学术投稿

分子生物学方法在儿童流行性感冒监测中的应用

朱汝南;钱渊;王芳;刘成贵

关键词:流感病毒, 多重逆转录-聚合酶链反应, 巢式-聚合酶链反应, 序列分析
摘要:目的建立一种能够快速、特异、有效地直接从临床标本中检测流行性感冒(流感)病毒并进行病毒型和亚型鉴别的方法,同时了解近年来北京地区A3型流感病毒血凝素重链(HA1)区基因的变异特点.方法根据编码A、B型流感病毒膜蛋白M基因的核苷酸序列设计两对引物,用于同一逆转录(RT)-PCR反应中(多重RT-PCR),根据A、B型毒株扩增产物的大小(分别为506 bp和261 bp)鉴别A、B型流感病毒.另根据编码A1和A3型流感病毒糖蛋白HA基因的核苷酸序列设计两对引物,与B型M基因引物用于同一RT-PCR反应中,可区分A1、A3或B型流感病毒(扩增产物分别为944 bp、1 072 bp和261 bp).为提高检测临床标本的敏感性,针对A1和A3型病毒HA基因和B型病毒M基因又设计了3对引物作为外侧引物,进行巢式-PCR反应.根据第二次PCR的扩增产物在1.2%的琼脂糖凝胶电泳中的大小即可确定型别.经PCR扩增1996~2002年间分离的北京地区A3型流感病毒株HA1区基因,测序并进行序列分析.结果用上述多重RT-PCR鉴定流感病毒分离株156株,与血凝抑制试验阳性符合率为100%.用多重巢式-PCR检测92份已经病毒分离确定为流感的儿科临床呼吸道标本,与病毒分离和血凝抑制试验阳性符合率分别为76.9%(A1型)、57.1%(A3型)、86.5%(B型).对5株1996~2002年间A3型分离株HA1区基因序列分析结果显示,不同年份的分离株HA1区基因具有较高的核苷酸和氨基酸同源性,而且年份越近的毒株之间同源性越高.结论多重RT-PCR和巢式-PCR可同时检测不同型别的流感病毒,并可直接对临床标本进行检测,为流感监测提供更加快速的新方法.北京地区A3型流感病毒分离株HA1区基因持续不断地发生点突变,糖基化位点不断增多,可能是导致其抗原漂移的原因.
中华流行病学杂志相关文献
  • 高原环境下急性高原病预后及与再患率关系的随访研究

    为探讨急性高原病(AHAD)患者在高原环境条件下的预后(AHAD再患率)情况,对西藏军区总医院(海拔3 658 m)40年间(1955年12月至1995年12月)收治的AHAD患者的随访资料进行总结.

    作者:黄跃;李素芝;郭灵常 刊期: 2003年第01期

  • 一氧化氮合酶基因G894T变异与高血压病关系的研究

    目的探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因第7外显子G894T变异(Glu298Asp)与高血压病的关系.方法以人群中筛检出的、未经药物治疗的116例高血压病患者及136名血压正常者为研究对象,运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测G894T变异.结果G894T变异与高血压病显著相关,894T等位基因频率高血压病组显著高于血压正常组(16.0%∶8.8%,P=0.019),OR=1.96,95%CI:1.14~3.37.在病例组、对照组及两组合计中,G894T变异基因型的收缩压及舒张压水平皆显著升高(P<0.05).用多元协方差分析调整年龄、性别、吸烟、饮酒、体重指数、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇后,在病例与对照合计中,G894T 变异基因型对收缩压及舒张压水平仍具有正显著影响(P<0.01).结论 eNOS基因第7外显子G894T变异可能是该研究人群中高血压病发病的重要危险因素之一.

    作者:贾崇奇;赵仲堂;王立华;郝风荣;冯月秋;王束玫;徐晓菲;贾存显 刊期: 2003年第01期

  • 广东省小儿川崎病流行病学调查

    自从1967年日本川崎富作医生首次报道川崎病以来,日本已观察到15万余例川崎病患儿,北美、欧洲、中国等地的病例亦逐年增多[1-4].但迄今为止,其病因尚未明了.为了解广东省川崎病的发病率、分布及流行特征,以探索川崎病的病因及其影响发病的因素,我们进行了广东省川崎病流行病学调查,结果报告如下.

    作者:周晓光;王淑珍;赵庆国;肖昕;柳国胜;张拓红 刊期: 2003年第01期

  • 加强监测 迎接流行性感冒新挑战

    流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性传染病,以其病原的易变性和疾病的传播速度快而著称.流感的影响主要表现在流行期间急性病人的高发病率,就诊人数增加,住院率甚至死亡率增加,对老年人、儿童和有潜在健康问题的人有合并并发症甚至致命的危险.据史料记载,早在1173~1875年之间全球共发生流感大小流行299次.20世纪发生4次世界性大流行,严重的是1918~1919年A1(H1N1)亚型的大流行,为人类现代史上大的瘟疫,累计发病达7亿多人,造成2 000多万人的死亡,超过第一次世界大战的战亡总人数.

    作者:郭元吉;唐耀武 刊期: 2003年第01期

  • 浙江省与日本A3型流行性感冒病毒株的血凝特性及HA1序列比较

    目的比较近年来在浙江省与日本流行的A3(H3N2)型流行性感冒(流感)毒株的血凝特征与血凝素重链(HA1)区域的序列差异.方法对浙江省不同性状的流感代表株进行了抗原性分析,并与日本同期的毒株作了血凝特性及HA1区域的氨基酸序列比较分析.结果近年在浙江流行的A3型流行株,其抗原性已发生较大变异,其中绝大部分是对鸡红细胞缺乏凝集特性的O相毒株,它与A/武汉/359/95株二者在HA1区域的氨基酸同源性仅为94.82%,存在较大差异,这些O相毒株可以通过在MDCK细胞上的传代而转变为D相毒株,日本的同期毒株,其情况也相似.结论 A3型流感病毒在HA1区域发生的变异,是近年引起浙江省流感流行的主要因素.

    作者:卢亦愚;严菊英;周敏;姜晓路 刊期: 2003年第01期

  • 北京部分地区1995~1999年腔隙性脑梗死发病率变化趋势

    为了更准确地反映人群腔隙性脑梗死发病率的变化趋势,为人群脑血管病的预防提供更加可靠的数据.我们按照统一标准、统一的方法对北京部分社区人群进行了5年(1995~1999年)的监测,结果报告如下.

    作者:吴桂贤;吴兆苏;刘静;曾哲淳;王文化;秦兰萍;刘军;刘飒;张茁 刊期: 2003年第01期

  • 中国2000~2001年流行性感冒流行概况

    目的了解中国2000~2001年流行性感冒(流感)流行及抗原性变异情况. 方法鸡胚传代病毒用于抗原性分析;病毒液提取RNA进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物纯化后测序.然后用MegAlign(Version 1.03)和Editseq(Version 3.69)软件进行基因种系发生树分析.结果 2001年流行的H1N1亚型病毒血凝素蛋白重链(HA1)区氨基酸序列与A/上海/7/99(H1N1)相比,在抗原决定簇D区的第190位发生了氨基酸替换;基因种系发生树表明2001年的H1N1亚型流感病毒存在基因特性不同的两系病毒株.国内人群中仍然同时流行着两种抗原性明显不同的B型流感病毒(Yamagata 系和Victoria系),Yamagata 系病毒占大多数,Victoria系的HA1区基因与B/山东/7/97毒株相比,其197和199位氨基酸发生了替换.B型的基因种系发生树也证实Victoria系病毒株的抗原性改变.2000年分离的H3N2亚型流感病毒的HA1区氨基酸序列与A/悉尼/5/97(H3N2)间有7~8个氨基酸的差异;2001年分离的H3N2病毒株与2000年的病毒株相比,又在83、186、202、222位发生了氨基酸替换,表明H3N2亚型病毒株间的抗原性发生了较明显的变异.结论 2000~2001年中国流感的流行情况较为平静;H3N2亚型的抗原性发生了变异;H1N1亚型和B型病毒的抗原性虽没发生明显的变异,但它们均同时流行着两系抗原性不同的毒株.

    作者:张烨;李梓;郭俊峰;王敏;温乐英;郭元吉 刊期: 2003年第01期

  • 云南省8个少数民族聚居地亚克汀病流行情况调查

    目的调查云南省8个少数民族聚居地亚克汀病的患病率,研究其流行规律、特点,为今后的防治工作提供科学依据.方法用<中国联合型瑞文测验(CRT-C2)>测定智商;用<津医精神运动成套测验(JPB)>进行精神运动测验.结果调查8~12岁少数民族儿童4 222名,平均智商(IQ)91±19,其中IQ 55~69者277人,查出精神运动障碍119例;儿童甲状腺B超平均肿大率为5.4%,尿碘中位数466.9 μg/L,盐碘合格率为94.9%.结论 4 222名少数民族儿童中,轻度智力落后兼有精神运动障碍者119例,由此估算亚克汀病患病率为2.8%.

    作者:王珊珊;陆林;王希荣;宁岚;白斌;蒋笃强;汪梅;安广武 刊期: 2003年第01期

  • 中国北方5城市慢性乙型肝炎患者中SEN病毒检测

    目的了解SEN病毒D和H(SENV-D/H)在中国慢性乙型肝炎患者(CHB)中的感染情况.方法应用巢式聚合酶链反应法(nPCR),对中国北方5城市595例CHB患者和北京市96名正常人血清检测SENV-D/H DNA,并用PCR产物直接测序法对7株SENV进行了序列分析.结果CHB患者SENV感染率为61.3%,正常人为62.5%,两者差异无显著性(χ2=0.047,P=0.829).但不同城市CHB患者中SENV感染率存在一定差异.从不同城市分离的SENV 的核苷酸序列同源性较高,4株SENV-D同源性为91%~98%,3株SENV-H同源性为95%~98%.结论在5城市CHB患者中存在SENV-D/H感染,其感染率与正常人群相似,提示SENV- D/H可能没有直接致病性.

    作者:闫杰;何忠平;庄辉;董庆鸣;宋淑静;朱林;王小红 刊期: 2003年第01期

  • 中国人群肺癌发病危险因素的Meta分析

    目的探讨中国人群肺癌发生的主要危险因素,为预防决策提供依据.方法利用Meta分析方法综合国内1990~2001年关于肺癌发病危险因素的研究文献41篇.累计病例5 600例,对照6 892例.结果各因素合并比值比分别为:精神因素(3.34)、吸烟(3.04)、室内煤烟污染(3.20)、室内油烟污染(2.72)、肺癌家族史(2.61)、饮食蔬菜摄入(0.49)、水果摄入(0.69)、体重指数(1.57)、家族肿瘤史(2.97)、呼吸系统疾病史(2.66)、厨房通风情况(2.13)、生活用煤(1.50)、被动吸烟(1.42).结论目前影响中国人群肺癌发生的主要因素为精神因素、吸烟、室内环境污染、呼吸系统疾病史及家族史、蔬菜和水果摄入量等.

    作者:么鸿雁;施侣元 刊期: 2003年第01期

  • 男性不育症危险因素的病例对照研究

    目的探讨男性不育症的危险因素.方法对94对病例和对照1∶1配比进行病例对照研究.结果长期大量吸烟(OR=3.45,95%CI:1.95~6.10)、婚外性生活史(OR=7.29,95%CI:2.54~20.89)、高温大棚蔬菜种植(OR=6.73,95%CI:1.91~23.69)、苯类化学品接触(OR=20.53,95%CI:4.67~90.25)、解脲支原体感染(OR=5.55,95%CI:2.28~13.53)与男性不育症有关联,为其危险因素.结论男性不育症是由多种因素长期反复作用的结果,其预防应从整治环境污染、加强职业防护、提高自我防护能力、改变不良工作及生活习惯等方面做起.

    作者:秦开贵;侯云霞;张兰英;李明红;杨淑霞;马越 刊期: 2003年第01期

  • 甘肃省缺碘致儿童智力损伤影响的探讨

    甘肃省饮水调查结果提示80%以上的人口聚集区水碘低于10 μg/L,碘缺乏病流行广泛.1995年开始全民食盐加碘,但碘盐质量不够稳定,非碘盐时有冲击,全省居民户碘盐合格率1995、1997、1999年分别为55.5%、61.0%、69.5%.近30余年典型地方性克汀病无新发病例,但病区存在着相当数量的弱智儿童(亚克汀病)认为是补碘不足造成的较为轻微的亚临床损伤.正是这种症状不够典型,易被忽略,但数量较多的亚克汀病是病区社会经济、文化发展的大障碍.为评估我省目前碘缺乏造成的脑损伤的程度和状况,我们于1997年进行了以下的调查.

    作者:张育新;杨海霞;朱小南;李玲;杨琛;曹永琴;田德玲 刊期: 2003年第01期

  • 循证医学和循证保健 第五讲 应用证据

    在以上几讲中,我们对循证医学已经有了初步的了解,这一讲,主要讨论如何应用证据.评价证据的目的是为了使用,卫生保健工作者应当充分利用这些评价后的佳证据来制订决策,进行采购和管理卫生服务,然后改变资金流向和实现卫生资源的有效配置.通常各种临床治疗/预防指南、社区预防服务指南都是经过评价、得以肯定的佳证据,临床医生或保健系统工作者可以直接用来指导自己日常的实践.在没有指南可借鉴的情况下,应严格按照循证的步骤来制定一个治疗或预防的模式,并进一步进行研究.无论是哪种方式,都应当考虑所获得的证据是否可以应用于自己的病人或人群,以及他们自己的观念和期望[1].

    作者:徐波;詹思延 刊期: 2003年第01期

  • 深圳地区1999年手足口病患儿中肠道病毒71型的监测

    世界上许多国家和地区相继报道了肠道病毒71型(enterovirus type 71, EV71)的流行[1-3].目前已知EV71的感染可以导致手足口病,无菌性脑膜炎、脑炎和脊髓灰质炎样的麻痹性疾病等多种与神经系统相关的疾病.我们于1999年对深圳地区出现手足口病病例进行了EV71的监测,结果报告如下.

    作者:何雅青;杨洪;严志平;张顺祥;何建凡 刊期: 2003年第01期

  • 性别间和家庭聚集的幽门螺杆菌感染的Meta分析

    目的综合分析并探讨幽门螺杆菌感染情况.方法运用Meta分析方法对幽门螺杆菌性别间和家庭聚集的研究进行综合定量分析.结果性别间幽门螺杆菌感染率有细微差别(95%CI:0.057 9~0.096 3);父母均阳性子女幽门螺杆菌感染率较父母均阴性者为高(95%CI:0.337 8~0.504 2).结论幽门螺杆菌感染率存在性别差异和家庭聚集现象,幽门螺杆菌流行病学研究涉及很多方面,但均缺乏足够调查和证据,尚需进一步研究.

    作者:万毅;徐勇勇;薛富波;樊代明 刊期: 2003年第01期

  • 天津市儿童流行性感冒病原学检测分析

    目的对天津市2001~2002年流行性感冒(流感)患儿进行病原学分析.方法用狗肾传代(MDCK)细胞和鸡胚双腔法进行流感病毒分离.用鸡红细胞和人O型红细胞凝集试验证实病毒的存在,用红细胞凝集抑制试验进行型和亚型的鉴定.结果 2001年10月至2002年3月共采集14岁以下流感样患儿咽拭子标本238份,分离出64株流感病毒,检出率为26.9%;其中A(H3N2)亚型42株,占检出数的65.6%;A(H1N1)亚型13株,占20.3%;B型9株,占14.1%.所分离的64株流感病毒都具有适应于MDCK细胞株生长及与人O型红细胞凝集良好的生物学特性.转种鸡胚后,绝大多数(62/64株)能适应鸡胚生长;但64份阳性咽拭子标本液直接接种鸡胚,仅有3份血凝阳性.此外,96.4%(53/55株)A型流感病毒均可由O相转为D相,有2株A(H3N2)为O相特征.B型流感病毒均为D相特征.结论天津地区流感病毒存在A(H3N2)、A(H1A1)和B三个型,以A(H3N2)为优势流行型.

    作者:郭小华;段卫平;王世荣;张华;李颖;陈锦英 刊期: 2003年第01期

  • DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶在人群肺癌发生中的作用

    目的探讨DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,hMGMT)在人群肺癌发生中的作用. 方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测150例肺癌组织、40例正常肺组织、50对肺癌病例和对照外周血单个核细胞中hMGMT基因mRNA的表达;用免疫组化检测p53、C-MYC、K-RAS基因表达;并分析有关暴露因素对修复基因hMGMT表达的影响,以及hMGMT基因与p53、C-MYC、K-RAS等癌变相关基因的关系.结果32.7%(49/150)的肺癌组织和5.0%(2/40)的正常肺组织存在hMGMT基因表达低下,hMGMT基因表达低下与肺癌发生的危险度OR值为9.22(2.05~57.65).20.0%(10/50)的肺癌病人外周血和4%(2/50)的正常人外周单个核细胞血细胞也可检出hMGMT基因表达低下.探讨影响hMGMT基因表达的各种暴露因素,发现吸烟可抑制hMGMT基因表达.另外发现,K-RAS癌基因的过度表达与hMGMT表达低下有关(P<0.05);而p53、C-MYC基因的表达与hMGMT无关. 结论 DNA修复基因hMGMT可能在肺癌发生中起着重要的作用,其表达低下是人群发生肺癌的危险因素之一,该基因的低表达可作为有价值的肺癌易感性标志.

    作者:吕嘉春;施侣元;吴中亮;廖永德;周晟;王孝养;黎银燕;宾晓农;曾波航;陈家堃 刊期: 2003年第01期

  • 一起小学生流行性腮腺炎爆发的调查

    2002年6月23日横县卫生防疫站接到疫情:长寨村委白花小学有数例流行性腮腺炎(流腮)病人,立即会同县第二人民医院有关人员组成联合调查组前往疫区调查.

    作者:陆祖添;颜少芬;黄志碧 刊期: 2003年第01期

  • 浙江省狂犬病新发疫源地调查及其流行特征

    狂犬病是一种人畜共患的急性传染病.人被带有狂犬病病毒的犬、猫等肉食动物咬伤而得病,病死率极高,几乎达100%.2000年12月9日温州市泰顺县发生首例狂犬病病人,至2001年底全市共发生狂犬病病人10例,全部死亡.

    作者:周祖木;李剑敏;卢汝透;杨曙光;朱立言;章显传;余向华;山若青;陈岚;黄卡特 刊期: 2003年第01期

  • 安徽省学生伤害的流行病学调查

    我国每年有70万人死于各种伤害,造成了大量的永久性残疾,给社会带来严重的经济负担.伤害已经成为严重威胁年轻一代健康的重要公共卫生问题.安徽省地形地貌呈现多样性,长江和淮河自西向东横贯全境,本次调查了皖南、皖中、皖北的大、中、小学生,较好的代表了安徽学生的伤害发生情况.现将结果报告如下.

    作者:尹婧;黄芬;郝加虎;姚应水;徐元勇;童志才;陈文化;叶冬青 刊期: 2003年第01期

中华流行病学杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中华医学会