乔媛媛；张达矜；赵晓航
目的 探讨埃博拉病毒(Ebola virus)包膜蛋白GP DNA表达质粒对小鼠中和抗体的诱导作用.方法 将质粒pcDNA3.1、pcDNA3.1-GP(全长GP)、pcDNA3.1-GPATM(去跨膜段的GP)和pcDNA3.1-GP△Met(去起始密码子的GP)分别经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清GP抗体滴度；Western blot法检测抗体的特异性；利用埃博拉假病毒感染293E细胞模型观察中和抗体对埃博拉假病毒的中和作用.结果 全长的埃博拉病毒GP和去跨膜段的GP可诱导有效的免疫反应,且诱导生成的GP抗体特异性良好；GP抗血清可有效抑制埃博拉假病毒进入293E细胞.结论 埃博拉病毒GP DNA表达质粒可诱导高滴度的中和抗体,并可有效中和埃博拉假病毒.
作者：何丽芳；武雯俊；王丽丽；陈敏；王馨；杨宁；黄镇 刊期： 2013年第06期
目的 在毕赤酵母中表达小鼠B淋巴细胞活化刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)可溶性片段(msBAFF),纯化后检测其生物学活性.方法 采用RT-PCR法从BALB/c小鼠外周血单核细胞中扩增msBAFF基因,插入表达载体pPICZαA中,构建重组表达质粒pPICZαA-msBAFF,转化巴斯德毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达.表达的重组msBAFF蛋白经硫酸铵沉淀及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化后,分别单独及与antiIgM共同作用于BALB/c小鼠脾脏B淋巴细胞,检测其对B淋巴细胞活力的影响.结果 重组表达质粒pPICZαAmsBAFF经双酶切鉴定构建正确；表达的重组msBAFF蛋白相对分子质量约为20 000,诱导60 h表达量较高；经硫酸铵沉淀、透析除盐及Q Sepharose XL阴离子交换柱纯化,获得了较纯的msBAFF,BCA法测定纯化蛋白的产率为20 mg/L;重组BAFF蛋白具有促进小鼠B淋巴细胞活力的作用.结论 成功在毕赤酵母中表达了重组msBAFF蛋白,纯化的重组蛋白具有良好的生物学活性,为进一步研究小鼠BAFF基因的功能及基于BAFF的佐剂与单克隆抗体的制备奠定了物质基础.
作者：欧子强；唐勇；向军俭；吕卫东；林婷婷 刊期： 2013年第06期
目的 建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据.方法 对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-MuV特异的巢式PCR法及TaqMan探针Real-time PCR法进行检测,比较两种方法检测MuV的灵敏性.结果 细胞培养-MuV特异的巢式PCR法共检出31份MuV阳性样本,系统进化分析表明,该31株MuV均属于F基因亚型；TaqMan探针Real-time PCR法共检出41份MuV阳性样本,其中包含了细胞培养-MuV特异的巢式PCR法检出的31份阳性样本,TaqMan探针Real-time RT-PCR法对MuV的检出率(40.59％)高于传统细胞培养-巢式PCR法的检出率(30.69％).结论 TaqMan探针Real-time PCR法的灵敏性、特异性和简便性均优于传统的细胞培养-MuV特异的巢式PCR法,可应用于腮腺炎的临床诊断及免疫防控.
作者：施海晶；王晶晶；陈俊英；陈巍；潘明；赵钢；孙强明 刊期： 2013年第06期
目的 构建人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)质粒,并探讨其对不同p53状态卵巢癌细胞SKOV3(缺p53)和OVCAR3(含p53)生长和凋亡的影响.方法 设计并合成针对hTERT基因的siRNA,与表达的质粒pGenesil-1连接,构建重组表达质粒pG1、pG2和pGCR(阴性对照质粒),分别转染卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3,并设未转染细胞对照组和转染空载体对照组.转染后48 h,荧光显微镜观察并计算转染效率；实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hTERT基因mRNA的表达；Western blot检测转染细胞中hTERT、p53和p21蛋白的表达；端粒重复序列扩增(Telomeric repeat amplification portocol,TRAP)法检测转染细胞端粒酶的活性；CCK-8法检测细胞生长情况；流式细胞仪和Annexin V-PE/7-AAD双染法分别检测细胞周期和细胞凋亡的情况.结果 已成功构建了靶向hTERT siRNA重组质粒pG1、pG2和阴性对照质粒pGCR,具有较高的转染效率,与pGCR转染组相比,pG1和pG2转染组hTERT基因和蛋白表达(P＜0.05)及端粒酶活性均明显降低,pG1和pG2转染组均可抑制两种细胞的生长,且对OVCAR3细胞的抑制作用强于SKOV3细胞；pG1和pG2转染组G0-G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显增多(P＜0.05)；在OVCAR3细胞中,hTERT表达受抑后均出现了明显的凋亡,同时伴随p53和p21蛋白表达的增加,在缺乏p53基因的SKOV3细胞中并未导致明显的凋亡,其p21蛋白表达明显低于pGCR转染组(P＜0.05).结论 构建的靶向hTERT siRNA重组表达质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起肿瘤细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关.
作者：罗祎；姚珍薇；杨雅莹；易永芬 刊期： 2013年第06期
目的 评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)和野毒株脊髓灰质炎灭活疫苗(Wild strain inactivated poliovirus vaccine,wIPV)在恒河猴体内不同免疫方案的免疫原性.方法 将25只恒河猴随机分为5组:sIPV组(免疫3剂sIPV)、sIPV/口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(oral attenuated poliovirus vaccine,OPV)组(免疫2剂sIPV后,再免疫2剂OPV)、wIPV组(免疫3剂wIPV)、wIPV/OPV组(免疫2剂wIPV后,再免疫2剂OPV)和对照组(免疫3次稀释液M199),每组5只.OPV口服接种,IPV和M199经上臂三角肌处肌肉注射,2剂间免疫间隔时间为1个月.首次免疫前和每剂免疫后1个月采血,分离血清,采用微量中和试验法测定血清中抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体效价.结果 除对照组外的4个试验组全程免疫结束后,恒河猴血清中均可检出较高水平的中和抗体,且所有恒河猴血清中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体全部阳转.Ⅰ型和Ⅲ型抗体免疫应答中,接种sIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种wIPV的2个试验组(P＜0.05)；Ⅱ型免疫应答中,接种wIPV的2个试验组中和抗体水平高于接种sIPV的2个试验组(P＜0.05).采用wIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体免疫应答均可获得与单独接种wIPV同样的效果；而采用sIPV/OPV序贯免疫,Ⅰ型抗体免疫应答效果低于单独接种sIPV,Ⅱ型抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ型抗体第4剂免疫后水平也有所上升.结论 sIPV和wIPV在恒河猴体内均可诱导良好的免疫应答,初步证实了IPV/OPV序贯免疫的可行性,为今后免疫策略的制定提供了一定的实验依据.
作者：杨卉娟；陈俊英；和占龙；李华；杨耀云；叶君；岳俊；孙强明；施海晶 刊期： 2013年第06期
目的 构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)ATP依赖的丝氨酸蛋白酶蛋白水解亚基1(ATPdependent Clp proteolytic subunit 1,ClpP1)基因重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌中表达重组蛋白.方法 从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中PCR扩增ClpP1基因,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,转化大肠埃希菌B21 (DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1经双酶切和测序鉴定,证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约35 000,可与鼠抗His单克隆抗体特异性结合.结论 成功构建了重组表达质粒pET-32a(+)-ClpP1,并在大肠埃希菌中表达了重组蛋白,为进一步研究ClpP1蛋白在MTB中的生物学特性奠定了基础.
作者：张春燕；杨春；李岱容；穆柳青；杨静；冯鑫 刊期： 2013年第06期
目的 纯化重组人干扰素β1a(recombinant human interferon β1a,rhIFNβ1a),并分析其理化性质.方法 应用15L生物反应器悬浮微载体培养表达rhIFNβ1a的重组CHO细胞,细胞培养收获液经超滤浓缩、蓝胶亲和层析、脱盐和CM离子交换层析纯化后,采用水泡性口炎病毒抑制法测定rhIFNβ1a的效价；Lowry法测定蛋白含量；等电聚焦电泳法测定其等电点；SDS-PAGE和高效液相色谱法测定其纯度；Western blot法分析其免疫活性；SDS-PAGE和质谱仪测定其相对分子质量；圆二色谱法分析其二级结构.结果 共纯化了3批样品,纯化的rhIFNβ1a平均蛋白浓度为0.2840 mg/ml,平均比活可达1.06×108 IU/mg,纯度达95％以上,蛋白质平均回收率为58.36％,蛋白质相对分子质量为20 445.0,等电点约为6.6,免疫活性良好,二级结构与国家标准品基本一致.结论 成功纯化了rhIFNβ1a,并检测了其理化性质,为建立大规模制备rhIFNβ1a的生产工艺和制造检定规程,实现产业化奠定了基础.
作者：李柳萍；杨胥微；黄志斌；喇文军；王妍 刊期： 2013年第06期
目的 构建miR-34a慢病毒表达质粒,并检测其对入结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 以hsa-miR-34a前体序列pre-miR-34a为模板,设计末端部分互补的引物,进行引物退火反应,形成引物二聚体,进行PCR扩增,再以此DNA双链为模板进行PCR扩增,PCR产物酶切后,插入线性化的慢病毒载体pGIPZ-GFP中,构建重组慢病毒表达质粒pGIPZ-miR-34a,与包装质粒Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒的包装,梯度稀释法检测重组慢病毒的滴度.将包装好的重组慢病毒感染SW480细胞,qPCR法检测感染细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平；MTT和平板克隆法检测感染细胞的增殖活力；流式细胞术检测感染细胞的细胞周期分布.结果 PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确；重组慢病毒的滴度为6.52×108 TU/ml;重组慢病毒感染SW480细胞后,显著上调了细胞中miR-34a基因mRNA的转录水平,明显抑制了细胞的增殖活力(P＜0.01),G0-G1期细胞比例明显增加(P＜0.01).结论 成功构建了miR-34a慢病毒表达质粒,慢病毒感染SW480细胞后,能显著提高miR-34a的内源性表达,并抑制细胞的增殖,为进一步研究miR-34a的功能及作用机制奠定了基础.
作者：邵新宏；张才全 刊期： 2013年第06期
目的 探讨山奈酚(kaempferol,KA)对二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)的免疫抑制作用.方法 将BALB/c小鼠按体重随机分为6组:生理盐水对照组、DTH模型组、环磷酰胺(cytoxan,CTX)组(20 mg/kg)、KA低剂量(2 mg/kg)、中剂量(4 mg/kg)、高剂量(8 mg/kg)组,每组10只,用DNFB致敏,同时给药,连续给药7d.致敏后第5天于小鼠右耳背涂1％ DNFB 5μl诱发DTH,左耳涂等量的丙酮/橄榄油溶剂作为对照.连续给药7d后,称量小鼠体重及脾脏和胸腺湿重,计算脾脏指数和胸腺指数；DNFB激发后48 h,剪下小鼠左右耳廓,称重,计算小鼠耳廓肿胀度,并将剪取的右耳耳廓制成冰冻切片,光学显微镜下观察小鼠耳廓局部组织的病理变化；无菌取脾,制备脾细胞,MTT法检测经ConA刺激的脾淋巴细胞的增殖活力.结果 KA高剂量组能显著降低DTH小鼠的脾脏指数和胸腺指数(P＜0.01或P＜0.05)；KA中、高剂量组能明显抑制DNFB所诱发的小鼠耳廓肿胀度(P＜0.05或P＜0.01)；KA能明显减少DTH小鼠耳廓局部组织淋巴细胞的浸润,并抑制脾脏淋巴细胞的增殖(P＜0.05或P＜0.01).结论 KA对DTH小鼠具有明显的免疫抑制作用,抑制淋巴细胞的增殖可能是其作用机制之一.
作者：佟春玉；曹宁；刘振华；崔玉东 刊期： 2013年第06期
目的 以T4噬菌体为载体,构建特异性杀伤肝癌细胞的噬菌体药物载体,并对其选择性细胞毒活性进行初步评价.方法 通过噬菌体文库筛选肝癌细胞特异性结合肽(tumor specific peptide,TSP),利用分子克隆技术和噬菌体体外展示技术,将其与噬菌体小衣壳蛋白Soc重组,并展示在T4噬菌体表面.同时通过1-乙基-(3-二甲基氨基丙级基)碳酰二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride,EDC]化学法,将表阿霉素(epidoxorubicin,Epi)偶联在噬菌体衣壳表面,采用MTT法在细胞水平上检测噬菌体药物载体对人肝癌细胞Bel-7402和正常肝细胞HL-7702的选择性杀伤作用.结果 Soc-TSP融合蛋白以846拷贝/噬菌体颗粒的密度展示在T4噬菌体表面,Epi载药率达每个噬菌体颗粒表面近2 000个药物分子.与游离的Epi相比,构建的T4噬菌体药物载体对肝癌Bel-7402细胞的杀伤作用提高了4～6倍,而对正常肝细胞HL-7702的影响不大.结论 肿瘤特异噬菌体药物载体可提高药物对肿瘤细胞的靶向性以及肿瘤细胞对药物分子的摄入,从而实现对肿瘤细胞的特异性杀伤.
作者：李嵌；赵晨阳；惠林萍；何琳；于涛 刊期： 2013年第06期
目的 探讨云芝糖肽(polysaccharopeptide,PSP)对乳腺癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的作用.方法 体外分离乳腺癌患者或健康人PBMC,并将其分别分为PSP组(分别加入终浓度为25μg/ml的PSP和终浓度为100 μg/ml的PHA)和对照组(只加入终浓度为100 μg/ml的PHA),采用TLR4单克隆抗体对各组细胞进行免疫荧光染色.将乳腺癌患者PBMC分为空白对照组、TLR4抗体组、PSP组和PSP+ TLR4抗体组,采用Q-PCR检测各组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平.结果 健康志愿者对照组PBMC荧光强度较强,而健康志愿者PSP组PBMC荧光强度较弱；乳腺癌患者PSP组与乳腺癌患者对照组相比,细胞荧光强度更弱.与空白对照组比较,TLR4抗体组PBMC IL-12和组TNF-α的表达水平均显著降低(P＜0.05),PSP组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01)；与PSP和TLR4抗体组比较,PSP+ TLR4抗体组PBMC IL-12、IL-6和TNF-α的表达水平均显著上调(P＜0.05或＜0.01).结论 TLR4可能是PSP的作用受体之一.
作者：王静；余爽；陈楚；董冰；鲍依稀 刊期： 2013年第06期
目的 评价微柱凝胶卡式法(microtubes gel test,MGT)检测红细胞不规则抗体的效果.方法 分别采用MGT和传统试管抗人球蛋白法(test tube Coombs test,TT-Coombs'T)对201 1年9月～2012年12月在河北省大名县人民医院输血治疗的1147例患者的血清样本进行不规则抗体筛查,并以TT-Coombs'T作为“金标准”,对MGT进行敏感性、特异性评价；采用MGT对不规则抗体检测为阳性的样本进行进一步的抗体鉴定.结果 MGT及TT-Coombs'T测定1147份样本不规则抗体的结果均为阳性的为10份,阴性为1137份,阳性率为0.87％,MGT的敏感性和特异性均为100％；经MGT进一步鉴定,10份不规则抗体中Rh系统抗体9份(抗-E 5份,抗-c 2份,抗-D 1份,抗-C 1份),MNS系统抗体1份(抗-M).结论 微柱凝胶卡式法检测红细胞不规则抗体敏感性和特异性好,其操作较传统试管法简便、快捷,且操作和结果的判读易于标准化,影响因素少,更适用于临床输血前不规则抗体筛查试验.
作者：安勤发；胡志红；崔慧芹 刊期： 2013年第06期
目的 探讨T-钙黏着蛋白(T-cadherin)与碱性成纤维细胞生长因子(basic fibro blast growth factor,bFGF)在人子宫肌瘤中的表达及其相关性,以探讨二者在子宫肌瘤发生、发展过程中的作用.方法 收集2011年9～12月间经重庆医科大学附属第一医院诊断为子宫肌瘤并行手术治疗,术后病理报告确诊为子宫肌瘤的患者50例,取其子宫肌瘤组织(A组)及同源正常子宫肌层组织(B组),同期收集经该院诊断为良性疾病并行手术治疗,术后病理报告确诊未患子宫肌瘤的10名患者正常子宫肌层组织作为对照组(C组).50例子宫肌瘤患者根据术前彩色多普勒血流显像(Color Doppler Flow Imaging,CDFI)和激素水平进一步分组比较.采用SP免疫组化法检测子宫组织中T-cadherin 和bFGF蛋白的定位,Western blot和RT-PCR法分别检测子宫组织中T-cadherin和bFGF蛋白的表达水平及基因mRNA转录水平,并分析二者与CDFI分级和激素分期的相关性.结果 A组T-cadherin主要定位于肌瘤细胞膜,bFGF主要定位于肌瘤细胞浆；A组子宫组织中T-cadherin和bFGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于B组和C组(P＜0.05),且二者明显呈正相关(P＜0.01)；T-cadherin和bFGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均随CDFI等级的升高而增强(P＜0.05或P＜0.01).结论 T-cadherin和bFGF在子宫肌瘤组织中高表达,提示二者在子宫肌瘤的发生、发展过程中起促进作用.
作者：王丽芳；唐良萏；贾莉；曹毅 刊期： 2013年第06期
目的 克隆并原核表达西方马脑炎病毒(Western equine encephalomyelitis virus,WEEV)E2基因.方法 采用PCR法从重组质粒pVL1393-C-E中扩增E2基因,插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-E2,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒pET-30a(+)-E2经PCR、双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为52 900,诱导6h目的蛋白的表达量较高,约占菌体总蛋白的23.5％,重组蛋白主要以包涵体形式存在,可与鼠源His单克隆抗体特异性结合.结论 克隆并原核表达了WEEV E2基因,为E2蛋白免疫原性及WEEV亚单位疫苗的研究奠定了基础.
作者：马金柱；王化磊；郑学星；赵永坤；高玉伟；王铁成；黄耕；杨松涛；夏咸柱 刊期： 2013年第06期
目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染地鼠肾细胞BHK-21的抑制作用.方法 将不同浓度的NGF(100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6和0.8μg/L)加入BHK-21细胞中,采用MTT法检测NGF对BHK-21细胞的毒性作用；将不同稀释度的JEV(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7)JEV感染BHK-21细胞,蚀斑计数法测定病毒滴度；在JEV感染的BHK-21细胞中加入不同浓度的NGF,观察细胞的CPE情况,并通过蚀斑减少率分析NGF对JEV的抑制作用.结果 NGF浓度在100 μg/L以内对BHK-21细胞无毒性；JEV的滴度为Lg 8.70 pfu/ml;NGF(12.5 μg/L)+ JEV组BHK-21细胞病变程度明显减轻；随着NGF浓度的提高,蚀斑减少率也呈升高趋势(r=0.929,P＜0.05),NGF浓度为3.1μg/L以上时,蚀斑减少率达10％以上,具有明显的抗JEV效果.结论 NGF在浓度为0.8～100 μg/L的范围内,对JEV具有明显的抑制作用,为今后研究NGF抗病毒的作用机制奠定了实验基础.
作者：杨栋；顾鹏毅；刘海军；李宁禾；刘畅；姚宇；李鹤；孙英杰；孙晋民 刊期： 2013年第06期
目的 研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethyl-hexyl)phthalate,DEHP]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生的机制.方法 将孕12d (gestation day,GD12)的SD孕鼠随机分为2组:实验组[将DEHP溶于1.5ml大豆油中灌胃大鼠,750 mg/(kg·d)]和对照组(以1.5ml大豆油灌胃大鼠),每组20只,自GD12 ～ GD19连续每天定时给药1次.各组分别取10只孕鼠正常分娩,雄性仔鼠出生后30 d,计数每窝产雄性活仔数,称量体重,并测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD),逐个检查雄鼠的阴茎弯曲度和尿道开口部位,判断有无尿道下裂；其余孕鼠在怀孕第20天行剖宫产取出胎鼠,采用实时定量PCR (qPCR)和免疫组化法分别检测雄性胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 雄性仔鼠出生后30 d,实验组与对照组比较,每窝产雄性活仔数、雄性仔鼠的体重及AGD均有明显减少或缩短(P均＜0.001)；实验组尿道下裂发生率约为30.6％.与对照组比较,实验组胎鼠阴茎组织中JNK1和JNK2mRNA的水平明显增加(P＜0.05),磷酸化JNK1和JNK2蛋白的表达水平有增加的趋势.结论 DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中JNK通路异常表达有关.
作者：李明勇；邱林；何大维；林涛；涂生芬；华燚；张德迎；龙春兰；魏光辉 刊期： 2013年第06期
目的 构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达.方法 从含HBV全序列的质粒pHBV中扩增HBV S抗原基因,在HBV S疏水区127和128位氨基酸序列处引入Age Ⅰ酶切位点,将HCV E1和E2区保守的线性中和抗原表位及HVR1的模拟表位基因分别插入该位点,获得嵌合HCV中和抗原表位的重组HBV S基因,将该基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组真核表达质粒pCI-HBSE1～4.将4种重组真核表达质粒转染293T细胞,间接免疫荧光和Western blot检测嵌合基因的表达.结果 4种重组真核表达质粒经双酶切证实构建正确；4种重组质粒转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western blot显示,在相对分子质量约27 000处可见蛋白条带.结论 成功构建了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合基因真核表达质粒,其在293T细胞中可有效表达,为进一步制备嵌合HCV中和抗原表位的HBV S抗原VLP,研究中和抗体对HCV假病毒颗粒(HCVpp)和JFH-1HCV体外培养系统(HCVcc)感染的抑制作用奠定了实验基础.
作者：舒放；雷迎峰；林芳；王希；李斌；张利军；董轲；张惠中；韦三华 刊期： 2013年第06期
目的 原核表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40,DnaJ),并探讨其免疫保护效果.方法 从2、3、6B、14、19F、R6型肺炎链球菌基因组DNA中扩增DnaJ基因,插入原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-DnaJ,转化大肠埃西菌(E.coli) BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组DnaJ蛋白经Ni-NTA树脂纯化后,分别经腹腔和鼻黏膜免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和唾液中特异性IgG和IgA抗体滴度；用重组蛋白刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测细胞因子水平的变化；流式细胞术检测特异性抗DnaJ血清结合到肺炎链球菌表面的能力；检测抗DnaJ血清抑制R6型肺炎链球菌黏附A549细胞的能力.结果 6株肺炎链球菌的PCR扩增产物均可见1 119 bp的DnaJ基因片段,测序结果与GenBank中登录的序列一致；重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确；纯化的重组DnaJ蛋白相对分子质量约为38 000,纯度达90％以上,可与DnaJ小鼠免疫血清发生特异性反应.腹腔免疫DnaJ可使小鼠血清产生高滴度的特异性抗DnaJ抗体,鼻黏膜免疫DnaJ可增加小鼠血清和黏膜中抗DnaJ IgG和IgA抗体水平(P＜0.01)；鼻黏膜免疫DnaJ可使小鼠脾细胞释放高水平的细胞因子IL-10、IFNγ和IL-17A;抗DnaJ血清对肺炎链球菌具有更强的结合能力,且可抑制肺炎链球菌黏附肺癌上皮细胞A549.结论 DnaJ可诱导小鼠产生保护性免疫应答,提示其具有作为肺炎链球菌蛋白疫苗抗原的潜力.
作者：游文献；曹炬 刊期： 2013年第06期
目的 在CHO-K1细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factorⅦ,hFⅦ).方法 利用脂质体转染法,将表达质粒pcDNA3.1-FⅦ和空载体pcDNA3.1分别转染CHO-K1细胞,经900 μg/ml G418筛选抗性细胞株.收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清中rhFⅦ的水平；PT法检测细胞培养上清的凝血时间；Western blot法检测细胞培养上清中rhFⅦ的表达.结果 共获得3株抗性细胞,分别命名为CHO-FⅦ01 ～ 03,空载体转染的细胞命名为CHO-CK；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中均检测到了rhFⅦ,但含量均低于阳性对照；CHO-CK细胞培养上清的凝血时间分别为CHO-FⅦ01～03细胞培养上清的2.4、2.1和3.1倍；CHO-FⅦ01～ 03细胞培养上清中含目的蛋白rhFⅦ,相对分子质量约为50 000.结论 成功在CHO-K1细胞中表达了hFⅦ,为下一步hFⅦ的深入研究及应用奠定了基础.
作者：肖薇；赵睿；李长清；边国慧；肖小璞；林方昭 刊期： 2013年第06期
多药耐药性细菌及新型病毒的出现使抗生素疗法面临重大挑战.众多临床前研究数据表明,单克隆抗体(简称单抗)在治疗细菌及病毒感染,尤其是在院内感染方面有很大优势,极具开发潜力.目前国内外仅有一种抗感染单抗被批准用于临床,还有许多单抗正处于不同临床研究阶段.本文就目前在研单抗的临床研究进展作简要综述.
作者：王茶；魏敬双 刊期： 2013年第06期
中国生物制品学杂志
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