肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨

韩瑞刚；张建中；黄英武；郑燕华；赵尔增；周金莲；张卫国

关键词：组织芯片, 肺肿瘤, 石蜡包埋组织, 新鲜组织, 基因表达

摘要：目的:探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法,以及在基因表达分析中的应用.方法:选取肺癌石蜡包埋组织90例,新鲜液氮冻存肺癌及癌旁肺组织20例,常规切片HE染色下确定穿刺部位,石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法(1998),每例穿取0.6 mm组织柱2条,制备180点阵组织芯片;而新鲜组织芯片参考Fejzo 等方法(2001),并略作改良,制备50点阵组织芯片.所有组织芯片模块,经4 μm切片、常规组织学染色和免疫组化染色,以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性.结果:180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片,组织排列整齐,HE染色后组织形态可观察率在98%以上;p53、c-myc、bcl-2、bax和Ki-67等免疫组化染色后,肺癌组织可见不同程度的抗原表达,组织点阵的形态可观测率在89%～95%之间.新鲜组织芯片经HE染色后,形态可观测率和基因表达可分析率在70%左右.结论:手工法组织芯片制备简便易行,使用组织少,不破坏原蜡块;实验均一性、可比性好,且节省试剂.与常规组织切片相比,2点0.6 mm组织可以获得原蜡块95%以上的信息,完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析;新鲜组织芯片技术已经初步建立,但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA 分析方法.

临床与实验病理学杂志相关文献

一张玻片上分别显示HID-AB-PAS及HP的染色法

目前HID-AB-PAS及幽门螺杆菌(HP)特染已作为胃镜病理切片的常规诊断内容,前者可检测上皮黏液性质,后者便于查找HP.我们尝试在同一张切片上进行两种特染,取得良好效果,现报道如下.

作者：孙吉心；卢根福；陈剑瑛；王登山刊期： 2002年第04期
胫骨皮质旁软骨肉瘤1例报道及文献复习

目的:了解皮质旁软骨肉瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断要点.方法:报道1例胫骨皮质旁软骨肉瘤临床和病理改变,结合文献对该肿瘤的临床表现、病理形态学特征及诊断和鉴别诊断要点进行讨论.结果:皮质旁软骨肉瘤大体呈结节状,切面分叶状、瓷白色半透明,有砂砾感.镜下肿瘤主要为分化良好的透明软骨成分,由纤细的纤维束分割,或由化生的骨小梁包裹,可见软骨内钙化和骨化,可见灶性区黏液变性,缺乏肿瘤性骨样基质,免疫组织化学标记显示肿瘤细胞Vim、S-100蛋白阳性,PCNA 少数细胞阳性.结论:皮质旁软骨肉瘤是罕见的恶性程度较低的软骨肉瘤.

作者：孟凡青；吕翔；张华勇；戴晓波刊期： 2002年第04期
Ⅳ型胶原在膀胱癌中的表达及意义

基膜是阻止肿瘤细胞侵袭转移的天然屏障.正常的基膜是由Ⅳ型胶原等成分构成的一致密网状结构,研究表明Ⅳ型胶原的降解程度与恶性肿瘤的浸润转移相关[1,2].膀胱癌是泌尿系中常见的恶性肿瘤,近年来在这方面的研究报道不多.本研究应用免疫组化方法检测Ⅳ型胶原在膀胱癌中的表达,探讨它在膀胱癌浸润转移中的作用及其临床意义.

作者：王剑火；陈梓甫；施作霖；陈文榜刊期： 2002年第04期
皮肤Merkel细胞癌1例报道及文献复习

1 临床资料患者男性,74岁,因发现左膝部肿块1年余,瘙痒半月.体检:左膝关节上方一3 cm×2 cm肿块,高出皮肤,质硬,边界尚清,腹股沟淋巴结未及肿大.胸片未见异常,CT未做.术中见肿块位于表皮下,与肌层无粘连,行肿块切除术.术后患者未予放疗和化疗,1年后死于肿瘤广泛播散.

作者：李伟华；陆朝辉；鲁洁琼；陈健刊期： 2002年第04期
肿瘤淋巴管形成与肿瘤转移关系的研究进展

恶性肿瘤是严重危害人类健康的常见疾病,造成恶性肿瘤治疗困难的主要原因之一是恶性肿瘤常发生远处部位的转移.如果肿瘤只局限在原发部位,则通过手术等方法可使患者治愈,转移是肿瘤患者死亡的主要原因.肿瘤发生播散和转移的途径主要有:(1)局部浸润,体腔、体表种植;(2)通过血管的血行转移;(3)通过淋巴管的淋巴转移等.其中通过淋巴管常常是某些肿瘤初始转移阶段的主要途径,肿瘤细胞进入引流淋巴结,继而再进入血流,造成更广泛的远处转移,威胁患者的生命.

作者：张贺龙；王文亮刊期： 2002年第04期
肾脏原发性淋巴瘤临床病理特征

目的: 探讨肾脏原发性恶性淋巴瘤(PRL)的诊断标准,为临床和病理早期诊断PRL提供依据.方法: 对2例PRL患者行肾脏穿刺活检,镜下观察其病变特点,同时用LCA、CD20、CD45RO、CD3等抗体对其进行免疫组织化学标记,并结合临床资料综合分析.结果: 2例病变极为相似,均显示肾小球及肾小管间散在大量异型细胞,肾小管显萎缩.2例肿瘤细胞免疫组化标记LCA、CD45RO和CD3均为阳性; CD20、CD79、CD68、CK、HHF35、S-100蛋白、Lys和NSE均为阴性,结果证实2例PRL均为外周T细胞淋巴瘤.结论: 要诊断肾脏淋巴瘤,首先需排除它处淋巴瘤或白血病侵犯肾脏,并结合临床表现和形态学特征来综合考虑;肾脏穿刺活检结合免疫组织化学标记也不失为一种诊断PRL准确而又简捷的方法.

作者：尹红玲；黎岳南；颜亚晖；杨晓静；吴晓英刊期： 2002年第04期
单核苷酸多态性的研究及应用

1 单核苷酸多态性(SNPs)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNPs)是指在基因组水平上由于单个核苷酸变异所引起的DNA序列多态性.在含有30亿个碱基的人类基因组中,估计平均每1 000个碱基出现1个SNP[1].SNPs可分为编码区SNPs(cSNPs)、基因调控区SNPs(pSNPs)和存在于连接两个基因之间的DNA中的随机非编码区的SNPs(rSNPs) 3类[3].其中有意义的SNPs存在于基因的编码区和基因调节域,它们能够导致基因功能改变,对表型产生很大的影响[2,3].并有研究报道那些能够使基因功能丧失,导致死亡的SNPs在人群中将随着年龄增长而降低[4].

作者：徐恩萍；来藏德刊期： 2002年第04期
乳腺浸润性导管癌中HPV18、HPV16感染的研究

目的:了解乳腺浸润性导管癌中HPV18、HPV16的感染情况,分析其是否是乳腺癌发生的危险因素及与临床病理的相关性.方法:根据HPV16、HPV18的DNA序列,合成相应特异的寡核苷酸片段,用加尾标记法制备地高辛标记探针,用原位杂交法检测51例乳腺浸润性导管癌、10例相应正常乳腺上皮及15例良性乳腺病变中HPV18、HPV16的感染,并分析其与患者发病年龄、肿块大小及淋巴结转移的相关性.结果:浸润性导管癌中HPV18或16的总阳性率达70.6%, 其中HPV18与HPV16的阳性率分别为58.8%、45.1%, 均明显高于正常乳腺上皮的感染率(30.0%、10.0%;P<0.05);乳腺良性病变的HPV18、16阳性率分别是60.0%、6.0%, 其中HPV18的阳性率亦显著高于正常乳腺上皮(P<0.05).结论:(1) HPV16和18可能是乳腺浸润性导管癌发生的致病因子,HPV18尚可能与乳腺良性病变的发生有关.(2) HPV的感染与患者年龄、肿块大小及淋巴结转移无相关性.

作者：周晓燕；朱伟萍；金爱萍；施达仁刊期： 2002年第04期
溃疡性结肠炎与结肠克隆病病理诊断的鉴别要点

特发性炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC) 和Crohn病(Crohn's disease, CD),在西方国家是常见病和多发病.我国过去一直认为该病变较少见,因此对其认识不够深刻.溃疡性结肠炎和Crohn病虽然是两种不同的疾病,但两者的病因和发病机制均不清楚,临床表现都具有慢性迁延、反复发作、不易根治的特点,因此两者的鉴别诊断一直是一大难题.随着结肠镜对IBD窥视下和活检病理形态的认识不断加深,人们开始重视肠黏膜活检病理诊断在UC和CD鉴别中的应用价值,并倾向将结肠镜黏膜活检列为诊断炎症性肠病的标准之一.为了帮助病理和临床医生熟悉并掌握IBD的病理特点,规范诊断标准,笔者分别从3个方面对UC和CD的病理鉴别诊断要点进行分析总结.

作者：纪小龙；尹彤刊期： 2002年第04期
原发于骨骼肌的间变性大细胞T细胞淋巴瘤

目的:探讨骨骼肌原发的间变性大细胞淋巴瘤的临床病理特征和免疫表型.方法:采用常规制片和免疫组化(S-P)法检测1例(14岁)骨骼肌原发的间变性大细胞淋巴瘤.结果:肿瘤细胞CD30、ALK-1、CD45RO和CD45阳性;而CD20、EMA、S-100蛋白、desmin和CD68阴性.结论:本例为间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性的间变性大细胞淋巴瘤.骨骼肌原发的间变性大细胞淋巴瘤非常少见,诊断时应先排除其它肿瘤和其它部位淋巴瘤累及骨骼肌.

作者：冯晓莉；应建明；孙耘田刊期： 2002年第04期
成人肺先天性囊性腺瘤样畸形继发恶变1例

患者男性,40岁.因低热、乏力2个月,胸闷、喘憋2周,于1998年3月9日入院.CT示:左上肺野可见巨大薄壁透亮区,6 cm×5 cm,诊断为肺大疱.术中见:左肺上叶尖后段呈囊性改变,对应肺膜表面肥厚,行左肺上叶切除术.

作者：常占平；金锦善；廖松林刊期： 2002年第04期
Ki67表达在IgA肾病中的临床及病理意义

采用适当的抗原修复技术,Ki67抗体已可用于石蜡包埋的组织进行免疫组化染色.Ki67主要标记除了G0期及早期G1期的所有增殖细胞[1].笔者采用单克隆抗体Ki67/MIB1,对IgA肾病肾活检标本进行免疫组化染色,以研究IgA肾病与细胞增殖的关系.

作者：刘军；胡宏慧；姚建；徐琴君刊期： 2002年第04期
脾脏炎性假瘤2例

例1,男性,45岁.因反复畏寒、发热1月入院.腹部B超示脾门旁实质内3.0 cm×3.3 cm异常回声区.术中见脾脏大小、色泽正常,质软.病理检查:脾脏1个,10.5 cm×7.0 cm×4.5 cm,切面脾实质内散在多个灰白小结节,直径0.5～0.8 cm,界清,质中等.镜检:病变处脾正常结构消失,大量淋巴细胞、浆细胞及少量嗜酸性粒细胞和灶性中性粒细胞浸润,多量泡沫细胞形成,血管增生,并可见小灶性坏死,间质细胞梭形似纤维母细胞伴胶原纤维形成(图1,2).免疫表型:CD3及UCHL-1弥漫阳性,L26及CD79灶性阳性,Kappa(+),Lambda(+),间质梭形细胞vimentin(+)、SMA(+)(图3)、actin(+)(图4).病理诊断:脾脏炎性假瘤.

作者：袁键群；盛彩霞；许敬尧刊期： 2002年第04期
以囊性变为主的回肠恶性间质瘤1例

患者男性,27岁.因反复左下腹疼痛3月余,尤以左侧卧位时明显,伴解黑便3天入院.查体:左下腹可触及一较大的包块,质较硬、压痛,活动度差.B超示:肿块呈多房性,大小16 cm×15 cm,回声不均.在B超引导下行包块穿刺,抽出较多暗红色血性液体.手术中见肿物大部分位于腹膜后,与回肠紧密相连,累及膀胱.临床诊断:腹膜后肿瘤(恶性).

作者：何建芳；刘旭明；黄锦叶刊期： 2002年第04期
肾外肾母细胞瘤1例

患者男性,62岁,腰部不适数天.体检:血压正常,B超发现左肾上腺部有10 cm×7 cm×7 cm肿块.实验室检查:血糖、血电解质正常.考虑肾上腺肿瘤,行肾上腺肿瘤切除术,术中冷冻切片见正常肾上腺组织及团块样似肾小球样组织,未作诊断.手术医师见肿块位于肾上腺部位,有完整包膜,与肾脏相距3～4 cm,肾包膜完整,肿块与周围组织无粘连,易分离,行肿块剥离术.术后1个月复查未见病征.

作者：帅剑波；周经厚；黎冠群刊期： 2002年第04期
肺鳞癌及癌前病变PCNA、p16、p21、p53表达及细胞凋亡观察

目的:观察肺癌癌变过程中细胞增殖与凋亡活性的改变,分析它们在肺癌发生发展过程中的意义并探讨其调控基因的作用.方法:收集86例支气管黏膜活检标本,采用免疫酶标法对各组病例进行PCNA、p53、p21、p16蛋白表达检测,用3′-OH末端DNA原位标记技术进行凋亡细胞检测.结果:在正常与鳞化组,PCNA只在极个别细胞中表达,p21、p53未见表达,p16阳性表达率分别为100%、93.3%,凋亡细胞阳性率为(29±5.6)%、(24±4.7)%.轻、中度非典型增生组,PCNA也只在少数细胞中表达,p21、p53没有表达或极少数细胞表达,p16表达率分别为91.7%、83.3%,凋亡细胞阳性率分别为(22.0±4.3)%和(18.5±3.7)%.在重度非典型增生与高分化鳞癌组织中PCNA阳性率显著增加,而凋亡细胞阳性率却明显减少,p21、p53表达增加,p16显著下降.结论:支气管黏膜癌变是一个由量变到质变的过程,而中到重度非典型增生是这一过程中的关键性阶段,不仅增殖活性增加,而且凋亡活性下降,它们的调控基因p16、p21、p53也发生了显著的变化,可能起着重要的调节作用.

作者：李代强；谢季；李美蓉刊期： 2002年第04期
大鼠肝内移植肿瘤与肥大细胞关系的形态学研究

目的:研究大鼠肝内移植肿瘤与其周边肥大细胞的关系.方法:建立40只雄性Wistar大鼠肝内移植肿瘤模型,运用HE染色,肥大细胞(mast cell, MC)Alcian blue特殊染色,苦味酸-天狼猩红染色和电镜等技术,观察移植肿瘤肝组织的形态学改变,肿瘤周边浸润MC的数量以及MC与肿瘤组织的关系,8只正常大鼠为对照组.结果:肿瘤组织周边部分肝细胞形态学异常;肝组织内胶原纤维增生,主要为Ⅰ型和Ⅲ型胶原,并包绕肿瘤组织,肿瘤周边MC浸润,并沿胶原纤维分布,不同大鼠其肿瘤周边MC数量不一,有的差异明显.超微结构观察显示MC通过多个接触点与肿瘤细胞紧密相连,并释放胞质颗粒内容物,导致肿瘤细胞崩解.结论:MC与肿瘤组织有着非常密切的关系,MC可能通过多种途径直接和间接地发挥抗肿瘤作用.

作者：阮幼冰；官阳；张志勇刊期： 2002年第04期
影响胸腹水细胞学阳性率的技术因素分析

胸、腹水细胞学诊断因具有快速、准确、简便以及患者痛苦少等优点,在临床上得以广泛应用,并逐渐成为诊断疾病的重要手段之一.准确的诊断对临床治疗至关重要.因此,如何减少胸、腹水细胞学诊断的漏诊、误诊,提高其诊断阳性率具有重要的实际意义.正确掌握良、恶性细胞学特征是准确诊断的关键;然而,制片方法等技术因素恰当与否,对胸、腹水细胞学诊断阳性率同样具有重要影响,为此,笔者就影响其阳性率的技术因素进行分析探讨.

作者：肖楚梅；汪波；石灵春；张维彬刊期： 2002年第04期
肾上腺皮质腺瘤内髓脂肪瘤样结节1例及文献复习

髓脂肪瘤常见于肾上腺皮质、髓质或副肾上腺,偶见于肾上腺外[1].肿瘤绝大多数单独发生,而发生于肾上腺肿瘤(或其它病变)内者(即瘤内瘤)极少见[1～4].肾上腺肿瘤内髓脂肪瘤的临床病理特征不同于单独发生者.作者报道1例肾上腺皮质腺瘤内髓脂肪瘤样结节,结合文献讨论其临床病理特征及组织来源.

作者：姜惠峰；黄晓红刊期： 2002年第04期
TNFα对培养的脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的: 探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞的损伤作用. 方法: 将培养的内皮细胞分为对照组和实验组,实验组培养液中含有TNFα(4×105 U/L);通过普通光镜、扫描电镜、透射电镜观察TNFα对内皮细胞形态和超微结构的影响,并运用免疫组化染色来观察TNFα对内皮细胞表达细胞间粘附分子(ICAM-1)的影响.结果: (1)光镜、电镜观察结果显示:实验组内皮细胞拉长,由原来的多边形变为成纤维状,细胞间距不均且变大;微绒毛变短甚至呈泡状,个别拉长,有些部位细胞膜有缺损以及内质网扩张、线粒体凝聚等改变.并且这些改变有时间依赖性.(2)实验组内皮细胞ICAM-1表达明显增强.结论: TNFα(4×105 U/L)对内皮细胞有明显的损伤作用

作者：董红梅；喻伦银；贾宗智；邓末宏刊期： 2002年第04期