于中东；张宇嘉；杨兆航；高鹄；张起；张淼
目的 提高海洋细菌Bacillus cereus CAMT2377产葡萄糖氧化酶活力.方法 对碳源、氮源、无机盐等培养基组成及装液量、接种量、培养温度、发酵时间、转速等培养条件进行筛选,通过单因素分析和统计优化提升菌株产酶性能.结果 Bacillus cereus CAMT2377产葡萄糖氧化酶适宜培养基成分为1％麦芽糖、0.5％鱼粉蛋白胨、0.05％CaCl2,在此培养基中接种8％体积比的种子液后,于31℃,20％装液量,200 r/min条件下培养60 h,产葡萄糖氧化酶活力可在10 U/mL以上;响应面优化产酶过程获得适参数为温度35℃,时间82 h,转速247 r/min,优化条件下产酶活力提高至15U/mL以上,较优化前提高了50％.结论 通过单因素分析和响应面优化,提高了海洋细菌Bacillus cereus CAMT2377产葡萄糖氧化酶的活力.
作者：黄晓月；莫日坚；徐德峰；叶日英；孙力军；王雅玲 刊期： 2018年第11期
细菌样颗粒(bacterium-like particle,BLP)是一种无生命活性的球型颗粒,主要成分为乳酸乳球菌肽聚糖壳.BLP可作为系统免疫疫苗与黏膜免疫疫苗的佐剂,通过激活固有性免疫系统发挥佐剂的功能,特别是作为黏膜佐剂,能同时增强抗原特异性黏膜免疫应答和全身免疫应答.本文对BLP佐剂疫苗的优势、应用与疫苗设计进行综述.
作者：卢井才 刊期： 2018年第11期
目的 探讨大肠埃希菌细菌膜外蛋白A(outer-membrane protein A,OMPA)对小肠上皮细胞增殖的影响及其作用机制.方法 采用3种浓度的OMPA(10、20及40 ng/mL)作用于小肠上皮细胞,分别作用0、24、48和72 h,MTT法检测细胞的增殖情况.采用抑制效果佳浓度的OMPA分别作用小肠上皮细胞0、20、40、60 min,通过Western blot法检测小肠上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中ERK、JNK及p38的磷酸化情况.结果 20 ng/mL的OMPA作用48 h时对小肠上皮细胞的生长抑制程度大,细胞生长率为(23.12±0.21)％.与作用0 min时比较,20 ng/mL的OMPA作用20、40及60 min时,小肠上皮细胞中p-JNK/JNK比值显著降低(P＜0.01),p-ERK/ERK及p-p38/p38差异均无统计学意义(P＞0.05);与作用20 min时比较,20 ng/mL的OMPA作用40及60 min时,小肠上皮细胞中p-JNK/JNK比值显著降低(P＜0.01),p-ERK/ERK及p-p38/p38差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 OMPA可抑制小肠上皮细胞的增殖,该抑制作用是通过抑制MAPK通路中JNK的磷酸化实现的.
作者：杨事达；赵鸿梅 刊期： 2018年第11期
目的 制备鲍曼不动杆菌OmpK/Omp22融合蛋白,并检测其抗原特异性抗体应答水平.方法 以鲍曼不动杆菌标准株19606基因组DNA为模板,通过重叠延伸PCR技术获取OmpK/Omp22融合基因片段,将其定向克隆入原核表达质粒pColdI,筛选重组质粒并进行酶切及DNA测序鉴定.重组质粒转化大肠埃希菌BL21株,经IPTG诱导表达,镍亲和纯化柱纯化重组蛋白.小鼠背部皮下注射重组融合蛋白(20 μg/只,体积50 μL)和等体积完全弗氏佐剂,并于初次免疫后第14和21天相同剂量加强免疫1次,分别于末次免疫后7、21 d小鼠内眦取血,测定小鼠血清中抗原特异性抗体滴度.结果 PCR扩增获得约1 400 bp的基因片段,定向克隆筛选到约5 800 bp的重组质粒,纯化的重组融合蛋白相对分子质量约52 000,小鼠血清中检测到特异性IgG抗体,高抗体滴度可达1:102 400.结论 成功制备了鲍曼不动杆菌OmpK/Omp22融合蛋白,小鼠血清中检测到高滴度特异性IgG抗体,为进一步研究其免疫活性奠定了基础.
作者：郭三君；任珊；谢勇恩 刊期： 2018年第11期
目的 系统评价表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)+61A/G基因多态性与中国人群原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发病风险间的关系.方法 计算机检索中国知网(CNKI)、维普(VIP)、万方、PubMed、EMBASE、Elsevier等数据库,检索时间从建库至2016年12月,收集EGF+ 61A/G基因多态性与中国人群HCC发病风险的病例对照研究,应用RevMan 5.3软件进行meta分析.结果 共纳入7篇文献,8项研究,包括1 810例患者,2 175例对照者.在等位基因模型、显性模型、隐性模型、共显性模型AA/GG组中,EGF+61A/G基因多态性整体效应差异均有统计学意义(P＜0.05),而在共显性模型AA/AG组中差异无统计学意义(P＞0.05).等位基因模型OR=0.83,95％CI=0.75～0.91;显性模型OR=1.36,95％CI=1.10～1.68;隐性模型OR=1.36,95％CI=1.20～1.55;共显性模型AA/AG组中OR=0.93,95％CI=0.65～1.01,AA/GG组OR=0.67,95％CI=0.53～0.83.在各种基因模型下,EGF+ 61A/G基因多态性与HBV相关型HCC均具有关联.结论 EGF+61A/G基因多态性与中国人群HCC发病风险有关,等位基因G及基因型GG能够增加罹患HCC的风险,尤其是HBV相关型HCC.
作者：高洁芳；张洪；吕舰；王丽 刊期： 2018年第11期
目的 CHO K1细胞中表达人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体,并进行鉴定.方法 采用电穿孔转染法将含编码人源化抗VEGF单克隆抗体轻、重链全基因的真核表达质粒DGV-K11转染至CHO K1细胞,经L-蛋氨酸亚砜(methionine sulfoxide,MSX)加压筛选和有限稀释克隆筛选,获得分泌表达人源化抗VEGF单克隆抗体的K11细胞株.利用生物反应器培养K11细胞,采用MabSelect SuRe、DEAESepharose FF和Eshmuno S凝胶色谱纯化培养液,以贝伐珠单抗(Bevacizumab)作为阳性对照,分析人源化抗VEGF单克隆抗体的纯度、电荷异质性、相对分子质量、N-末端序列、等电点及生物学活性.结果 人源化抗VEGF单克隆抗体还原和非还原型CE-SDS分析图谱峰形及电荷异质性与阳性对照相似,轻、重链N-末端氨基酸序列一致;人源化抗VEGF单克隆抗体及阳性对照的SEC-HPLC单体纯度分别为97.46％和97.08％,完整相对分子质量分别为149 201.76和149 201.81,主峰等电点分别为7.31和7.32,生物学活性分别为0.993 × 104和0.960×104 U/mg.结论 于CHO细胞中成功表达了人源化抗VEGF单克隆抗体,与贝伐珠单抗(Bevacizumab)具有相似的纯度、电荷异质性及生物学活性,本实验为CHO细胞大规模表达人源化抗VEGF单克隆抗体奠定了基础.
作者：周朋；张琨；许磊涛；叶艺；孔茜；杨帅；彭玲；黄颖；孔健 刊期： 2018年第11期
目的 分析2016年长春市高校学生麻疹抗体水平.方法 按照分层整群的抽样方法,在长春市某高校随机抽取1 100名大学生,问卷收集调查对象性别、年龄、户籍、地区等基本信息.抽取静脉血,利用ELISA法检测麻疹IgG抗体水平.结果 1 100名大学生中,男生581人(52.8％),女生519人(47.2％);本省453人(41.2％),外省647人(58.8％);年龄在16～ 26岁之间.麻疹IgG抗体阳性率为91.2％,保护性抗体阳性率为42％,麻疹IgG抗体几何平均浓度(GMC)为697.21 mIU/mL;男生麻疹IgG抗体阳性率和保护性抗体阳性率均高于女生,差异有统计学意义(P＜O.05);保护性抗体阳性率外省高于本省,差异有统计学意义(P＜0.O1),长春地区高于省内其他地市,差异有统计学意义(P＜0.001).18～ 20岁人群占调查总数的91.7％,麻疹IgG抗体水平阳性率、保护性抗体阳性率及抗体GMC在各年龄组间差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 长春市高校学生麻疹IgG抗体水平尚未达到世界卫生组织要求的95％,易暴发麻疹疫情,应对高校大学生开展麻疹疫苗的补充免疫及强化免疫,提高其防病能力,控制麻疹发病率.
作者：闫莉；陶育晖；付思美；王爽 刊期： 2018年第11期
目的 探讨治疗用卡介苗(简称BCGt)对MB49膀胱肿瘤细胞(简称MB49细胞)增殖的影响.方法 体外培养MB49细胞,每天观察并采用CCK-8法检测细胞生长情况,绘制细胞生长曲线.取对数生长期的MB49细胞与不同浓度(20、15、10、8、6、3、2.5、2、1.5、1 mg/mL)的BCGt作用72 h,CCK-8法检测细胞增殖能力,计算细胞抑制率.同时采用ELISA法测定细胞培养液中IL-6、IL-8及IL-15的浓度.结果 MB49细胞于第1～4天处于对数生长期,细胞增殖速度较快,细胞形态正常.BCGt可有效抑制MB49细胞的增殖,且呈剂量依赖性,IC50为3.650 mg/mL.经BCGt作用后细胞培养液中IL-6和IL-15浓度明显增高(P＜0.05),IL-8浓度未发生明显变化(P＞0.05).结论 BCGt可抑制MB49细胞的增殖,可能是通过提高IL-6和IL-15的水平,促进细胞免疫应答,从而发挥抗肿瘤作用的.
作者：唐溯；潘海龙；潘科锦；孟丽；林苹；曾献武 刊期： 2018年第11期
目的 制定利用激光透射方式检测冻干制品密封性的标准,并对其进行验证.方法 通过贝威帝灯检机的HGA工位的模拟数值与制品实际氧含量的对比,确立两者之间的关系及实际的检测标准,并对该检测标准的实用性进行验证.结果 模拟数值与实际氧含量具有线性关系,依据《欧州药典》9.0版相关规定,将检测标准设为7 500.6批制品的HGA检测合格率均在99％以上,平均合格率为99.38％,平均公差为1.35％,合格制品氧含量的平均值为1.09％,不合格制品氧含量的平均值为16.35％.结论 通过实际测试证实了此检测方法的可行性,并有效弥补了激光检测制品密封性及检测标准设定的空白.
作者：于中东；张宇嘉；杨兆航；高鹄；张起；张淼 刊期： 2018年第11期
目的 研究水痘减毒活疫苗应用预灌封灭菌注射用水作为稀释剂,其接种的便捷性和质量稳定性.方法 连续生产3批合格的预灌封灭菌注射用水,并与3批水痘减毒活疫苗进行配套组合,同时准备3批外购安瓿瓶灭菌注射用水,与相同批号的3批水痘减毒活疫苗进行配套组合,比较两种组合在操作上使用的时间复溶后水痘疫苗的质量稳定性.结果 应用预灌封灭菌注射用水配水痘减毒活疫苗的组合较安瓿瓶灭菌注射用水配水痘减毒活疫苗的组合,在接种操作上可节约42％的时间(P＜0.05);在10 min内,3名操作人员共完成预灌封灭菌注射用水配水痘减毒活疫苗组合的模拟接种操作完成次数(34次)明显多于安瓿瓶灭菌注射用水配水痘减毒活疫苗组合(20次)(P＜0.05);3批预灌封灭菌注射用水作为稀释剂复溶的水痘减毒活疫苗的加速和长期稳定性试验结果均符合《中国药典》三部(2015版)和上海生物制品研究所有限责任公司的《水痘减毒活疫苗注册标准》要求,病毒滴度均≥3.3 lgPFU/0.5 mL,牛血清白蛋白残留量均＜50 ng/mL,抗生素残留量均＜50 ng/剂,与安瓿瓶灭菌注射用水作为稀释剂复溶的水痘减毒活疫苗的质量指标无明显差异.结论 预灌封灭菌注射用水作为水痘减毒活疫苗的稀释剂,相比传统安瓿瓶灭菌注射用水在使用上更便捷,接种效率更高,两者对于水痘疫苗质量的影响无明显差异,适合广泛应用于疫苗的配套使用.
作者：舒祥；程庆；谢蕾；陈佩锋；蔡蕾；王亮 刊期： 2018年第11期
疫苗接种可有效降低疾病致死率,极大提高了人民生活健康水平,是公共卫生领域中性价比高的用于降低传染性疾病负担的有效干预手段.近年来,越来越复杂的疫苗生产工艺和对于疫苗安全性、有效性方面严格的注册及监管要求,导致疫苗开发及生产成本逐年增加,因此在疫苗成本效益方面存在一些矛盾.随着经济社会的发展,虽然我国公共卫生系统的资金投入逐年增加,但公共卫生系统涉及面越来越广,如何有的放矢地制订卫生政策,合理安排公共卫生资源是政策制定者亟待解决的难题.
作者：段凯；郭靖；杜洪桥 刊期： 2018年第11期
目的 将乙型脑炎野毒株SA14囊膜蛋白(envelope,E)氨基酸残基107位点(E107)和138位点(E138)突变为乙型脑炎减毒株SA14-14-2的相应位点,正向分析两个氨基酸位点突变在乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)减毒中的作用.方法 通过融合PCR方法分别扩增含有E107(1296-T)、E138(1389-A)、E107+138(1296-T/1389-A)突变位点的PCR片段,Kas Ⅰ和BglⅡ酶切后替换乙型脑炎强毒SA14的嵌合病毒SA14-14-2/SA14的相应区域,构建3个突变株病毒的全长克隆,转染BHK21细胞获得突变株病毒.测定并比较3个突变株和嵌合病毒SA14-14-2/SA14、疫苗株SA14-14-2的蚀斑大小及细胞增殖特征、小鼠脑内神经毒力、小鼠皮下感染人脑能力,分析E107、E138位点突变对JEV的减毒作用.结果 测序结果表明成功构建了3株突变株病毒,其中E107单位点突变对小鼠脑内神经毒力和皮下感染人脑能力无显著改变,蚀斑形态和细胞增殖能力也无明显变化.E138单位点突变及E138和E107双位点突变使病毒脑内神经毒力和皮下感染人脑能力急剧降低,其中E138和E107双位点突变使病毒皮下感染人脑能力完全消失,并且E138单位点突变以及E138和E107双位点突变病毒蚀斑较疫苗株SA14-14-2和嵌合病毒SA14-14-2/SA14明显偏小,但增殖能力有明显升高.结论 E138位点突变对JEV SA14的减毒起关键作用;在E138位点突变的前提下,E107位点与E138位点有显著的协同作用.
作者：范凤鸣；刘莉娜；孙艳；牟建超；陈智；杨欢；刘俐；刘杰；曾献武；杨会强 刊期： 2018年第11期
目的 探讨Ghrelin对人卵巢癌细胞株HO-8910的调控作用.方法 分别将400、500、600、700、800 ng/mLGhrelin与HO-8910细胞一同孵育24 h,MTT法检测Ghrelin对细胞增殖的影响;将600 ng/mL Ghrelin作用于HO-8910细胞0、30、60 min后,定量PCR及Western blot法分别检测Ghrelin对细胞中miR-1以及Bcl-2、Caspase-12表达的影响.结果 600 ng/ mL及以上浓度的Ghrelin作用24 h后,细胞抑制率明显升高,与400 ng/ mL相比,差异有统计学意义(P＜0.05),Ghrelin抑制HO-8910细胞的增殖呈剂量依赖性;miR-1表达升高,Bcl-2表达下降,Caspase-12表达升高,作用30、60 min与O min相比,作用60 min与30 min相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Ghrelin能抑制人卵巢癌细胞株HO-8910增殖,Caspase-12表达的变化提示Ghrelin可能通过miR-1和Bcl-2调控卵巢癌细胞的增殖.
作者：刘瑞平；白瑞霞；赵鹏伟 刊期： 2018年第11期
目的 通过融合牛乳铁蛋白肽基因(bovine lactoferricin B,LfcinB)与红色荧光蛋白(mApple)基因,构建以mApple为报告基因的酵母表达载体,融合表达重组蛋白LfcinB-mApple,并进行活性检测.方法 取含LfcinB和mApple基因的pYES2-α-LfcinB-G13、pYES2-α-mApple-DP-AP质粒,分别经PCR扩增后连接形成片段LfcinB-mApple,插入质粒pYES2-α(质粒pYES2-α-LfcinB-G 13经双酶切所得)中,将构建的重组表达质粒pYES2-α-LfcinB-mApple转入酿酒酵母菌株W303,半乳糖诱导表达.管碟法检测表达的LfcinB-mApple对大肠埃希菌DH5α、金黄色葡萄球菌的抑菌活性;激光共聚焦检测红色荧光蛋白荧光的发射.结果 重组表达质粒pYES2-α-LfcinB-mApple经酶切鉴定和测序证明构建正确;表达的重组LfcinB-mApple对大肠埃希菌DH5α、金黄色葡萄球菌均有明显抑菌活性;重组酵母细胞内观察到红色荧光.结论 重组酿酒酵母成功分泌表达了具有生物活性的LfcinB-mApple,对进一步研究LfcinB的生物功能及大规模生产提供了条件.
作者：荣慧杰；查向东；孔小卫；葛嫚嫚；张旭冉 刊期： 2018年第11期
目的 体外培养牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV),并制备其多克隆抗体.方法 制备牛肾原代细胞,并进行传代,建立细胞库.将BVD/MD Oregon C24毒种接种至牛肾细胞,进行体外传代,建立BVDV毒种库.按MOI=0.01将BVDV接种至牛肾细胞,制备BVDV病毒液,经Sepharose CL-2B凝胶柱纯化后,分别免疫家兔和健康海蓝白产蛋鸡,制备兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体,ELISA法测定效价.结果 牛肾细胞体外传至20代生长状态均良好,传代稳定.建立的BVDV毒种库的毒力达7.50 CCID50/mL,BVDV病毒液毒力达7.00 CCID50/mL以上,纯化后毒力达5.00 CCID50/mL以上.获得的兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体效价分别为1∶12800和1∶6 400.结论 体外成功培养了BVDV,制备的兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体效价较高,为BVDV检测试剂盒的研发奠定了基础.
作者：郭新；回悦君；付博；刘辉；陈子杨；孟多佳；刘宏伟；姜崴；郑晓丽 刊期： 2018年第11期
目的 考察新生牛血清质量控制对SPF鸡胚细胞和人二倍体(2BS)细胞生长的影响.方法 选择来源可追溯性、工艺质量稳定,且检定合格的新生牛血清样品配制细胞生长液,用于SPF鸡胚细胞和2BS细胞的培养.待细胞生长成致密成纤维单层细胞,记录细胞成单层的时间,用胰酶消化细胞,通过全自动细胞计数仪对细胞悬液进行测定,观察总细胞数、活细胞数,计算细胞存活率.根据活细胞数计算MOI,分别用腮腺炎及风疹病毒接种SPF鸡胚细胞和2BS细胞,检测收获病毒液的滴度.结果 SPF鸡胚细胞总细胞数不低于3.5× 106个/mL,活细胞数不低于2.1×106个/mL,细胞存活率不低于60％;2BS细胞总细胞数不低于7.0× 105个/mL,活细胞数不低于4.2× 105个/mL,细胞存活率不低于60％.腮腺炎病毒原液滴度在6.1～6.6 lgCCID50/mL之间,平均值为6.28 lgCCID50/mL,SD为0.11,生产过程加工能力指数(process capability index,Cpk)为1.51,批间质量趋于一致;风疹病毒原液滴度均在5.5～6.2 lgCCID50/mL之间,平均值为5.8 lgCCID50/mL,SD为0.17,Cpk值为1.40,批间质量趋于一致.结论 新生牛血清的质量良好,用其培养SPF鸡胚细胞和2BS细胞的活细胞比率可控,收获的病毒液滴度较均一,差异性较小.
作者：付永其；金珏艳；张颖欣；刘辉；陆晨；宋艳梅；杨琦；陆梦溪；王为 刊期： 2018年第11期
目的 分析一种新型抗胃泌素(gastrins,GAS)疫苗的质量,为其质量标准的建立提供参考.方法 采用免疫双扩散法、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对一种将GAS抗原表位与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)载体偶联的新型抗GAS疫苗GAS-TT进行鉴定,并参考《中国药典》四部(2015版)对疫苗进行细菌内毒素、异常毒性及过敏反应检查.结果 疫苗可特异性结合破伤风抗毒素及相应抗原表位抗体,其主成分相对分子质量为158 000～166 000,疫苗细菌内毒素含量为95 EU/mg,且无异常毒性及过敏反应.结论 该疫苗具有较好的特异性结合属性及分子分布特征,且符合其相关安全性检查项(内毒素、异常毒性及过敏反应检查)的拟定标准.
作者：贺庆；高濛；戚胜美；裴宇盛；高华；王军志 刊期： 2018年第11期
目的 构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株.方法 分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含Bbs Ⅰ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒.重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2 μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞.采用Western blot法对敲除效果进行鉴定.结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确.Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白.结论 成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株.
作者：孙瑜；陈红霞；齐永；李素芹；沈万鹏；饶继先；李佳萌；李晓玲；李越希 刊期： 2018年第11期
B族链球菌(group B streptococcus,GBS)主要危害新生儿、孕妇以及免疫力低下人群,能够引发早产、死产,还能引起脓毒症、菌血症和脑膜炎等多种疾病.使用抗生素是预防GBS的主要手段,但随着抗生素耐药性的逐渐增强,急需发展一种安全、有效的GBS疫苗,用于预防GBS感染.目前已有部分GBS候选疫苗进入临床试验阶段,同时也有部分疫苗处于临床前研究阶段.本文就这些具有临床使用潜力的GBS疫苗的研究现状进行综述.
作者：殷晓辰；林雅华 刊期： 2018年第11期
目的 分析表达纤溶酶抑制剂Textilinin-1的毕赤酵母工程菌的遗传稳定性,为今后可能的大规模生产奠定基础.方法 将分泌表达纤溶酶抑制剂Textilinin-1的毕赤酵母工程菌在YPD液体培养基中连续培养200代,对原始工程菌及第200代工程菌的菌落和细胞形态、分泌表达情况以及目的基因的拷贝数等进行检测.结果 第200代工程菌在菌落特征、菌体形态、分泌表达情况、Textilinin-1基因序列及拷贝数等均与原始工程菌一致.结论 该毕赤酵母工程菌具有良好的遗传稳定性,适合大规模生产.
作者：兰海英；石乔；李娜；康乐；陈宏超；徐梅 刊期： 2018年第11期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
