张云涛；路东；席仲兴；杨福军；张甲菊；谢雍
microRNA是一种长约22 nt的非编码性小RNA,通过与靶基因的3'非翻译区(3'-UTR)结合来调控靶基因的表达.microRNAs的功能涉及多种生物学过程,与细胞分化、器官形成、肿瘤发生等密切相关.近年来发现,microRNAs在免疫细胞的产生、发育以及免疫应答过程中有着重要的作用.本文主要对microRNAs在免疫系统中的发展及对免疫功能调控的新研究进展作一综述.
作者：丁瑜；张学峰；张嘉保 刊期： 2008年第12期
目的 观察在不同温度保存条件下噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子的稳定性.方法 将噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子样品分为两组,一组添加等体积的80%甘油,另一组不添加甘油,分别于不同温度条件下存放不同时间后取样,用妹噬斑法检测滴度.结果 在37℃和25℃条件下保存,噬菌体疫苗种子滴度下降较快,在4℃和-20℃条件下保存噬菌体疫苗种子滴度下降相对较慢;37℃、25℃及4℃条件下保存,添加甘油并无明显的保护作用,而在-20℃条件下保存,添加甘油有明显的保护作用.结论 噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子可在4℃条件下短期保存,-20℃条件下长期保存,并可添加甘油作为保护剂.
作者：王海漩；段金梅；胡凝珠；任万军；兰芸；胡云章 刊期： 2008年第12期
近年来,国际上不断提高对疫苗生产质量的要求,并逐步强化生产工艺的验证.各国的疫苗质量管理部门越来越意识到生产工艺验证对保证疫苗质量的重要性,因此纷纷验证其生产工艺是否符合预定的质量标准.疫苗生产企业根据制定并经注册的生产工艺,将前验证、同步验证、回顾性验证以及过程确认或再验证有效地合理应用到产品中,建立适合产品的验证及确认方法,达到控制疫苗生产工艺的目的.
作者：过琴媛；李芙 刊期： 2008年第12期
目的 研究风疹疫苗病毒松叶株(Matsuba)传代病毒E2基因的遗传特征及其基因稳定性.方法 将Matsuba株毒种RV14在原代兔肾细胞上连续传代至第23代,取第14、16、17、18和23代病毒,利用RT-PCR方法扩增其E2蛋白基因,并与pUC18质粒连接后测序,对各代病毒及参考株的E2基因序列进行比对分析.结果 Matsuba株E2基因全长846 bp,传至23代时仍有很高的同源性,第14、16、17、18和23代与一致序列的核苷酸同源性分别为100%、100%、99.8%、99.8%和99.6%,氨基酸同源性分别为100%、100%、100%、99.3%和99.2%.Matsuba株E2基因与参考株核苷酸序列同源性为91.0～98.7%.Matsuba株各代病毒核苷酸、氨基酸序列高度保守,各关键功能区未发生变异.结论 风疹病毒Matsuba疫苗株E2基因遗传特性稳定,为在分子水平保证Matsuba株毒种及其生产疫苗的安全性提供了依据.
作者：高雪军；可美毓；刘晨鸣；赵雅静；魏至栋；朱莉萍 刊期： 2008年第12期
目的 分析重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的氨基酸组成.方法 应用氨基酸分析仪,采用离子交换色谱茚三酮柱后衍生法对rhG-CSF进行氨基酸组成分析.样品采用常规酸水解处理后,以氨基酸标准溶液外标法进行测定.结果 系统对标准溶液各个氨基酸组分均有良好的分离.3支rhG-CSF样品的9次测定结果除Met外,均较接近,变异系数较小,与理论值基本一致.结论 采用氨基酸自动分析仪柱后衍生法分析氨基酸组成重复性好,误差较小,可用于rhG-CSF的质量控制.
作者：毕华；饶春明；刘兰；袁力勇；丁有学；史新昌；王军志 刊期： 2008年第12期
2008年2月7日,浙江省松阳县裕溪乡裕溪村一条本地犬咬人后自毙,其脑组织被送至丽水市疾病预防控制中心检测.犬伤者孝某某,女,80岁,右脚而被咬伤,属二级暴露,于被咬当日在当地防保站接种狂犬病疫苗(辽宁成大生物股份有限公司产品,批号20070902-5),按照0、4、7、14、28的程序进行全程接种,未接种狂犬病免疫球蛋白.
作者：叶茂华；雷永良；王晓光 刊期： 2008年第12期
目的 观察国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的接种反应及其免疫原性.方法 观察组200例和对照组50例暴露后,按照0、3、7、14、28 d免疫程序,分别接种国产、进口冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞).观察组接种疫苗后,观察全身和局部反应情况.采用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测观察组和对照组接种后的血清中和抗体水平.结果 观察组疫苗接种后,局部红肿、硬结、疼痛、瘙痒发生率分别1.4%、0.8%、17.1%和2.4%;全身反应发热、皮疹、头痛、疲劳乏力和其他反应发生率分别为1.2%、0.4%、2.4%、4.2%和0.3%,且在第7天完全消失.观察组与对照组疫苗首剂接种后7 d,抗体阳转率分别为加.3%和37.0%,14 d分别为95.5%和97.7%,差异无统计学意义;且首剂接种后45 d,抗体阳转率均为100%.观察组和对照组疫苗首剂接种后7、14、45 d,血清中和抗体GMT差异无统计学意义,14、45 d血清中和抗体GMT均大于0.5 IU/ml.结论 国产冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)接种反应轻微,并具有良好的免疫原性.
作者：王凌云；孙美平；张雪春；徐若辉；邹艳杰；左永波；齐华 刊期： 2008年第12期
目的 构建人颗粒溶素(GLS)活性肽(9ku-GLS)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因的真核表达载体,并检测其在小鼠黑色素瘤细胞B16中的表达.方法 经PCR扩增9ku-GLS基因,插入质粒pBudCE4.1中,经酶切及测序鉴定正确后,亚克隆至质粒pEGFP-C1中,将融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K转染B16细胞,采用荧光显微镜及RT-PCR法检测融合蛋白的表达.结果 融合基因真核表达质粒pEGFP-C1/S9K经双酶切鉴定证明构建正确,转染B16细胞24 h后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光,且经RT-PCR可扩增出267 bp的目的 基因片段.结论 已成功构建9ku-GLS与EGFP融合基因的真核表达质粒,且在B16细胞中表达了融合蛋白.
作者：何永林；朱道银；伊正君；杨春；徐蕾；王瑜伟 刊期： 2008年第12期
目的 观察冻干麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗的接种反应和免疫原性.方法 分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期进行,分别选择7～15岁和8～18月龄儿童接种国产MMR疫苗,同时设进口MMR疫苗、单价麻疹、腮腺炎、风疹疫苗对照,进行接种反应和免疫原性观察.结果 Ⅰ期7～15岁接种国产MMR疫苗的11人中,仅3人发生局部弱反应,反应率为27.3%;8～11月龄接种国产MMR疫苗的26人中,发热率和皮疹反应率分别为11.5%、15.4%,其中高热率为3.8%.Ⅱ、Ⅲ期观察的1188名8～18月龄儿童中,接种国产MMR疫苗发热率为10.69%,皮疹反应率为3.64%,局部反应率为0.44%,其他反应率为0.22%.与对照疫苗比较,仅发热率高于腮腺炎疫苗及风疹疫苗,且差异有统计学意义,其他反应差异均无统计学意义.接种国产MMR疫苗后,麻疹、腮腺炎、风疹HI抗体阳转率和抗体GMT分别为99.5%、85.9%、100%和1:57、1:4.2、1:890.与对照疫苗比较,麻疹抗体GMT国产MMR疫苗高于进口MMR疫苗和麻疹疫苗,抗体阳转率国产MMR疫苗高于进口MMR疫苗,且差异有统计学意义;腮腺炎抗体GMT国产MMR疫苗低于进口MMR疫苗,且差异有统计学意义,其他各疫苗组差异均无统计学意义.结论 国产MMR疫苗具有良好的安全性和免疫原性.
作者：徐宏基；李微；夏建华；陶红；方捍华；李亚君；储艳；马富宝；徐闻青；王树巧 刊期： 2008年第12期
目的 研究轮状病毒(RV)LLR疫苗株VP7基因的遗传特征,为疫苗的质量控制和发展提供依据.方法 将LLR株轮状病毒毒种LLR38在原代牛肾细胞上连续传至49代.提取第38、43、44、49代病毒RNA.通过RT-PCR扩增VP7基因片段,将其克隆人质粒pGEM-T中,进行序列测定与分析.结果 LLR株VP7基闪全长1 062 bp,含编码326个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF).各代次病毒的VP7基因核苷酸与推导的氨基酸变化完全一致,与GenBanK中LLR参考株(L11602)同源性分别为99.9%和99.7%.与14株G10血清型RV毒株之间,核苷酸与推导的氨基酸序列同源性分别为84.3%～87.4%和92.7%～94.9%;与不同血清型RV代表株间,VP7基因核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为62.2%～76.8%和72.9%～83.1%;在A、B、C 3个重要抗原表位,LLR株与同一血清型RV代表株B223氨基酸同源性高达97.5%,而与不同血清型仅为42.5%～62.5%.结论 轮状病毒LLR疫苗株VP7基因具有良好的遗传稳定性,与来自不同国家同一型别的RV株VP7蛋白氨基酸序列之间无明显差异,在遗传上密切相关,从VP7基因分子水平证明LLR株毒种及其制备的疫苗是安全可靠的.
作者：赵雅静；高雪军；刘晨鸣；魏至栋；冯德杰；朱莉萍 刊期： 2008年第12期
鲍特百日咳杆菌分泌腺苷酸环化酶毒素,该毒素能够将其催化基团转运到真核细胞中,并由真核细胞的钙调蛋白激活,产生大量的cAMP.因此,腺苷酸环化酶毒素既可作为表位运输的工具,又有助于研究细菌毒素蛋白进入真核细胞的机制.本文就百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素的研究进展作一综述.
作者：吴丽洁；徐颖华；张庶民 刊期： 2008年第12期
目的 探讨姜黄素对HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 分别用10、20、40 μmol/L姜黄素处理HeLa细胞24 h后,MTT法检测细胞的增殖,光镜观察细胞形态,TUNEL技术检测细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测CytochromeC和Caspase-9蛋白的表达,Westem blot法检测XIAP蛋白的表达.结果 姜黄素对HeLa细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量依赖性;部分细胞呈现典型的凋亡形态学改变;姜黄素作用后,Cytochrome C和Caspase-9蛋白的表达显著增强,XIAP蛋白的表达显著下降,且均呈剂量依赖性.结论 姜黄素能抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,Cytochrome C和Caspase-9的表达上调及XIAP的表达下调可能参与凋亡过程.
作者：黄谟婉；马英 刊期： 2008年第12期
目的 建立篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺.方法 利用7.5 L篮式生物反应器和片状载体培养Vero细胞,接种乙型脑炎病毒P3V2株毒种,根据葡萄糖的消耗量,分析细胞的生长情况及调节病毒培养时的灌流速度,每24 h取样,检测病毒滴度.收获的病毒液经纯化后,制备乙脑灭活疫苗,检测各项指标.结果 Vero细胞培养至96 h,葡萄糖消耗量达高峰,细胞密度达峰值;接种病毒后72 h,葡萄糖消耗量达高峰,灌流量为7 L/d,连续收获7～9 d,共可收获(40±5)L病毒液;96 h病毒滴度达高峰,为10.0 LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到<中国药典>三部(2005版)要求.结论 已建立了篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺.
作者：张晋；张月兰；赵玉秀；王辉；马乐；马可；牛志彬；梁宏阳 刊期： 2008年第12期
目的 构建多拷贝脑钠肽(BNP)基因重组表达质粒,并探讨BNP基因的拷贝数与其表达水平的相关性.方法 通过人工合成和PCR技术扩增BNP基因,将其克隆至载体pCW111中,构建表达质粒pBNP11,并通过亚克隆构建含有不同数量表达盒的正向串联表达质粒,分别转化大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),经温度诱导表达,SDS-PAGE分析,并经激光扫描测定目的 蛋白的表达量.结果 测序及酶切鉴定证明1～3拷贝BNP重组表达质粒构建正确,重组蛋白在大肠杆菌DH5a和BL21(DE3)中均可获得表达,表达量分别为菌体总蛋白的8.12%、9.94%、和9.18%.结论 已构建了多拷贝BNP的重组表达质粒,BNP的表达水平随BNP拷贝数的增加而升高,但并末成倍增加.
作者：易俊波；买制刚；卢海蓉；黄德新；李凌云；林枫 刊期： 2008年第12期
目的 探讨骨桥蛋白反义基因(ANOPN)对乳腺癌荷瘤裸鼠肿瘤生长及肺转移的影响.方法 构建人骨桥蛋白反义基因真核表达质粒pcDNA3.1-ANOPN,将质粒pcDNA3.1-ANOPN、空载体pcDNA3.1(+)和等量的脂质体分别转染人乳腺癌细胞系MDA-MA-231,将转染细胞分别命名为MDA-ANOPN、MDA-veet和MDA,接种至裸鼠,观察肿瘤的生长、转移情况,并用免疫组化法检测肿瘤组织切片中OPN的表达.结果 重组质粒pcDNA3.1-ANOPN经酶切、PCR及测序,证明构建正确.MDA.ANOPN组裸鼠出瘤时间、肿瘤体积及重量较MDA-vect和MDA组均显著降低,肿瘤肺转移灶数量减少,OPN表达较低.结论 ANOPN可抑制裸鼠移植瘤的牛长及肺转移.
作者：于杰；姜伟栋；葛立本；王旭东 刊期： 2008年第12期
目的 在原核表达系统巾表达肠出血性大肠杆菌O157:H7(EHEC O157:H7)Ⅲ型分泌蛋白EspA与Stx2毒素A1亚单位(Stx2A1)的融合蛋白,并对表达蛋白进行纯化及免疫学活性检测.方法 PCR扩增espA和stx2A1全长基因,利用重叠延伸PCR技术获得espA-stx2A1融合基凶,T-A克隆后插入表达载体pET-28a(+),构建原核表达质粒pET-28a(+).espA-stx2A1,转化大肠杆菌BL21(DE3),分别在37℃和25℃用IPTG诱导表达.以EspA单克隆抗体亲和层析柱纯化目的 蛋白,免疫小鼠,检测其免疫原性及抗血清的反应原性,并以天然Stx2毒素攻击,观察保护效果.通过细胞毒试验检测免疫小鼠抗血清的体外中和作用.结果 重霍延伸PCR方法扩增出1 319 bp的融合基因片段,重组表达质粒构建正确;目的 蛋白在25℃时的表达量明显高于37℃,约占菌体总蛋白的40%.两种温度下,目的 蛋白均主要以包涵体形式存在;纯化后蛋白纯度可达90%.Western blot结果证实,融合蛋白与EspA单克隆抗体和Stx2A1单克隆抗体均发生特异性反应.融合蛋白免疫小鼠制备的抗血清能分别与O157:H7的EspA、Stx2A发生特异性免疫反应.融合蛋白免疫小鼠能够抵御致死剂量天然Stx2毒素的攻击,保护率达95%.免疫小鼠血清町以中和天然Stx2毒素对HeLa细胞的毒性作用.结论 已成功表达了EspA-Stx2A1融合蛋白,纯化的蛋白显示出较好的免疫保护效果,为研制EHEC O157:H7基因工程多亚单位疫苗奠定了基础.
作者：程琰；罗萍；张卫军；顾江；邹全明；毛旭虎 刊期： 2008年第12期
纳豆激酶是一种具有强烈溶栓功能的碱性丝氨酸蛋白酶,近年来,国内外学者对其进行了广泛的研究.本文介绍了纳豆激酶的理化性质、主要生物学活性、溶栓机理及其生物学活性体外检测方法的研究进展.
作者：丁有学；刘兰；袁力勇 刊期： 2008年第12期
目的 应用生物反应器大规模培养脊髓灰质炎病毒.方法 用7 L、75 L和550 L生物反应器逐级放大培养Veto细胞,每天取样进行细胞计数.在550 L生物反应器巾培养脊髓厌质炎病毒,观察细胞病变,并检测病毒感染性滴度.结果 一级细胞培养(灌流培养法)、二级细胞培养(循环培养法)和三级细胞培养(批培养法)的平均细胞密度分别为2.79×106、2.38×106和1.04×106个/ml,一级培养的细胞倍增数高;病毒培养体积达350 L,病毒收获液滴度大于7.625 IgCCID50/ml.结论 通过三级放大工艺,可大规模培养脊髓灰质炎病毒.
作者：衡燮；李桂兰；奚光跃；温嘉纳；沈伟；何秀莲；唐成丽；廖国阳；姜述德；孙明波 刊期： 2008年第12期
目的 观察不同感染复数(MOI)对Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞巾增殖的影响.方法 分别用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒感染Vero细胞,观察不同MOI致细胞病变情况,并检测病毒滴度.结果 病毒感染Vero细胞后48 h,3组MOI(0.001、0.01、0.1)细胞病变均达(州).Ⅰ型病毒增殖高峰出现在接种后72 h,3组MOI病毒滴度分别为(8.690±0.190)、(8.690±0.190)和(8.315±0.185)IgCCID50/ml;Ⅱ型病毒增殖高峰出现在接种后96 h,3组MOI病毒滴度分别为(8.355±0.097)、(8.440±0.310)和(8.285±0.155)IgCCID50/ml;Ⅲ型病毒增殖高峰出现存接种后48～96 h,3组MOI病毒高滴度分别为(7.500±0.250)、(7.500±0.250)和(7.750±0.250)igCCID50/ml.结论 不同MOI对3型病毒增殖影响不大,可以采用低MOI(0.001)制备疫苗.
作者：石慧颖；张冲；李懿；杨永娟；宋冬梅；陈明；宁海京；刘宇；赵敏；支惠；沈心亮 刊期： 2008年第12期
目的 制备高中和活性的鼠抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)单克隆抗体,并进行鉴定.方法 用重组TNF-α免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗TNF-α单抗,纯化后,用间接ELISA法和微量细胞病变MTT法柃测抗体效价,ELISA相加试验测定抗原表位,硫氰酸铵洗脱法测定单抗的相对亲和力指数,并进行类及亚类、细胞染色体核型、特异性及稳定性检测.结果 筛选出7株分泌抗TNF单克隆抗体的细胞株,其中6株具有较高的中和活性和良好的稳定性,其细胞上清及腹水的中和效价分别为1:40～1:160和(1～3)×10-4 7株单抗均为IgG类IgG1亚类,轻链类型均为K,细胞核型分析符合杂交瘤细胞特征,特异性良好,5H10株与其余6株有不同的抗原表位,相对亲和力指数为0.4～1.5 mol/L.结论 已成功制备具有高中和活性的鼠抗TNF-α单克隆抗体,为抗人TNF-α嵌合抗体的构建奠定了基础.
作者：李萍；蒋琳；马亚茹；鱼轲；郭敏；陆俭 刊期： 2008年第12期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
