何婧；王导新
多药耐药性细菌及新型病毒的出现使抗生素疗法面临重大挑战.众多临床前研究数据表明,单克隆抗体(简称单抗)在治疗细菌及病毒感染,尤其是在院内感染方面有很大优势,极具开发潜力.目前国内外仅有一种抗感染单抗被批准用于临床,还有许多单抗正处于不同临床研究阶段.本文就目前在研单抗的临床研究进展作简要综述.
作者：王茶；魏敬双 刊期： 2013年第06期
目的 探讨重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的免疫原性及其对重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫增强作用.方法 用透射电镜观察HBcAg、HBsAg及HBcAg+ HBsAg混合抗原病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的形态.将小鼠随机分为6组:阴性对照组(NS)、HBcAg组(C)、HBsAg组(S)、HBsAg+铝佐剂组(S+Al)、HBsAg+ HBcAg混合组(S+C)及HBsAg+ HBcAg+铝佐剂组(S+C+Al),用相应抗原免疫各组小鼠,分别于第0天、第14天经小鼠双侧大腿肌肉进行初次和加强免疫1次,间接ELISA法检测各组小鼠血清中HBsAg和HBcAg的特异性抗体水平,分析HBsAg特异性抗体亚类,ELISPOT法检测各组小鼠脾细胞中HBsAg特异性IFNγ、HBcAg特异性IFNγ及HBsAg特异性IL-4水平.结果 电镜观察可见HBsAg和HBcAg均呈大小均一的VLP结构,二者混合后有聚集现象.初次免疫后,S+C组的HBsAg特异性抗体水平与S组差异无统计学意义(P=0.074),加强免疫后,S+C组HBsAg特异性抗体水平明显高于S组(P=0.002),C组和S+C组均可产生高水平HBcAg特异性抗体.S组HBsAg抗体亚类以IgG1为主,S+C组以IgG2a为主.S+C组HBsAg特异性IFNγ斑点数明显高于S组、S+Al组和S+C+Al组(P＜0.05),C组与S+C组HBcAg特异性IFNγ斑点数均较高,与S+C+Al组比较,S+Al组HBsAg特异性IL-4斑点数明显升高(P=0.026).结论 HBcAg具有良好的免疫原性,可增强HBsAg的免疫反应,使反应向Th1方向极化,为治疗性乙肝疫苗的研发奠定了基础.
作者：李计来；徐静；王娟；吴刚；赵莉；许丽锋 刊期： 2013年第06期
目的 原核表达并纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal entertoxin B,SEB).方法 以合成的SEB全基因序列为模板,PCR扩增SEB基因片段,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-SEB,转化E.coil BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经硫酸铵盐析、SP阳离子层析柱、Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱纯化后,用Thrombin切除组氨酸标签,再经Chelating金属鳌合层析铜(Cu2+)柱和DEAE阴离子层析柱纯化.结果 重组原核表达质粒pET-28a-SEB经双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为31000,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30％.终纯化后的重组SEB蛋白纯度可达90％以上.结论 成功构建了SEB基因重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了重组SEB蛋白,为进一步研究其致病机理及防控方法奠定了基础.
作者：张亮；张国利；陈萍；朱平；岳玉环；吴广谋；田园；刘雪；冯越 刊期： 2013年第06期
目的 构建人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)质粒,并探讨其对不同p53状态卵巢癌细胞SKOV3(缺p53)和OVCAR3(含p53)生长和凋亡的影响.方法 设计并合成针对hTERT基因的siRNA,与表达的质粒pGenesil-1连接,构建重组表达质粒pG1、pG2和pGCR(阴性对照质粒),分别转染卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3,并设未转染细胞对照组和转染空载体对照组.转染后48 h,荧光显微镜观察并计算转染效率；实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hTERT基因mRNA的表达；Western blot检测转染细胞中hTERT、p53和p21蛋白的表达；端粒重复序列扩增(Telomeric repeat amplification portocol,TRAP)法检测转染细胞端粒酶的活性；CCK-8法检测细胞生长情况；流式细胞仪和Annexin V-PE/7-AAD双染法分别检测细胞周期和细胞凋亡的情况.结果 已成功构建了靶向hTERT siRNA重组质粒pG1、pG2和阴性对照质粒pGCR,具有较高的转染效率,与pGCR转染组相比,pG1和pG2转染组hTERT基因和蛋白表达(P＜0.05)及端粒酶活性均明显降低,pG1和pG2转染组均可抑制两种细胞的生长,且对OVCAR3细胞的抑制作用强于SKOV3细胞；pG1和pG2转染组G0-G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显增多(P＜0.05)；在OVCAR3细胞中,hTERT表达受抑后均出现了明显的凋亡,同时伴随p53和p21蛋白表达的增加,在缺乏p53基因的SKOV3细胞中并未导致明显的凋亡,其p21蛋白表达明显低于pGCR转染组(P＜0.05).结论 构建的靶向hTERT siRNA重组表达质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起肿瘤细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关.
作者：罗祎；姚珍薇；杨雅莹；易永芬 刊期： 2013年第06期
目的 构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达.方法 从含HBV全序列的质粒pHBV中扩增HBV S抗原基因,在HBV S疏水区127和128位氨基酸序列处引入Age Ⅰ酶切位点,将HCV E1和E2区保守的线性中和抗原表位及HVR1的模拟表位基因分别插入该位点,获得嵌合HCV中和抗原表位的重组HBV S基因,将该基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组真核表达质粒pCI-HBSE1～4.将4种重组真核表达质粒转染293T细胞,间接免疫荧光和Western blot检测嵌合基因的表达.结果 4种重组真核表达质粒经双酶切证实构建正确；4种重组质粒转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western blot显示,在相对分子质量约27 000处可见蛋白条带.结论 成功构建了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合基因真核表达质粒,其在293T细胞中可有效表达,为进一步制备嵌合HCV中和抗原表位的HBV S抗原VLP,研究中和抗体对HCV假病毒颗粒(HCVpp)和JFH-1HCV体外培养系统(HCVcc)感染的抑制作用奠定了实验基础.
作者：舒放；雷迎峰；林芳；王希；李斌；张利军；董轲；张惠中；韦三华 刊期： 2013年第06期
目的 在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ).方法 利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900 μg/ml G418筛选抗性细胞株.收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清中rhFⅦ的水平；PT法检测细胞培养上清的凝血时间；Western blot法检测细胞培养上清中rhFⅦ的表达.结果 共获得3株抗性细胞,分别命名为CHO-FⅦ01 ～ 03,空载体转染的细胞命名为CHO-CK；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中均检测到了rhFⅦ,但含量均低于阳性对照；CHO-CK细胞培养上清的凝血时间分别为CHO-FⅦ01～03细胞培养上清的2.4、2.1和3.1倍；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中含目的蛋白rhFⅦ,相对分子质量约为50 000.结论 成功在CHO-K1细胞中表达了hFⅦ,为下一步hFⅦ的深入研究及应用奠定了基础.
作者：肖薇；赵睿；李长清；边国慧；肖小璞；林方昭 刊期： 2013年第06期
目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染地鼠肾细胞BHK-21的抑制作用.方法 将不同浓度的NGF(100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6和0.8μg/L)加入BHK-21细胞中,采用MTT法检测NGF对BHK-21细胞的毒性作用；将不同稀释度的JEV(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7)JEV感染BHK-21细胞,蚀斑计数法测定病毒滴度；在JEV感染的BHK-21细胞中加入不同浓度的NGF,观察细胞的CPE情况,并通过蚀斑减少率分析NGF对JEV的抑制作用.结果 NGF浓度在100 μg/L以内对BHK-21细胞无毒性；JEV的滴度为Lg 8.70 pfu/ml;NGF(12.5 μg/L)+ JEV组BHK-21细胞病变程度明显减轻；随着NGF浓度的提高,蚀斑减少率也呈升高趋势(r=0.929,P＜0.05),NGF浓度为3.1μg/L以上时,蚀斑减少率达10％以上,具有明显的抗JEV效果.结论 NGF在浓度为0.8～100 μg/L的范围内,对JEV具有明显的抑制作用,为今后研究NGF抗病毒的作用机制奠定了实验基础.
作者：杨栋；顾鹏毅；刘海军；李宁禾；刘畅；姚宇；李鹤；孙英杰；孙晋民 刊期： 2013年第06期
目的 评价微柱凝胶卡式法(microtubes gel test,MGT)检测红细胞不规则抗体的效果.方法 分别采用MGT和传统试管抗人球蛋白法(test tube Coombs test,TT-Coombs'T)对201 1年9月～2012年12月在河北省大名县人民医院输血治疗的1147例患者的血清样本进行不规则抗体筛查,并以TT-Coombs'T作为“金标准”,对MGT进行敏感性、特异性评价；采用MGT对不规则抗体检测为阳性的样本进行进一步的抗体鉴定.结果 MGT及TT-Coombs'T测定1147份样本不规则抗体的结果均为阳性的为10份,阴性为1137份,阳性率为0.87％,MGT的敏感性和特异性均为100％；经MGT进一步鉴定,10份不规则抗体中Rh系统抗体9份(抗-E 5份,抗-c 2份,抗-D 1份,抗-C 1份),MNS系统抗体1份(抗-M).结论 微柱凝胶卡式法检测红细胞不规则抗体敏感性和特异性好,其操作较传统试管法简便、快捷,且操作和结果的判读易于标准化,影响因素少,更适用于临床输血前不规则抗体筛查试验.
作者：安勤发；胡志红；崔慧芹 刊期： 2013年第06期
目的 建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据.方法 对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-MuV特异的巢式PCR法及TaqMan探针Real-time PCR法进行检测,比较两种方法检测MuV的灵敏性.结果 细胞培养-MuV特异的巢式PCR法共检出31份MuV阳性样本,系统进化分析表明,该31株MuV均属于F基因亚型；TaqMan探针Real-time PCR法共检出41份MuV阳性样本,其中包含了细胞培养-MuV特异的巢式PCR法检出的31份阳性样本,TaqMan探针Real-time RT-PCR法对MuV的检出率(40.59％)高于传统细胞培养-巢式PCR法的检出率(30.69％).结论 TaqMan探针Real-time PCR法的灵敏性、特异性和简便性均优于传统的细胞培养-MuV特异的巢式PCR法,可应用于腮腺炎的临床诊断及免疫防控.
作者：施海晶；王晶晶；陈俊英；陈巍；潘明；赵钢；孙强明 刊期： 2013年第06期
目的 原核表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40,DnaJ),并探讨其免疫保护效果.方法 从2、3、6B、14、19F、R6型肺炎链球菌基因组DNA中扩增DnaJ基因,插入原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-DnaJ,转化大肠埃西菌(E.coli) BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组DnaJ蛋白经Ni-NTA树脂纯化后,分别经腹腔和鼻黏膜免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和唾液中特异性IgG和IgA抗体滴度；用重组蛋白刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测细胞因子水平的变化；流式细胞术检测特异性抗DnaJ血清结合到肺炎链球菌表面的能力；检测抗DnaJ血清抑制R6型肺炎链球菌黏附A549细胞的能力.结果 6株肺炎链球菌的PCR扩增产物均可见1 119 bp的DnaJ基因片段,测序结果与GenBank中登录的序列一致；重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确；纯化的重组DnaJ蛋白相对分子质量约为38 000,纯度达90％以上,可与DnaJ小鼠免疫血清发生特异性反应.腹腔免疫DnaJ可使小鼠血清产生高滴度的特异性抗DnaJ抗体,鼻黏膜免疫DnaJ可增加小鼠血清和黏膜中抗DnaJ IgG和IgA抗体水平(P＜0.01)；鼻黏膜免疫DnaJ可使小鼠脾细胞释放高水平的细胞因子IL-10、IFNγ和IL-17A;抗DnaJ血清对肺炎链球菌具有更强的结合能力,且可抑制肺炎链球菌黏附肺癌上皮细胞A549.结论 DnaJ可诱导小鼠产生保护性免疫应答,提示其具有作为肺炎链球菌蛋白疫苗抗原的潜力.
作者：游文献；曹炬 刊期： 2013年第06期
目的 构建miR-34a慢病毒表达质粒,并检测其对入结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 以hsa-miR-34a前体序列pre-miR-34a为模板,设计末端部分互补的引物,进行引物退火反应,形成引物二聚体,进行PCR扩增,再以此DNA双链为模板进行PCR扩增,PCR产物酶切后,插入线性化的慢病毒载体pGIPZ-GFP中,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-miR-34a,与包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒的包装,梯度稀释法检测重组慢病毒的滴度.将包装好的重组慢病毒感染SW480细胞,qPCR法检测感染细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平；MTT和平板克隆法检测感染细胞的增殖活力；流式细胞术检测感染细胞的细胞周期分布.结果 PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确；重组慢病毒的滴度为6.52×108 TU/ml;重组慢病毒感染SW480细胞后,显著上调了细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平,明显抑制了细胞的增殖活力(P＜0.01),G0-G1期细胞比例明显增加(P＜0.01).结论 成功构建了miR-34a慢病毒表达质粒,慢病毒感染SW480细胞后,能显著提高miR-34a的内源性表达,并抑制细胞的增殖,为进一步研究miR-34a的功能及作用机制奠定了基础.
作者：邵新宏；张才全 刊期： 2013年第06期
目的 探讨T-钙黏着蛋白(T-cadherin)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibro blast growth factor,bFGF)在人子宫肌瘤中的表达及其相关性,以探讨二者在子宫肌瘤发生、发展过程中的作用.方法 收集2011年9～12月间经重庆医科大学附属第一医院诊断为子宫肌瘤并行手术治疗,术后病理报告确诊为子宫肌瘤的患者50例,取其子宫肌瘤组织(A组)及同源正常子宫肌层组织(B组),同期收集经该院诊断为良性疾病并行手术治疗,术后病理报告确诊未患子宫肌瘤的10名患者正常子宫肌层组织作为对照组(C组).50例子宫肌瘤患者根据术前彩色多普勒血流显像(Color Doppler Flow Imaging,CDFI)和激素水平进一步分组比较.采用SP免疫组化法检测子宫组织中T-cadherin 和bFGF蛋白的定位,Western blot和RT-PCR法分别检测子宫组织中T-cadherin和bFGF蛋白的表达水平及基因mRNA转录水平,并分析二者与CDFI分级和激素分期的相关性.结果 A组T-cadherin主要定位于肌瘤细胞膜,bFGF主要定位于肌瘤细胞浆；A组子宫组织中T-cadherin和bFGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于B组和C组(P＜0.05),且二者明显呈正相关(P＜0.01)；T-cadherin和bFGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均随CDFI等级的升高而增强(P＜0.05或P＜0.01).结论 T-cadherin和bFGF在子宫肌瘤组织中高表达,提示二者在子宫肌瘤的发生、发展过程中起促进作用.
作者：王丽芳；唐良萏；贾莉；曹毅 刊期： 2013年第06期
目的 在毕赤酵母中表达小鼠B淋巴细胞活化刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)可溶性片段(msBAFF),纯化后检测其生物学活性.方法 采用RT-PCR法从BALB/c小鼠外周血单核细胞中扩增msBAFF基因,插入表达载体pPICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-msBAFF,转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达.表达的重组msBAFF蛋白经硫酸铵沉淀及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化后,分别单独及与antiIgM共同作用于BALB/c小鼠脾脏B淋巴细胞,检测其对B淋巴细胞活力的影响.结果 重组表达质粒pPICZαAmsBAFF经双酶切鉴定构建正确；表达的重组msBAFF蛋白相对分子质量约为20 000,诱导60 h表达量较高；经硫酸铵沉淀、透析除盐及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化,获得了较纯的msBAFF,BCA法测定纯化蛋白的产率为20 mg/L;重组BAFF蛋白具有促进小鼠B淋巴细胞活力的作用.结论 成功在毕赤酵母中表达了重组msBAFF蛋白,纯化的重组蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究小鼠BAFF基因的功能及基于BAFF的佐剂与单克隆抗体的制备奠定了物质基础.
作者：欧子强；唐勇；向军俭；吕卫东；林婷婷 刊期： 2013年第06期
目的 探讨埃博拉病毒(Ebola virus)包膜蛋白GP DNA表达质粒对小鼠中和抗体的诱导作用.方法 将质粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-GP(全长GP)、pcDNA3.1-GPATM(去跨膜段的GP)和pcDNA3.1-GP△Met(去起始密码子的GP)分别经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清GP抗体滴度；Western blot法检测抗体的特异性；利用埃博拉假病毒感染293E细胞模型观察中和抗体对埃博拉假病毒的中和作用.结果 全长的埃博拉病毒GP和去跨膜段的GP可诱导有效的免疫反应,且诱导生成的GP抗体特异性良好；GP抗血清可有效抑制埃博拉假病毒进入293E细胞.结论 埃博拉病毒GP DNA表达质粒可诱导高滴度的中和抗体,并可有效中和埃博拉假病毒.
作者：何丽芳；武雯俊；王丽丽；陈敏；王馨；杨宁；黄镇 刊期： 2013年第06期
目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.td)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值.方法 根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv 1352/pET30aSETB.用Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,Spe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的包涵体蛋白经His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售M.tb抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较.结果 构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致；表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30％；纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95％；以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70％和90.00％,而市售M.tb抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00％和63.33％;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0％,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7％,二者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功制备了M.tb Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景.
作者：阳幼荣；冯金栋；张俊仙；赵卫国；刘宇；梁艳；白雪娟；王兰；吴雪琼 刊期： 2013年第06期
目的 研究Netrin-1对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channel α-subunit,α-ENaC)表达的调控及其可能的机制,并探讨其在急性肺损伤(acute lung injury,ALI)及急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)中的作用.方法 取对数生长期的A549细胞,用相同浓度的Netrin-1(500 μg/L),分别作用0、3、6、12、24和48 h,用不同浓度的Netrin-1(0、0.5、5、50和500 μg/L),作用12 h.将A549细胞分为药物组(500 μg/LNetrin-1)、抑制组(1 μmol/L PSB1115+ 500 μg/L Netrin-1)和对照组(仅加RPMI1640培养基),培养12 h.RT-PCR 法分别检测各组α-ENaC基因mRNA的转录水平；Western blot法检测各组α-ENaC蛋白的表达水平.结果 相同浓度下,Netrin-1作用A549细胞6h后,α-ENaC基因mRNA相对转录水平及蛋白相对表达量显著高于对照组(P＜0.05),作用12h时达高；相同时间内,Netrin-1浓度大于5 μg/L时,α-ENaC基因mRNA相对转录水平及蛋白的相对表达量均明显高于对照组(P＜0.05),且呈剂量依赖性,浓度为500 μg/L时达高；药物组α-ENaC基因mRNA相对转录水平及蛋白相对表达量均明显高于对照组及抑制组(P＜0.05),PSB1115可明显抑制α-ENaC基因mRNA的转录和蛋白表达.结论 Netrin-1可通过腺苷A2b受体途径,从基因水平上调α-ENaC的表达,有益于ALI及ARDS的预后.
作者：何婧；王导新 刊期： 2013年第06期
目的 建立噬菌体单链抗体碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)细胞ELISA检测方法,以期排除外周血中白细胞的干扰,将筛选到的噬菌体抗体用于临床样本的检测.方法 从大容量噬菌体抗体库中筛选与食管癌细胞结合的噬菌体单链抗体,制备食管癌细胞KYSE-170和EC 109鉴定板及白细胞鉴定板,采用ALP细胞ELISA法分析筛选到的噬菌体抗体与两种食管癌细胞及白细胞的结合活性,同时与辣根过氧化物酶(horse radish peroxidase,HRP)细胞ELISA法进行比较,以抗卵清蛋白(ovalbumin,OA)为阴性对照.结果 经ALP细胞ELISA法检测,筛选到的噬菌体抗体1、2、3均可与KYSE-170和EC109细胞结合,A405值在检测范围内；3个噬菌体抗体与不同食管癌细胞系的结合活性差异有统计学意义(P＜0.001)；抗OA抗体与两种食管癌细胞的结合活性明显低于3个噬菌体抗体,且差异有统计学意义(P＜0.001)；3个噬菌体抗体与白细胞结合的A405值在检测范围内,与食管癌细胞系的结合活性相比,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ALP细胞ELISA法可鉴定噬菌体单链抗体,并可排除白细胞的干扰,有望应用于临床样本的检测.
作者：乔媛媛；张达矜；赵晓航 刊期： 2013年第06期
目的 探讨云芝糖肽(polysaccharopeptide,PSP)对乳腺癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的作用.方法 体外分离乳腺癌患者或健康人PBMC,并将其分别分为PSP组(分别加入终浓度为25μg/ml的PSP和终浓度为100 μg/ml的PHA)和对照组(只加入终浓度为100 μg/ml的PHA),采用TLR4单克隆抗体对各组细胞进行免疫荧光染色.将乳腺癌患者PBMC分为空白对照组、TLR4抗体组、PSP组和PSP+ TLR4抗体组,采用Q-PCR检测各组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平.结果 健康志愿者对照组PBMC荧光强度较强,而健康志愿者PSP组PBMC荧光强度较弱；乳腺癌患者PSP组与乳腺癌患者对照组相比,细胞荧光强度更弱.与空白对照组比较,TLR4抗体组PBMC IL-12和组TNF-α的表达水平均显著降低(P＜0.05),PSP组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01)；与PSP和TLR4抗体组比较,PSP+ TLR4抗体组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01).结论 TLR4可能是PSP的作用受体之一.
作者：王静；余爽；陈楚；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第06期
目的 探讨一种分离培养人脐带Wharton's jelly间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的新方法.方法 取人脐带组织,除去动静脉后剪碎成2～5 mm3,将组织碎片浸入4 g/L Ⅰ型胶原酶和1 g/L透明质酸酶的混合液中,于37℃处理1h,再用0.25％胰蛋白酶在相同条件下消化30 min,得到的消化液经70 μm细胞滤网过滤后,制备单个细胞悬液,培养并传代.取P1、P3、P7代脐带Wharton's jelly MSC,绘制细胞生长曲线；取P3代细胞,采用流式细胞术检测细胞表面标记分子,并分别采用成骨和成脂诱导培养基进行成骨及成脂诱导分化,茜素红染色和油红O染色观察结果.结果 P1、P3代脐带Wharton's jelly MSC的增殖能力强,且P1代细胞的增殖能力强于P3代,P7代细胞的增殖能力较P3代细胞有所减弱.P3代脐带Wharton's jelly MSC高表达CD90(99.8％)、CD105(100％)和CD166(100％),低表达CD45(0.3％)、CD14(0.1％)、CD34(0.2％)和CD79a(0.3％),不表达HLA-DR.P3代Wharton's jellyMSC经成骨诱导后,茜素红染色可见红色结节；经成脂诱导后,油红O染色可见脂质沉积.结论 本方法获得的Wharton's jelly MSC活性好,增殖能力强,为后续实验研究及临床应用提供了理想的种子细胞.
作者：高勇；蒋明德；王钊；吴晓玲；贺永；王群茹 刊期： 2013年第06期
近年来,系统生物学应用芯片、测序、质谱等高通量检测技术,结合相关数据库,应用计算机模型,对所得数据进行综合研究,在生物、医学等领域已得到广泛应用,特别在肿瘤、糖尿病等复杂人类疾病的预测和治疗方面发挥着越来越大的作用.本文就系统生物学在疫苗学中的应用和前景进行综述.
作者：吴星 刊期： 2013年第06期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
