学术投稿

利用相差显微镜观察FISH检测石蜡包埋组织切片的理想酶消化程度

陈慧;陈淳;王华;陈燕;殷于磊

关键词:相差显微镜, FISH, 石蜡组织, 胃酶消化
摘要:自1969年发展至今FISH检测技术操作程序得到了极大简化[1],临床病理科已广泛应用.石蜡包埋组织切片的FISH检测流程中,酶消化是关键步骤.理想的酶消化状态是获得清晰易判读的杂交信号.然而国内大多数实验室在判断酶消化是否达到理想状态尚缺乏简便有效的手段.许多工作人员根据文献报道或试剂盒推荐估计酶消化时间,在酶消化后染DAPI于荧光显微镜下观察消化是否达到理想状态,既浪费荧光染料又增加了汞灯的损耗,且操作烦琐.而事实上国外实验室FISH检测已多采用相差显微镜来判断酶的消化程度.本文现就采用相差显微镜观察判断FISH检测石蜡包埋组织切片的酶消化程度的有效性作一探讨.
临床与实验病理学杂志相关文献
  • 结肠癌中Destrin表达及临床病理学意义

    目的 探讨Destrin蛋白表达与结肠癌发生、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期的关系.方法 将87例结肠癌、26例结肠上皮内瘤变及34例正常结肠组织标本制成组织芯片,采用免疫组化SP法检测Destrin表达.结果 Destrin在正常结肠黏膜中的阳性率为20.59%(7/34),低于结肠上皮内瘤变(42.31%),二者差异无显著性(P>0.05).Destrin在低级别上皮内瘤变中表达低于高级别上皮内瘤变,二者差异无显著性(P>0.05).Destrin在高级别上皮内瘤变组织中的表达明显高于正常结肠黏膜组织(P<0.05);Destrin在结肠癌中阳性率为80.46%(70/87),明显高于正常结肠黏膜和上皮内瘤变(P<0.05).Destrin在高、中、低分化腺癌中的阳性率分别为70.00%(7/10)、80.85%(38/47)与83.33%(25/30),三者之间差异无显著性(P>0.05).结肠癌中Destrin表达与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05).结论 Destrin表达与结肠癌的发生、肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期密切相关,其可能是结肠癌诊断及预后的重要生物学标志物.

    作者:苏坚;颜鸿飞;周钰娟;廖前进;史玲;杨晶;苏琦 刊期: 2013年第07期

  • 即用型抗体再稀释在全自动免疫组化染色中的应用

    全自动免疫组化染色仪使实验室技术人员从繁琐的手工操作中解放出来,大大提高了免疫组化的工作效率,由于其都有相应的加强二抗相匹配,所以染色强度和染色阳性率均相应提高[1].即用型抗体的优点在于使用方便,一般不需要使用者重新摸索稀释的比例[2].但在实际工作中我们发现部分即用型抗体在全自动免疫组化染色仪上染色后组织切片背景有着色,因此我们尝试把即用型抗体再稀释后,再进行全自动免疫组化染色,取得较为满意的效果.

    作者:孙廷谊;谢红建;孔令非 刊期: 2013年第07期

  • 胰腺浆液性微囊性腺瘤13例临床病理分析

    目的 探讨胰腺浆液性微囊性腺瘤(serous microcystic adenoma,SMA)临床病理特征、诊断与鉴别诊断.方法 回顾性分析13例SMA患者的临床影像学特征、组织病理学及免疫表型,并复习相关文献.结果 13例SMA中女性10例,男性3例;年龄39~74岁,平均58.8岁;8例为体检时发现,无临床症状.9例伴肝和(或)肾囊肿,其中3例中央可见骨化.镜下见肿瘤主要由大小不等的囊腔组成,囊壁衬覆单层立方上皮,细胞质透明并富含糖原.肿瘤细胞核小而圆,居中,无核仁,无核分裂象.间质可见粗大的纤维组织分隔.免疫表型:上皮细胞CK(AE1/AE3)、CK7、CK19、CK8/18、Cyclin D1和EMA均阳性,CEA、CD34、ER和PR均阴性.随访2~65个月,未见复发及转移.结论 胰腺SMA是发生于胰腺外分泌部的少见肿瘤,结合临床影像学、病理组织学和免疫表型有助于诊断及鉴别诊断.手术切除肿瘤后预后良好.

    作者:林生明;张声;陈余朋;刘雪咏;王鹏程;蔡珊珊;熊令根;王行富 刊期: 2013年第07期

  • 腮腺硬化型黏液表皮样癌1例临床病理学观察并文献复习

    目的 探讨腮腺硬化型黏液表皮样癌(sclerosing mucoepidermoid carcinoma,SMEC)的临床特点、组织学特征及鉴别诊断.方法 采用免疫组化EnVision两步法对SMEC标本进行染色,结合临床资料并复习相关文献,分析其形态学特征及免疫表型.结果 肿瘤与周围腮腺组织混杂存在,中央硬化,外周淋巴细胞及少量嗜酸细胞浸润,并见鳞状细胞巢及黏液细胞.免疫表型:黏液细胞CEA、CKL均(+),非角化的表皮样细胞及中间型细胞CEA(-),表皮样细胞CKH(+),Ki-67、c-erbB-2均(-).结论 腮腺SMEC发病率极低,属于低度恶性肿瘤.

    作者:李晓琴;徐欣华;杨荣;刘芳;罗雁;康雅琼;何欣;尚立娜;宋丽娟 刊期: 2013年第07期

  • 恶性血管周上皮样细胞肿瘤2例并文献复习

    目的 探讨恶性血管周上皮样细胞肿瘤(malignant perivascular epitheliod cell tumor,PEComa)的临床、病理特征及鉴别诊断.方法 对2例恶性PEComa进行临床、病理形态学、免疫表型及电镜观察,并复习相关文献.结果 镜下见肿瘤组织由梭形细胞及上皮样细胞构成,细胞异型性明显,细胞胞质透明或嗜酸,细胞核大,有核仁,瘤细胞由纤细的纤维结缔组织及薄壁血管将其分隔成巢状、腺泡状、片状结构,部分区域可见多核瘤巨细胞伴肿瘤坏死,核分裂多见.免疫表型:肿瘤细胞表达HMB-45、S-100、SMA及desmin;电镜下见肿瘤细胞胞质内可见高电子密度核心的内分泌小体和少许不成熟的黑色素小体.结论 恶性PEComa罕见,病理形态多样,熟悉其临床、病理形态、免疫表型及电镜下改变,有助于临床、病理医师对其正确诊断及鉴别诊断.

    作者:石峰;昌红;王莉 刊期: 2013年第07期

  • 食管鳞状细胞癌中Beclin1表达及其对增殖的影响

    目的 探讨Beclin1在食管鳞状细胞癌(esophagus squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及意义,分析其过表达对人ESCC细胞株TE1体外生长活性的影响.方法 分别采用免疫组化SP法和RT-PCR技术检测57例ESCC及癌旁正常食管黏膜组织中Beclin1蛋白及mRNA的表达;利用基因转染、RT-PCR及Western blot法观察外源性Beclin1过表达对ESCC细胞株TE1的影响;MTT法分析外源性Beclin1过表达对TE1细胞增殖的影响;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测转染后肿瘤细胞的细胞周期和凋亡;在荧光显微镜下观察转染后肿瘤细胞的自噬.结果 免疫组化染色结果示,在ESCC中Beclin1蛋白的阳性率为29.82%(17/57),明显低于癌旁正常食管黏膜组织100%(57/57)(P<0.00),Beclin1蛋白的表达与ESCC患者的分化程度(χ2=6.158,P=0.046)、淋巴结转移(χ2=5.664,P=0.017)有关;与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度无关;RT-PCR检测结果示,在ESCC中Beclin1 mRNA的表达量(0.168±0.038)明显低于癌旁正常食管黏膜组织(0.280±0.052)(P<0.00).pCMV6-Entry-Beclin1脂质体法转染TE1细胞后,在mRNA和蛋白水平Beclin1的表达均高于TE1PE组及TE1组.在TE1细胞中过表达Beclin1后可抑制肿瘤细胞的体外生长,抑制率为57.21%.FCM检测pCMV6-Entry-Beclin1转染后G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制;凋亡率为5.91%,高于TE1PE组和TE1组(P<0.05).在荧光显微镜下见TE1Beclin1组中MDC标记的自噬囊泡数量明显增加.结论 自噬相关基因Beclin1 mRNA及蛋白在ESCC中表达下调,自噬活性的降低可能与ESCC的发生、发展及侵袭转移有关;Beclin1过表达可抑制人ESCC细胞株TE1的增殖,并诱导其自噬和凋亡,利用自噬基因Beclin1对ESCC基因治疗也许具有可行性.

    作者:吴娟;杜芸 刊期: 2013年第07期

  • EGF对人肝癌细胞CK19表达及增殖能力的影响

    目的 观察表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人肝癌细胞株PLC-5和HepG2中CK19表达及增殖浸润能力的影响.方法 通过体外培养人肝癌PLC-5和HepG2细胞,分别连续采用EGF(30 ng/ml)、TGF-β1(10 ng/ml)、HGF(50 ng/ml)及FGF-b(50 ng/ml)刺激5天后,采用RT-PCR技术检测CK19 mRNA的表达,采用MTT法检测EGF对人肝癌细胞PLC-5和HepG2增殖能力的影响,划痕实验检测EGF对人肝癌细胞PLC-5和HepG2侵袭转移的影响.结果 (1)EGF可促进肝癌细胞PLC-5和HepG2中CK19 mRNA的表达、降低其AFP mRNA的表达.HGF和FGF-b对CK19及AFP mRNA表达影响较小;(2)PLC-5和HepG2的mRNA和蛋白水平均有EGFR的表达,EGF可明显上调PLC-5和HepG2中CK19 mRNA的表达,并可诱导CK19蛋白表达;(3)PLC-5和HepG2的EGF处理组的细胞增殖能力和浸润特性均明显高于无血清空白对照组.结论 EGF可促进CK19的表达并提高肝癌细胞株的浸润能力,抑制EGF与EGF受体的结合可能会改善CK19阳性肝癌患者的预后.

    作者:刘印;詹智;田京 刊期: 2013年第07期

  • K-ras基因状态与结直肠癌临床病理特征的关系

    目的 观察结直肠癌原发灶K-ras基因的突变,探讨其与临床病理特征的关系.方法 运用实时荧光定量PCR法检测230例结直肠癌组织K-ras基因12、13密码子的突变,利用χ2检验分析其与临床病理特征的相关性.结果 230例结直肠癌患者中,84例K-ras基因发生突变,突变率为36.5%,其中12密码子突变65例(28.2%)、13密码子突变19例(8.3%).结直肠癌肺转移患者K-ras基因突变率较无肺转移患者高(P=0.022),12、13单密码子突变与临床病理特征(患者年龄、性别、肿瘤部位、病理分型、TNM分期、Dukes分期、区域淋巴结及肝肺转移)无关(P>0.05).结论 结直肠癌K-ras基因突变可能与肺转移存在相关性,检测K-ras基因突变对结直肠癌患者临床个体化治疗具有指导意义.

    作者:杨瑞钦;杨春康;徐可;许元基 刊期: 2013年第07期

  • 胃癌中Ataxin-3表达及与临床病理学的意义

    目的 观察Ataxin-3蛋白在人胃癌组织中的表达及分布,探讨其在胃癌发生、发展过程中的意义及与临床病理学特征的关系.方法 采用免疫组化SuperVision两步法检测Ataxin-3在胃癌(265例)、正常胃黏膜(209例)、胃低级别上皮内瘤变(86例)及高级别上皮内瘤变(75例)组织中的表达,并对其表达与临床病理学特征的关系进行统计学分析.结果 Ataxin-3的表达,在胃癌组织中低于正常胃黏膜组织(P<0.001);胃癌组与低级别上皮内瘤变组中的表达有差异(P﹤0.001),而胃癌组与高级别上皮内瘤变组比较表达无差异(P>0.05);Ataxin-3表达与胃癌的Lauren组织学分型、肿瘤分化、远处转移及p53突变蛋白的表达存在相关性(P均<0.05).结论 Ataxin-3蛋白很可能在胃癌的发生、发展过程中起重要意义.

    作者:曾丽霞;马韵;王超;龙喜带;王华 刊期: 2013年第07期

  • 病理实验室质量控制与安全管理团队建设

    医院医疗质量建设的重点是规范科室的质量与安全管理团队工作,切实加强科室质量与安全管理团队建设,有效地推进科室管理工作,持续提升科室医疗质量和服务水平是确保医疗质量和医疗安全的根本.为规范科室工作、指导科室开展质量与安全管理工作,本文就如何提高病理实验室质量与安全管理团队建设水平介绍如下.

    作者:马恒辉;周晓军 刊期: 2013年第07期

  • 结直肠癌中FOXO3a表达及其与β-catenin、E-cadherin关系

    目的 探讨结直肠癌组织中FOXO3a的表达及其与Wnt信号通路中心蛋白β-catenin和该通路间接调节因子E-cadherin的关系.方法 应用免疫组化SP法检测112例结直肠癌组织和103例正常肠黏膜组织中FOXO3a、β-catenin及E-cadherin蛋白的表达,分析三者表达与临床病理特征的关系以及FOXO3a与β-catenin、E-cadherin表达的相关性.结果 (1)FOXO3a在结直肠癌组织中的阳性率(57.14%)较正常肠黏膜组织(93.20%)明显降低(P<0.001),β-catenin在结直肠癌组织中的异常表达率(73.21%)较正常肠黏膜组织(2.91%)明显升高(P<0.001),E-cadherin在结直肠癌组织中的阳性率(70.54%)较正常肠黏膜组织(98.06%)明显降低(P<0.001).(2)结直肠癌组织中FOXO3a、E-cadherin低表达以及β-catenin异常表达与肿瘤深层浸润、差分化、淋巴结转移和TNM高分期密切相关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小均无关(P>0.05).(3)结直肠癌组织中FOXO3a的阳性表达与β-catenin的异常表达呈负相关(rs=-0.361,P<0.001),与E-cadherin的阳性表达呈正相关(rs=0.351,P<0.001).结论 FOXO3a、E-cadherin表达降低与β-catenin异常表达可能在结直肠癌的发生、侵袭和转移过程中起重要作用,FOXO3a抑制结直肠癌发生、发展的作用机制可能与Wnt信号通路有关.

    作者:郭存存;孙晋敏;韩文灿;郑茂金;柳红;吴永平 刊期: 2013年第07期

  • 计算机辅助阅片与单纯人工阅片在宫颈液基细胞学诊断中对比观察

    目的 探讨计算机辅助阅片系统(ThinPrep imaging system,TIS)在宫颈液基细胞学诊断中的应用价值.方法 对10 000例宫颈液基细胞学标本运用TIS辅助阅片+人工阅片进行诊断,记录阅片时间及诊断结果,并分别与2011年同期10 000例单纯人工阅片的阅片时间及诊断结果进行比较.结果 单纯人工阅片平均时间为4.8 min/片,TIS辅助阅片后的人工阅片平均时间为2.6 min/片,阅片速度提高84.62%,二者差异有统计学意义(P<0.001).两种阅片方法对比鳞状上皮细胞异常标本检出率显示:使用TIS后非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells,ASC)以上的细胞增加9.82%,其中未明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells-undetermined significance,ASC-US)增加12.01%;低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)增加6.71%;高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)增加22.73%,不除外高级别鳞状上皮内病变的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells-cannot exclude HSIL,ASC-H)降低27.78%,两组相比差异无显著性(P>0.05).两种阅片方法对比细胞学与组织学的诊断符合率显示:细胞学诊断为LSIL以上的与组织学诊断为子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的符合率分别为90.32%和91.47%,使用TIS后诊断为LSIL的、组织学诊断为CIN1的符合率由71.59%升至74.45%,HSIL组织学诊断为CIN2以上的符合率由77.78%升至82.05%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 TIS能显著提高阅片速度,降低诊断医师的劳动强度,提高工作效率,并具有与单纯人工阅片相似的病变检出率,是一种具有较高应用价值的子宫颈癌筛查技术手段.TIS对HSIL的高敏感性,有待探讨.

    作者:周东华;田杰;王夷黎;秦艳;平静;刘小燕;陈莹;范菊花 刊期: 2013年第07期

  • 免疫组化热修复应用于TUNEL染色

    检测细胞凋亡的方法较多,目前TUNEL染色较多应用于石蜡切片.作者在实验中发现,用蛋白酶K消化切片的染色方法不易操作和控制,为此对免疫组化热修复法进行改进,染色效果满意,且简便易行,现介绍如下.

    作者:李梅;吴建农 刊期: 2013年第07期

  • 利用相差显微镜观察FISH检测石蜡包埋组织切片的理想酶消化程度

    自1969年发展至今FISH检测技术操作程序得到了极大简化[1],临床病理科已广泛应用.石蜡包埋组织切片的FISH检测流程中,酶消化是关键步骤.理想的酶消化状态是获得清晰易判读的杂交信号.然而国内大多数实验室在判断酶消化是否达到理想状态尚缺乏简便有效的手段.许多工作人员根据文献报道或试剂盒推荐估计酶消化时间,在酶消化后染DAPI于荧光显微镜下观察消化是否达到理想状态,既浪费荧光染料又增加了汞灯的损耗,且操作烦琐.而事实上国外实验室FISH检测已多采用相差显微镜来判断酶的消化程度.本文现就采用相差显微镜观察判断FISH检测石蜡包埋组织切片的酶消化程度的有效性作一探讨.

    作者:陈慧;陈淳;王华;陈燕;殷于磊 刊期: 2013年第07期

  • 急性纤维素性机化性肺炎的研究进展

    急性纤维素性机化性肺炎(acute fibrinous and organizing pneumonia,AFOP)是近年提出的新概念,组织学特征为气腔内纤维素球形成,可存在于多种肺损伤中,也可与其他病理改变混合存在.其是否将作为独立疾病诊断,目前尚存在争议.该文主要综述其临床病理特征、病因机制及常见的诊断问题,并复习相关文献,以提高对AFOP的认识.

    作者:冯安宁;孟凡青 刊期: 2013年第07期

  • 消化道憩室伴发胃肠道间质瘤3例报道并文献复习

    目的 探讨消化道憩室伴发胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)的临床病理特征.方法 对3例小肠憩室伴发GIST的病例进行研究,并文献复习.结果 包括本组3例在内,国内外报道憩室伴发GIST病例共23例,男女比为1.1:1,平均年龄57.2岁,其中22例(95.7%)发生于小肠憩室,包括Meckel憩室13例(56.5%)、空肠憩室6例(26.1%)、十二指肠憩室2例(8.7%)、空回肠交界处憩室1例(4.3%),另1例发生于胃憩室(4.3%),无发生于食管及结直肠憩室者.憩室伴发GIST形态学表现及免疫表型同憩室外病例.结论 憩室伴发GIST罕见,以小肠憩室为主,多见于Meckel憩室.

    作者:韩树青;陈健;郭瑞峰;刘艺;梁化印 刊期: 2013年第07期

  • 一种解决切片干燥的方法

    影响切片质量的因素较多,要制出高质量的切片,每一操作步骤都至关重要[1,2],组织切片的制作程序包括脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封固.其中切片是制片过程中手工操作较复杂而又重要的环节,切片质量的好坏直接影响诊断工作[1].在实际工作中,由于空气干燥,尤其是冬天切片易出现龟裂和空洞现象(图1).往往靠对每张切片组织块表面哈气来补救,或者蘸温水加湿组织表面,该方法不仅效果差,而且影响制片速度.笔者摸索出一种简单有效的方法,解决了切片易出现龟裂、空洞的问题,现介绍如下.

    作者:付先利;吴建农 刊期: 2013年第07期

  • 肾上腺皮质嗜酸细胞癌7例临床病理分析

    目的 探讨7例肾上腺皮质嗜酸细胞癌临床及病理特点.方法 回顾性分析7例肾上腺皮质嗜酸细胞癌的临床特点、组织形态学特征,并复习相关文献.结果 7例肾上腺皮质癌中皮质醇增多症1例,原发性醛固酮增多症2例,无功能性4例.7例均为肾上腺超声诊断,术后病理诊断均为肾上腺皮质嗜酸细胞癌.6例进行随访,随访时间(21.7±20.6)个月,死亡3例.结论 肾上腺皮质嗜酸细胞癌罕见,诊断依据病理学及免疫表型,多为无功能性(57.1%),亦可表现内分泌功能异常(42.9%),非低恶性度肿瘤,治疗以手术为主.

    作者:许敬平;吴大为;黄江梅;高艳明;邵俊涛 刊期: 2013年第07期

  • 肿瘤出芽对判断pT3期结直肠高、中分化腺癌淋巴结转移的价值

    目的 探讨pT3期结直肠高、中分化腺癌肿瘤出芽数目及其与临床病理参数之间的关系.方法 采用光镜和免疫组化EnVision法观察106例结直肠癌组织中肿瘤出芽情况并进行分级.结果 肿瘤出芽数:1级37例(34.9%),2级27例(25.5%),3级42例(39.6%).肿瘤出芽数1级组(<5个/HPF)的淋巴结转移检出率明显低于2级组(5~9个/HPF)和3级组(≥10个/HPF),差异有显著性(P=0.000).3级组淋巴结转移检出率高于2级组,差异无统计学意义(P=0.206).肿瘤出芽分级与患者年龄、性别及肿瘤发生部位、分化程度均无关(P>0.05).结论 pT3期结直肠高、中分化腺癌中,肿瘤出芽数≥5个/HPF是提示肿瘤淋巴结转移的重要组织学特征.

    作者:赵有财;王劲松;黄悦;李俐;杨小兵;赵建华;黄文斌 刊期: 2013年第07期

  • 血管肌纤维母细胞瘤3例并文献复习

    目的 探讨血管肌纤维母细胞瘤(angiomyfibroblastoma,AMF)的临床病理特征、诊断和鉴别诊断.方法 对3例AMF进行组织学观察和免疫组化标记,抗体为vimentin、SMA、MSA、ER、PR、CD34、desmin、S-100蛋白和CK.结果 3例均表现为外阴部肿块.眼观:肿瘤境界均清楚;镜检:肿瘤均由相互交替分布的细胞密集区和细胞稀疏区组成,其间血管丰富,多为毛细血管至中等大薄壁血管.瘤细胞呈巢状或束状围绕血管排列.免疫表型:瘤细胞vimentin、SMA、ER和PR均阳性,CD34在血管壁呈阳性、瘤细胞阴性,MSA、desmin、S-100蛋白和CK均阴性.结论 AMF是一种少见的好发于外阴的良性软组织肿瘤,需与侵袭性血管黏液瘤、富细胞性血管纤维瘤等鉴别.

    作者:李敏媛;张丽华;杨树东;洪建刚 刊期: 2013年第07期

临床与实验病理学杂志

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主办:安徽医科大学;中华医学会安徽分会