(18.2±1.3)%;HSP70-TKD诱导的NK细胞对Colo+、Colo-的杀伤活性有显著性差异,当效靶比为20∶1时,杀伤活性分别为(61.2±3.0)%、(24.5±1.5)%, NK对CW2+、CW2-的杀伤活性有显著性差异,当效靶比为20∶1时,杀伤活性分别为(63.8±3.2)%、(22.4±1.8)%。结论:HSP70-TKD诱导的NK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞,在体外易向HSP70表达阳性的肿瘤细胞迁移。
作者:汪相如;陈蓉明;龚福生;应敏刚;郑秋红 刊期: 2016年第08期
目的:探讨模型UC大鼠血中前列腺素-E2(PG-E2)、白三烯B4(LT-B4)、血小板活化因子(PAF)及血管内皮生长因子( VEGF)的水平,及经过美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脱石散治疗干预后上述四个因子的变化情况,以了解这四个炎性因子在模型UC大鼠血中的意义及上述三种药物对这四个炎性因子的干扰效果。方法:将100只大鼠随机分成正常组、模型组、美沙拉秦组、酪酸梭菌组、蒙脱石散组,用酶联免疫吸附试验分别检测各组小鼠血中第12天血中的PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF的含量,并进行统计学分析。结果:①模型组、美沙拉秦组、酪酸梭菌组、蒙脱石散组较正常组的DAI及血清PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF含量均升高,差异有统计学意义( P<0.05)。②与模型组比较,美沙拉秦组、酪酸梭菌组、蒙脱石散组的DAI及血清PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF含量均降低,差异有统计学意义( P<0.05)。③美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脱石散的治疗效果比较,美沙拉秦及蒙脱石散疗效较好,差异有统计学意义( P<0.05) ,美沙拉秦与蒙脱石散疗效无差异。结论:①在TNBS/乙醇法诱导的UC大鼠血清中PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF表达增高,与炎症呈正相关。②美沙拉秦、酪酸梭菌、蒙脱石散可下调模型大鼠促炎因子PG-E2、LT-B4、PAF、VEGF的表达,这可能与UC大鼠肠道炎症的缓解,促进大鼠UC的恢复有关。
作者:何山;刘凯;黄永坤 刊期: 2016年第08期
目的:研究柚皮苷对人宫颈癌Hela细胞体外增殖的影响及相关机制研究。方法:用不同浓度的柚皮苷处理体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用 MTT法检测处理24、48、72 h后Hela 细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率, Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况,同时Western blot观察环氧合酶-2(COX-2)表达的相对量。结果:与对照组相比,柚皮苷低剂量组细胞抑制率无显著差异( P>0.05),柚皮苷中剂量组和高剂量组细胞抑制率显著增高( P<0.05);柚皮苷低剂量组细胞凋亡率无显著差异(P>0.05),柚皮苷中剂量组和高剂量组细胞凋亡率显著增高(P<0.05),同时柚皮苷中剂量和高剂量组可观察到明显的细胞凋亡现象;柚皮苷低剂量组细胞COX-2表达的相对量无显著差异( P>0.05),柚皮苷中剂量组和高剂量组细胞COX-2表达的相对量显著降低( P<0.05);结论:柚皮苷能抑制宫颈癌细胞生长,且随其浓度增加抑制作用增强,其机制可能与其抑制COX-2蛋白表达,促进细胞凋亡相关。
作者:杨文静;王璐;孙锐 刊期: 2016年第08期
目的:比较分析磁微粒化学发光法与酶联免疫吸附法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体的检测结果。方法:分别采用磁微粒化学发光法( A方法)和酶联免疫吸附法( B方法)对166例自身免疫病患者血清、50例健康者血清中抗PR3抗体、抗MPO抗体进行定量检测,对检测结果进行统计分析。结果:A方法测定高、中、低质控血清的批内和批间重复性优于B方法,A、B方法测定质控血清的准确度均符合要求;A、B方法测定抗PR3抗体、抗MPO抗体临床样本的线性相关系数r分别为0.9878,0.9896;A、B方法的检测结果采用kappa分析,kappa系数分别为0.897和0.882。结论:磁微粒化学发光法( A方法)测定抗PR3抗体、抗MPO抗体优于酶联免疫吸附法( B方法),更符合临床应用要求。
作者:张立娟 刊期: 2016年第08期