高勇；蒋明德；王钊；吴晓玲；贺永；王群茹
目的 研究狂犬病病毒(rabies virus,RV)aG株糖蛋白(glycoprotein,GP)的遗传稳定性,并对GP基因组进行序列测定及生物信息学分析.方法 采用RT-PCR法扩增6代次aG株RV(4aGV4、4aGV5、4aGV7、4aGV 11、4a-GV15、4aGV18)G区基因,分别将产物克隆入pGEM-T载体中,测定序列并进行拼接；测定6代次aG株RV的滴度、荧光滴度和毒力；应用DNAStar和Mega4.0软件包中的相应软件对基因组序列进行分析,并与我国近期分离且具有地域代表性的RV街毒株进行基因同源性分析.结果 6代次aG株RV GP基因保持高度稳定,未出现核苷酸突变位点；6代次aG株RV的滴度有所不同,但其毒力指标基本一致；RV aG株与我国街毒流行株GP抗原区具有较高的同源性,且膜外区同源性远高于跨膜区及膜内区；aG株RV第147位关键位点氨基酸与街毒流行株该位点不同,其余各关键抗原位点在各毒株间均高度同源；6代次aG株RV关键毒力位点均未出现氨基酸突变,传代稳定,aG株RV与各街毒流行株关键毒力位点均高度同源；aG株病毒信号肽结构与我国多株流行株高度同源,而其GP则与法国巴斯德原株PV2061株及分离自美国的HEP-Flury株高度同源,与我国流行街毒株亦具有较高的同源性.结论 RV aG株GP遗传稳定,且与我国近期分离的街毒株高度同源,本研究为完善该毒株的质量控制及全面评价其在我国的适用性提供了实验依据.
作者：李加；曹守春；石磊泰；王云鹏；吴小红；刘景华；唐建蓉；俞永新；董关木 刊期： 2013年第06期
目的 对2009年中国云南省昆明地区柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus group B5,CVB5)的部分VP1基因序列进行分析,以了解CVB5的遗传特性.方法 收集2009年中国云南省昆明地区临床诊断为无菌性脑炎患儿的200份粪便标本,设计针对CVB的通用引物,利用半巢式RT-PCR扩增部分VP1基因.PCR产物直接测序后,采用Omiga 和Mega 5.05等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列及系统进化分析.结果 共分离出7株CVB5,其部分VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为92.7％～98.5％和93.6％～100.0％;与中国其他不同地区参考株的核苷酸序列同源性为80.1％～ 99.1％,其中与中国山东株98388-SD-CHN-1998同源性较低；与中国其他不同地区参考株的氨基酸序列同源性为84.4％～100.0％,其中与中国河南株CoxB5-Henan-2010和中国山东株98388-SD-CHN-1998之间同源性低；与其他不同国家参考株比较,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在77.5％～ 89.1％和92.1％ ～ 96.3％之间；与原型株Faulkner的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.6％ ～ 80.9％和92.1％～ 95.4％.基因系统进化分析显示,分离的7株CVB5属于相对独立的1个分枝,中国流行株除98388-SD-CHN-1998外,构成1个分枝.结论 2009年中国云南省昆明地区CVB5流行株属于相同基因型.
作者：邵聪文；潘玥；邓新强；叶君；马忠飞；孙强明；马绍辉 刊期： 2013年第06期
目的 制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.td)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值.方法 根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv 1352/pET30aSETB.用Nhe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,Spe Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达的包涵体蛋白经His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售M.tb抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较.结果 构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致；表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30％；纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95％；以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70％和90.00％,而市售M.tb抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00％和63.33％;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0％,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7％,二者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 成功制备了M.tb Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景.
作者：阳幼荣；冯金栋；张俊仙；赵卫国；刘宇；梁艳；白雪娟；王兰；吴雪琼 刊期： 2013年第06期
目的 构建miR-34a慢病毒表达质粒,并检测其对入结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 以hsa-miR-34a前体序列pre-miR-34a为模板,设计末端部分互补的引物,进行引物退火反应,形成引物二聚体,进行PCR扩增,再以此DNA双链为模板进行PCR扩增,PCR产物酶切后,插入线性化的慢病毒载体pGIPZ-GFP中,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-miR-34a,与包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒的包装,梯度稀释法检测重组慢病毒的滴度.将包装好的重组慢病毒感染SW480细胞,qPCR法检测感染细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平；MTT和平板克隆法检测感染细胞的增殖活力；流式细胞术检测感染细胞的细胞周期分布.结果 PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确；重组慢病毒的滴度为6.52×108 TU/ml;重组慢病毒感染SW480细胞后,显著上调了细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平,明显抑制了细胞的增殖活力(P＜0.01),G0-G1期细胞比例明显增加(P＜0.01).结论 成功构建了miR-34a慢病毒表达质粒,慢病毒感染SW480细胞后,能显著提高miR-34a的内源性表达,并抑制细胞的增殖,为进一步研究miR-34a的功能及作用机制奠定了基础.
作者：邵新宏；张才全 刊期： 2013年第06期
目的 克隆并原核表达西方马脑炎病毒(Western equine encephalomyelitis virus,WEEV)E2基因.方法 采用PCR法从重组质粒pVL1393-C-E中扩增E2基因,插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-E2,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-E2经PCR、双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为52 900,诱导6h目的蛋白的表达量较高,约占菌体总蛋白的23.5％,重组蛋白主要以包涵体形式存在,可与鼠源His单克隆抗体特异性结合.结论 克隆并原核表达了WEEV E2基因,为E2蛋白免疫原性及WEEV亚单位疫苗的研究奠定了基础.
作者：马金柱；王化磊；郑学星；赵永坤；高玉伟；王铁成；黄耕；杨松涛；夏咸柱 刊期： 2013年第06期
目的 纯化重组人干扰素β1a(recombinant human interferon β1a,rhIFNβ1a),并分析其理化性质.方法 应用15L生物反应器悬浮微载体培养表达rhIFNβ1a的重组CHO细胞,细胞培养收获液经超滤浓缩、蓝胶亲和层析、脱盐和CM离子交换层析纯化后,采用水泡性口炎病毒抑制法测定rhIFNβ1a的效价；Lowry法测定蛋白含量；等电聚焦电泳法测定其等电点；SDS-PAGE和高效液相色谱法测定其纯度；Western blot法分析其免疫活性；SDS-PAGE和质谱仪测定其相对分子质量；圆二色谱法分析其二级结构.结果 共纯化了3批样品,纯化的rhIFNβ1a平均蛋白浓度为0.2840 mg/ml,平均比活可达1.06×108 IU/mg,纯度达95％以上,蛋白质平均回收率为58.36％,蛋白质相对分子质量为20 445.0,等电点约为6.6,免疫活性良好,二级结构与国家标准品基本一致.结论 成功纯化了rhIFNβ1a,并检测了其理化性质,为建立大规模制备rhIFNβ1a的生产工艺和制造检定规程,实现产业化奠定了基础.
作者：李柳萍；杨胥微；黄志斌；喇文军；王妍 刊期： 2013年第06期
目的 原核表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40,DnaJ),并探讨其免疫保护效果.方法 从2、3、6B、14、19F、R6型肺炎链球菌基因组DNA中扩增DnaJ基因,插入原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-DnaJ,转化大肠埃西菌(E.coli) BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组DnaJ蛋白经Ni-NTA树脂纯化后,分别经腹腔和鼻黏膜免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和唾液中特异性IgG和IgA抗体滴度；用重组蛋白刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测细胞因子水平的变化；流式细胞术检测特异性抗DnaJ血清结合到肺炎链球菌表面的能力；检测抗DnaJ血清抑制R6型肺炎链球菌黏附A549细胞的能力.结果 6株肺炎链球菌的PCR扩增产物均可见1 119 bp的DnaJ基因片段,测序结果与GenBank中登录的序列一致；重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确；纯化的重组DnaJ蛋白相对分子质量约为38 000,纯度达90％以上,可与DnaJ小鼠免疫血清发生特异性反应.腹腔免疫DnaJ可使小鼠血清产生高滴度的特异性抗DnaJ抗体,鼻黏膜免疫DnaJ可增加小鼠血清和黏膜中抗DnaJ IgG和IgA抗体水平(P＜0.01)；鼻黏膜免疫DnaJ可使小鼠脾细胞释放高水平的细胞因子IL-10、IFNγ和IL-17A;抗DnaJ血清对肺炎链球菌具有更强的结合能力,且可抑制肺炎链球菌黏附肺癌上皮细胞A549.结论 DnaJ可诱导小鼠产生保护性免疫应答,提示其具有作为肺炎链球菌蛋白疫苗抗原的潜力.
作者：游文献；曹炬 刊期： 2013年第06期
目的 在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ).方法 利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900 μg/ml G418筛选抗性细胞株.收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清中rhFⅦ的水平；PT法检测细胞培养上清的凝血时间；Western blot法检测细胞培养上清中rhFⅦ的表达.结果 共获得3株抗性细胞,分别命名为CHO-FⅦ01 ～ 03,空载体转染的细胞命名为CHO-CK；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中均检测到了rhFⅦ,但含量均低于阳性对照；CHO-CK细胞培养上清的凝血时间分别为CHO-FⅦ01～03细胞培养上清的2.4、2.1和3.1倍；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中含目的蛋白rhFⅦ,相对分子质量约为50 000.结论 成功在CHO-K1细胞中表达了hFⅦ,为下一步hFⅦ的深入研究及应用奠定了基础.
作者：肖薇；赵睿；李长清；边国慧；肖小璞；林方昭 刊期： 2013年第06期
目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染地鼠肾细胞BHK-21的抑制作用.方法 将不同浓度的NGF(100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6和0.8μg/L)加入BHK-21细胞中,采用MTT法检测NGF对BHK-21细胞的毒性作用；将不同稀释度的JEV(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7)JEV感染BHK-21细胞,蚀斑计数法测定病毒滴度；在JEV感染的BHK-21细胞中加入不同浓度的NGF,观察细胞的CPE情况,并通过蚀斑减少率分析NGF对JEV的抑制作用.结果 NGF浓度在100 μg/L以内对BHK-21细胞无毒性；JEV的滴度为Lg 8.70 pfu/ml;NGF(12.5 μg/L)+ JEV组BHK-21细胞病变程度明显减轻；随着NGF浓度的提高,蚀斑减少率也呈升高趋势(r=0.929,P＜0.05),NGF浓度为3.1μg/L以上时,蚀斑减少率达10％以上,具有明显的抗JEV效果.结论 NGF在浓度为0.8～100 μg/L的范围内,对JEV具有明显的抑制作用,为今后研究NGF抗病毒的作用机制奠定了实验基础.
作者：杨栋；顾鹏毅；刘海军；李宁禾；刘畅；姚宇；李鹤；孙英杰；孙晋民 刊期： 2013年第06期
目的 探讨云芝糖肽(polysaccharopeptide,PSP)对乳腺癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的作用.方法 体外分离乳腺癌患者或健康人PBMC,并将其分别分为PSP组(分别加入终浓度为25μg/ml的PSP和终浓度为100 μg/ml的PHA)和对照组(只加入终浓度为100 μg/ml的PHA),采用TLR4单克隆抗体对各组细胞进行免疫荧光染色.将乳腺癌患者PBMC分为空白对照组、TLR4抗体组、PSP组和PSP+ TLR4抗体组,采用Q-PCR检测各组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平.结果 健康志愿者对照组PBMC荧光强度较强,而健康志愿者PSP组PBMC荧光强度较弱；乳腺癌患者PSP组与乳腺癌患者对照组相比,细胞荧光强度更弱.与空白对照组比较,TLR4抗体组PBMC IL-12和组TNF-α的表达水平均显著降低(P＜0.05),PSP组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01)；与PSP和TLR4抗体组比较,PSP+ TLR4抗体组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01).结论 TLR4可能是PSP的作用受体之一.
作者：王静；余爽；陈楚；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第06期
目的 探讨重组乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)的免疫原性及其对重组乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的免疫增强作用.方法 用透射电镜观察HBcAg、HBsAg及HBcAg+ HBsAg混合抗原病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的形态.将小鼠随机分为6组:阴性对照组(NS)、HBcAg组(C)、HBsAg组(S)、HBsAg+铝佐剂组(S+Al)、HBsAg+ HBcAg混合组(S+C)及HBsAg+ HBcAg+铝佐剂组(S+C+Al),用相应抗原免疫各组小鼠,分别于第0天、第14天经小鼠双侧大腿肌肉进行初次和加强免疫1次,间接ELISA法检测各组小鼠血清中HBsAg和HBcAg的特异性抗体水平,分析HBsAg特异性抗体亚类,ELISPOT法检测各组小鼠脾细胞中HBsAg特异性IFNγ、HBcAg特异性IFNγ及HBsAg特异性IL-4水平.结果 电镜观察可见HBsAg和HBcAg均呈大小均一的VLP结构,二者混合后有聚集现象.初次免疫后,S+C组的HBsAg特异性抗体水平与S组差异无统计学意义(P=0.074),加强免疫后,S+C组HBsAg特异性抗体水平明显高于S组(P=0.002),C组和S+C组均可产生高水平HBcAg特异性抗体.S组HBsAg抗体亚类以IgG1为主,S+C组以IgG2a为主.S+C组HBsAg特异性IFNγ斑点数明显高于S组、S+Al组和S+C+Al组(P＜0.05),C组与S+C组HBcAg特异性IFNγ斑点数均较高,与S+C+Al组比较,S+Al组HBsAg特异性IL-4斑点数明显升高(P=0.026).结论 HBcAg具有良好的免疫原性,可增强HBsAg的免疫反应,使反应向Th1方向极化,为治疗性乙肝疫苗的研发奠定了基础.
作者：李计来；徐静；王娟；吴刚；赵莉；许丽锋 刊期： 2013年第06期
目的 建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据.方法 对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-MuV特异的巢式PCR法及TaqMan探针Real-time PCR法进行检测,比较两种方法检测MuV的灵敏性.结果 细胞培养-MuV特异的巢式PCR法共检出31份MuV阳性样本,系统进化分析表明,该31株MuV均属于F基因亚型；TaqMan探针Real-time PCR法共检出41份MuV阳性样本,其中包含了细胞培养-MuV特异的巢式PCR法检出的31份阳性样本,TaqMan探针Real-time RT-PCR法对MuV的检出率(40.59％)高于传统细胞培养-巢式PCR法的检出率(30.69％).结论 TaqMan探针Real-time PCR法的灵敏性、特异性和简便性均优于传统的细胞培养-MuV特异的巢式PCR法,可应用于腮腺炎的临床诊断及免疫防控.
作者：施海晶；王晶晶；陈俊英；陈巍；潘明；赵钢；孙强明 刊期： 2013年第06期
目的 评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Wild strain inactivated poliovirus vaccine,wIPV)在恒河猴体内不同免疫方案的免疫原性.方法 将25只恒河猴随机分为5组:sIPV组(免疫3剂sIPV)、sIPV/口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)组(免疫2剂sIPV后,再免疫2剂OPV)、wIPV组(免疫3剂wIPV)、wIPV/OPV组(免疫2剂wIPV后,再免疫2剂OPV)和对照组(免疫3次稀释液M199),每组5只.OPV口服接种,IPV和M199经上臂三角肌处肌肉注射,2剂间免疫间隔时间为1个月.首次免疫前和每剂免疫后1个月采血,分离血清,采用微量中和试验法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体效价.结果 除对照组外的4个试验组全程免疫结束后,恒河猴血清中均可检出较高水平的中和抗体,且所有恒河猴血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体全部阳转.Ⅰ型和Ⅲ型抗体免疫应答中,接种sIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种wIPV的2个试验组(P＜0.05)；Ⅱ型免疫应答中,接种wIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种sIPV的2个试验组(P＜0.05).采用wIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体免疫应答均可获得与单独接种wIPV同样的效果；而采用sIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ型抗体免疫应答效果低于单独接种sIPV,Ⅱ型抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ型抗体第4剂免疫后水平也有所上升.结论 sIPV和wIPV在恒河猴体内均可诱导良好的免疫应答,初步证实了IPV/OPV序贯免疫的可行性,为今后免疫策略的制定提供了一定的实验依据.
作者：杨卉娟；陈俊英；和占龙；李华；杨耀云；叶君；岳俊；孙强明；施海晶 刊期： 2013年第06期
目的 构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATPdependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白.方法 从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21 (DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础.
作者：张春燕；杨春；李岱容；穆柳青；杨静；冯鑫 刊期： 2013年第06期
在现代生物制药工艺路线中,层析是常用的一种技术手段.层析技术所需要的层析介质是药品监管的重点项目之一,其中层析介质的使用寿命(使用次数)必须经研究确认,并经药品监管部门审核和批准.在缩小模型上进行前瞻性研究是被广泛接受的层析介质使用寿命的研究方法.本文就层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认作一简要综述.
作者：杨红艳；隋礼丽 刊期： 2013年第06期
目的 在毕赤酵母中表达小鼠B淋巴细胞活化刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)可溶性片段(msBAFF),纯化后检测其生物学活性.方法 采用RT-PCR法从BALB/c小鼠外周血单核细胞中扩增msBAFF基因,插入表达载体pPICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-msBAFF,转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达.表达的重组msBAFF蛋白经硫酸铵沉淀及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化后,分别单独及与antiIgM共同作用于BALB/c小鼠脾脏B淋巴细胞,检测其对B淋巴细胞活力的影响.结果 重组表达质粒pPICZαAmsBAFF经双酶切鉴定构建正确；表达的重组msBAFF蛋白相对分子质量约为20 000,诱导60 h表达量较高；经硫酸铵沉淀、透析除盐及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化,获得了较纯的msBAFF,BCA法测定纯化蛋白的产率为20 mg/L;重组BAFF蛋白具有促进小鼠B淋巴细胞活力的作用.结论 成功在毕赤酵母中表达了重组msBAFF蛋白,纯化的重组蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究小鼠BAFF基因的功能及基于BAFF的佐剂与单克隆抗体的制备奠定了物质基础.
作者：欧子强；唐勇；向军俭；吕卫东；林婷婷 刊期： 2013年第06期
目的 探讨一种分离培养人脐带Wharton's jelly间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)的新方法.方法 取人脐带组织,除去动静脉后剪碎成2～5 mm3,将组织碎片浸入4 g/L Ⅰ型胶原酶和1 g/L透明质酸酶的混合液中,于37℃处理1h,再用0.25％胰蛋白酶在相同条件下消化30 min,得到的消化液经70 μm细胞滤网过滤后,制备单个细胞悬液,培养并传代.取P1、P3、P7代脐带Wharton's jelly MSC,绘制细胞生长曲线；取P3代细胞,采用流式细胞术检测细胞表面标记分子,并分别采用成骨和成脂诱导培养基进行成骨及成脂诱导分化,茜素红染色和油红O染色观察结果.结果 P1、P3代脐带Wharton's jelly MSC的增殖能力强,且P1代细胞的增殖能力强于P3代,P7代细胞的增殖能力较P3代细胞有所减弱.P3代脐带Wharton's jelly MSC高表达CD90(99.8％)、CD105(100％)和CD166(100％),低表达CD45(0.3％)、CD14(0.1％)、CD34(0.2％)和CD79a(0.3％),不表达HLA-DR.P3代Wharton's jellyMSC经成骨诱导后,茜素红染色可见红色结节；经成脂诱导后,油红O染色可见脂质沉积.结论 本方法获得的Wharton's jelly MSC活性好,增殖能力强,为后续实验研究及临床应用提供了理想的种子细胞.
作者：高勇；蒋明德；王钊；吴晓玲；贺永；王群茹 刊期： 2013年第06期
目的 研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethyl-hexyl)phthalate,DEHP]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生的机制.方法 将孕12d (gestation day,GD12)的SD孕鼠随机分为2组:实验组[将DEHP溶于1.5ml大豆油中灌胃大鼠,750 mg/(kg·d)]和对照组(以1.5ml大豆油灌胃大鼠),每组20只,自GD12 ～ GD19连续每天定时给药1次.各组分别取10只孕鼠正常分娩,雄性仔鼠出生后30 d,计数每窝产雄性活仔数,称量体重,并测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD),逐个检查雄鼠的阴茎弯曲度和尿道开口部位,判断有无尿道下裂；其余孕鼠在怀孕第20天行剖宫产取出胎鼠,采用实时定量PCR (qPCR)和免疫组化法分别检测雄性胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 雄性仔鼠出生后30 d,实验组与对照组比较,每窝产雄性活仔数、雄性仔鼠的体重及AGD均有明显减少或缩短(P均＜0.001)；实验组尿道下裂发生率约为30.6％.与对照组比较,实验组胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2mRNA的水平明显增加(P＜0.05),磷酸化JNK1和JNK2蛋白的表达水平有增加的趋势.结论 DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中JNK通路异常表达有关.
作者：李明勇；邱林；何大维；林涛；涂生芬；华燚；张德迎；龙春兰；魏光辉 刊期： 2013年第06期
近年来,系统生物学应用芯片、测序、质谱等高通量检测技术,结合相关数据库,应用计算机模型,对所得数据进行综合研究,在生物、医学等领域已得到广泛应用,特别在肿瘤、糖尿病等复杂人类疾病的预测和治疗方面发挥着越来越大的作用.本文就系统生物学在疫苗学中的应用和前景进行综述.
作者：吴星 刊期： 2013年第06期
目的 采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定重组人干扰素α1b(recombinant human interferon α1b,rhIFNα1b)滴眼液中苯扎氯铵(benzalkonium chloride)的含量.方法 采用HPLC法测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵含量,色谱条件:流动相:乙腈:5 mmol/L醋酸铵[含1％三乙胺,用冰醋酸调节pH值至(5.0±0.2)]体积比为65∶35;流速:1.0 ml/min;检测波长:262 nm;进样量20 μl;柱温:室温.对该方法进行验证,并应用该方法检测3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量.结果 该方法检测苯扎氯铵专属性和系统适应性良好；低检测限和定量限分别为0.53 μg/ml和1.48 μg/ml;苯扎氯铵在10～50μg/ml浓度范围内,标准曲线的线性关系良好,R2=0.999 1；连续6次进样,峰面积的RSD=1.78％;苯扎氯铵理论浓度为22、24、26 μg/ml的加样回收率平均为97.90％,RSD=0.96％.3批rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的相对含量分别为19.27、19.89和19.76 μg/ml,分别为标示量的96.34％、94.46％和98.80％.结论 HPLC法简便、灵敏、准确,可用于测定rhIFNα1b滴眼液中苯扎氯铵的含量.
作者：牛晓霞；曹艳；吴美英 刊期： 2013年第06期
中国生物制品学杂志
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