学术投稿

单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

吴庆四;徐迎春;姬艳丽;杨媛媛;姚余有

关键词:胸腺/病理学, DNA损伤, 小鼠
摘要:目的引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂.方法载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1 h,在电泳缓冲液中解旋30 min,电泳30 min,胸腺细胞核用20 mg/L的EB染色5 min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用.结果紫外线和不同浓度H2O2 0.001、0.01、0.1、1.0 mmol/L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重.结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤.
安徽医科大学学报杂志相关文献
  • 瘦素在大鼠学习记忆中枢的分布

    目的观察瘦素在大鼠中枢神经系统的分布.方法采用HE和免疫组化SABC染色方法.结果在SD大鼠的大脑皮质、海马、下丘脑、杏仁体、丘脑、胼胝体、缰核和内囊等处可观察到瘦素免疫反应阳性细胞.结论瘦素广泛存在于大鼠大脑皮质、海马及杏仁体等与学习记忆密切相关部位.提示瘦素可能参与学习记忆活动.

    作者:王盛花;贾雪梅;柯红林;吴学平;陈晓蓉 刊期: 2005年第02期

  • 院内产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的流行及耐药性分析

    目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pm)流行及耐药情况,以指导临床合理用药.方法对临床分离的384株E.coli和88株K.pm采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)1999年版本标准规定的ESBLs表型初筛、确证实验确定ESBLs的发生率;药敏试验采用微量液体稀释法,由MicroScan WalkAWay-40全自动微生物分析仪测定.结果 E.coli和K.pm的ESBLs发生率分别为30.2%、28.4%;产ESBLs菌除对哌拉西林/他唑巴坦(Pip/Tazo)(E.coli为3.6%、K.pm为9%)、氨曲南(E.coli为8.1%、K.pm为5.7%)、头孢曲松(E.coli为3.9%、K.pm为4.5%)、头孢噻肟(E.coli为3.4%、K.pm为2.3%)耐药率较低外,对其他抗生素都有较高耐药率.结论治疗产ESBLs菌引起的感染应首选氨曲南、耐酶抑抑制剂复合物药物、头霉素类以及其药敏试验敏感的药物;E.coli和K.pm 是主要的ESBLs产生菌.

    作者:盛大平;李涛;徐元宏 刊期: 2005年第02期

  • 重组弓形虫14-3-3抗原用于弓形虫血清抗体的检测

    目的探讨重组弓形虫信号转导蛋白14-3-3(Toxo14-3-3)在弓形虫病免疫诊断中的价值.方法根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14-3-3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14-3-3的ORF,克隆pET-28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较.结果对400份血清标本的平行检测,Toxo14-3-3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2.5%、3.0%和3.25%,三者之间差异无显著性(P>0.05);三者之间的符合率为99.0%、98.8%和99.0%,差异无显著性(P>0.05).结论重组Toxo14-3-3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值.

    作者:蔡娟;都建;汪学龙;沈继龙 刊期: 2005年第02期

  • 头孢噻肟钠/头孢克洛序贯治疗小儿细菌性肺炎

    抗生素序贯疗法[1]:是指在感染早期阶段胃肠道外给予2或3 d的抗生素,待临床征象改善和基本稳定后就将抗生素改为口服用药的疗法.笔者对62例小儿细菌性肺炎患儿实施了抗生素序贯疗法,效果满意,现报道如下.

    作者:杨武 刊期: 2005年第02期

  • 卡方检验、圆形分布、同质分析三种统计方法在周期性数据中的比较应用

    目的运用卡方检验、圆形分布、同质分析对周期性数据进行分析比较.方法用卡方检验、圆形分布、同质分析对安徽省某地区 1 236名3~6周岁儿童的出生体重和出生日期进行分析比较.结果卡方检验难以正确分析周期性数据的构成差异,圆形分布与同质分析的分析周期性数据的结果较一致.结论圆形分布和同质分析可以综合分析周期性数据,使分析结果更加丰富和全面.

    作者:祝高峰;潘发明;魏跃红;叶冬青 刊期: 2005年第02期

  • 单细胞碱性凝胶电泳用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂

    目的引进单细胞凝胶电泳(SCGE)实验方法,用以检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂.方法载有经紫外线和H2O2作用过的胸腺细胞和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1 h,在电泳缓冲液中解旋30 min,电泳30 min,胸腺细胞核用20 mg/L的EB染色5 min,用荧光显微镜和显微细胞图像分析系统观察和分析H2O2和紫外线在体外条件下对正常胸腺细胞的DNA损伤作用.结果紫外线和不同浓度H2O2 0.001、0.01、0.1、1.0 mmol/L均可导致小鼠胸腺细胞DNA损伤,且随着H2O2浓度的增加DNA损伤逐渐加重.结论 SCGE可用于检测小鼠胸腺细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2和紫外线引起的胸腺细胞DNA损伤.

    作者:吴庆四;徐迎春;姬艳丽;杨媛媛;姚余有 刊期: 2005年第02期

  • DNA印迹试验

    DNA印迹是一种将电泳分离的DNA片段转移到固相支持物上用探针与靶DNA进行杂交的技术,又称Southern杂交.利用一种或多种限制内切酶酶切消化的基因组DNA[1],或经PCR获得扩增片段,经琼脂糖凝胶电泳,所得的DNA片段按分子大小分离,DNA片段经琼脂糖凝胶、变性,并将凝胶中的单链DNA片段转移到固相支持物上(多为硝酸纤维素膜,NC或尼龙膜),用放射性核素标记或非放射性核素(如地高辛)标记的探针与交联于NC膜上的DNA杂交,杂交斑点对X线底片曝光产生放射自显影图像或显色,有互补序列的DNA可通过形成特异的探针-靶序列复合物使靶序列可见.

    作者:汪渊;左艳;左莉;刘虎;张素梅;熊江霞;卜丽佳;周青;桂淑玉 刊期: 2005年第02期

  • 重组人白细胞介素10单克隆抗体对角朊细胞增殖及产生细胞因子的影响

    目的研究重组人白细胞介素10单克隆抗体对无血清培养的角朊细胞增殖、产生细胞因子的影响.方法用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定对细胞增殖的影响;用小鼠胸腺细胞增殖法检测IL-1;ELISA法检测IL-6、IL-8.结果抗重组人白细胞介素10单克隆抗体促进角朊细胞增殖与IL-1、IL-6及IL-8的分泌,并呈剂量依赖关系.结论重组人白细胞介素10单克隆抗体促进角朊细胞增殖与细胞因子分泌.

    作者:陈飞虎;李俊;陈敏珠 刊期: 2005年第02期

  • 抗肝硬化复方对胆汁淤积性肝硬化的保护作用

    目的观察抗肝硬化复方(BJ-JN)对胆汁淤积性肝硬化的治疗作用及其作用机制.方法利用胆总管结扎术制备大鼠肝脏胆汁淤积性肝硬化模型,于造模第四周起ig给予BJ-JN 3、6、12 g/(kg·d)和阳性对照药肝灵8 g/(kg·d),连续14 d检测血生化、肝匀浆SOD活性、MDA、肝组织羟脯氨酸(HyP)的含量和肝脏病理组织学的改变.结果 3个剂量BJ-JN均能使肝、脾指数和血浆ALT明显降低.病理组织学结果显示,BJ-JN对肝脏病理性改变有改善作用.3个剂量BJ-JN均能明显提高肝硬化大鼠的SOD活性和总蛋白含量,降低HyP含量,中、高剂量组能明显降低肝组织MDA含量.结论 BJ-JN对胆总管结扎术所致肝硬化具有明显的保护作用,其作用机制可能与抗氧化作用有关.

    作者:胡秀萍;吴樱樱;朱虹;徐明;邹玉宏;邝荔香;杨雁;陈敏珠 刊期: 2005年第02期

  • 体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

    目的探索在体外诱导人骨髓间充质干细胞(hMSC)向心肌细胞分化的方法.方法以5-杂氮胞苷(5-Aza)对hMSC诱导,利用结蛋白抗体、房性利钠肽抗体以及闰盘蛋白抗体进行免疫组化染色,并进行超薄切片透射电镜观察.结果经反复多次传代后,细胞形态及抗原表达无改变,始终保持未分化状态和稳定扩增.利用5-Aza对其诱导后第2周始,免疫组化染色发现细胞结蛋白、闰盘蛋白以及房性利钠肽表达均为阳性,不同浓度5-Aza诱导组之间差异无显著性.电镜观察发现这些细胞具有心肌细胞的特点.结论在体外利用5-Aza可以诱导hMSC向心肌细胞分化.

    作者:韩永生;褚俊;翟志敏;严激;周德存;胡闻;陈柯;严中亚 刊期: 2005年第02期

  • 银杏叶提取物对亚硝酸钠小鼠记忆的影响

    目的探讨银杏叶提取物(EGB)对亚硝酸钠(NaNO2)小鼠记忆的影响.方法采用跳台实验观察EGB对跳台潜伏期(SDL)和跳台错误次数的影响;应用毛细管微量热沉法和毛细管微量法分别检测血液指标纤维蛋白原(Fib)含量和红细胞压积(HCT)数值.结果 EGB 25、50、100 mg/kg可明显延长SDL,EGB 50、100 mg/kg组小鼠跳台错误次数明显减少.EGB 25、50、100 mg/kg均可明显恢复降低的Fib含量;EGB 50 mg/kg可明显升高NaNO2小鼠的HCT数值.结论 EGB对NaNO2造成的小鼠记忆障碍有明显的改善作用,其机制可能与改善血液流变状态有关.

    作者:周兰兰;明亮;左从文;马传庚 刊期: 2005年第02期

  • 初孕年龄、产次与绝经后妇女骨密度的关系

    目的探讨初孕年龄、产次与绝经后妇女骨密度(BMD)的关系.方法调查180名健康绝经后妇女年龄、初孕年龄、产次、绝经时间,并测量身高、体重、腰椎L2~4及左侧股骨近端(Neck、Ward三角、Troch)BMD.结果①初孕年龄≤20岁的绝经后妇女在L2~4及股骨近端各部位BMD值均低于初孕年龄在21~25岁者(Neck、Ward三角、Troch P<0.01,L2~4 P<0.05)和初孕年龄在26~30岁者(L2~4、Neck、Ward三角、Troch P<0.01),在L2~4、Neck、Ward三角部位低于初孕年龄>30岁者(Ward三角P<0.01,L2~4、Neck P<0.05).②随着产次的增加,股骨近端各部位BMD逐渐下降,产3次,产4次,产次≥5次各组BMD显著低于产1次和产2次组(P<0.01).③多因素分析显示:产次与股骨近端各部位BMD呈显著负相关,绝经年限与L2~4、Neck和Troch部位BMD呈显著负相关,初孕年龄与Neck和Troch部位BMD呈负相关.结论初孕年龄≤20岁的绝经后妇女腰椎和股骨近端BMD减低,产次影响绝经后妇女股骨近端各部位BMD.

    作者:佘敦敏;章秋;邵宜波;杨洋 刊期: 2005年第02期

  • 自由臂三维超声成像技术的临床应用

    目的探讨自由臂三维超声成像技术的临床应用价值.方法采用自由臂三维超声成像方法对43例各种疾病的患者进行三维重建.结果三维图像重建满意者38例,成功率88%.三维图像形象逼真,形态直观,立体感强,空间关系明确.结论自由臂三维超声成像技术在临床应用是可行的,可以提供二维超声图像不能提供的病灶形态学信息.

    作者:张超学;张新书;王玲;郑慧;姜凡;段开诚;刘芳 刊期: 2005年第02期

  • 两种不同培养体系对卵母细胞体外受精及胚胎体外发育的影响

    目的挑选出一种较为理想的体外受精(IVF)培养体系.方法 90例(91个周期)接受IVF/单精子胞浆内注射(ICSI)技术治疗的患者,卵母细胞的IVF及胚胎的体外培养分别采用GⅢ体系(A组,51周期,)和Quinn体系(B组,40周期).结果 A组和B组分别获得683枚和652枚卵母细胞,IVF后,受精率分别为63.25%(432/683)及66.41%(433/652),无显著性差异(P>0.05).体外培养24 h后,A组414枚受精卵发生卵裂,卵裂率为95.83%(414/432);B组397枚受精卵发生卵裂,卵裂率为91.69%(397/433) ,无显著性差异(P>0.05).继续培养,行第3天胚胎移植,A、B两组分别获得优质胚胎220及140枚(53.14%和35.26%).终,A组共有26例获得临床妊娠,B组15例获得临床妊娠,妊娠率为50.98%和37.5%,两者之间有显著性差异(P<0.05).另外,B组中受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率方面,IVF周期与ICSI周期之间无显著性差异(P>0.05),而A组中优质胚胎率及临床妊娠率方面,有显著性差异(48.97%和63.11%,45.71%和56.25%,P<0.05),受精率和卵裂率方面两周期之间无显著性差异(P>0.05).结论 Quinn系列似乎有助于卵母细胞的体外受精,而GⅢ体系更有利于胚胎的早期发育及后期的着床方面.对于GⅢ系列采取ICSI授精方式似乎更能提高试管婴儿的成功率.

    作者:赵济华;曹云霞 刊期: 2005年第02期

  • 中国汉族人群N-乙酰基转移酶1基因多态性的检测分析

    目的探讨N-乙酰基转移酶1(NAT1)基因型检测方法及其基因多态性的分布.方法在140名汉族健康人的外周血中,应用聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性分析(RFLP)及多重PCR技术,进行NAT1等位基因分型研究.结果应用PCR-RFLP+多重PCR方法避免了多种限制性内切酶之间相互干扰,可准确区分NAT1基因型.在140名检测标本中,NAT1*3,NAT1*4,NAT1*10和NAT1*11的发生频率分别是8.2%、 49.6%、 40%和2.2%.NAT1*4发生率明显低于欧美人群,但高于东南亚人群;而NAT1*10的发生率高于欧美人群,NAT1*3和NAT1*11的发生率较低,与大多数亚洲人群基本一致.结论 PCR-RFLP+多重PCR方法检测NAT1基因型特异性高;NAT1基因型分布与其他国家检测情况有所差异.

    作者:徐张巍;梅俏;许建明;胡乃中;胡咏梅 刊期: 2005年第02期

  • 链脲佐菌素糖尿病大鼠下颌下腺超微结构观察

    目的观察链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠下颌下腺超微结构变化.方法 SD雄性大鼠18只,随机分为对照组、实验组及治疗组,用STZ复制糖尿病动物模型,饲养12周后测体重和血糖,取材制片应用透射电镜观察其超微结构变化.结果与对照组体重[(367.33±26.73) g]和血糖[(6.49±0.79) mmol/L]比较:实验组体重[(156.50±10.13) g]减轻、血糖[(27.79±9.28) mmol/L]升高,有显著性差异(P<0.01);治疗组体重[(354.67±31.94) g]、血糖[(8.75±2.56) mmol/L]无显著性差异(P>0.05).与对照组比较,实验组下颌下腺电镜下主要变化为为:细胞核固缩,染色质致密;线粒体肿胀或空泡变性、嵴断裂;粗面内质网囊状扩张,断裂成短棒状,脱颗粒等.治疗组无明显改变.结论糖尿病可导致下颌下腺组织出现一系列超微病理改变,为进一步探讨糖尿病发生机制提供了形态学依据.

    作者:吴学平;贾雪梅;王盛花;汪渊;张孝林;朱华庆;胡闻 刊期: 2005年第02期

  • 胰岛素抵抗与高血压病左室肥厚、心力衰竭的关系

    目的探讨胰岛素抵抗(IR)与高血压病左室肥厚及心力衰竭的关系.方法选择健康对照组30例,高血压病例120例(其中不伴靶器官损害组44例,伴左室肥厚组39例,伴心力衰竭组37例),根据UCG测定左室质量指数和射血分数,并根据公式计算IR指数,HOMA-IR=FINS×FPG/22.5.结果 Logistic回归分析显示:HOMA-IR是影响高血压病左室肥厚的危险因素(P<0.01),也是影响心力衰竭的危险因素(P<0.05).结论 IR随高血压病心脏损害的加重,呈逐步上升趋势,经多因素分析具有统计学意义.

    作者:殷丽琼;吴继雄 刊期: 2005年第02期

  • 急性淋巴细胞白血病p16基因纯合性缺失、点突变及启动子甲基化变异

    目的探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)患者p16基因的失活机制.方法从29例患者外周血提取白细胞基因组DNA,采用PCR、PCR-SSCP、MSP分析方法,对p16基因第二外显子的纯合性缺失、点突变及启动子区CpG岛的甲基化变异进行分析.结果 p16基因第二外显子的缺失率为27.6%(8/29),未见其点突变;p16基因启动子区CpG岛的甲基化率为13.8%(4/29).结论 p16基因的失活和ALL的发生发展有一定的关系.

    作者:刘晓颖;汪惠园;周青;袁凌云;汪渊 刊期: 2005年第02期

  • 体外循环术后异常失血原因分析及防治

    目的探讨体外循环术后异常失血的原因及处理方法.方法分析374例体外循环心内直视术后纵隔、心包和(或)胸腔失血量.结果术后纵隔、心包和(或)胸腔失血量>15 ml/kg者共45例,占12.03%.异常失血的原因以术前心功能不全及继发的多脏器功能失调、术中止血不彻底、鱼精蛋白中和不足、深静脉穿刺不当、转机时间过久等多见.结论术前调整脏器功能,术中细致操作、彻底止血、加强血液保护,术后严密监护、妥善处理、必要时及时开胸止血,是防治术后出血的关键.

    作者:李峰;周汝元;林敏;葛圣林;葛建军;胡根源;张士兵;张飞;周正春 刊期: 2005年第02期

  • 犬慢性快速右心室起搏构建心衰模型

    目的探讨犬快速右心室起搏构建心衰模型的方法学.方法采用快频率[(230±10)次/min]以VOO方式起搏犬右心室3周,构建实验性心衰模型,观察起搏前、后临床表现.同时应用心脏彩色超声心动图检测起搏前后心功能及心脏形态学变化.结果 5条犬经快速右心室起搏3周均出现呼吸困难、活动减少、体重减轻等临床表现,心脏彩色超声心动图证实左室射血分数由62.6±4.77降至44.4±2.88 (P<0.01).结论慢性快速右心室起搏是构建心衰模型的有效方法,成功地给犬安植快频率右心室起搏器并确保手术后3周以(230±10)次/min快频率起搏是模型构建成功的关键,选择理想的手术切口及佳的囊袋位置在模型构建过程中尤为重要.

    作者:王邦宁;宋兵;陈大年;骆志刚 刊期: 2005年第02期

安徽医科大学学报杂志

安徽医科大学学报杂志

主管:安徽省教育厅

主办:安徽医科大学