学术投稿

不同材质细胞培养容器培养甲型肝炎病毒的比较

邵聪文;杨晓蕾;梁海孝;曹洁;张名;杨建波;冯昌增;郑惠文;陈梦娇

关键词:甲型肝炎病毒, 人二倍体细胞, 转瓶, 细胞工厂
摘要:目的 比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的差异.方法 采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2株,倒置光学显微镜下观察细胞的形态变化;细胞接种病毒后第0、7、14、18、22、26、30天时取样,ELISA法测定病毒的感染性滴度,分析病毒的增殖动力学.结果 两种材质的容器培养的KMB17细胞的生长状态和形态无明显差异;HAV H2株增殖动力学相似;单位体积病毒收获液中的病毒产量无显著差异;聚苯乙烯细胞工厂培养的HAV的单位培养容积产量是中性玻璃转瓶的7.28倍.结论 聚苯乙烯细胞工厂和中性玻璃转瓶培养的人二倍体细胞和HAV均能良好生长,细胞工厂可替代转瓶成为新的疫苗规模化生产的细胞培养技术.
中国生物制品学杂志相关文献
  • 农村基层医护人员乙型肝炎防治措施及乙型肝炎疫苗接种影响因素的调查

    乙型病毒性肝炎简称乙肝,是病毒性肝炎中危害严重的一种传染病,居全球死亡原因的第10位[1].我国是全世界仅有的少数几个乙肝病毒高流行和高发病的国家之一.我国自1992年开始实施接种乙肝疫苗防治乙肝,经过多年努力,取得了显著成效,尤其是儿童乙肝疫苗接种率明显提高,但是成人乙肝发病率仍维持在较高水平,尤其是医务人员,由于其职业的特殊性,经常接触患者的血液、尿液及其他潜在危险因素,感染乙肝的概率较普通人群增加[2].本文通过对农村基层医护人员乙肝病毒防治措施及乙肝疫苗接种影响因素进行问卷调查,探讨乙肝疫苗接种行为的影响因素,为开展农村基层医务人员接种乙肝疫苗和制定乙肝病毒防护策略提供依据.

    作者:王焕新;刘艳丽;王艳 刊期: 2015年第02期

  • 结核病药效评价用结核分枝杆菌参考菌株的筛选

    目的 筛选结核病(tuberculosis,TB)药效评价用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)国家参考菌株.方法 取169株MTB临床分离株,采用结核杆菌生长指示管(mycobacterial growth indicator tube,MGIT)960液体培养基,对4种一线抗TB药物[链霉素(streptomycin,STR)、异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)和乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]进行药敏试验,并对耐INH和/或耐RFP的菌株的相关耐药基因位点进行测序,确认突变位点;用间隔区寡核苷酸分型法(Spoligotyping)对所有菌株进行基因分型,多位点可变数量串联重复序列分型方法(mutiple loci VNTR analysis,MLVA)对北京家族MTB临床分离株进行基因分型.结果 169株MTB临床分离株中耐STR 118株,INH 143株,RFP 129株,EMB 95株,耐多药(至少对NIH和RFP耐药)120株,单耐INH 5株,单耐RFP7株,四种抗TB药均敏感共11株.143株INH耐药菌株中,katG基因突变菌株占76.9%,inhA基因突变菌株占27.3%,aphC基因突变菌株占25.2%,至少2个基因发生突变的菌株有31株;129株RFP耐药菌株中,rpoB基因531位点发生突变,占67.4%,526位发生突变,占17.8%,516位点发生突变,占16.3%,至少2个位点发生突变的菌株有10株.169株MTB临床分离株分为北京家族和非北京家族,北京家族111株;非北京家族58株,主要有CAS家族2株,EAI家族7株,H家族11株,LAM家族6株,MANU家族6株,T家族7株,U家族1株,X3家族3株,还有15株在数据库中未表现的新基因型.111株北京家族MTB临床分离株分为4大群,其中Ⅱ群分布广,占68.5%,代表性好.筛选出耐多药菌株27株,敏感菌株5株,单耐异烟肼2株,单耐利福平3株.结论 成功筛选出敏感菌株、单耐药菌株、MDR菌株作为候选菌株.

    作者:邓海清;陈保文;杨蕾;张婷;卢锦标;吴小翠;万康林;黄长江;王国治 刊期: 2015年第02期

  • 206例鸡蛋过敏儿童接种麻疹风疹联合减毒活疫苗后的安全性观察

    目的 观察鸡蛋过敏儿童接种麻疹风疹联合减毒活疫苗的安全性.方法 选取北京市朝阳区2013年2~3月期间8~17月龄接种麻疹风疹联合减毒活疫苗的206名鸡蛋过敏体质儿童及242名非鸡蛋过敏体质儿童,接种麻疹风疹联合减毒活疫苗.采用电话调查的方法对接种疫苗后的不良反应发生情况进行回顾性队列分析.结果 本次电话调查的总应答率为87.3%.在拨通电话的391例研究对象中,鸡蛋过敏组184例,非鸡蛋过敏组207例.鸡蛋过敏组和非鸡蛋过敏组的不良反应发生率分别为10.3%和8.2%;局部反应发生率分别为1.6%和1.0%;生命体征异常率分别为6.0%和4.8%;全身反应发生率分别为3.8%和5.8%,差异均无统计学意义(P>0.05).不良反应中,明确为偶合反应的3例(鸡蛋过敏组2例,非鸡蛋过敏组1例,临床诊断均为幼儿急疹).结论 鸡蛋过敏儿童接种麻疹风疹联合减毒活疫苗与非鸡蛋过敏儿童相比,不良反应发生率未增加.

    作者:韩柏慧;时念民;刘方;王瑞 刊期: 2015年第02期

  • 水痘-带状疱疹病毒Oka株在人二倍体细胞株SV-1上的遗传稳定性及基因序列差异位点分析

    目的 研究水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka株在人二倍体细胞株SV-1上的遗传稳定性,并对不同代次毒株进行全基因测序及差异位点分析.方法 将VZV Oka株在SV-1细胞株上连续传至48代,检测病毒滴度.对VZV Oka株33、35、38、39及48代病毒进行全基因测序,应用DNASTAR.Lasergene.v7.1软件进行数据的拼接及序列分析.结果 VZV Oka株在SV-1细胞上连续传代获得的33~48代病毒滴度在4.000 ~4.625 lgCCID50/ml之间,病毒滴度的算数平均值为4.292 lg CCID50/ml; VZV Oka株基因组全长125 114 bp,GC含量46%;33、35、38、39、48代病毒的核苷酸序列同源性为99.99%,这5代病毒与标准疫苗株V-Oka的核苷酸序列同源性为99.96%;VZV Oka株在MRC-5、SV-1细胞上制备的38代病毒全基因序列有1个差异位点;本研究中的各代次病毒基因序列高度同源,与Varivax和Varilrix疫苗株、野毒株Dumas及亲本株p-Oka相比,与疫苗株V-Oka的同源性高.结论 VZV Oka株在SV-1细胞上的适应性及遗传稳定性均良好.

    作者:孟凡红;于巍;张嵬;杨利伟;何玉君;高强;黄金凤;尹卫东 刊期: 2015年第02期

  • 转基因牛乳中重组人乳铁蛋白中试纯化工艺的建立及其活性分析

    目的 建立转基因牛乳中重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rhLF)的中试纯化工艺,并分析纯化的rhLF的活性.方法 以含rhLF的转基因牛乳为原料,通过陶瓷膜分离技术除菌,一步阳离子交换层析,非离子型去污剂与金属络合剂去除内毒素,以及超滤浓缩脱盐,冷冻干燥制备重组蛋白纯品等步骤纯化rhLF,采用SDS-PAGE、凝胶过滤色谱(SEC-HPLC)法和反相色谱(RP-HPLC)法分析rhLF的纯度;ELISA法检测rhLF的含量;鲎试剂法检测rhLF的内毒素含量;圆二色谱技术分析rhLF的二级结构;并检测rhLF的铁结合能力和抑菌活性.结果 纯化的rhLF的平均纯度可达96%,内毒素含量小于0.5EU/mg,整个工艺回收率达75%,且具有与天然人乳铁蛋白(human lactoferrin,hLF)相近的二级结构及正常的铁结合能力和抑菌活性.结论 建立的牛乳中rhLF的中试纯化工艺简便高效,适用于rhLF的规模化生产.

    作者:赵建敏;王建武;孟如杰;付明波;王慧敏;汤波;陈敏;李宁 刊期: 2015年第02期

  • 壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗的制备及其对斜带石斑鱼的口服免疫效果

    目的 制备包裹哈维弧菌(Vibrio harve yi,Vh)重组外膜蛋白OmpK的壳聚糖-海藻酸钠复合微囊疫苗,并检测其对斜带石斑鱼的口服免疫效果.方法 采用乳化-复乳化法将壳聚糖、海藻酸钠包裹哈维弧菌重组外膜蛋白OmpK,制备微囊疫苗,测定其粒径、包裹率及载抗原量;经口灌服免疫斜带石斑鱼,2周后进行加强免疫,设OmpK蛋白组和空白对照组,ELISA法检测免疫后斜带石斑鱼血清及后肠黏膜上清抗体水平;于免疫后30 d,经斜带石斑鱼腹腔注射1.0× 107CFU/ml的哈维弧菌,计算各组相对保护率(relative percent survival,RPS).结果 微囊为球形或类球形,粒径5.0~ 20.0 μm,平均粒径10.6 μm;微囊中蛋白平均包裹率为71.26%,平均载抗原量为1.67%.微囊疫苗组血清抗体效价峰值为29,明显高于OmpK蛋白组(P<0.01);微囊疫苗组后肠黏膜上清的吸光值(A450-A 630)明显高于OmpK蛋白组和空白对照组(P<0.01).微囊疫苗组的RPS达62.5%,高于OmpK蛋白组(P<0.01).结论 制备的壳聚糖-海藻酸盐复合微囊疫苗口服石斑鱼后,具有较好的免疫效果,作为鱼类口服疫苗的投递载体是可行的.

    作者:任燕;张小江;陶家发;李宁求;石存斌;吴淑勤 刊期: 2015年第02期

  • 黄山市2010~2013年疑似预防接种异常反应监测分析

    目的 分析黄山市2010~2013年疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的发生特征,评价预防接种的安全性.方法 采用描述性流行病学方法对2010 ~2013年黄山市AEFI监测资料进行分析.结果 2010~ 2013年全市共报告AEFI 116例,其中一般反应99例(85.34%),异常反应11例(9.48%),偶合症5例(4.31%),接种事故1例(0.86%).各区县均有AEFI报告,48 h内报告率为93.10%,48 h内调查率为97.14%;男女性别比为1.27∶1,年龄≤1岁占43.10%,报告疫苗以国家免疫规划(National Immunization Programme,NIP)疫苗为主;报告的AEFI病例主要集中在5~9月份,68.97%发生在接种后1d内;AEFI报告发生率为7.39/10万,其中一般反应为6.30/10万,异常反应为0.70/10万,一般反应以发热、红肿、硬结为主,异常反应以过敏性皮疹、卡介苗淋巴结炎为主.结论 全市AEFI监测质量有待继续提高,各区县报告数据差异较大.AEFI常发生于低年龄组儿童和NIP疫苗,为监测重点;各疫苗不良反应报告发生率均在预期发生范围内,安全性良好.

    作者:张向阳;汪萍;王维维 刊期: 2015年第02期

  • 不同材质细胞培养容器培养甲型肝炎病毒的比较

    目的 比较中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂两种材质的培养容器培养人二倍体细胞和甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)的差异.方法 采用相同的培养条件,在中性玻璃转瓶和聚苯乙烯细胞工厂中分别培养人胚肺二倍体细胞KMB17,并接种HAV H2株,倒置光学显微镜下观察细胞的形态变化;细胞接种病毒后第0、7、14、18、22、26、30天时取样,ELISA法测定病毒的感染性滴度,分析病毒的增殖动力学.结果 两种材质的容器培养的KMB17细胞的生长状态和形态无明显差异;HAV H2株增殖动力学相似;单位体积病毒收获液中的病毒产量无显著差异;聚苯乙烯细胞工厂培养的HAV的单位培养容积产量是中性玻璃转瓶的7.28倍.结论 聚苯乙烯细胞工厂和中性玻璃转瓶培养的人二倍体细胞和HAV均能良好生长,细胞工厂可替代转瓶成为新的疫苗规模化生产的细胞培养技术.

    作者:邵聪文;杨晓蕾;梁海孝;曹洁;张名;杨建波;冯昌增;郑惠文;陈梦娇 刊期: 2015年第02期

  • 口服重组幽门螺杆菌疫苗冻干工艺的优化

    目的 优化口服重组幽门螺杆菌疫苗的冻干工艺,以降低冻干过程中制剂瓶的破瓶率.方法 通过改变冻干工艺中预冻、升华干燥、解析干燥阶段的工艺参数,对12批口服重组幽门螺杆菌疫苗进行冻干试验,在保证样品外观、水分、pH值及无菌检查合格的前提下,以制剂瓶的破瓶率为指标筛选优冻干工艺.结果 口服重组幽门螺杆菌疫苗的优冻干工艺条件为:预冻期2h内冷冻至-45℃并维持4.5h;升华干燥时阶段性升温,总历时34 h;解析干燥时28 ℃维持12 h.按此工艺冻干后的口服重组幽门螺杆菌疫苗样品的外观、水分、pH值及无菌检查均在合格范围内,且制剂瓶的破瓶率为0.结论 优化后的口服重组幽门螺杆菌疫苗冻干工艺稳定可靠,为今后的大规模生产奠定了基础.

    作者:张静;翁樑;邹雪;李建旭;刘丹;彭超;葛自强;夏名鹏;刘亚龙 刊期: 2015年第02期

  • 人参皂苷代谢产物CK诱导卵巢癌细胞CAOV3的凋亡机制

    目的 探讨人参皂苷代谢产物CK对卵巢癌细胞CAOV3的增殖抑制作用,及其诱导细胞凋亡的机制.方法 采用MTT比色法测定不同浓度(0、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0、50.0μg/ml)CK对卵巢癌细胞CAOV3增殖的抑制作用.流式细胞术检测不同浓度(0、2.5、5.0 μg/ml)CK诱导CAOV3细胞凋亡的情况;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色观察细胞凋亡过程中形态变化;体外Caspase活力测定凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的激活情况;Western blot分析Caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶[Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的断裂情况.结果 CK可明显抑制卵巢癌细胞CAOV3的增殖,CK浓度与其对细胞的增殖抑制作用呈剂量-效应关系,IC50值为3.6μg/ml.随着CK浓度的增加,发生凋亡的细胞数增加,出现典型的凋亡形态特征的细胞逐渐增多.Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均被激活.随着CK浓度的增加,酶活性增加,Caspase-3底物PARP断裂的条带逐渐加深.结论 CK对卵巢癌细胞CAOV3有毒性作用,能够抑制细胞增殖,且CK浓度与这种抑制作用呈剂量-效应关系;CK抑制CAOV3细胞的增殖作用是通过促进细胞凋亡来实现的,且这种细胞凋亡涉及内源及外源型途径.

    作者:高岩;林英嘉;李杨;金英花 刊期: 2015年第02期

  • 氯化钠含量对人凝血因子Ⅷ冻干品结晶形态的影响

    目的 研究人凝血因子Ⅷ(FⅧ)中氯化钠含量与冻干品结晶形态的关系,为FⅧ冻干品的质量控制提供依据.方法 采用阴离子交换凝胶柱层析法制备高纯度的FⅧ溶液,分别加入氯化钠至低中高浓度(40、80、160 mmol/L)后,真空冻干,并与添加160 mmol/L氯化钠和100 mmol/L甘氨酸的冻干品进行对比.目测法观察冻干品外观,扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)下观察结晶形态;差示扫描量热法(differential scanning calorimeter,DSC)检测热力学性质;参考《中国药典》三部(2010版)检测FⅧ活性、含水量、复溶时间.结果 FⅧ溶液随着盐浓度增加,冻干品外观依次变差,由疏松网孔状结构变致密片层状结构,共晶点降低,凝血活性降低,复溶时间延长,含水量增加;添加甘氨酸作为保护剂的冻干品外观明显变好,呈疏松网孔状结构,共晶点高,凝血活性强,复溶时间短,含水量低.结论 氯化钠含量对冻干品结晶形态有显著影响,可在溶液配制阶段调节氯化钠含量及添加保护剂,以控制冻干品的结晶形态.

    作者:蒋桂香;张伟;朱光祖;吕应年 刊期: 2015年第02期

  • 四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

    目的 建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证.方法 以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证.结果 定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ ml,检测限为0.938 ng/ml.A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%.结论 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测.

    作者:朱涛;邓捷;邓新;邵忠琦;毛慧华;宇学峰 刊期: 2015年第02期

  • 不同生产工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV84-7株)的比较

    目的 采用细胞工厂替代传统转瓶工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株).方法 分别用细胞工厂和3L转瓶培养2BS细胞,制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)各6批,采用Countstar全自动细胞计数仪进行细胞计数,并以计数结果中的单位面积细胞数、成活率及消化后细胞的平均直径为指标,考察细胞质量,同时采用蚀斑法检测原液、成品及成品37℃放置7 d后(热稳定性)的病毒滴度.结果 采用细胞工厂连续制备的6批2BS细胞的平均单位面积细胞数、细胞平均成活率均略优于3L转瓶培养工艺,平均直径变动范围小于3L转瓶;细胞工厂制备的6批疫苗,平均原液滴度为5.58 lgPFU/ml,平均成品滴度为4.78 lgPFU/0.5ml,37℃放置7d后的平均病毒滴度为4.13 lgPFU/0.5ml,优于3L转瓶.结论 利用细胞工厂制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株),可获得更高滴度病毒液,降低疫苗生产过程中的劳动强度及污染风险,并提高了疫苗产量及质量的稳定性,适合于水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的规模化生产.

    作者:李立;侯良玉;麻广;丁秀红;李永忠;哈秀杰;曾昊;李毅;邹蔚然 刊期: 2015年第02期

  • 一步柱层析纯化血浆分离多种血液制品组分

    目的 采用一步吸附及分步解吸的柱层析技术——扩张床吸附(expanded bed adsorption,EBA)技术,从原料血浆中分离多个有效组分,从而提高血浆的综合利用率.方法 以琼脂糖(碳化钨)-DEAE为吸附介质,将原料血浆按一定流速流经层析柱,并使待分离组分吸附于介质上,通过不同的缓冲液组成、洗脱流速、洗脱体积分步分离有效组分,并初步探讨工艺放大过程中的关键因素.结果 EBA技术可从原料血浆中依次分离出白蛋白、免疫球蛋白、纤维蛋白原、α-1蛋白酶抑制剂4种蛋白;该技术在工艺放大过程中,柱高及洗脱流速是影响分离效果的关键因素;该技术可去除部分病毒,使病毒滴度降低约一个数量级.结论 一步柱层析技术具有血浆综合利用度高、易操作、操作周期短、成本低、可去除病毒等优势,其有望成为传统低温乙醇工艺的有效替代技术,应用于工业化生产.

    作者:喇文军;王妍;周靖;林孝发;张丽君 刊期: 2015年第02期

  • 生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备

    目的 制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定.方法 复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记.结果 制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1∶256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09.结论 成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础.

    作者:李丽;鞠文;殷德辉;孟日增;李娟;宋秀玲;徐坤 刊期: 2015年第02期

  • 生物信息学方法预测高分子蛋白质twitchin的一级结构

    目的 预测高分子蛋白质twitchin基因的exon-intron结构,并确定其一级结构及结构域.方法 利用生物信息学方法,从霸王莲花青螺(Lottia gigantea)基因组数据中探索有无twitchin的基因,预测twitchin的基因exon-intron 结构及twitchin mRNA组成,从而确定该蛋白的一级结构,并检测其结构域;与同源蛋白进行序列比对,绘制系统树,了解其在系统进化中的位置.结果 在霸王莲花青螺基因组数据中存在twitchin的基因,且该蛋白基因在基因组中横跨220 000 bp的序列区域(「sca_38」的149 839-367 346区域),预测编码twitchin的mRNA约由13000bp组成,推算相对分子质量约为480 000,该蛋白由Ig、Fn、kinase结构域和unique序列组成,与贻贝twitchin相比较,他们之间具有较高的同源性.结论 在霸王莲花青螺中存在twitchin的基因,预测和确定了该蛋白质的一级结构.

    作者:包玉龙;郑源强;丁枫;吕璐;薛成芳;韩新荣;石艳春 刊期: 2015年第02期

  • 西尼罗病毒E蛋白在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中的表达及其鉴定

    目的 利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)囊膜E蛋白,并进行鉴定.方法 利用分子克隆技术将WNV E基因克隆至杆状病毒供体质粒pFastBacl中,构建重组供体质粒pFastBac-E,转化大肠埃希菌DH 10Bac,构建重组穿梭质粒Bac-E,转染sf9细胞,收获含WNV E基因的重组杆状病毒AcMNPV-E,采用间接免疫荧光及Western blot法检测E蛋白的表达.结果 重组供体质粒pFastBac-E经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,重组穿梭质粒Bac-E经PCR鉴定证明构建正确,转染约96 h后,sf9细胞体积变大、变圆,细胞颗粒化,进而从培养板上脱落,漂浮,收获的第1代AcMNPV-E经PCR鉴定为阳性.感染重组杆状病毒AcMNPV-E的sf9细胞周围出现绿色荧光,表达的目的蛋白可与兔抗WNV E蛋白多克隆抗体及鼠抗His单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约53 000处可见目的蛋白条带.结论 利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统成功表达了WNV E蛋白,为WNV快速诊断方法及新型疫苗的建立奠定了基础.

    作者:李岭;王化磊;曹增国;金宏丽;郑学星;冯娜;赵国星;李倩;李楠 刊期: 2015年第02期

  • 脊髓灰质炎病毒减毒活疫苗中Ⅲ2株全基因测序及序列分析

    目的 对脊髓灰质炎病毒减毒活疫苗中Ⅲ2株全基因进行测序,并与P3/Leon/37株和SabinⅢ株的全基因序列进行同源性比较.方法 通过大片段克隆和小片段克隆两种方法,采用RT-PCR法扩增覆盖中Ⅲ2株基因组全长且互相重叠的4个大片段和8个小片段,基因组中间片段的PCR产物直接测序,基因组末端的片段先进行TA克隆再测序.分别将两种方法得到的cDNA片段进行拼接,并将所得全长cDNA序列与P3/Leon/37株和SabinⅢ株的全基因序列进行同源性比较.结果 两种方法均能得到长度为7 432 bp的中Ⅲ2株全长cDNA序列,且碱基序列完全一致;中Ⅲ2株全基因序列与P3/Leon/37株和SabinⅢ株全基因序列的同源性均为99%;中Ⅲ2株与P3/Leon/37株的碱基序列差异共有19处(非编码区3处和编码区16处),编码区有6个基因突变导致氨基酸序列的改变;中Ⅲ2株和SabinⅢ株的碱基序列差异共有28处(非编码区13处和编码区15处),编码区有3个基因突变导致氨基酸序列的改变.结论 中Ⅲ2减毒疫苗株全基因组cDNA序列为7 432 bp,与SabinⅢ株全基因序列的同源性为99%.

    作者:董莉娟;谢忠平;李华;杨婷;龙润乡;岳磊;杨蓉;罗芳宇 刊期: 2015年第02期

  • 内蒙古巴彦淖尔市2008~2013年急性弛缓性麻痹病例监测系统分析

    急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例是指所有15岁以下人群出现急性弛缓性麻痹症状的病例及任何年龄临床诊断为脊髓灰质炎(以下简称脊灰)的病例.AFP病例的诊断要点为急性起病、肌张力减弱、肌力下降、腱反射减弱或消失.常见的AFP病例包括脊灰;格林巴利综合征;横贯性脊髓炎、脊髓炎、脑脊髓炎、急性神经根脊髓炎;多神经病;神经根炎;外伤性神经炎;单神经炎;神经丛炎;周期性麻痹;肌病;急性多发性肌炎;肉毒中毒;四肢瘫、截瘫和单瘫;短暂性肢体麻痹[1].我市自1993年开始,连续开展了13年26轮次的脊灰疫苗强化免疫活动,已连续20年未检测到脊灰野病毒毒株病例,一直保持较高水平的常规免疫接种率.2000年经世界卫生组织确认,达到了无脊灰状态.加强AFP病例监测是巩固消灭脊灰成果的重要策略之一.

    作者:曹民治;耿春梅;郭丽;蔺永平 刊期: 2015年第02期

  • Al(OH)3佐剂对不同抗原含量肠道病毒71型灭活疫苗免疫效果的影响

    目的 分析Al(OH)3佐剂对不同抗原含量肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗免疫效果的影响.方法 将ICR小鼠随机分为9组,每组8只:常规剂量(160 EU/0.1 ml EV71)、1/2剂量(80EU/0.1 mlEV71)、1/5剂量(32 EU/0.1 ml EV71)无佐剂及佐剂[Al(OH)31.0 mg/ml]疫苗组,并设佐剂、生理盐水及空白对照组,分别于0、28 d经肌肉免疫小鼠,分别于初免及加强免疫后28 d,经尾静脉采血,分离血清,采用体外微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞仪检测IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-10、IFNγ及TNF水平.结果 初免后28 d,1/2剂量疫苗组中佐剂组小鼠血清抗体阳性率明显高于无佐剂疫苗组,差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间差异无统计学意义(P>0.05);加强免疫后28 d,常规剂量疫苗组中,佐剂及无佐剂组小鼠血清抗体阳性率均为100%,抗体GMT分别为1∶152.2和1∶139.6,1/2剂量疫苗组中,佐剂组小鼠血清中抗体GMT与无佐剂组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其余组间抗体阳性率及抗体GMT差异均无统计学意义(P>0.05).常规剂量、1/2剂量、1/5剂量疫苗组,均诱导产生IL-6、IL-10、IFNγ及TNF 4种细胞因子,与佐剂对照组和生理盐水对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),未检测到IL-2、IL-4、IL-17A.结论 EV71灭活疫苗可诱导小鼠产生IL-6、IL-10、IFNγ、TNF 4种细胞因子及特异性的抗EV71抗体,加入佐剂后免疫效果更好.

    作者:李华;姜广菊;杨婷;何晓娟;岳磊;谢天宏;杨水芝;朱凡丽;龙润乡 刊期: 2015年第02期

中国生物制品学杂志

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