武建潮；宁金龙；高学宏；李晓静；孟刚
目的人内皮细胞特异性分子-1(Human endocellular-specific molecule-1, ESM-1)表达载体的构建及其体外表达,表达产物的纯化及多克隆抗体和单克隆抗体的制备.重组MEK基因的真核转染,转染的内皮细胞中ESM-1的表达. 方法用PCR方法扩增ESM-1的基因片段,扩增产物与T-Vector连接,构建克隆载体pGEM-T- ESM-1.在宿主菌中扩增重组质粒,提取质粒并进行酶切纯化,将目的基因插入pET-28b中构建成表达载体,再次转化入大肠杆菌XL1-blue,蓝白选择、耐药性标记粗筛并挑取阳性克隆,经限制性内切酶酶谱分析、DNA序列分析两种方法鉴定.然后提取质粒,转化入大肠杆菌BL-21,用IPTG诱导表达.表达产物行SDS-PAGE,割下所需条带,用电洗脱方法纯化得到所需目的蛋白.免疫新西兰纯种大白兔,制备多抗,并用免疫双扩散法测定抗体效价;免疫BALB/C小鼠,制备抗人ESM-1的单克隆抗体.用重组MEK( )基因转染人脐静脉内皮细胞ECV304,加以鉴定,并检测转染细胞中ESM-1表达的改变. 结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为pET-28b-ESM-1重组质粒,SDS-PAGE证实获得的融合蛋白分子量为24 ku,表达量约占菌体总蛋白的24%.所得多抗效价为1:16(免疫双扩散),单抗效价为1:6000(ELISA).重组MEK基因转染成功,用Western blot和免疫荧光的方法检测显示,转染不同活性型重组MEK基因的ECV304其ERK-2的表达量不同, ESM-1的表达量在转染不同活性型重组MEK基因的细胞中也不同,都是转染高活性型的细胞中表达量高,转染野生型的细胞中次之,未转染的ECV304中表达少. 结论成功获得ESM-1的表达载体, 并在大肠杆菌中获得表达,成功制备了抗ESM-1的多克隆抗体和单克隆抗体.在转染了不同活性型重组MEK基因的ECV304细胞中,ESM-1的表达量有改变,在转染高活性型重组MEK基因的细胞中表达量高,转染野生型重组MEK基因的细胞次之,未转染的ECV304中ESM-1的表达量少.说明ESM-1可能是MAPK信号转导通路上的一个重要的成分,并在肿瘤转移以及肿瘤血管生成中发挥作用.
作者：张素梅；汪渊 刊期： 2004年第01期
介绍本实验室常用基因组DNA的提取方法:对来源于培养的细胞或血细胞,一般采用蛋白酶K和去垢剂温和破碎的方法,而对于组织来源的细胞,还要先采用物理方法如匀浆法、超声波法、液氮破碎法等破碎细胞,再行分离.
作者：汪渊；胡若磊；朱光能；张素梅；左莉；卜丽佳；朱华庆；周青；桂淑玉 刊期： 2004年第01期
白癜风是一种以局限或广泛性色素完全脱失斑为典型临床表现的常见皮肤病,目前病因和发病机制尚有待进一步研究.由于本病可严重影响患者外观,由此产生许多社会适应性及精神心理问题[1,2],并且患者常并发其他多种自身免疫性或内分泌疾病而颇受临床关注.现收集并分析了我院门诊10年来773例白癜风患者的临床表型(病程、发病季节、临床表现、伴发疾病及家族史等),同时对部分患者的精神心理因素与正常人群之间的差异进行了对比分析.
作者：宋军；孟庆琴；马小玲；刘雯蓓 刊期： 2004年第01期
目的建立单室模型药物血管外多剂量给药的吸收和清除药动学的残数法计算方法.方法将残数法原理用于单室模型药物血管外多剂量给药的药动学参数计算,以数学分析和模型药物数据处理进行方法学研究.结果建立了单室模型药物血管外多剂量给药的药动学参数的残数法,其与单剂量的残数法有一定的相关性.结论残数法适用于评价单室模型药物血管外多剂量给药的药动学参数,以评价多剂量给药的吸收和清除特征是否发生变化,并据此指导临床用药.
作者：张继稳；裴小兵 刊期： 2004年第01期
目的通过分析332例儿童型白癜风的临床资料,了解此型白癜风的临床特点. 方法运用SPSS 10.0软件分析资料.结果儿童型白癜风平均发病年龄为7.61岁,临床类型以局限型多见,好发季节为夏季, 伴发自身免疫性疾病少见.结论儿童型白癜风是一种特殊类型的白癜风.
作者：汪继云；杨森；刘宏胜；崔勇；刘江波；何平平；高敏；王红艳；张学军 刊期： 2004年第01期
目的探讨氨甲喋呤(MTX)单次肌肉注射与米非司酮联合应用治疗异位妊娠.方法观察组MTX 50 mg肌注1次,米非司酮75 mg Bid口服×3～4 d,对照组MTX 20 mg肌注Qd×5 d,两组均同时给予中药宫外孕一号方口服.结果 MTX单次肌肉注射与米非司酮联合治疗成功率为90.77%,明显高于对照组,β-HCG下降速度及幅度明显高于对照组且副反应明显减少.结论 MTX单次肌肉注射与米非司酮联合治疗异位妊娠安全有效、副反应少.
作者：步仰高；朱贝利 刊期： 2004年第01期
目的建立药用聚乳酸辅料的Sn含量测定方法.方法样品经硝酸-硫酸消解处理,以分光光度法测定之.显色剂为苯芴酮,测定波长为510 nm.结果线性范围为1～10μg;r=0.9997; 检出限为1～2 μg/g;方法的平均回收率为100.8%;日内RSD为5.3%.结论该方法已符合2000年中国药典关于杂质限量检测方法的规定,是检测此类辅料中Sn残留量的可行方法.
作者：赵国琴；高永清；储成顶；俞敏；刘飞 刊期： 2004年第01期
目的了解经肛门途径清洁灌肠及经口服途径全肠道灌洗对幼龄兔肠黏膜屏障功能及细菌移位的影响,以期选择更为安全的方法;并对灌肠后细菌及内毒素移位的机制进行探讨.方法选用幼龄兔30只,随机分成3组,每组10只,分别为经肛灌肠组(A),经口全肠道灌洗组(B)及空白对照组(C).依次取肠系膜淋巴结(MLN)、肝、脾、肺匀浆,并抽取门静脉血液、胆汁,分别行细菌培养及药敏实验,并行血浆内毒素测定.结果口服清肠组及灌肠组与对照组三者之间差异均有显著性(P<0.05).结论灌肠组和口服清肠液组,都可明显地引起肠道细菌移位,而灌肠组较口服清肠液组更为明显.
作者：王忠荣；张敬杰；徐兵；李巍松；孔祥；苏义林；吴圣军；孙华；王德生；卜跃晨；陈多炎；陈柯；胡闻 刊期： 2004年第01期
目的探讨枯否细胞条件培养基(KCCM)、混合的新生牛血清(NBS)和大鼠血清(RS)对肝星状细胞(HSC)增殖和胶原合成的促进作用.方法采用KCCM、单纯NBS及混合血清刺激大鼠HSC-T6细胞,用3H-TdR和3H-脯氨酸掺入法检测HSC增殖活性和胶原合成状况.结果不同刺激剂作用48 h后,HSC均体积增大,胞突增多延长,核分裂像增多.48 h的3H-TdR和96 h的3H-脯氨酸掺入明显增加.结论混合血清对HSC-T6的综合激活作用较KCCM和单纯10% NBS的作用明显,能明显促进其增殖和胶原合成,是有效的肝纤维化体外模型.
作者：吴强；杨雁；张宵翔；薛绍礼；邹宇宏；陈敏珠 刊期： 2004年第01期
巨噬细胞金属弹力酶(macrophage metalloelastase,MME)是由活化的巨噬细胞分泌的一种基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs),命名为MMP-12.它是巨噬细胞穿透基底膜和浸润组织必不可少的一种活性成分.近10年来,有关巨噬细胞金属弹力蛋白酶基因的研究在不断深入,研究领域不断扩展.现从动物实验和人类疾病二个方面综述巨噬细胞金属弹力蛋白酶基因表达的意义.
作者：许建明；石海 刊期： 2004年第01期
目的比较心肺转流心脏手术对成人和小儿围术期患者血浆C-反应蛋白(CRP)及细胞因子TNF-α、IL-8、 IL-10水平的影响.方法将择期心脏手术患者16例分为两组,成人组(A组),小儿组(B组),每组8例.分别于全麻诱导前(基础,T0)、主动脉开放后(T1)、心肺转流停机后(T2)、术毕(T3)、术后24 h(T4)、术后48 h(T5)抽取患者中心静脉血,采用双抗体放免法定量测定TNF-α、IL-8、 IL-10的血浆水平;采用放射免疫分析法定量测定CRP血浆水平.结果组间比较A组和B组TNF-α在T0、T1、T2、T4、T5血浆浓度相比差异无显著性(P>0.05),而在T3,A组显著高于B组.CRP在T0、T1、T2、T3、T4时,A组与B组比较差异没有显著性(P>0.05);而在T5 A组血浆浓度高于B组,差异具有显著性(P<0.05).IL-8血浆浓度在T2、T3时,A组低于B组差异具有显著性(P<0.05);IL-10血浆浓度A组和B组比较,差异无显著性(P>0.05).组内比较A、B两组内TNF-α、IL-10所测血浆浓度值和T0相比差异无显著性(P>0.05).CRP在A组和B组中T4和T5均较T0升高(P<0.05);IL-8在A组和B组中T1、T2、T3、T4、T5时均较T0增高(P<0.05).结论心肺转流心脏手术所诱发的组织炎性反应小儿强于成人.
作者：钱梅；方能新；张健；曾一平；徐志荣；夏云 刊期： 2004年第01期
目的观察重组人生长激素对严重烧伤患者创面愈合、蛋白质代谢及预后的作用.方法严重烧伤患者36例,随机分成治疗组和对照组各18例,两组患者具有可比性.治疗组患者自术后第1天开始加用重组人生长激素(rhGH)0.2 U/(kg*d),疗程2周,对照组未用rhGH,其它治疗方法基本相同.比较两组患者一般情况、创面愈合及蛋白质代谢情况.结果与对照组相比,rhGH治疗组患者一般情况良好、体重下降减少、供皮区和植皮区创面愈合提前、伤后14 d后血浆蛋白水平明显升高(P<0.05).结论 rhGH能促进蛋白质合成、缩短创面愈合时间,从而提高大面积严重烧伤患者治愈率.
作者：方林森；胡德林；汪昌荣；王永杰；余又新 刊期： 2004年第01期
目的观察血小板活化因子(PAF)对培养肺微血管内皮细胞形态、单层通透性、肌动蛋白骨架的影响及山莨菪碱的干预作用.方法 HE染色观察PAF对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)的形态影响;用针头式滤器观察PAF 对RPMVEC单层通透性的影响;用免疫细胞化学的方法观察PAF 对RPMVEC F-肌动蛋白(F-actin)分布的影响;并观察山莨菪碱干预后的变化.结果 PAF浓度大于0.1 mg/L作用48 h内观察到细胞脱落和破裂.10 mg/L PAF 120 min内可使RPMVEC单层通透性增高、F-actin解聚,山莨菪碱可抑制上述变化.结论 PAF引起RPMVEC脱落和破裂呈时间和剂量依赖性;PAF引起内皮单层通透性的增高的机制与F-actin解聚密切相关;山莨菪碱可抑制PAF引起RPMVEC细胞脱落、单层通透性增高和F-actin解聚,对PAF引起的RPMVEC损伤有一定保护作用.
作者：王应灯；孙耕耘 刊期： 2004年第01期
目的克隆小鼠巨噬细胞金属弹力酶(MME)基因结构域Ⅰ和Ⅱ,构建真核细胞表达载体,用于动物肿瘤原位种植模型的研究.方法通过PCR选择性扩增MME基因结构域Ⅰ和Ⅱ,克隆入pGEM-T载体中,限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切及PCR鉴定.结果以MME cDNA为模板进行PCR扩增的特异性片段在750 bp和1 000 bp之间.以此构建的pGEM-T-MME克隆载体和表达载体, 经限制性内切酶酶切证实载体中带有MME目的基因片段; 与小鼠MME cDNA序列的碱基符合率为99.63%; 证明MME基因已正确克隆到了真核细胞表达载体pcDNA3.1中.结论成功构建了pcDNA3.1-MME重组质粒,奠定了转基因研究MME表达与肿瘤生长转移关系的实验基础.
作者：许建明；石海；梅俏；汪学龙；宋育林；鲍俊俊；董钟云 刊期： 2004年第01期
目的观察器官培养角膜保存法保存角膜活性的效果,探讨该方法临床应用的可行性.方法兔角膜28只,分为两组,实验组16只眼,对照组12只眼.实验组用31℃器官培养液保存,对照组用K-液4℃保存.两组中每4只角膜分别保存3、7、14 d.实验组4只角膜保存14 d后移入运输液中培养3 d.保存前测角膜厚度,做内皮细胞形态学检查和台盼蓝染色.保存后不同时间做相同检查和茜素红染色, 并用透射电镜观察角膜内皮细胞超微结构.在取出角膜前从所有保存瓶抽取保存液样本做细菌和真菌的培养. 临床应用器官培养保存1周的角膜行穿透性角膜移植术1例.结果实验组和对照组角膜内皮细胞形态、活性率1周后差异有显著性.2组角膜厚度差异有显著性.透射电镜检查, 实验组7 d和14 d角膜内皮细胞超微结构完整.对照组7 d后线粒体肿胀,14 d可见细胞结构破坏.穿透性角膜移植术临床病例随访2年,角膜移植片基本透明.结论器官培养液保存角膜的效果确切,活性保存时间明显长于K-液保存.
作者：廖荣丰；朱美玲；刘兴华；龚健杨；陈逖 刊期： 2004年第01期
目的克隆和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶(SjTPI)编码基因,为寻找血吸虫病的候选疫苗联合应用打基础.方法设计合成引物,抽提日本血吸虫成虫总RNA,用RT-PCR法从中扩增出SjTPI基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,用双酶切、以重组质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定.结果 RT-PCR法从成虫总RNA中扩增出大小为759 bp SjTPI基因编码序列,重组质粒pGEM-SjTPI经双酶切、PCR扩增,均可获得一条与RT-PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明具有一个长度为759 bp的完整开放阅读框,与日本血吸虫(菲律宾株)和曼氏血吸虫磷酸丙糖异构酶核苷酸序列有高度同源性(分别为99%和88%).结论该实验成功地克隆了SjTPI编码基因,为进一步研究提供了条件.
作者：汪学龙；沈继龙；姚涌；江宝玲；蒋作君 刊期： 2004年第01期
目的分析实验性动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)大耳白兔血液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶的变化规律.方法建立兔动脉粥样硬化模型,检测模型各阶段血液中各种脂质、AST、ALT、LDH、CK、Bun、Cre等生化指标.结果成功地建立了动脉粥样硬化兔模型;大白兔在喂食高胆固醇饲料4周或12周时,血液中总胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-ch)浓度升高(P<0.05);AST、ALT的活性和Bun、Cre的含量变化差异无显著性(P>0.05);而LDH和CK的活性随着动脉粥样硬化的进程而逐渐升高,变化差异有显著性(P<0.05﹚,ASa组和ASb组的LDH活性分别比对照组升高2.2倍和3.5倍,CK的活性则分别增加2.4倍和7.5倍.VitE组与ASb组比较,LDH和CK的活性都显著下降(P<0.05).结论提示血清LDH和CK的活性升高与动脉粥样硬化的进程相关;VitE可能对血管内皮细胞和平滑肌细胞具有保护作用.
作者：江志奎；朱华庆；周青；汪渊 刊期： 2004年第01期
新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿窒息的常见并发症,其中中、重度HIE患儿病死率和后遗症发生率较高,在此类患儿血清中某些酶有不同程度的变化.现对HIE患儿血清酶学变化进行观察分析.
作者：周金花；宣桂华 刊期： 2004年第01期
目的探讨造血干细胞移植(HSCT)治疗血液肿瘤的造血重建、疗效和移植相关并发症.方法①8例血液肿瘤患者中,采用自体外周血干细胞移植(APBSCT)2例,自体骨髓移植(ABMT)1例,HLA 1～2个位点不合无关脐血移植(UCBT)3例,异基因外周血干细胞移植(Allo-PBSCT)2例,分别采用CBV、Bu/Cy、Bu/Cy/BCNU和Cy/TBI 4种方案进行预处理.②患者自体外周血干细胞(PBSC)动员方案采用Cy/G-CSF,异基因供者PBSC动员方案采用G-CSF/GM-CSF.③在异基因HSCT中采用环孢霉素A(CsA)和霉酚酸酯(MMF)预防急性GVHD(aGVHD).④应用小剂量肝素预防肝静脉闭塞病(VOD).结果①3例接受自体HSCT的患者移植后均获得完全缓解(CR),2例移植后淋巴瘤复发.5例接受异基因HSCT治疗的患者中有1例未植入,异基因HSCT的植入率为80%.8例移植成功率为87.5%.②8例患者移植后于3～7 d(中位时间为4.5 d)开始骨髓脱空,骨髓脱空时间持续3～9 d(中位时间为5 d),外周血中性粒细胞绝对值(ANC)＞0.5×109/L的时间为9～27 d(中位时间为14 d),血小板计数(BPC)＞20×109/L的时间为10～41 d(中位时间为14 d),BPC＞50×109/L的时间为11～53 d(中位时间为14 d).在不同类型的HSCT中以APBSCT和Allo-PBSCT造血重建较快,ABMT和UCBT造血重建相对较晚.③5例异基因HSCT中有3例发生Ⅰ～Ⅱ度aGVHD,GVHD的发生率为60%.8例患者移植后仅1例发生咽部感染,1例发生晚期出血性膀胱炎(HC),感染和HC的发生率均为12.5%.无VOD和移植相关死亡发生.结论 HSCT可以提高血液肿瘤的CR率和治愈率,延长血液肿瘤患者的无病生存(DFS)时间.
作者：刘欣；孙自敏；王祖贻；刘会兰；朱薇波；吴竞生；汝文华 刊期： 2004年第01期
目的探讨环孢素A治疗急性排斥反应的作用机制.方法采用Ono方法建立SD大鼠心脏移植排斥反应动物模型,将实验分为两组:对照组n=10,未进行任何治疗;环孢霉素A(CsA)组:n=20,术后1～7 d腹腔内注射CsA 10mg/(kg*d).采用ELISA法测定术后IL-2的含量,采用Tunel法检测心肌细胞凋亡,并计算凋亡指数.结果两组移植物存活时间为7.25 d±0.71 d和19.4 d±2.07 d,实验组比对照组延长12 d(P<0.01).实验组术后IL-2含量明显减少,与对照组相比较差异有显著性(P<0.05).两组中心肌细胞凋亡指数分别为2.84±1.48和0.54±0.19(P<0.0001).结论 CsA通过抑制IL-2的分泌和心肌细胞凋亡,发挥抗排斥作用.
作者：钱叶本；陈规划；黄洁夫 刊期： 2004年第01期
安徽医科大学学报杂志
主管:安徽省教育厅
主办：安徽医科大学
