王爽；谷旭；程梁；吴哲
目的:探讨组织转谷氨酰胺酶2 (TGM2)基因多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病的关系,阐明精神分裂症发病的遗传因素.方法:收集428例中国北方汉族人群精神分裂症患者和555名健康对照者全血样品,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测TGM2基因rs2076380、rs7270785、rs4811528和rs6023526位点基因型.应用拟合优度x2检验分析4个单核苷酸多态性(SNPs)位点基因型频数分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律,应用x2检验和数量性状分析分别进行等位基因、基因型的关联性分析.结果:TGM2基因rs2076380、rs7270785、rs4811528和rs6023526位点的基因型频数分布在精神分裂症病例组和健康对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05).等位基因关联分析,病例组和对照组中各SNPs位点等位基因的频数分布比较差异无统计学意义(均P＞0.05).基因型关联分析,病例组和对照组中各SNPs位点基因型的频数分布比较差异无统计学意义(均P＞0.05).临床表型分析,各SNPs位点与精神分裂症阳性、阴性临床表型无关联(P＞0.05).结论:TMG2基因rs2076380、rs7270785、rs4811528和rs6023526位点多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病无关联.
作者：杜伟利；王嘉欣；惠李；赵鑫丽；赵晓霞；王珍琦；刘扬；张萱 刊期： 2014年第01期
目的:对建鲤半胱氨酸蛋白酶抑制剂(CPIs) Cystatin进行原核表达和纯化鉴定,并以重组Cystatin为抗原制备多克隆抗体.方法:用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入pET 30a Cystatin的E.coliBL21 (DE3)表达重组蛋白,经过Ni2+-NTA镍离子亲和层析纯化重组Cystatin,高效液相色谱鉴定重组Cystatin的纯度,Azocasein法测定其对木瓜蛋白酶的抑制作用.利用QuickAntibody-Mouse5W快速佐剂和纯化的重组Cystatin免疫Balb/C小鼠获得抗血清,采用夹心ELISA法鉴定抗血清的效价,Western blotting和免疫组织化学法鉴定抗血清的抗原识别特异性.结果:原核表达的目的蛋白相对分子质量约20 000;镍亲和层析纯化后重组Cystain在SDS-PAGE上显示单一条带,纯度＞95％;Azocasein法检测,0.014 μg重组Cystain抑制木瓜蛋白酶活性达50％以上;ELISA夹心法检测获得的Cystatin抗血清效价达到1:512 000;Western blotting检测,转入pET-30a空质粒的全菌蛋白中未检测到Cystatin存在,而在转入pET-30a-Cystatin的全菌蛋白及纯化各步样品中均检测到Cystatin信号,且均为单一条带;免疫组织化学检测,建鲤各组织呈现不同强度的Cystatin阳性染色,抗血清中的多克隆抗体与原核和真核表达的Cystatin均特异性结合.结论:成功表达和纯化了建鲤Cystatin;获得含高效价多克隆抗体的Cystatin抗血清,具有高特异性和灵敏性.
作者：李松；杨立彬；张舒岩；金羽；陈秀华；李新；刘玲；李树蕾；李树红 刊期： 2014年第01期
目的:配制含有多酸化合物的新型洗手液,并探讨其在人手部抗流感病毒的效果和安全性.方法:采用MDCK细胞流感病毒模型研究2种多酸化合物K10Na[(VO)3(SbW9O33)2]·26H2O(PM-1001)和K15 [Pr (BW11O39)2]·28H2O (Pr-B)的体外抗病毒作用,选择3个适宜的多酸剂量配制成含高、中、低剂量多酸洗手液;依据美国标准方法进行洗手液抗病毒效果评价,含2种多酸化合物的洗手液各有5名志愿者参与实验,将每名志愿者的10个手指随机分成5组,在手指上涂0.02 mL组织培养半数感染剂量(TCID50)为10 7.5/0.1 mL的病毒悬液后,分别在加病毒后、病毒液晾干后和用不同洗手液处理后收集病毒,采用MDCK细胞培养法测定病毒滴度;检测流感病毒在手部晾干30和60 min后的浓度和活力变化;选择含高浓度PM-1001的洗手液,按照《消毒技术规范》(2008版)利用昆明小鼠和白色家兔进行毒性评价.结果:PM-1001和Pr-B抗流感病毒的治疗指数(TI)分别为82.68和69.13;对照组的病毒浓度为104.33±0.66 TCID50/0.1mL,各洗手液处理组组织培养法均未检测到病毒,各洗手液处理组病毒浓度均低于对照组(P＜0.001),30和60 min收集的病毒浓度分别为103.98±0.42TCID50/0.1 mL和103.83±0.35 TCID50/0.1 mL,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);含高浓度PM-1001的洗手液对昆明小鼠的经口毒性实验半数致死浓度(LD50)大于5 000 mg·kg-1(体质量),对家兔完整皮肤刺激指数为0.33,对3只家兔眼刺激的平均评分分别为0、0.67和0.33.结论:含多酸化合物的新型洗手液可有效抑制手部甲型流感病毒,属实际无毒级的物质,对家兔完整皮肤和眼无刺激性.
作者：佟瑶；张毛毛；李丽；殷德辉；曲笑锋；齐燕飞；李娟；徐坤 刊期： 2014年第01期
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)通过多种分子信号通路触发肿瘤细胞的凋亡,而胃癌细胞却可通过多种机制抵抗这种凋亡.TRAIL与化疗药物联合应用可明显逆转胃癌细胞对TRAIL的耐药现象.本文就TRAIL及其受体的结构和功能、TRAIL诱导凋亡的信号通路、胃癌细胞的TRAIL耐药机制以及其联合化疗药物的疗效进行综述.
作者：金晓红；朱志图；史毅 刊期： 2014年第01期
目的:探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血和骨髓中白细胞介素17 (IL-17)、白细胞介素23(IL-23)及转化生长因子β(TGF-β)的表达水平及其临床意义,阐明AA的发病机制.方法:随机选取50例AA患者作为实验组,30例同期体检健康人作为对照组;采用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR法检测外周血、骨髓中IL-17、IL-23、TGF-β蛋白及mRNA表达水平.结果:与对照组比较,实验组患者外周血、骨髓中IL-17和IL-23蛋白及mRNA表达水平明显升高,组间比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中以IL-17升高为显著(P＜0.001);实验组患者外周血和骨髓中TGF-β蛋白及mRNA表达水平明显降低,组间比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).实验组患者外周血和骨髓中IL-17与IL-23蛋白表达水平均呈正相关关系(r=0.69,P＜0.05; r=0.71,P＜0.05),IL-17与TGF-β蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.65,P＜0.05),IL-23与TGF-β蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.72,P＜0.05).结论:IL-17、IL-23和TGF-β可能直接参与AA的发生发展过程,三者的联合检测可为AA患者的临床治疗提供新的思路.
作者：李军；黄可欣；陆培信；宋雪松；马洪喜 刊期： 2014年第01期
目的:探讨抗精神病药奎硫平对谷氨酸损伤的海马神经元凋亡、坏死及细胞周期的影响,阐明其对神经系统的作用机制.方法:采用体外原代培养的大鼠海马神经元,复制谷氨酸损伤模型,实验分为正常对照组、谷氨酸损伤组和奎硫平(0.1、1.0、10.0、50.0、100.0、200.0和500.0 μmol·L-1)组,在体外通过流式细胞术(FCM)测定奎硫平应用前后神经元凋亡、坏死和细胞周期的改变.结果:谷氨酸损伤组较正常对照组细胞凋亡率增加(P＜0.01);与谷氨酸损伤组比较,50.0～200.0 μmol·L-1奎硫平组细胞凋亡率降低(P＜0.05,P＜0.01).谷氨酸损伤组坏死细胞较正常对照组升高2.9倍(P＜0.05);与谷氨酸损伤组比较,0.1 μmol·L-1奎硫平组坏死细胞比例降低(P＜0.05),为谷氨酸损伤组的52.0％.与正常对照组比较,谷氨酸损伤组G0/G1期细胞百分数增加(P＜0.001),S期细胞百分数下降(P＜0.01),G2 +M期细胞百分数变化不明显.与谷氨酸损伤组比较,200.0 μmol·L-1奎硫平组G0/G1期细胞百分数降低(P＜0.05),为谷氨酸损伤组的68.9％;S期细胞百分数升高(P＜0.05),为谷氨酸损伤组的3.4倍.结论:奎硫平能够抵抗谷氨酸诱导的神经元损伤,减少细胞凋亡和坏死,改变细胞周期进程.
作者：刘颖；张萱；刘纯岩；倪文杰；毛洪涛；王珍琦 刊期： 2014年第01期
目的:探讨经糖皮质激素联合免疫抑制剂干扰素γ(IFN-γ)治疗前后系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中自然杀伤细胞(CD3 CD56+ NK细胞)及其激活性、抑制性受体表达的变化,阐明其治疗SLE的作用机制.方法:选取26例SLE患者和16例健康对照者,采用流式细胞术检测2组受试者治疗前、治疗4和12周后外周血CD3 CD56+ NK细胞比率及其激活性受体和抑制性受体表达率.结果:与健康对照组比较,治疗前SLE患者CD3-CD56+ NK细胞比率明显降低(P＜0.05),其激活性受体NKG2C+、NKP30+和NKP46+的表达率均明显增高(P＜0.05),抑制性受体KIR2DL3+、KIR3DL1+和NKG2A+的表达率均明显降低(P＜0.05),IFN-γ+CD3-CD56+ NK细胞比率明显增高(P＜0.001).与治疗前比较,治疗4和12周后SLE患者CD3-CD56+ NK细胞比率均明显增高(P＜0.05);治疗4周后SLE患者CD3-CD56+ NK细胞激活性受体NKG2C+、NKP30+和NKP46+的表达率均明显降低(P＜0.05),治疗12周后上述受体表达率均进一步降低(P＜0.05).治疗4周后SLE患者CD3-CD56+ NK细胞抑制性受体KIR2DL3+、KIR3DL1+和NKG2A+的表达率较治疗前均明显增高(P＜0.05),治疗12周后CD3-CD56+ NK细胞KIR3DL1+、CD158a+、CD158b+和NKG2A+的表达率较治疗前均明显增高(P＜0.05).与治疗前比较,治疗4和12周后SLE患者IFN-γ+ CD3-CD56+ NK细胞比率均明显降低(P＜0.001).结论:NK细胞及其受体的变化可能与SLE的发病有关,糖皮质激素联合免疫抑制剂可能通过调节NK细胞及其受体的变化发挥治疗作用.
作者：冯莉；赵令；马宁；姜振宇 刊期： 2014年第01期
目的:探讨干细胞标志物Musashi1和性别决定区Y框架蛋白2(Sox2)在肺癌组织中的表达情况,阐明二者在肺癌发生发展过程中的作用及其临床意义.方法:采用免疫组织化学法检测50例肺癌组织、32良性病变肺组织和18例癌旁正常肺组织中Musashi1和Sox2蛋白的表达水平,并分析二者的表达水平与肺癌临床病理参数的关系.结果:Musashi1在肺癌组织、良性病变肺组织和癌旁正常肺组织中的阳性表达率分别为50％(25/50)、0(0/32)和0(0/18),在肺癌组织中的阳性表达率显著高于良性病变肺组织和癌旁正常肺组织(P＜0.001);Musashi1表达强度与肺癌的组织学类型和分化程度有关联(P＜0.05),与年龄、性别、TNM分期和淋巴结转移无关(P＞0.05).Sox2在肺癌组织、良性病变肺组织和癌旁正常肺组织中的中-强度阳性表达率分别为64％ (32/50)、9.4％ (3/32)和0(0/18),在肺癌组织中的中-强度阳性表达率显著高于良性病变肺组织和癌旁正常肺组织(P＜0.001);Sox2的表达强度与肺癌的组织类型有关联(P＜0.001),与年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移和分化程度无关(P＞0.05).肺癌组织中Musashi1和Sox2的阳性表达强度呈正相关关系(r=0.598,P＜0.001).结论:Musashi1和Sox2蛋白在肺癌组织中表达上调,提示二者在肺癌的发生发展过程中可能起重要作用,有望成为新的肺癌诊断标志物和治疗靶点.
作者：李劳冬；莫碧文；于会娜；王昌明；曾锦荣；王绩英；韦江红；黄剑伟 刊期： 2014年第01期
目的:探讨解毒通络保肾胶囊(保肾胶囊)对2型糖尿病大鼠肾组织脂联素及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达的干预作用,阐明其肾脏保护作用及机制.方法:将65只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(对照组,10只,喂饲常规大鼠饲料)、高脂膳食组(高脂组,10只)和糖尿病组(45只),后2组大鼠实验期间喂饲高脂饲料.4周后糖尿病组大鼠腹腔注射低剂量链脲佐菌素复制2型糖尿病模型,造模后再随机分为糖尿病模型组(模型组)、保肾胶囊组(1.4g· kg-1)和罗格列酮联合贝那普利组(阳性对照组).连续进行相应处理12周后,测定大鼠血糖(BG)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量清蛋白排泄量(UAE)及血清脂联素水平,免疫组织化学法检测肾组织脂联素和MCP-1蛋白表达水平.结果:与对照组比较,保肾胶囊组糖尿病大鼠BG、Scr、BUN水平及UAE明显降低(P＜0.01).与对照组比较,模型组大鼠血清脂联素水平、肾组织脂联素蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),肾组织MCP-1蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).保肾胶囊组大鼠血清脂联素水平和肾脂联素蛋白表达水平较模型组分别升高1.5和3.0倍(P＜0.01),而肾组织MCP-1蛋白表达水平降低55％ (P＜0.01).相关分析,血清脂联素水平与UAE(r=-0.466,P＜0.01)、Scr水平(r=-0.563,P＜0.01)、BUN水平(r=-0.512,P＜0.01)及肾组织MCP-1蛋白表达水平(r=-0.526,P＜0.01)均呈负相关关系.结论:保肾胶囊处理可升高2型糖尿病大鼠血清脂联素水平,上调肾组织脂联素水平和下调肾组织MCP-1蛋白表达水平,这可能与保肾胶囊的肾脏保护作用有关.
作者：赵金祥；赵丽艳；王秀阁；高林花；南征 刊期： 2014年第01期
目的:分析近10年来吉林省农村住院患者就诊与医疗费用的流向,探讨存在的主要问题并提出相应的对策.方法:通过2003 2012年吉林省新型农村合作医疗(新农合)信息系统中的统计报表收集资料,同时采用整群抽样方法,对2003-2012年参加新农合(简称参合)的住院患者进行调查,分析各级医院的住院人次、住院费用、住院补偿金额和次均住院补偿比等.结果:2003-2012年分流到县级以上和县级医疗机构的住院人次、住院费用和住院补偿费用逐年增加.2009年参合农民住院人次分流到县级以上、县级、乡级医疗机构的构成比分别为26.7％、46.3％和27.0％,2012年分别为30.4％、54.2％和15.4％.2009年住院费用分流到县级以上、县级、乡级医疗机构的构成比分别为57.0％、34.0％和9.0％,2012年分别为56.3％、37.9％和5.8％.2009年住院补偿费用分流到县级以上、县级、乡级医疗机构的构成比分别为49.2％、38.1％和12.7％,2012年分别为46.3％、45.6％和8.1％.2009年县级以上、县级、乡级医疗机构的次均住院补偿比例分别为32.2％、41.5％和52.6％,2012年分别为43.2％、63.1％和73.4％.结论:近10年来,吉林省参合农民的住院人次、住院费用和住院补偿费用分流到县级以上和县级医疗机构的比例均明显增多,分流到乡级医疗机构则逐年减少.次均住院补偿比在省内各级医院均逐年升高,乡级医疗机构的次均住院补偿比高.
作者：刘中正；张秀敏；王昕晔；赵璐；李晶华；沈文生；王国强 刊期： 2014年第01期
目的:观察葛根素(Pur)预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的干预作用,并探讨其预处理脑保护效应的可能时间窗.方法:40只雄性SD大鼠随机分为缺血再灌注(IR)组及Pur预处理(PC)-6h组、PC-12h组、PC-24h组和PC-48 h组,除IR组外,其余4组大鼠分别于脑缺血前6、12、24及48 h给予Pur100 mg·kg-1腹腔注射行单次预处理,IR组大鼠腹腔注射等容量生理盐水,采用大脑中动脉线栓法阻闭90 min再灌注建立局灶性脑缺血再灌注模型,于再灌注后24 h行神经功能评分并计算脑梗死体积百分比(BIVP).结果:与IR组比较,PC-6h、PC-12h及PC-24h组大鼠脑缺血再灌注后24 h神经功能评分均明显增加(P＜0.01),BIVP明显减少(P＜0.01),而PC-6h、PC-12h及PC-24h组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).PC-48 h组与IR组大鼠再灌注后24 h神经功能评分及BIVP比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:Pur预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤可产生保护作用,其预处理脑保护效应时间窗可持续达24 h.
作者：常明则；田晔；乔琳；狄政莉；胡彬；张茹；王虎青；吴海琴；刘勇 刊期： 2014年第01期
目的:观察“温阳补气”针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠血清中乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)和干扰素γ(IFN-γ)表达水平的影响,分析针灸治疗重症肌无力(MG)的作用机制.方法:采用乙酰胆碱受体α1 (AchRα1) 129-145多肽片段免疫接种雌性Lewis大鼠,建立EAMG模型.随机选取建模成功的EAMG大鼠30只,分为针灸治疗组、药物对照组及模型对照组,每组10只,并将同期购进未建模的10只大鼠设为空白对照组.针灸治疗组大鼠予以“温阳补气”针法治疗,每次30 min,每天1次,7d为一疗程,疗程间休息1d,连续治疗2个疗程;药物对照组大鼠予以溴吡斯的明灌胃治疗,18.5 mg· kg-1·d-1,连续治疗15 d;其余2组不予任何特殊处置,仅作对照观察.治疗前后24 h,抽取大鼠尾根静脉血,采用ELISA法测定大鼠血清中AchR-Ab和IFN-γ的表达水平.结果:与模型对照组及治疗前比较,治疗后针灸治疗组和药物对照组EAMG大鼠血清的AchR-Ab和IFN-γ表达水平均明显降低(P＜0.05或P＜0.01);与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清中AchR-Ab和IFN-γ表达水平明显升高(P＜0.01).但治疗后针灸治疗组与药物对照组比较无明显变化(P＞0.05).结论:“温阳补气”针法可以降低EAMG大鼠血清中AchR-Ab和IFN-γ的表达水平,从而达到治疗MG的作用.
作者：王洪峰；董理；王婷婷 刊期： 2014年第01期
目的:调查吉林省长春市高血压患者神经症的患病情况,探讨其影响因素,为高血压患者神经症的防治提供决策依据.方法:应用分层整群抽样方法抽取15家社区卫生服务中心,由社区医生电话预约该社区登记的高血压患者1 216人,采用世界卫生组织复合性国际诊断交谈表计算机版(CIDI3.0-CAPI)对患者进行访谈,共完成有效问卷999份,按《国际疾病分类第十版(ICD-10)》诊断标准进行神经症的诊断.高血压患者各种神经症的患病情况采用终生患病率、12个月患病率和30 d患病率3个指标描述;12个月患病率人群分布特征组间比较采用x2检验;对高血压患者的一般人口学特征和心理社会因素进行单因素和多因素非条件Logistic回归,筛选主要影响因素.结果:高血压患者神经症的终生患病率为14.6％,12个月患病率为10.8％,30 d患病率为7.9％; Logistic回归分析,年龄(60～69岁和≥70岁)、负性生活事件、简易积极应对和生活满意程度均是高血压患者神经症的影响因素,其OR (OR95％CI)分别为0.412 (0.216,0.784)、0.308 (0.139,0.683)、1.010(1.003,1.017)、0.670 (0.454,0.989)和0.934 (0.896,0.974).结论:高血压患者神经症患病率较高,年龄是其影响因素之一,60岁以后随年龄增加神经症的患病率降低;负性生活事件刺激会增加高血压患者患神经症的风险,而积极的应对方式和高生活满意程度可有效降低高血压患者患神经症的风险.
作者：周婕；寇长贵；史杰萍；吴燕华；王崇；艾立哲；于雅琴；刘粹；王希林 刊期： 2014年第01期
目的:探讨Beyond冷光美白治疗前应用VivaSens脱敏剂对美白术后牙齿敏感治疗的有效性及对美白效果的影响,阐明其在冷光美白术中的应用价值.方法:选择门诊牙齿冷光美白患者15例,共299颗患牙.以患者的上颌牙列或下颌牙列(包括前牙及前磨牙)的牙列整体作为观察单位,随机确定每个患者上颌牙列或下颌牙列作为实验组和对照组.实验组患者15例,共150颗患牙,其中上颌牙列8个,下颌牙列7个;对照组15例,共149颗患牙,其中上颌牙列7个,下颌牙列8个.实验组术前使用VivaSens脱敏剂,对照组应用安慰剂.术前、术后应用探针测试法和冷空气测试法测定并记录患者患牙的敏感度,记为0～10.术后发放调查问卷,询问术后24和48 h有无牙齿敏感症状.术前、术后应用Vita比色板进行比色并做色阶记录.结果:术后即刻,实验组101颗患牙(94.0％)和对照组全部患牙(100％)出现了牙本质敏感,牙本质敏感发生率组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);术后24 h,实验组有22颗患牙(14.7％)、对照组有75颗患牙(50.3％)仍有牙本质敏感症状,牙本质敏感发生率组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);术后48 h,实验组患牙牙本质敏感症状均消失,对照组仍有16颗患牙(10.7％)有牙本质敏感症状,牙本质敏感发生率组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).实验组各阶段牙本质敏感度均低于对照组(P＜0.05).Vita比色板比色,术后与术前比较,实验组与对照组均提高了约5个色阶,2组间美白效果比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:VivaSens脱敏剂能有效降低冷光美白术后牙本质敏感发生率和敏感度,而且不影响冷光美白的效果.
作者：王爽；谷旭；程梁；吴哲 刊期： 2014年第01期
目的:了解吉林省成年人高血压知晓率、治疗率和控制率,为高血压的防治提供科学依据.方法:采用多阶段分层整群随机抽样的方法,于2012年7月在吉林省的9个市(州)共32个县(市、区)共抽取成年居民20 473人,进行问卷调查和体格检查,对样本进行复杂加权后,采用基于抽样设计的校正的Rao-Scottx2检验比较不同人群高血压知晓率、治疗率和控制率.结果:吉林省成年人高血压知晓率、治疗率和控制率分别为44.1％、41.3％和7.9％;男性高血压知晓率、治疗率和控制率均显著低于女性(P＜0.001);高血压知晓率和治疗率在18～24岁人群中低,分别为9.6％和9.5％;高学历人群高血压知晓率和治疗率均低于低学历人群(P＜0.001);有家族史者高血压知晓率、治疗率和控制率均显著高于无家族史者(P＜0.001);农村居民高血压知晓率和治疗率均高于城市居民(P＜0.05),农村和城市居民高血压控制率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:2012年吉林省成年人高血压知晓率和控制率低于2004 2005年全国平均水平,但治疗率高于全国平均水平;年轻人和男性人群高血压知晓率低,提示吉林省应对青年男性加强高血压防治相关教育.
作者：钟磊；王畅；李勇；何欢；张慧慧；唐媛；刘凡瑜；闫志会；吕乐 刊期： 2014年第01期
目的:构建人线粒体超氧化物歧化酶2 (SOD2)的真核细胞表达载体,探讨其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达效果.方法:以HUVEC mRNA为原始模板,应用RT-PCR技术,扩增编码线粒体SOD2全长的cDNA片段.利用分子生物学技术,将扩增的cDNA片段与真核细胞表达载体pcDNA3.0的多酶切位点相连接,构成重组质粒并转染到HUVEC,将细胞分为HUVEC母细胞组、转染pcDNA3.0空载组和转染pcDNA3.0-SOD2组.应用RT-PCR方法检测SOD2在HUVEC中的表达情况.结果:将表达SOD2全长cDNA片段定向克隆至质粒pcDNA3.0,测序结果表明成功构建人线粒体SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2.该载体稳定转染HUVEC后,在细胞内获得了稳定表达.与母细胞组和空载组比较,转染pcDNA3.0-SOD2组SOD2 mRNA表达水平明显增加.结论:成功构建SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2,并在人HUVEC中成功表达.本研究为SOD2对细胞保护作用研究提供了实验模型.
作者：仲苓芝；李文雪；李秀英；李新娜；李玉林；李荣贵 刊期： 2014年第01期
目的:对比长时间传代前后细菌对抗生素和抑菌中药敏感性的改变情况,检测某些耐药基因是否发生基因突变.方法:分别在含有左氧氟沙星和银花泌炎灵片的M-H肉汤培养基中对大肠埃希菌ATCC25922进行200代传代培养,测定小抑菌浓度(MIC)并与给药前MIC进行对比,以PCR法扩增细菌解旋酶基因(gyrA)和拓扑异构酶Ⅳ基因(parC),进行测序.结果:与给药前比较,经含左氧氟沙星的培养基中连续传代的大肠埃希菌对左氧氟沙星的MIC明显上升(P＜0.01),而经含银花泌炎灵片培养基连续传代的大肠埃希菌对银花泌炎灵片的MIC未出现明显差异(P＞0.05).基因测序结果,只有经左氧氟沙星培养基中连续传代的大肠埃希菌ATCC25922编码parC基因第381位发生突变,腺嘌呤(A) →胸腺嘧啶(T),其编码的赖氨酸(127)→天冬酰胺,并在第386位碱基插入胸腺嘧啶(T);而gyrA基因未见有碱基突变或插入.结论:在特定的环境压力下左氧氟沙星比银花泌炎灵片更容易诱导大肠埃希菌耐药性的产生,而parC基因突变可能是细菌耐药性产生的原因之一.
作者：王槐栋；张晓天；张超；关世慧；董君雪；牟佳；王放；郑敬彤 刊期： 2014年第01期
目的:探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)基因对裸鼠体内膀胱癌生长的抑制作用,阐明反义端粒酶基因对膀胱癌的治疗作用.方法:膀胱癌EJ细胞株分别采用换液培养和用硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸(PS-ASON)处理,将换液培养及PS-ASON处理的EJ细胞分别接种BALB/c裸鼠(对照组24只和PS-ASON处理组12只),观察致瘤率;肿瘤形成至20 mm后将对照组裸鼠随机分为3组(n=8),隔日注射生理盐水(空白对照组)、PS-ASON(PS-ASON注射组)及化疗药物表阿霉素(表阿霉素组).观察各组裸鼠致瘤时间、裸鼠体质量及肿瘤体积的变化,计算各组裸鼠生存率;光镜下观察肿瘤组织形态学变化.结果:PS-ASON处理组裸鼠致瘤率低于对照组(P＜0.01),致瘤时间长于对照组(P＜0.01),裸鼠平均体质量高于对照组(P＜0.01).按照不同分组,裸鼠注射不同药物治疗12 d后,PS-ASON注射组和表阿霉素组裸鼠肿瘤体积均小于空白对照组(P＜0.01);PS-ASON注射组与表阿霉素组裸鼠肿瘤体积比较差异无统计学意义(P＞0.05).空白对照组裸鼠体质量持续下降;接种16 d后,PS-ASON注射组裸鼠体质量明显高于空白对照组(P＜0.01);接种肿瘤8d后,表阿霉素组裸鼠体质量低于PS-ASON注射组(P＜0.01);空白对照组裸鼠体质量与表阿霉素组比较差异无统计学意义(P＞0.05).光镜下观察,PS-ASON注射组和表阿霉素组肿瘤细胞出现大量凋亡和坏死.PS-ASON注射组裸鼠生存率明显高于空白对照组(P＜0.001)和表阿霉素组(P＜0.01).结论:反义端粒酶基因对体内膀胱癌形成及生长有明显的抑制作用,抑制程度与化疗药表阿霉素相当,可以用于膀胱癌治疗的进一步研究.
作者：王海明；石爱平；许宁；王春喜 刊期： 2014年第01期
目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1 AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义.方法:以pcDNA3.1 HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT) PAK1 AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG.将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达.结果:PCR扩增出约200 bp大小的野生型和失活型PAK1 AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1 AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000.结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1 AID的融合蛋白.
作者：刘彤；李丹妮；李洋；李丰 刊期： 2014年第01期
目的:利用特异性发夹结构Wee1B shRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响.方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、ControlshRNA注射组和Wee1B shRNA注射组,收集各组卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1BshRNA的干涉效能;荧光显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定Wee1B活性.结果:与TE缓冲液和Control shRNA注射组比较,Wee1B shRNA注射组小鼠1-细胞期受精卵Wee1B mRNA水平和蛋白表达显著降低;与其他3组比较,Wee1B shRNA注射组Wee1B的激酶活性明显降低;未注射组、TE缓冲液注射组和Control shRNA注射组在hCG注射33 h后1-细胞期受精卵的卵裂率分别为71.91％±1.74％、72.90％±2.25％和72.28％±2.06％,3组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);而Wee1B shRNA注射组的卵裂率提高18.00％,为90.00％±0.77％,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:Wee1B表达沉默可提高小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,说明Wee1B负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程.
作者：任丽莉；刘超；刘乙蒙；孟智超；孙静；于秉治；肖建英 刊期： 2014年第01期
吉林大学学报（医学版）杂志
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