曾杰;肖亚平;安尧;徐晓玉
DNA甲基化是目前研究为广泛的一种表观遗传学现象,甲基化后的DNA可在不改变碱基序列的情况下对植物的表型进行调控.在高等植物中有CG、CHG和CHH(H代表A、C或T)3种甲基化位点,多发生于对称序列CG和重复序列中,且不同物种中的甲基化程度和模式不同.药用植物功能基因启动子区域的DNA发生甲基化后,可抑制基因的表达,进而影响其次生代谢产物的积累,导致品质差异的形成.在众多的DNA甲基化检测方法中,重亚硫酸盐测序法可在单核苷酸水平上鉴别DNA甲基化的位点和程度,是DNA甲基化分析的金标准.对其进行引物优化、技术改良后,可有效地揭示药用植物的DNA甲基化情况,这为阐明经典遗传学不能完全解释的药用植物品质差异等问题提供了技术支持,并开辟了新的研究方向.
作者:邢朝斌;张妍彤;王卓;宋菊;龙月红 刊期: 2017年第24期
目的 通过生物活性检测结合化学指纹图谱分析,探索灯盏细辛抗血小板聚集的活性成分.方法 采用UPLC-UV分析技术建立不同批次灯盏细辛药材化学指纹图谱,对不同批次灯盏细辛进行抗血小板聚集活性效价检测,基于谱效关系推测可能的活性物质,并对5个高相关性成分进行体外抗血小板聚集作用的验证,根据5种单体化合物在灯盏细辛中的含量差异,计算5个单体化合物的相对活性贡献度.结果 通过化学指纹图谱与抗血小板聚集生物效价的谱效相关分析,筛选并鉴定出与生物活性相关系数大于0.5的5个色谱峰,分别鉴定为绿原酸、咖啡酸、野黄芩苷、异绿原酸A、异绿原酸C.进一步体外实验表明5个化合物在相同质量浓度下均有不同程度的抗血小板聚集作用(抑制率16.5%~85.5%),相对活性强度顺序:野黄芩苷>异绿原酸C>咖啡酸>异绿原酸A>绿原酸;而5种成分从相对活性贡献度来看,异绿原酸C与野黄芩苷的活性贡献度大于另外3种成分.结论 建立了灯盏细辛体外抗血小板聚集生物效价的检测方法;且野黄芩苷和异绿原酸C是灯盏细辛体外抗血小板聚集的主要活性成分.
作者:伍珊娜;刘振杰;章从恩;何琴;王玄;牛明;王伽伯;肖小河 刊期: 2017年第24期
四氢小檗碱(THB)属于四氢异喹啉类生物碱,来源于罂粟科植物延胡索的块根,也可由小檗碱氢化合成.与小檗碱比较,THB同样具有多种显著的生物活性.目前研究发现THB具有抗高血压、抗心律失常、抗纤维性颤动、抗急性心肌梗死及对缺血再灌注损伤的治疗及保护作用.也有报道称THB具有抗氧化、调节胃肠功能等作用.通过检索Pubmed、CNKI等数据库,查阅国内外相关文献,旨在对THB的药理作用进行归纳总结,为THB的深入研究提供参考.
作者:季宇彬;刘欣;于蕾;窦利民;张小坡 刊期: 2017年第24期
目的 优选大孔吸附树脂同时纯化雪松松针中莽草酸和总黄酮的佳工艺.方法 以雪松松针中莽草酸和总黄酮的质量分数为评价指标,考察了6种树脂的纯化效果;以上样质量浓度、上样体积流量、上样量、水洗脱用量、乙醇质量浓度和乙醇洗脱用量考察了佳树脂的纯化能力;在单因素实验的基础上,采用正交试验法,通过综合评分优选佳的纯化工艺.结果 XAD 7HP树脂对雪松松针中莽草酸和总黄酮的纯化效果佳,水洗脱部分为莽草酸,乙醇洗脱部分为总黄酮,其佳的纯化工艺为上样液中莽草酸的质量浓度11.59 mg/mL和总黄酮的质量浓度6.96 mg/mL、上样体积流量8 BV/h、上样量2.0 mL/g;水洗脱用量为上样液加4 BV的水洗液、70%的乙醇洗脱4 BV.纯化后莽草酸的质量分数由19.25%提升到28.98%,总黄酮的质量分数由11.92%提升到54.45%.结论 优选的纯化工艺稳定、可行,为工业化生产雪松松针中莽草酸和总黄酮提供参考.
作者:刘东彦;张莉霞;杜瑞琴;石晓峰;马趣环;范彬;沈薇;王新娣 刊期: 2017年第24期
通过分析全球中药提取物专利数据,揭示中药提取物研究的发展情况和创新趋势,为行业发展提供参考.基于Innography平台,对中药提取物全球专利进行检索和统计分析,从专利权人分布、地区分布、技术热点主题,专利强度以及专利侵权风险等角度进行深入解读,并以红豆杉为例进行了专利文本聚类分析.全球中药提取物研究总体呈上升趋势,专利申请主要集中在中国、日本、韩国和美国.美国企业综合实力强,高价值专利量多,在红豆杉提取物技术中处于优势地位.近年来美国专利诉讼量有所下降,大部分诉讼原告是科技型中小企业.文本聚类结果显示红豆杉提取物涉及了化学合成技术.近几年我国中药提取物专利申请量飞速增长,但申请人分布比较分散,高质量专利的申请量明显弱于美国、日本等国家.国内企业要充分利用现代科学手段不断挖掘中药新的有效成分和提取新工艺,从根本上提高中药提取物行业的竞争力.
作者:郭伟;包逸萍 刊期: 2017年第24期
目的 探讨黄芪及其有效成分(黄芪多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷)对上焦水饮内停大鼠的影响.方法 将大鼠随机分为对照组(0.5%羧甲基纤维素钠)、模型组(0.5%羧甲基纤维素钠)、黄芪水煎液组(5.40 g/kg)、黄芪多糖组(1.41 g/kg)、黄芪甲苷组(50 mg/kg)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷组(30 mg/kg)及芪苈强心胶囊(1g/kg)阳性对照组,每组各10只,除对照组外,其他各组采用肩胛区sc异丙肾上腺素和气管置管复合干预因素制备上焦水饮内停大鼠模型;各组ig给药2周后,观察大鼠体质量、心脏指数、肺指数、左心室质量指数、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短分数(LVFS)、血浆肌酸激酶(CK)、心肺组织病理学、肺泡灌洗液回抽率、肺通透指数和肺干湿比的改变.结果 与模型组相比,黄芪水煎液组、各成分组均可不同程度地改善模型大鼠一般状况,体质量明显升高(P<0.05),心脏指数、左心室质量指数、血浆CK均不同程度降低(P<0.05、0.01),黄芪多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷组大鼠LVEF、LVFS、肺泡灌洗液回抽率明显升高(P<0.05),肺指数、肺通透指数和肺干湿比明显降低(P<0.05).结论 黄芪及其有效成分可以改善上焦水饮内停大鼠的心肺损伤.
作者:陈倩;季旭明;阚东方;韩晓春;张亚楠;王世军 刊期: 2017年第24期
目的 研究菝葜属植物小果菝葜Smilax davidiana根茎的化学成分.方法 采用反相硅胶(RP1s)、半制备HPLC色谱法等多种方法分离纯化,并对化合物进行结构鉴定.结果 从小果菝葜根茎70%乙醇提取部位分离得到20个化合物,分别鉴定为香橙素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、黄檀素(2)、3,5,7,4'-四羟基黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、山柰酚-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、槲皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、槲皮素-3-O-β-L-鼠李糖(6)、4,6-二羟基-2-O-(β-D-吡喃葡萄糖苷)苯乙酮(7)、3,5-二羟基-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷)苯乙酮(8)、2,4,6-三羟基苯乙酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、2,4,6-三羟基苯乙酮-2,4-二-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、表儿茶素(11)、latifolin (12)、3'-O-(E-4-酰基)-奎尼酸(13)、5-O-咖啡酰奎宁酸丁酯(14)、5,5'-二甲氧基落叶松树脂醇4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)、1-O-二十六烷酰基甘油酯(16)、cinchonain Ib (17)、腺嘌呤核苷(18)、白藜芦醇(19)和3,4,5-三甲氧苯基-1-β-D-吡喃葡萄糖苷(20).结论 化合物4~9、12~16均为首次从菝葜属植物中分离得到,1~3、17、18为首次从小果菝葜中分离得到.
作者:周梦;刘星;李琳玉;舒积成;梁永红;黄慧莲 刊期: 2017年第24期
目的 研究繁茂膜海绵Hymeniacidon perleve来源青霉属真菌Penicillium sp.HPQJ10的次级代谢产物.方法 利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20以及半制备高效液相等色谱分离手段进行分离纯化,根据波谱学数据鉴定化合物结构.结果 从发酵产物中共分离到14个单体化合物,分别鉴定为N-[(Z)-2-(4-hydroxyphenyl) ethenyl] formamide (1)、2,4-dimethoxyphenyl acetate(2)、6,8,5',6'-四羟基-3'-甲基黄酮(3)、4-羟基苯乙酸(4)、cyclo-(L-Pro-L-Val)(5)、cyclo-(L-Pro-L-Leu) (6)、邻苯二甲酸二异丁酯(7)、邻苯二甲酸二丁酯(8)、7-hydroxy-2-(2-hydroxypropyl)-5-methyl chromone(9)、2-(2,4-dimethoxylphenyl)-3-(4-hydroxybenzyl)-1,2,4-triazole(10)、(22E,24R)-麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇(11)、cyc1o-(Leu-Pro-Ile-Pro) (12)、2,4-二甲氧基苯甲酸(13)、3-甲氧基苯酚(14).结论 除化合物1、3、10、11以外,其他化合物均为首次从该菌种中分离得到.
作者:杨君泽;何山;丁立建 刊期: 2017年第24期
自噬是一种保守的细胞自我降解方式,是将受损细胞器或大分子物质由自噬泡包绕再通过自噬溶酶体降解再利用的过程.自噬在细胞的生物合成、营养和代谢平衡及应激与存活中具有重要作用.调控自噬能够引发多重级联反应,可以应用于肿瘤治疗.黄酮类化合物作用于不同的肿瘤细胞系会诱导作用各异的自噬.黄酮类化合物可以诱导自噬通过非凋亡或非典型凋亡途径较为直接地抑制肿瘤细胞增殖,也可以在诱导自噬后进一步引发凋亡等其他致死方式间接抑制肿瘤细胞增殖,或通过抑制保护性自噬从而强化其他形式的杀伤作用,但有时也会诱导肿瘤细胞发生保护性自噬,弱化细胞杀伤作用.对近10年来黄酮类化合物调控肿瘤细胞自噬的研究进展进行了综述,为中药调控细胞自噬的相关研究提供参考.
作者:张洪;张惟郁;朱伟嵘 刊期: 2017年第24期
脑血管病具有高发病率、高致残率、高死亡率及高再发率的特点,是现代研究重点.现代研究表明桂枝茯苓方具有抗炎、免疫调节、抗氧化等作用,可以用于缺血性脑血管病与出血性脑血管病的治疗,但临床主要运用于缺血性脑血管病,其中又以急性脑梗死为主,并且取得较好的临床疗效.对桂枝茯苓方在脑血管病的临床应用及作用机制研究进展进行综述,以期为桂枝茯苓方在脑血管病的深入研究提供参考.
作者:张家明;余妮;任醒华;梁银;周小毛;余尚贞 刊期: 2017年第24期
“入盐走肾”理论是指导中药炮制的基本理论之一.近些年来,学者围绕盐炙中药做了大量研究工作,有力地推动了对“入盐走肾”炮制理论的科学阐释.从“入盐走肾”角度就近些年来盐炙中药研究进展进行综述,并对目前研究中存在问题进行分析,提出了盐炙中药的研究思路.
作者:李凯;周宁;张振凌 刊期: 2017年第24期
目的 对半夏曲中4种优势微生物建立快速、有效的荧光定量PCR检测方法.方法 以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、宛氏拟青霉Paecilomyces variotii、丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis、黑曲霉Aspergillus niger的重组质粒为标准质粒,设计特异性引物并进行特异性、灵敏性及重复性实验.结果 4种优势微生物的熔解曲线峰单一.枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉的低检测限度分别为584、622、0.272、500拷贝/μL.不同质量浓度的标准质粒变异系数(CV)均小于5%.结论 建立的枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉的荧光定量PCR检测方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,可用于发酵类中药中微生物的检测及定量.
作者:郭佳佳;王立元;翁美芝;谢卫华;龙凯;苏明声;杨明;谢小梅 刊期: 2017年第24期
目的 探讨虫草菌丝中的3种活性成分(虫草素、腺苷、麦角甾醇)对血管新生和肝内皮细胞功能的影响.方法 采用鸡胚绒毛尿囊膜实验和转基因斑马鱼实验分别观察虫草素、腺苷、麦角甾醇对新生血管面积、功能血管数量及碱性磷酸酶变化的影响;MTT法测定3个化合物对人肝癌SK-HEP-1细胞的细胞毒活性;采用血管内皮生长因子(VEGF)诱导SK-HEP-1细胞增殖为模型,以索拉非尼为阳性对照药,MTT法测定3个化合物对细胞增殖的影响,Transwell法观察细胞迁移,Matrigel管腔形成实验观察细胞管腔形成情况,荧光探针法检测胞内一氧化氮(NO)的量和一氧化氮合酶(NOS)活性.结果 虫草菌丝中腺苷、麦角甾醇能够显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生、减少转基因斑马鱼功能血管数量,而虫草素能够促进鸡胚绒毛尿囊膜血管新生;与对照组相比,VEGF可诱导SK-HEP-1细胞增殖,促进细胞迁移和管腔形成,并可使其胞内NO水平和NOS活性显著升高;与模型组相比,虫草素、腺苷、麦角甾醇呈剂量依赖性地抑制SK-HEP-1细胞增殖,腺苷、麦角甾醇能抑制SK-HEP-1细胞迁移,3者均可不同程度地抑制SK-HEP-1细胞管腔形成,且剂量依赖性地降低胞内NO水平和NOS活性.结论 虫草菌丝中的虫草素、腺苷、麦角甾醇对SK-HEP-1细胞增殖、迁移、管腔形成有不同程度的抑制作用,其中腺苷的作用尤为明显;其机制与抑制细胞内NO水平和NOS活性有关.
作者:孙鑫;刘洪亮;黄恺;赵志敏;吕靖;刘成海 刊期: 2017年第24期
目的 基于细胞自噬探讨钩藤碱对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤时血栓前状态的影响.方法 采用TNF-α诱导HUVECs制备损伤模型,透射电镜和免疫荧光技术观察HUVECs自噬水平的变化,Western blotting法检测自噬标记蛋白人微管相关蛋白轻链3Ⅱ (LC3Ⅱ) /LC3Ⅰ、Beclin-1、p62和凝血相关因子核转录因子-κB(NF-κB)、血管假性血友病因子(vWF)和纤溶酶原活化物抑制剂-1(PAI-1)的蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中前列环素(PGI2)和内皮素-1(ET-1)的量.结果 TNF-α上调了HUVECs中凝血相关因子NF-κB、vWF、PAI-1蛋白的表达水平,降低了细胞培养上清液中ET-1和PGI2的量(P<0.05),使细胞中出现自噬小体,上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平,下调p62蛋白表达水平(P<0.05);钩藤碱能够促进HUVECs中自噬小体的产生,并在一定程度上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平,下调p62蛋白表达水平(P<0.05),下调凝血相关因子NF-κB、vWF、PAI-1蛋白的表达水平,上调细胞培养上清液中ET-1和PGI2的量(P<0.05);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)能够抑制钩藤碱的作用效果(P<0.05).结论 钩藤碱能够通过增强自噬降低TNF-α介导的HUVECs细胞凝血相关因子的表达,抑制血管内皮炎性损伤时血栓前状态的发生.
作者:李超;蔺琳;张蕾;李运伦 刊期: 2017年第24期
目的 测定蓬莪术炮制过程中pH值及7种成分(双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素、莪术二酮、莪术醇、吉马酮、β-榄香烯)量的动态变化,从而对其所含的姜黄素类和挥发油类成分在醋制过程中受水、热、酸等外界因素的作用而发生的化学成分量变化进行研究.方法 分别以蒸馏水、9°米醋、9%醋酸水溶液对蓬莪术进行炮制,并对特定时间点的水液pH值进行测定,用SPSS软件对所得数据进行分析;采用HPLC方法同时测定生品组、空白组、醋制组和参照组蓬莪术样品中7种成分的量,并对其量的变化进行分析.结果 与空白组相比,醋制组和参照组终的pH值偏低且无显著差异;与空白组和参照组相比,醋制组中测定的3种姜黄素类成分量均增加[双去甲氧基姜黄素质量分数为(0.002 320±0.000 344) mg/g、去甲氧基姜黄素质量分数为(0.059 65±0.015 64) mg/g、姜黄素质量分数为(0.272 5±0.125 2)mg/g],而测定的挥发油类成分有不同程度地降低.结论 在炮制过程中,药用辅料9°米醋中的主要有效成分可能是醋酸;米醋中的醋酸及其他少量有机成分可能通过调节pH值来保护蓬莪术药材中化学成分不被水、热、酸破坏;通过对不同成分保护程度的差异来调节蓬莪术醋制前后毒效成分的减加,不仅体现了9°米醋作为药用辅料的科学性,也为进一步研究蓬莪术醋制“减毒增效”物质基础提供了新思路.
作者:高天慧;廖婉;傅超美;杨立诚;郑义蕾;陈诗韵;陈雯清 刊期: 2017年第24期
目的 研究雷公藤红素对神经胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制.方法 采用MTT法检测雷公藤红素对U87细胞增殖的影响;流式细胞术检测U87细胞凋亡和线粒体膜电位;Western blotting法检测U87细胞中线粒体途径相关凋亡蛋白表达水平;Transwell和划痕实验检测U87细胞的迁移能力.结果 雷公藤红素可显著抑制U87细胞的增殖、降低U87细胞线粒体膜电位并诱导U87细胞凋亡;雷公藤红素显著性地调控Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)、Caspase-9和Caspase-3的表达水平;同时雷公藤红素显著抑制U87细胞迁移能力.结论 雷公藤红素抑制U87细胞增殖、迁移和诱导其凋亡,其中凋亡机制可能是通过调控线粒体途径相关凋亡蛋白来实现的.
作者:龚建军;胡永胜 刊期: 2017年第24期
目的 优选高山红景天多糖(RSP)的佳硫酸化修饰条件,提高RSP的抗氧化活性.方法 利用氯磺酸-吡啶法对RSP进行了硫酸化修饰,并通过单因素实验确定了硫酸化反应的佳工艺条件;应用红外光谱(IR)和扫描电子显微镜(SEM)对RSP和硫酸化高山红景天多糖(S-RSP)的理化性质进行了分析;通过测定RSP和S-RSP对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力,考察了S-RSP的取代度(DS)与多糖抗氧化活性之间的关系.结果 当氯磺酸与吡啶的体积比为1∶4、反应时间为2h、反应温度为60℃时,制得的S-RSP的含硫量大值为18.83%,取代度大值为2.38.RSP经硫酸化修饰后,增强了其抗氧化活性,S-RSP的DS与DPPH自由基清除能力存在一定的正比例关系.结论 氯磺酸与吡啶的体积比影响S-RSP的DS大小;RSP经硫酸化修饰后通过改变多糖的极性而增加了其抗氧化能力.
作者:宋见喜;任婷;王贺;牟莹莹;冯丽娟;孙新;佟海滨 刊期: 2017年第24期
目的 克隆多穗柯的查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因,并了解其表达情况.方法 根据转录组测序结果,利用PCR扩增技术获取多穗柯CHI基因的cDNA全长,并对其进行生物信息学分析,采用qRT-PCR法检测CHI基因在多穗柯不同器官的表达量.结果 多穗柯CHI基因的cDNA全长为772 bp,开放阅读框长为696bp,编码231个氨基酸的蛋白.该蛋白不存在跨膜区域,定位于细胞质中.多穗柯CHI基因在不同部位均有表达,叶片的表达量高,是根部低量的9.75倍.结论 首次克隆获得多穗柯的CHI基因,明确该基因属于CHIⅡ型.且多穗柯CHI基因在各器官中的表达量具有显著差异.
作者:林丽梅;龙月红;冯若宣;尹峰;黄剑;邢朝斌 刊期: 2017年第24期
目的 研究氧化苦参碱(OM)对接受转化生长因子-β1 (TGF-β1)刺激的人胰腺导管癌PANC-1细胞中Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响.方法 以TGF-β1刺激PANC-1细胞模拟胰腺纤维化模型,并观察给予OM干预对Smad3/Gli1通路相关因子表达的影响.通过细胞转染技术将Gli1及Smad3的RNA干扰质粒转染入PANC-1细胞;通过Western blotting技术检测Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达,ELISA技术检测纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(CoL-Ⅰ)在细胞培养上清中的表达.结果 与对照组相比,PANC-1细胞接受TGF-β1刺激后Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著升高;与TGF-β1组相比,OM和TGF-β1共同处理组Smad3、Gli1和α-SMA的蛋白表达显著降低.转染Smad3干扰质粒后,Gli1、α-SMA、FN和CoL-Ⅰ表达显著下降.与TGF-β1组比较,转染Gli1干扰质粒后加TGF-β1组α-SMA、FN和CoL-Ⅰ表达显著降低.结论 OM可能通过调节PANC-1细胞TGF-β1/Smad3/Gli1通路发挥抗胰腺纤维化作用.
作者:李嫚华;许威;张青;向晓辉;夏时海 刊期: 2017年第24期
目的 通过比较淫羊藿Epimedium brevicormon不同洗脱部位及其单体化合物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选淫羊藿活性部位和活性成分.方法 淫羊藿提取物经大孔树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20及制备液相的分离纯化,得到不同洗脱部位和单体化合物.运用Aβ25-35体外诱导的神经细胞损伤模型,采用Hoechst33342和PI双染法,对淫羊藿的不同洗脱部位和成分进行活性筛选.结果 与模型组比较,除淫羊藿95%乙醇部位外,所有洗脱部位及其中的单体化合物山柰酚-3-O-[α-L-鼠李糖基(1 →6)-β-D-半乳糖苷]-7-O-α-L-鼠李糖苷、淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B均对Aβ25-35所致SH-SY5Y细胞损伤有显著保护作用.结论 淫羊藿对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有保护作用,其二氯甲烷-甲醇(5∶1)部位作用强,其次是30%乙醇部位、50%乙醇部位.
作者:李英;王俨如;张小强;吴云;丁岗;王振中;萧伟 刊期: 2017年第24期