学术投稿

蛋白磷酸酶LY1基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

彭万仁;陈兵;倪芳;鲁云霞;郑红;李菲菲;汪思应

关键词:基因, 蛋白, 基因表达
摘要:目的 构建蛋白磷酸酶LY1基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法 PCR扩增LY1的CDs基因片段,并将其克隆人原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)-LY1.经限制性内切酶Nhe Ⅰ、XhoⅠ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.SDS-PAGE、Western blot方法检测重组蛋白的表达.结果 获得全长为1 179 bp的LY1基因片段,以构建的重组质粒pET28a(+)-LY1转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出分子量约为42 kD的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中.Western blot方法检测出LY1融合蛋白的表达.结论 成功构建了原核表达载体pET28a(+)-LY1,并表达出重组LY1蛋白,为进一步单克隆抗体的制备和生物信号转导的相关研究奠定了实验基础.
中华疾病控制杂志相关文献
  • 随州市2001~2006年健康人群流行性脑脊髓膜炎监测结果分析

    目的 了解随州市近年来流脑的流行趋势及人群免疫水平,预防和控制流脑的流行.方法 对2001~2006年随州市健康人群进行流行性脑脊髓膜炎抗体水平和带菌率进行了分析.结果 随州市监测期内未出现流脑病例;健康人群带菌率为5.17%,以B群为主;人群A群抗体阳性率93.51%,GMT为11.53;A+C流脑疫苗免疫前GMT为1.62,抗体阳性率2.76%,免疫后GMT为14.93,抗体阳性率93.66%.结论 近几年内随州市出现A群流脑流行的机率很小;A+C流脑疫苗接种后,人群对C群流脑有了一定的抵抗力,但要继续做好流脑监测工作,密切关注流脑流行菌株的变迁,预防和控制流脑的流行.

    作者:郭芳;刘晓辉;蒋冰;彭斌;黄晓敏;王永光;聂绍发 刊期: 2007年第05期

  • 血清蛋白质谱在单纯性室间隔缺损诊断中的应用

    目的 通过构建血清诊断模型,探讨血清蛋白质谱在诊断单纯性室间隔缺损中的意义.方法 采用病例对照研究设计,用CM10蛋白质芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿、85例儿科常见病患儿及23例其他先天性心脏病患儿血清,筛选血清差异蛋白,并构建诊断模型.结果 完整模型ROC曲线下面积、预测准确率、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为0.988、95.00%、100.00%、92.42%、87.18%和100.00%,简化模型ROC曲线下面积、预测准确率、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为0.948、94.00%、88.24%、96.97%、93.75%和94.12%.简化模型与完整模型之间预测准确率、灵敏度及特异度比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 利用血清蛋白质谱建立的诊断模型能够较好地区分病例与对照,对诊断室间隔缺损具有一定的发展和应用前景.

    作者:仇小强;李永红;曾小云;钟秋安 刊期: 2007年第05期

  • 5097例被监管人员HIV抗体检测结果分析

    既往的调查表明,重庆市艾滋病传播的主要途径为静脉吸毒[1].监管场所是吸毒人员较为集中的地方,为及时了解监管场所HIV感染状况,为今后制定相应的防治措施提供依据.现将梁平县2005年12月以来共监测的5 097例被监管人员HIV抗体检测资料分析如下.

    作者:张明泽 刊期: 2007年第05期

  • 蛋白磷酸酶LY1基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

    目的 构建蛋白磷酸酶LY1基因的原核表达载体,并在E.coli BL21(DE3)中表达.方法 PCR扩增LY1的CDs基因片段,并将其克隆人原核表达载体pET28a(+)中构建重组质粒pET28a(+)-LY1.经限制性内切酶Nhe Ⅰ、XhoⅠ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白.SDS-PAGE、Western blot方法检测重组蛋白的表达.结果 获得全长为1 179 bp的LY1基因片段,以构建的重组质粒pET28a(+)-LY1转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出分子量约为42 kD的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coli BL21(DE3)的胞质中.Western blot方法检测出LY1融合蛋白的表达.结论 成功构建了原核表达载体pET28a(+)-LY1,并表达出重组LY1蛋白,为进一步单克隆抗体的制备和生物信号转导的相关研究奠定了实验基础.

    作者:彭万仁;陈兵;倪芳;鲁云霞;郑红;李菲菲;汪思应 刊期: 2007年第05期

  • 蒙古族人群高血压危险因素的探讨

    目的 了解蒙古族人群高血压的患病情况并探索其危险因素.方法 选取内蒙古科左后旗朝鲁吐苏木(乡)10个村15岁及15岁以上的人群为调查对象,采取普查方法.运用Excel、SAS软件对资料进行统计分析.结果 蒙古族人群高血压患病率为28.18%,随年龄的增长而高升.11个变量经单因素非条件logistic回归分析有8个变量可能与高血压有关,再对这8个变量进行多因素logistic逐步回归分析筛选出高血压家族史、年龄、腰臀围比值(WHR)、打鼾、饮酒5个变量具有统计学意义.结论 高血压家族史、年龄、肥胖、打鼾、饮酒可能是蒙古族高血压的危险因素.

    作者:王华;张永红;滕国兴 刊期: 2007年第05期

  • IL-10-592A/C基因多态性与慢性牙周炎的关系

    目的 探讨IL-10启动子区基因多态性与重度慢性牙周炎易感性的关系.方法 收集142名重度慢性牙周炎患者和81名健康对照者的颊粘膜拭子,提取DNA,采用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测IL-10-592C/A基因多态性,比较重度慢性牙周炎患者和健康对照组中等位基因频率和基因型分布.结果 IL-10-592C/A等位基因频率和基因型分布在患者和对照组之间差异无统计学意义(OR=1.377,P>0.05).结论 IL-10-592C/A基因多态性与重度慢性牙周炎遗传易感性之间无相关关系.

    作者:唐燕;张蕴惠;章锦才 刊期: 2007年第05期

  • 社区感染性疾病的防治

    2005年初,大庆市第五医院成立了感染疾病科,并依据社区人群居住地较分散的特点成立了6个社区服务中心.几年来,在医疗实践中深刻体会到感染性疾病的管理与社区服务相结合,在感染性疾病和突发公共卫生事件应用急控制过程中效果显著.

    作者:刘玉华 刊期: 2007年第05期

  • 第四届全国伤害预防与控制学术会议召开

    作者:王声湧 刊期: 2007年第05期

  • 湖北省推广实施娱乐场所100%安全套使用项目效果评价与分析

    目的 了解湖北省推广实施娱乐场所100%安全套使用项目(100%CUP)及其效果,提出完善及改进的建议,为普遍深入开展100%CUP提供参考依据.方法 对商业性行为女性群体(CSW)实施综合的干预措施,促进安全套使用,并在1 a干预前后随机抽样问卷调查测试.结果 推广实施100%CUP 1 a后,CSW对艾滋病的传播与预防相关知识知晓率显著提高(x2>13,P<0.01),CSW今后愿意使用安全套的比例由88.0%上升到95.4%(x2=210.10,P<0.01),近1次与嫖客发生性关系时安全套使用率由68.5%上升到83.0%(x2=315.34,P<0.01),近1个月与嫖客发生性关系时安全套使用率由32.3%上升到48.4%(x2=298.10,P<0.01),去公立医院就诊的比例由38.8%上升到42.4%,安全套销量增长18.6%.结论 湖北省大范围推广实施100%CUP策略及方法是有效可行的,同时,要进一步完善和改进实施100%CUP策略和措施,以提高干预覆盖面和效果.

    作者:姚中兆;许骏;丁洁;孙必高;罗莉;王红方;周旺 刊期: 2007年第05期

  • 安徽农村既往有偿供血地区居民艾滋病相关歧视调查

    目的 了解农村既往有偿供血地区居民对艾滋病感染者与患者相关歧视的现状,为寻求降低歧视的方法提供科学依据.方法 选择安徽省皖北某县12个存在既往有偿供血的村庄,由经过培训的调查员入户对395名农村居民进行问卷调查.结果 在农村既往有偿供血地区居民艾滋病非传播途径知识知晓程度较低,歧视仍较普遍,主要表现为不购买PLWHA家庭生产的食品或副食品(54.50%),不让PLWHA家小孩和自己家小孩一起玩耍(44.70%).引起歧视的主要原因中,89.32%的居民认为是基于对疾病缺乏了解、恐惧;92.50%的居民认为是因为艾滋病无法治愈的事实;有43.40%的人认为是有关艾滋病传播的传说、偏见.结论 农村既往有偿供血地区艾滋病知识知晓仍存在着误区及相关歧视,降低对AIDS患者歧视应作为今后AIDS健康教育的宣传工作重点,其中艾滋病非传播途径知识是艾滋病宣传教育的重点内容.

    作者:孙国梅;潘凯;肖锦铖 刊期: 2007年第05期

  • 神经肽Y受体2基因多态性对苯那普利降压疗效的影响

    目的 探讨神经肽Y受体2(neuropeptide Y receptor 2,NPY2R)基因多态性对苯那普利降压疗效的影响.方法 选取中国安徽某两地区共422名原发性高血压患者,服用苯那普利,每日10 mg,追踪观察16 d.分析苯那普利的降压疗效和NPY2R基因多态性的关系.结果 ①苯那普利13 d治疗后NPY2R Ile312Ile(T/C)突变组人群的舒张压下降要高于野生型组人群(校正前β±SE:2.28±1.07 mmHg,P=0.0338,校正后β±SE:2.72±0.98 mmHg,P=0.0056);②经过16 d的治疗后突变组人群的舒张压下降要高于野生型组人群(校正前β±SE:2.07±1.29 mmHg,P=0.1092,校正后β±SE:2.48±1.20 mmHg,P=0.0386);③NPY2R两种基因型人群的舒张压的下降值在治疗过程的前13 d基本一致,但此后两种基因型的舒张压降压疗效出现差异,突变组血压下降值高于野生型.结论 原发性高血压人群经过苯那普利13 d治疗后,NPY2R基因多态性和舒张压的降压疗效相关,其突变型(TC+CC)的降压疗效比野生型(TT)好,且基因型间存在药物时效性差异.

    作者:文育锋;臧桐华;徐希平 刊期: 2007年第05期

  • 江苏省结核分枝杆菌14个VNTRs位点的基因分型研究

    目的 了解江苏省结核分枝杆菌的VNTRs基因分型,发现江苏省流行的结核分枝杆菌的优势菌株,及不同地区流行菌株的基因型别差异.方法 选择结核分枝杆菌基因组中14个具有明显多态性特征的VNTRs位点,对江苏省13个市的235株结核分枝杆菌进行VNTR-PCR扩增,通过聚类分析对菌株进行VNTRs基因分型.结果 235株结核分枝杆菌菌株共分为8个基因型(Ⅰ~Ⅷ),其中以Ⅱ型为主要的基因型,占49.4%,其次是Ⅰ和Ⅴ型,分别占总数的22.6%和18.7%.不同地区结核分支杆菌VNTRs基因型别分布有统计学意义(P<0.001),其中Ⅴ型主要分布在苏北(占90.9%),而Ⅰ型在苏南的分布明显高于苏北.结论 江苏省的结核分枝杆菌具有明显的VNTRs多态性,Ⅱ型为江苏全省流行的优势菌株,约占全部菌株的1/2,但不同地区流行菌株的基因型别存在明显差异.

    作者:陆伟;万康林;杨丹丹;章体慧;周扬;虞浩;许卫国;汪华 刊期: 2007年第05期

  • 李金斯坦(Lichtenstein)无张力疝成型术治疗老年腹股沟疝77例临床观察

    老年人腹股沟疝发病率较高,因其结构和病理生理特点,应用传统手术方式,术后复发率较高.安徽省桐城市中医医院自2004年12月~2006年12月对77例老年腹股沟疝患者采用李金斯坦无张力疝成型术,取得满意效果.报告如下:

    作者:赵冰清 刊期: 2007年第05期

  • 补充维生素C和E对中老年人机体抗氧化功能的影响

    目的 了解补充抗氧化营养素对中老年人血清SOD与MDA水平的改善情况及其对机体抗氧化功能的影响.方法 采用多级抽样方法,抽取年龄为40~70岁的中老年者97人为干预组,对其开展为期6个月的营养素补充干预;同时抽取同年龄段中老年者95人为对照组,不加以任何干预措施.6个月后对两组进行血清学检测分析.结果 干预组男性和女性的SOD、MDA与LDL含量与对照组相比,差异均有显著性(P<0.05);干预组的中年组和老年前期组SOD含量高于对照组,MDA和LDL含量均低于对照组,且两组间SOD、MDA差异均有显著性(P<0.05);干预组老年组SOD含量高于对照组,MDA与LDL含量均低于对照组,差异均无显著性(P>0.05).结论 抗氧化营养素干预应从中年开始,补充抗氧化营养素VE、VC可改善机体抗氧化功能.

    作者:刘淮玉;吴建华;姚宗蓓;吕静;葛振涛;盛大膺;丁峰;何兵;袁利民 刊期: 2007年第05期

  • 《伤害流行病学现场研究方法》出版发行

    作者: 刊期: 2007年第05期

  • 海岛社区居民伤害现况调查

    目的 调查海岛县(南澳县)居民伤害发生的现况,为社区伤害的防制工作提供科学依据.方法 根据世界卫生组织推荐的社区调查方案,随机选择512户1 638名社区居民,对其过去1 a内伤害发生情况进行入户问卷调查.结果 16个社区居民在1 a里共发生各类伤害754人次,总发生人次率为43.28%.伤害发生率前3位依次为钝/锐器伤、跌倒/坠落、烧烫伤.发生伤害的男性(421人次,占55.84%)是女性(333人次,占44.16%)的1.26倍,且男性伤害发生率明显高于女性(P=0.001).男/女性均是钝/锐器伤的发生率高.男性钝/锐器伤的发生率高于女性,64.52%发生在31~55岁,45.50%发生于农牧渔水利生产人员(其中渔民占63.60%).跌倒/坠落伤多发生在1~15岁、41~55岁及60岁以上,47.19%发生于学龄前儿童和学生.女性烧烫伤的发生率高于男性,46.1596发生于做家务的人群.结论 海岛县城农牧渔水利生产人员是伤害高发人群,政府部门应针对当地伤害发生特点尽快制定并实施相应的预防策略与措施.

    作者:赵丹;李丽萍;林文杰;吴宜群 刊期: 2007年第05期

  • 健康教育对产程影响的临床观察

    妊娠、分娩是妇女一个自然正常的生理过程.目前,我国实行计划生育,绝大部分产妇是初产妇,'由于缺乏对分娩的直接体验,以及社会媒体对分娩痛苦不适当的宣传,产妇在分娩期常产生显著的心理变化.在问卷测查中表明,产妇入院后都存在不同程度的焦虑与恐惧,这会使产程延长,而产程延长又与新生儿窒息、感染等围产期并发症有关.因此,调整产妇的心理状态对缩短产程、降低围产期母婴患病率影响甚大.

    作者:李玉春 刊期: 2007年第05期

  • 舟山海岛1953~2006年传染病演变动态研讨

    普陀区位于浙江省东北部、舟山群岛东南部,全区由454个大小岛屿组成,人口32万,外来人口约12万.为了解普陀区传染病的演变动态,探索在不同时期传染病发病规律,掌握传染病的流行特征和影响因素,评价防治措施对传染病流行的影响,以及为今后制定相应的防治对策提供科学依据,现将普陀区1953~2006年传染病演变动态情况报告如下.

    作者:张世宏;王国荣 刊期: 2007年第05期

  • 秩和比法在传染病疫情网络直报报告质量评价中的应用

    自2004年我国对法定传染病实行网络直报以来,各级医疗机构和疾控中心报告的主动性和及时性大大提高了,网络直报也给疫情报告管理带来了新的内容[1].如何评价传染病网络直报的质量,是报告质量管理中有待解决的问题.本文将采用秩和比(rank-sum ratio,RSR)法[2]对报告质量进行综合评价(本文着重于评价方法的研究,具体数据仅供参考).

    作者:李云;杭惠;惠东明;陈立凌 刊期: 2007年第05期

  • 北京市朝阳区居民2004~2006年伤害死亡及其YPLL分析

    随着我国经济和交通的迅速发展,居民生活节奏的加快,伤害已经成为严重威胁人类健康的重要公共卫生问题,也是世界各国的主要死因之一[1,2],世界卫生组织1995年年度报告中指出:全球每年有500万余人死于伤害和暴力行为[3],近年来我国伤害发生率呈上升趋势,伤害的高发生率、高死亡率不仅给个人和家庭带来严重损失,也给社会造成沉重的经济负担.

    作者:石鹏;孟海英;韩晓燕 刊期: 2007年第05期

中华疾病控制杂志

中华疾病控制杂志

主管:国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会 安徽医科大学