张春燕；杨春；李岱容；穆柳青；杨静；冯鑫
目的 探讨RNA干扰Apg-2基因表达对BaF3-MIGR1和BaF3-p210(Bp210)细胞凋亡的影响.方法 取BaF3MIGR1和Bp210、稳定抑制Apg-2表达的BaF3-MIGR1-Hspa42和Bp210-Hspa42细胞及阴性对照Bp210-HspaHK和BaF3-MIGR 1-HspaHK细胞,采用瑞特染色法观察各组细胞的形态学变化；流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况；Western blot法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平.结果 干扰Apg-2基因表达后,细胞出现肿胀、胞浆空泡、核染色质聚集、核碎裂,部分细胞可见凋亡小体,处于有丝分裂中期细胞明显减少.与BaF3-MIGR1和Bp210细胞相比,BaF3-MIGR1-Hspa42和Bp210-Hspa42细胞的凋亡率显著增加(P＜0.05);Bcl-2蛋白的表达水平下调,Bax蛋白的表达水平无明显变化.结论 干扰Apg-2基因表达可促进BaF3-MIGR1和Bp210细胞凋亡增加,其可能是通过降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平来实现的.
作者：陈熙；钟梁；肖青；王欣；李春莉；冯文莉 刊期： 2013年第06期
目的 研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethyl-hexyl)phthalate,DEHP]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生的机制.方法 将孕12d (gestation day,GD12)的SD孕鼠随机分为2组:实验组[将DEHP溶于1.5ml大豆油中灌胃大鼠,750 mg/(kg·d)]和对照组(以1.5ml大豆油灌胃大鼠),每组20只,自GD12 ～ GD19连续每天定时给药1次.各组分别取10只孕鼠正常分娩,雄性仔鼠出生后30 d,计数每窝产雄性活仔数,称量体重,并测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD),逐个检查雄鼠的阴茎弯曲度和尿道开口部位,判断有无尿道下裂；其余孕鼠在怀孕第20天行剖宫产取出胎鼠,采用实时定量PCR (qPCR)和免疫组化法分别检测雄性胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 雄性仔鼠出生后30 d,实验组与对照组比较,每窝产雄性活仔数、雄性仔鼠的体重及AGD均有明显减少或缩短(P均＜0.001)；实验组尿道下裂发生率约为30.6％.与对照组比较,实验组胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2mRNA的水平明显增加(P＜0.05),磷酸化JNK1和JNK2蛋白的表达水平有增加的趋势.结论 DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中JNK通路异常表达有关.
作者：李明勇；邱林；何大维；林涛；涂生芬；华燚；张德迎；龙春兰；魏光辉 刊期： 2013年第06期
目的 以T4噬菌体为载体,构建特异性杀伤肝癌细胞的噬菌体药物载体,并对其选择性细胞毒活性进行初步评价.方法 通过噬菌体文库筛选肝癌细胞特异性结合肽(tumor specific peptide,TSP),利用分子克隆技术和噬菌体体外展示技术,将其与噬菌体小衣壳蛋白Soc重组,并展示在T4噬菌体表面.同时通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙级基)碳酰二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride,EDC]化学法,将表阿霉素(epidoxorubicin,Epi)偶联在噬菌体衣壳表面,采用MTT法在细胞水平上检测噬菌体药物载体对人肝癌细胞Bel-7402和正常肝细胞HL-7702的选择性杀伤作用.结果 Soc-TSP融合蛋白以846拷贝/噬菌体颗粒的密度展示在T4噬菌体表面,Epi载药率达每个噬菌体颗粒表面近2 000个药物分子.与游离的Epi相比,构建的T4噬菌体药物载体对肝癌Bel-7402细胞的杀伤作用提高了4～6倍,而对正常肝细胞HL-7702的影响不大.结论 肿瘤特异噬菌体药物载体可提高药物对肿瘤细胞的靶向性以及肿瘤细胞对药物分子的摄入,从而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤.
作者：李嵌；赵晨阳；惠林萍；何琳；于涛 刊期： 2013年第06期
目的 建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据.方法 对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-MuV特异的巢式PCR法及TaqMan探针Real-time PCR法进行检测,比较两种方法检测MuV的灵敏性.结果 细胞培养-MuV特异的巢式PCR法共检出31份MuV阳性样本,系统进化分析表明,该31株MuV均属于F基因亚型；TaqMan探针Real-time PCR法共检出41份MuV阳性样本,其中包含了细胞培养-MuV特异的巢式PCR法检出的31份阳性样本,TaqMan探针Real-time RT-PCR法对MuV的检出率(40.59％)高于传统细胞培养-巢式PCR法的检出率(30.69％).结论 TaqMan探针Real-time PCR法的灵敏性、特异性和简便性均优于传统的细胞培养-MuV特异的巢式PCR法,可应用于腮腺炎的临床诊断及免疫防控.
作者：施海晶；王晶晶；陈俊英；陈巍；潘明；赵钢；孙强明 刊期： 2013年第06期
目的 对2009年中国云南省昆明地区柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus group B5,CVB5)的部分VP1基因序列进行分析,以了解CVB5的遗传特性.方法 收集2009年中国云南省昆明地区临床诊断为无菌性脑炎患儿的200份粪便标本,设计针对CVB的通用引物,利用半巢式RT-PCR扩增部分VP1基因.PCR产物直接测序后,采用Omiga 和Mega 5.05等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列及系统进化分析.结果 共分离出7株CVB5,其部分VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为92.7％～98.5％和93.6％～100.0％;与中国其他不同地区参考株的核苷酸序列同源性为80.1％～ 99.1％,其中与中国山东株98388-SD-CHN-1998同源性较低；与中国其他不同地区参考株的氨基酸序列同源性为84.4％～100.0％,其中与中国河南株CoxB5-Henan-2010和中国山东株98388-SD-CHN-1998之间同源性低；与其他不同国家参考株比较,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在77.5％～ 89.1％和92.1％ ～ 96.3％之间；与原型株Faulkner的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.6％ ～ 80.9％和92.1％～ 95.4％.基因系统进化分析显示,分离的7株CVB5属于相对独立的1个分枝,中国流行株除98388-SD-CHN-1998外,构成1个分枝.结论 2009年中国云南省昆明地区CVB5流行株属于相同基因型.
作者：邵聪文；潘玥；邓新强；叶君；马忠飞；孙强明；马绍辉 刊期： 2013年第06期
目的 在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ).方法 利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900 μg/ml G418筛选抗性细胞株.收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清中rhFⅦ的水平；PT法检测细胞培养上清的凝血时间；Western blot法检测细胞培养上清中rhFⅦ的表达.结果 共获得3株抗性细胞,分别命名为CHO-FⅦ01 ～ 03,空载体转染的细胞命名为CHO-CK；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中均检测到了rhFⅦ,但含量均低于阳性对照；CHO-CK细胞培养上清的凝血时间分别为CHO-FⅦ01～03细胞培养上清的2.4、2.1和3.1倍；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中含目的蛋白rhFⅦ,相对分子质量约为50 000.结论 成功在CHO-K1细胞中表达了hFⅦ,为下一步hFⅦ的深入研究及应用奠定了基础.
作者：肖薇；赵睿；李长清；边国慧；肖小璞；林方昭 刊期： 2013年第06期
目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染地鼠肾细胞BHK-21的抑制作用.方法 将不同浓度的NGF(100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6和0.8μg/L)加入BHK-21细胞中,采用MTT法检测NGF对BHK-21细胞的毒性作用；将不同稀释度的JEV(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7)JEV感染BHK-21细胞,蚀斑计数法测定病毒滴度；在JEV感染的BHK-21细胞中加入不同浓度的NGF,观察细胞的CPE情况,并通过蚀斑减少率分析NGF对JEV的抑制作用.结果 NGF浓度在100 μg/L以内对BHK-21细胞无毒性；JEV的滴度为Lg 8.70 pfu/ml;NGF(12.5 μg/L)+ JEV组BHK-21细胞病变程度明显减轻；随着NGF浓度的提高,蚀斑减少率也呈升高趋势(r=0.929,P＜0.05),NGF浓度为3.1μg/L以上时,蚀斑减少率达10％以上,具有明显的抗JEV效果.结论 NGF在浓度为0.8～100 μg/L的范围内,对JEV具有明显的抑制作用,为今后研究NGF抗病毒的作用机制奠定了实验基础.
作者：杨栋；顾鹏毅；刘海军；李宁禾；刘畅；姚宇；李鹤；孙英杰；孙晋民 刊期： 2013年第06期
目的 构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达.方法 从含HBV全序列的质粒pHBV中扩增HBV S抗原基因,在HBV S疏水区127和128位氨基酸序列处引入Age Ⅰ酶切位点,将HCV E1和E2区保守的线性中和抗原表位及HVR1的模拟表位基因分别插入该位点,获得嵌合HCV中和抗原表位的重组HBV S基因,将该基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组真核表达质粒pCI-HBSE1～4.将4种重组真核表达质粒转染293T细胞,间接免疫荧光和Western blot检测嵌合基因的表达.结果 4种重组真核表达质粒经双酶切证实构建正确；4种重组质粒转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western blot显示,在相对分子质量约27 000处可见蛋白条带.结论 成功构建了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合基因真核表达质粒,其在293T细胞中可有效表达,为进一步制备嵌合HCV中和抗原表位的HBV S抗原VLP,研究中和抗体对HCV假病毒颗粒(HCVpp)和JFH-1HCV体外培养系统(HCVcc)感染的抑制作用奠定了实验基础.
作者：舒放；雷迎峰；林芳；王希；李斌；张利军；董轲；张惠中；韦三华 刊期： 2013年第06期
目的 研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)aG株糖蛋白(glycoprotein,GP)的遗传稳定性,并对GP基因组进行序列测定及生物信息学分析.方法 采用RT-PCR法扩增6代次aG株RV(4aGV4、4aGV5、4aGV7、4aGV 11、4a-GV15、4aGV18)G区基因,分别将产物克隆入pGEM-T载体中,测定序列并进行拼接；测定6代次aG株RV的滴度、荧光滴度和毒力；应用DNAStar和Mega4.0软件包中的相应软件对基因组序列进行分析,并与我国近期分离且具有地域代表性的RV街毒株进行基因同源性分析.结果 6代次aG株RV GP基因保持高度稳定,未出现核苷酸突变位点；6代次aG株RV的滴度有所不同,但其毒力指标基本一致；RV aG株与我国街毒流行株GP抗原区具有较高的同源性,且膜外区同源性远高于跨膜区及膜内区；aG株RV第147位关键位点氨基酸与街毒流行株该位点不同,其余各关键抗原位点在各毒株间均高度同源；6代次aG株RV关键毒力位点均未出现氨基酸突变,传代稳定,aG株RV与各街毒流行株关键毒力位点均高度同源；aG株病毒信号肽结构与我国多株流行株高度同源,而其GP则与法国巴斯德原株PV2061株及分离自美国的HEP-Flury株高度同源,与我国流行街毒株亦具有较高的同源性.结论 RV aG株GP遗传稳定,且与我国近期分离的街毒株高度同源,本研究为完善该毒株的质量控制及全面评价其在我国的适用性提供了实验依据.
作者：李加；曹守春；石磊泰；王云鹏；吴小红；刘景华；唐建蓉；俞永新；董关木 刊期： 2013年第06期
目的 探讨重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的免疫原性及其对重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫增强作用.方法 用透射电镜观察HBcAg、HBsAg及HBcAg+ HBsAg混合抗原病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的形态.将小鼠随机分为6组:阴性对照组(NS)、HBcAg组(C)、HBsAg组(S)、HBsAg+铝佐剂组(S+Al)、HBsAg+ HBcAg混合组(S+C)及HBsAg+ HBcAg+铝佐剂组(S+C+Al),用相应抗原免疫各组小鼠,分别于第0天、第14天经小鼠双侧大腿肌肉进行初次和加强免疫1次,间接ELISA法检测各组小鼠血清中HBsAg和HBcAg的特异性抗体水平,分析HBsAg特异性抗体亚类,ELISPOT法检测各组小鼠脾细胞中HBsAg特异性IFNγ、HBcAg特异性IFNγ及HBsAg特异性IL-4水平.结果 电镜观察可见HBsAg和HBcAg均呈大小均一的VLP结构,二者混合后有聚集现象.初次免疫后,S+C组的HBsAg特异性抗体水平与S组差异无统计学意义(P=0.074),加强免疫后,S+C组HBsAg特异性抗体水平明显高于S组(P=0.002),C组和S+C组均可产生高水平HBcAg特异性抗体.S组HBsAg抗体亚类以IgG1为主,S+C组以IgG2a为主.S+C组HBsAg特异性IFNγ斑点数明显高于S组、S+Al组和S+C+Al组(P＜0.05),C组与S+C组HBcAg特异性IFNγ斑点数均较高,与S+C+Al组比较,S+Al组HBsAg特异性IL-4斑点数明显升高(P=0.026).结论 HBcAg具有良好的免疫原性,可增强HBsAg的免疫反应,使反应向Th1方向极化,为治疗性乙肝疫苗的研发奠定了基础.
作者：李计来；徐静；王娟；吴刚；赵莉；许丽锋 刊期： 2013年第06期
目的 纯化重组人干扰素β1a(recombinant human interferon β1a,rhIFNβ1a),并分析其理化性质.方法 应用15L生物反应器悬浮微载体培养表达rhIFNβ1a的重组CHO细胞,细胞培养收获液经超滤浓缩、蓝胶亲和层析、脱盐和CM离子交换层析纯化后,采用水泡性口炎病毒抑制法测定rhIFNβ1a的效价；Lowry法测定蛋白含量；等电聚焦电泳法测定其等电点；SDS-PAGE和高效液相色谱法测定其纯度；Western blot法分析其免疫活性；SDS-PAGE和质谱仪测定其相对分子质量；圆二色谱法分析其二级结构.结果 共纯化了3批样品,纯化的rhIFNβ1a平均蛋白浓度为0.2840 mg/ml,平均比活可达1.06×108 IU/mg,纯度达95％以上,蛋白质平均回收率为58.36％,蛋白质相对分子质量为20 445.0,等电点约为6.6,免疫活性良好,二级结构与国家标准品基本一致.结论 成功纯化了rhIFNβ1a,并检测了其理化性质,为建立大规模制备rhIFNβ1a的生产工艺和制造检定规程,实现产业化奠定了基础.
作者：李柳萍；杨胥微；黄志斌；喇文军；王妍 刊期： 2013年第06期
目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.td)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值.方法 根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv 1352/pET30aSETB.用Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,Spe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的包涵体蛋白经His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售M.tb抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较.结果 构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致；表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30％；纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95％；以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70％和90.00％,而市售M.tb抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00％和63.33％;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0％,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7％,二者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功制备了M.tb Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景.
作者：阳幼荣；冯金栋；张俊仙；赵卫国；刘宇；梁艳；白雪娟；王兰；吴雪琼 刊期： 2013年第06期
目的 探讨云芝糖肽(polysaccharopeptide,PSP)对乳腺癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的作用.方法 体外分离乳腺癌患者或健康人PBMC,并将其分别分为PSP组(分别加入终浓度为25μg/ml的PSP和终浓度为100 μg/ml的PHA)和对照组(只加入终浓度为100 μg/ml的PHA),采用TLR4单克隆抗体对各组细胞进行免疫荧光染色.将乳腺癌患者PBMC分为空白对照组、TLR4抗体组、PSP组和PSP+ TLR4抗体组,采用Q-PCR检测各组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平.结果 健康志愿者对照组PBMC荧光强度较强,而健康志愿者PSP组PBMC荧光强度较弱；乳腺癌患者PSP组与乳腺癌患者对照组相比,细胞荧光强度更弱.与空白对照组比较,TLR4抗体组PBMC IL-12和组TNF-α的表达水平均显著降低(P＜0.05),PSP组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01)；与PSP和TLR4抗体组比较,PSP+ TLR4抗体组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01).结论 TLR4可能是PSP的作用受体之一.
作者：王静；余爽；陈楚；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第06期
多药耐药性细菌及新型病毒的出现使抗生素疗法面临重大挑战.众多临床前研究数据表明,单克隆抗体(简称单抗)在治疗细菌及病毒感染,尤其是在院内感染方面有很大优势,极具开发潜力.目前国内外仅有一种抗感染单抗被批准用于临床,还有许多单抗正处于不同临床研究阶段.本文就目前在研单抗的临床研究进展作简要综述.
作者：王茶；魏敬双 刊期： 2013年第06期
目的 研究Netrin-1对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channel α-subunit,α-ENaC)表达的调控及其可能的机制,并探讨其在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)及急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)中的作用.方法 取对数生长期的A549细胞,用相同浓度的Netrin-1(500 μg/L),分别作用0、3、6、12、24和48 h,用不同浓度的Netrin-1(0、0.5、5、50和500 μg/L),作用12 h.将A549细胞分为药物组(500 μg/LNetrin-1)、抑制组(1 μmol/L PSB1115+ 500 μg/L Netrin-1)和对照组(仅加RPMI1640培养基),培养12 h.RT-PCR 法分别检测各组α-ENaC基因mRNA的转录水平；Western blot法检测各组α-ENaC蛋白的表达水平.结果 相同浓度下,Netrin-1作用A549细胞6h后,α-ENaC基因mRNA相对转录水平及蛋白相对表达量显著高于对照组(P＜0.05),作用12h时达高；相同时间内,Netrin-1浓度大于5 μg/L时,α-ENaC基因mRNA相对转录水平及蛋白的相对表达量均明显高于对照组(P＜0.05),且呈剂量依赖性,浓度为500 μg/L时达高；药物组α-ENaC基因mRNA相对转录水平及蛋白相对表达量均明显高于对照组及抑制组(P＜0.05),PSB1115可明显抑制α-ENaC基因mRNA的转录和蛋白表达.结论 Netrin-1可通过腺苷A2b受体途径,从基因水平上调α-ENaC的表达,有益于ALI及ARDS的预后.
作者：何婧；王导新 刊期： 2013年第06期
目的 探讨T-钙黏着蛋白(T-cadherin)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibro blast growth factor,bFGF)在人子宫肌瘤中的表达及其相关性,以探讨二者在子宫肌瘤发生、发展过程中的作用.方法 收集2011年9～12月间经重庆医科大学附属第一医院诊断为子宫肌瘤并行手术治疗,术后病理报告确诊为子宫肌瘤的患者50例,取其子宫肌瘤组织(A组)及同源正常子宫肌层组织(B组),同期收集经该院诊断为良性疾病并行手术治疗,术后病理报告确诊未患子宫肌瘤的10名患者正常子宫肌层组织作为对照组(C组).50例子宫肌瘤患者根据术前彩色多普勒血流显像(Color Doppler Flow Imaging,CDFI)和激素水平进一步分组比较.采用SP免疫组化法检测子宫组织中T-cadherin 和bFGF蛋白的定位,Western blot和RT-PCR法分别检测子宫组织中T-cadherin和bFGF蛋白的表达水平及基因mRNA转录水平,并分析二者与CDFI分级和激素分期的相关性.结果 A组T-cadherin主要定位于肌瘤细胞膜,bFGF主要定位于肌瘤细胞浆；A组子宫组织中T-cadherin和bFGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于B组和C组(P＜0.05),且二者明显呈正相关(P＜0.01)；T-cadherin和bFGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均随CDFI等级的升高而增强(P＜0.05或P＜0.01).结论 T-cadherin和bFGF在子宫肌瘤组织中高表达,提示二者在子宫肌瘤的发生、发展过程中起促进作用.
作者：王丽芳；唐良萏；贾莉；曹毅 刊期： 2013年第06期
目的 探讨山奈酚(kaempferol,KA)对二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)的免疫抑制作用.方法 将BALB/c小鼠按体重随机分为6组:生理盐水对照组、DTH模型组、环磷酰胺(cytoxan,CTX)组(20 mg/kg)、KA低剂量(2 mg/kg)、中剂量(4 mg/kg)、高剂量(8 mg/kg)组,每组10只,用DNFB致敏,同时给药,连续给药7d.致敏后第5天于小鼠右耳背涂1％ DNFB 5μl诱发DTH,左耳涂等量的丙酮/橄榄油溶剂作为对照.连续给药7d后,称量小鼠体重及脾脏和胸腺湿重,计算脾脏指数和胸腺指数；DNFB激发后48 h,剪下小鼠左右耳廓,称重,计算小鼠耳廓肿胀度,并将剪取的右耳耳廓制成冰冻切片,光学显微镜下观察小鼠耳廓局部组织的病理变化；无菌取脾,制备脾细胞,MTT法检测经ConA刺激的脾淋巴细胞的增殖活力.结果 KA高剂量组能显著降低DTH小鼠的脾脏指数和胸腺指数(P＜0.01或P＜0.05)；KA中、高剂量组能明显抑制DNFB所诱发的小鼠耳廓肿胀度(P＜0.05或P＜0.01)；KA能明显减少DTH小鼠耳廓局部组织淋巴细胞的浸润,并抑制脾脏淋巴细胞的增殖(P＜0.05或P＜0.01).结论 KA对DTH小鼠具有明显的免疫抑制作用,抑制淋巴细胞的增殖可能是其作用机制之一.
作者：佟春玉；曹宁；刘振华；崔玉东 刊期： 2013年第06期
目的 原核表达并纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal entertoxin B,SEB).方法 以合成的SEB全基因序列为模板,PCR扩增SEB基因片段,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-SEB,转化E.coil BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经硫酸铵盐析、SP阳离子层析柱、Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱纯化后,用Thrombin切除组氨酸标签,再经Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱和DEAE阴离子层析柱纯化.结果 重组原核表达质粒pET-28a-SEB经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为31000,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30％.终纯化后的重组SEB蛋白纯度可达90％以上.结论 成功构建了SEB基因重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了重组SEB蛋白,为进一步研究其致病机理及防控方法奠定了基础.
作者：张亮；张国利；陈萍；朱平；岳玉环；吴广谋；田园；刘雪；冯越 刊期： 2013年第06期
目的 构建miR-34a慢病毒表达质粒,并检测其对入结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 以hsa-miR-34a前体序列pre-miR-34a为模板,设计末端部分互补的引物,进行引物退火反应,形成引物二聚体,进行PCR扩增,再以此DNA双链为模板进行PCR扩增,PCR产物酶切后,插入线性化的慢病毒载体pGIPZ-GFP中,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-miR-34a,与包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒的包装,梯度稀释法检测重组慢病毒的滴度.将包装好的重组慢病毒感染SW480细胞,qPCR法检测感染细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平；MTT和平板克隆法检测感染细胞的增殖活力；流式细胞术检测感染细胞的细胞周期分布.结果 PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确；重组慢病毒的滴度为6.52×108 TU/ml;重组慢病毒感染SW480细胞后,显著上调了细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平,明显抑制了细胞的增殖活力(P＜0.01),G0-G1期细胞比例明显增加(P＜0.01).结论 成功构建了miR-34a慢病毒表达质粒,慢病毒感染SW480细胞后,能显著提高miR-34a的内源性表达,并抑制细胞的增殖,为进一步研究miR-34a的功能及作用机制奠定了基础.
作者：邵新宏；张才全 刊期： 2013年第06期
目的 克隆并原核表达西方马脑炎病毒(Western equine encephalomyelitis virus,WEEV)E2基因.方法 采用PCR法从重组质粒pVL1393-C-E中扩增E2基因,插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-E2,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-E2经PCR、双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为52 900,诱导6h目的蛋白的表达量较高,约占菌体总蛋白的23.5％,重组蛋白主要以包涵体形式存在,可与鼠源His单克隆抗体特异性结合.结论 克隆并原核表达了WEEV E2基因,为E2蛋白免疫原性及WEEV亚单位疫苗的研究奠定了基础.
作者：马金柱；王化磊；郑学星；赵永坤；高玉伟；王铁成；黄耕；杨松涛；夏咸柱 刊期： 2013年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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