学术投稿

刺五加Actin基因cDNA全长序列的克隆与生物信息学分析

柴丽花;修乐山;周秘;邢朝斌

关键词:刺五加, 肌动蛋白, 克隆, 生物信息学分析
摘要:目的:克隆刺五加Actin基因的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。方法:以刺五加的叶片为材料,提取总RNA,逆转录为cDNA,根据初步克隆到的刺五加Actin基因保守序列设计引物,利用套式PCR进行3'和5'RACE扩增,得到Actin基因的3'和5'端cDNA序列片段,拼接获得cDNA全长。将该序列进行BLAST比对、相似度分析,并对刺五加Actin1蛋白的二级结构和三级结构进行预测。结果:刺五加的Actin基因全长1507 bp,命名为ESA ctin1,注册号KC469585。该基因开放阅读框(ORF)长1134 bp,编码377个氨基酸,5'端非编码区长140 bp,3'端非编码区长233 bp。ESActin1与GenBank 中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在75%以上,蛋白质序列的相似性在94%以上。结论:首次报道了刺五加Actin基因的全长cDNA序列,为刺五加的分子生物学研究奠定基础。
世界科学技术-中医药现代化杂志相关文献
  • 中药叶形态-脉序图谱鉴别法数据库系统的构建

    采用VFP数据库管理系统建立了首个“中药叶形态-脉序图谱(LMVP)鉴别法数据库系统”,存储46种易混淆中药的LMVP鉴别标准(特征)及其10种基本信息,以及117个科共358种中药及植物的相关参考文献,可供鉴别中药、方法学研究时查询相关鉴别标准(特征)、文献,并对数据进行统计分析。它是实施、推广、改进LMVP鉴别法,进一步对LMVP数据挖掘的技术平台。该数据库具有结构简单,功能较多、使用、管理维护便捷、适用于教学等特点。

    作者:黄金春;陈世革;何报作 刊期: 2013年第09期

  • 经皮耳迷走神经刺激治疗难治性癫痫的临床试验研究

    目的:本研究旨在探讨经皮(耳甲腔)电刺激耳迷走神经(ta-VNS)可否作为治疗难治性癫痫的一种有效方法。方法:采用经皮神经电刺激双盲法。首先,对50名难治性癫痫患者进行经皮电刺激耳迷走神经治疗(ta-VNS),初步观察治疗效果。然后,将另外144名癫痫患者随机分为:经皮电刺激耳迷走神经组(ta-VNS,n=98)和经皮电刺激非耳迷走神经组(tn-VNS,n =46)。每日治疗两次,共治疗24周。除了ta-VNS和tn-VNS组患者以外,其余同期入院患者均接受药物治疗。以校准恩格尔分级标准为疗效观察指标。在治疗后的第8周、第16周和第24周,对癫痫发作频率和严重程度进行评估。结果:前期研究中的50例癫痫患者,经过8周治疗后,6例无癫痫发作,12例发作频率分别减少了50%~89%。经过24周治疗后,8例无癫痫发作,2例癫痫发作频率减少≧90%,9例发作频率分别减少了50%~89%。在144例癫痫患者的研究中,经过8周治疗后,ta-VNS组的98例患者中10例无癫痫发作,6例发作频率减少≧90%,25例发作频率减少了50%~89%。经过24周的治疗后,15例无癫痫发作,6例发作频率减少≧90%,26例减少了50%~89%。经过前8周的治疗,tn-VNS对照组的46例患者重只有3例无癫痫发作,2例患者减少90%以上,9例发作频率减少了50%~89%。经过额外16周的ta-VNS治疗后,46例患者中有7例无癫痫发作,14例发作频率减少50%~89%。各组间发作频率减少百分比差异显著(P<0.05)。结论:ta-VNS与VNS作用相类似,能够抑制癫痫发作,是一个安全、有效、经济且广泛适用的治疗难治性癫痫方法。

    作者:荣培晶;刘爱华;张建国;王玉平;杨岸超;贲卉;李亮;李丽萍;宋潞;刘焕光;何伟;黄凤;李霞;刘儒鹏;吴鹏;朱兵 刊期: 2013年第09期

  • 益气消法对雌激素诱导子宫肌瘤模型豚鼠血管内皮生长因子及其受体蛋白表达的影响

    癥目的:观察益气消法对雌激素诱导子宫肌瘤模型豚鼠血管内皮生长因子及其受体蛋白表达的影响,探讨该法方药抑制血管生成治疗子宫肌瘤的作用机制。方法:通过去势+皮下注射苯甲酸雌二醇建癥立子宫肌瘤模型,并给予不同剂量益气消法中药进行治疗。采用免疫组化法检测子宫组织微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平;采用RT-PCR检测子宫组织VEGFR1 mRNA、VEGFR2 mRNA表达。并对以上指标进行统计学分析。结果:与正常对照组比较,模型组豚鼠子宫肌组织MVD、VEGF、VEGFR表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,中药各剂量组均有不同程度的降低,其中以高剂量癥组为明显,说明益气消法高剂量中药组可以显著抑制MVD、VEGF及其受体的蛋白表达。结论:益气消癥法通过抑制血管生成进而抗肌瘤细胞增殖,这可能是该法治疗子宫肌瘤的作用机制之一。

    作者:陆一竹;黄照环;张茜薇;宋卓敏;王娜 刊期: 2013年第09期

  • 干法制粒技术在FKⅣ颗粒剂制备中的应用

    目的:确定FKⅣ颗粒剂制粒的佳工艺条件。方法:比较湿法制粒与干法制粒制得颗粒剂的含量差异,选择干法制粒并考察该法中辅料种类、轧轮压力、轧轮转速和浸膏粉含水量对颗粒成型率、吸湿性和溶化性等影响,采用L9(34)正交试验优化干法制粒工艺参数。结果:添加50%浸膏粉量的微晶纤维素为稀释剂,1.0%的阿司帕坦为矫味剂,控制轧轮压力5.0 MPa,转速400 rpm,浸膏粉含水量约3.0%,所得颗粒具有成型率高、溶化性好、吸湿率低、口感好等优点。结论:FKⅣ颗粒剂干法制粒工艺合理可行,可满足生产需要。

    作者:钱俊;林夏;刘莉莉;王星星;吴云;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • HPLC-ELSD法测定注射用银杏二萜内酯中甘露醇和葡甲胺的含量

    目的:建立注射用银杏二萜内酯中甘露醇和葡甲胺含量测定方法。方法:采用HPLC-ELSD法,以乙腈-50 mmol·mL-1乙酸铵为流动相,色谱柱Waters XBridge Amide(4.6 mm×150 mm,3.5μm);梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1;柱温30℃;漂移管温度90℃,氮气流速2.0 L·min-1。结果:甘露醇在1.9665~19.665μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为100.57%(RSD=0.92%,n=9);葡甲胺在0.4838~4.638μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为100.67%(RSD=0.72%,n=9)。结论:该方法简便准确,重复性好,可作为测定注射用银杏二萜内酯中甘露醇和葡甲胺的含量测定方法。

    作者:伍清龙;孙永成;李雪峰;王伟;王振中;毕宇安;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • 基于人工神经网络的《伤寒论》方证知识库的构建

    目的:运用人工神经网络算法探讨“方”与“证”之间的非线性映射关系。方法:整理《伤寒论》中有症有方的条文,利用人工神经网络对245条数据进行训练,建立方证知识库,先选择100条作为测试样本,然后分别以桂枝汤证、麻黄汤证、小柴胡汤证、白虎汤证的症状表现输入模型,进行“症状”到“药物”的预测分析。结果:模型预测正确率79%,对桂枝汤证及麻黄汤证各药物的预测误差均在0.1以内;对小柴胡汤、白虎汤证中主药的预测误差在0.1以内,对其它药物的预测误差在0.3以内。结论:利用人工神经网络能较好的模拟方证之间的非线性映射,该思路可进一步应用于方证辨证论治体系中,为方证规范化及中医信息化服务。

    作者:杨涛;吴承玉 刊期: 2013年第09期

  • 刺五加Actin基因cDNA全长序列的克隆与生物信息学分析

    目的:克隆刺五加Actin基因的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。方法:以刺五加的叶片为材料,提取总RNA,逆转录为cDNA,根据初步克隆到的刺五加Actin基因保守序列设计引物,利用套式PCR进行3'和5'RACE扩增,得到Actin基因的3'和5'端cDNA序列片段,拼接获得cDNA全长。将该序列进行BLAST比对、相似度分析,并对刺五加Actin1蛋白的二级结构和三级结构进行预测。结果:刺五加的Actin基因全长1507 bp,命名为ESA ctin1,注册号KC469585。该基因开放阅读框(ORF)长1134 bp,编码377个氨基酸,5'端非编码区长140 bp,3'端非编码区长233 bp。ESActin1与GenBank 中注册的其它植物肌动蛋白核苷酸序列的相似性在75%以上,蛋白质序列的相似性在94%以上。结论:首次报道了刺五加Actin基因的全长cDNA序列,为刺五加的分子生物学研究奠定基础。

    作者:柴丽花;修乐山;周秘;邢朝斌 刊期: 2013年第09期

  • HPLC-ELSD结合化学计量学研究银杏叶片中萜类内酯指纹图谱

    目的:建立不同厂家银杏叶片中萜类内酯成分HPLC-ELSD指纹图谱。方法:色谱柱为Agi-lent Extend-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为正丙醇-四氢呋喃-水(1、15、84),柱温为30℃,流速为1 mL·min-1,蒸发光散射检测器检测;采用LC/Q-TOF MS对指纹图谱中的共有峰进行指认。并利用化学计量学方法,包括主成分分析(PCA)、相似度分析(SA)、聚类分析(HCA),对色谱数据进行分析。结果:该方法精密度、稳定性、重复性良好。同时采用LC/Q-TOF MS方法指认了5个共有峰,分别为银杏内酯J(M)、银杏内酯C、银杏内酯A、银杏内酯B及白果内酯。并采用该方法测定了市售14批银杏叶片,结合PCA、SA及HCA生成了银杏叶片中萜类内酯对照指纹图谱,并根据质量差异将样品分为4大类。结论:本方法可用于银杏叶片中萜类内酯成分的质量评价。

    作者:吴雨龙;李艳静;王佩香;丁岗;李萍;段金廒;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • 濒危药用植物麻花秦艽和粗茎秦艽cpDNA提取研究

    目的:对麻花秦艽和粗茎秦艽叶绿体基因组进行提取研究,为进一步研究秦艽叶绿体的基因组序列特征、遗传多样性以及资源保护研究奠定基础。方法:本文以麻花秦艽、粗茎秦艽为对象,采用改良的蔗糖密度梯度离心方法进行提取,优化纯化方法,分离得到秦艽叶绿体后测定cpDNA 浓度,检测其OD值并扩增ITS2序列验证其纯度。结果:获得高质量、高纯度的 cpDNA (0.1~0.4滋g/10 g),扩增ITS2序列验证其无核污染,满足后续测序要求。结论:cpDNA 的纯度和质量对叶绿体基因组测序的正确率和可信度具有重要的影响。本文获得了高纯度、高质量的秦艽cpDNA,为秦艽叶绿体基因组全序列的获得提供保障。

    作者:高欢欢;倪梁红;胡志刚;姚辉;吴和珍;潘宏林 刊期: 2013年第09期

  • 滋补脾阴法对脾阴虚糖尿病大鼠脑组织茁淀粉样蛋白及胰岛素降解酶的调节作用

    目的:观察脾阴虚糖尿病大鼠海马及大脑皮质中不同形式的β淀粉样蛋白(Aβ)、胰岛素降解酶(IDE)变化,及其在脾阴虚糖尿病认知功能障碍中的作用,并观察滋补脾阴法对其影响。方法:将大鼠随机分为空白对照组(Cont)、糖尿病组(DM)、脾阴虚组(pi)、脾阴虚糖尿病组(piDM)、滋补脾阴方药治疗组(ZBPYR)5组。采用梯度离心的方法提取可溶性与不可溶Aβ,通过ELISA方法测定各组大鼠海马及大脑皮质中可溶性与不可溶的Aβ1-42及Aβ1-40的含量变化,通过Western blot方法观察各组大鼠海马及皮质中IDE蛋白表达变化。结果:DM组、piDM组大鼠海马、大脑皮质可溶性与不可溶Aβ1-42均高于Cont组(P<0.05),ZBPYR组较DM组、piDM组降低了海马、大脑皮质可溶性与不可溶Aβ1-42的表达(P<0.05)。DM组、pi组、piDM组大脑皮质可溶性Aβ1-40较Cont组增加(P<0.05),ZBPYR组较DM组、piDM组有所下降(P<0.05)。DM组、piDM组海马IDE蛋白表达较Cont组降低(P<0.05),ZBPYR组海马较DM组、piDM组升高(P<0.05);DM组、pi组、piDM组大鼠大脑皮质IDE蛋白水平较Cont组降低(P<0.05),ZBPYR组大脑皮质较DM组降低(P<0.05)。结论:脑组织中Aβ1-42增加可能是糖尿病大鼠、脾阴虚糖尿病大鼠认知功能障碍的主要病理变化,IDE表达下降可能是导致Aβ1-42增加的原因之一,滋补脾阴法可能通过上调IDE蛋白表达降低Aβ1-42的含量。

    作者:梁丽娜;战丽彬;胡守玉;闫云;郑路平;孙杰;余丹 刊期: 2013年第09期

  • 金银花种质资源遗传多样性的ISSR分析

    目的:探讨金银花种质资源的遗传多样性,为其育种提供参考。方法:对采自金银花主产区的18个农家品种及野生忍冬和近缘种灰毡毛忍冬共计36个样品进行 ISSR-PCR 分析,采用NTSYS-pc软件计算金银花不同农家品种及近缘种间的Jaccard遗传相似系数,按非加权配对算术平均法(UPGMA)建立所研究类群的系统聚类图。结果:12条引物共扩增出129个条带,其中多态带为114条,占总扩增条带数的88.37%,金银花种质资源具有较丰富的遗传多样性。从聚类分析图可以看出,金银花不同样本首先聚在一起,表明是一自然类群;野生忍冬与栽培品种具有明显的遗传差异;主产区传统品系毛花系列遗传相对较稳定,而鸡爪花系列品种繁杂,遗传变异大;新品种九丰一号已独立成一稳定品种。结论:ISSR标记可以为金银花的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子生物学依据。

    作者:孙稚颖;姚辉;王振中;毕宇安;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • 不同型号大孔树脂吸附青风藤中青藤碱特性的研究

    目的:研究不同型号大孔树脂对青风藤中青藤碱的吸附效果。方法:以青藤碱转移率为考察指标,对大孔树脂吸附纯化青风藤生物碱的工艺进行筛选。结果:pH2条件下AL-3树脂对青藤碱吸附和解析效果好,pH6条件下X-5树脂吸附和解析效果好。结论:筛选树脂应综合考虑目标化合物的性质和树脂的孔径、比表面积、极性等参数。

    作者:吴建雄;秦建平;曹光环;刘启安;王振中;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • 散结镇痛胶囊中皂苷类成分的指纹图谱研究和多指标成分定量测定

    目的:建立散结镇痛胶囊中皂苷类成分的指纹图谱,为评价散结镇痛胶囊质量提供依据。方法:采用Waters Symmetry ShieldTM RP18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水梯度洗脱,流速1.2 mL· min-1,柱温30℃,检测波长203 nm。结果:各批次样品相似度在0.95以上,标示出9个共有峰;通过对照品比对,确定了5个成分,分别为三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd,并对其进行定量分析。结论:该方法快速、简便、准确,可作为评价该制剂质量的有效方法之一。

    作者:秦建平;吴建雄;李家春;陈保来;红梅;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • 面部黄褐斑的分部论治和经络辨证探讨

    黄褐斑是一种多见于中青年女性面部的色素沉着性皮肤病,以面部曝光部位发生获得性的褐色斑为特征。现代中医临床治疗,多是沿袭历代医家的辨证论治,遣方用药。笔者根据黄褐斑面部发病部位的不同,从中医整体观出发,探讨黄褐斑面部的发病部位与五脏的相关性,创造性采用部位辨证和经络辨证相结合的方法,及注重引经药物的使用,希望为黄褐斑的治疗提供新的思路。

    作者:郭静;段渠;朱晓燕;杜艾嫒;艾儒棣 刊期: 2013年第09期

  • 《中药饮片标准图鉴》

    《中药饮片标准图鉴》被列入全国新闻出版改革发展项目,以及“十二五”国家重点图书出版规划项目。本书共收载2010年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)中以植物为基原的饮片484味。本书依药名笔画排序,介绍来源、产地、采收加工、药材性状、炮制规范、饮片性状、性味功效、用量用法,以及饮片的炮制品。

    作者:主编;陈士林;林余霖 刊期: 2013年第09期

  • 江苏东海县金银花不同花期绿原酸和木犀草苷动态变化研究

    目的:研究江苏省东海县金银花药材基地不同采收期金银花中绿原酸和木犀草苷动态变化规律,确定金银花药材的佳采收期。方法:采用2010年版《中国药典》金银花含量测定方法测定绿原酸、木犀草苷含量,结合液相指纹图谱技术和干花收率等指标考察金银花药材三青期、二白期、大白期、银花期及金花期的质量。结果:不同花期金银花中绿原酸、木犀草苷含量存在明显变化,干花质量与产量也存在明显变化。结论:江苏省东海县药材基地金银花佳采收期为二白期与大白期,与地道产地一致。

    作者:王永香;吴云;孟瑾;沈娟;毕宇安;王振中;萧伟 刊期: 2013年第09期

  • 山药与《神农本草经》中“上品”中药配伍的临床运用探析

    山药是临床常用药之一,善滋补阴液,入肺、脾、肾三经。通过对历代所有运用山药的方剂分析,发现与山药配伍频率高的前30味中药,其中有28味来自于《神农本草经》,23味属“上品”。本文重点分析了山药与补益药的配伍意义及规律,以期为临床科学组方及人们日常保健使用提供依据,从而充分发挥山药的功效。

    作者:周滢;苏咏梅;曾志华;黄欣;周萍 刊期: 2013年第09期

  • 桃核承气汤对脓毒症大鼠不同脏器组织损伤的影响

    目的:观察桃核承气汤对脓毒症大鼠不同脏器组织的影响。方法:将雄性清洁级SD昆明大鼠100只随机分为正常对照组、模型对照6 h组、模型对照12 h组、桃核承气汤6 h组和桃核承气汤12 h组。正常对照组不作任何处理,其余组别采用经典的盲肠结扎穿孔法(CLP)复制脓毒症动物模型,模型组每只大鼠每天按1 mL/100 g体质量灌胃给予生理盐水,核承气汤组每只大鼠每天按1 mL/100 g体质量予桃核承气汤药液灌胃,7天后造模。大鼠造模成功后6 h、12 h分别采集肺、心脏、肾、肝、小肠组织标本,光镜和电镜观察各组不同组织病理形态学改变情况。结果:与同时点模型组比较,桃核承气汤组大鼠肺、心、肾组织病理形态学改变不明显;桃核承气汤12 h组大鼠肝、小肠组织病理形态学变化比较明显,两组病理形态学评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:桃核承气汤对CLP脓毒症大鼠肝、小肠组织具有保护作用,其作用机制尚待进一步研究。

    作者:杨荣源;王大伟;李际强;刘云涛;黄宏强 刊期: 2013年第09期

  • 多指标正交试验优选体外模拟草酸钙结石模型佳条件

    目的:选取晶体生长速率和(COM和聚集体量)/总晶体量比例为评价指标,优化体外模拟草酸钙结石模型条件。方法:采用琼脂凝胶双向扩散法,选取琼脂凝胶浓度、培养温度、培养时间、氯化钙和草酸钠配比4个因素进行正交试验,通过光学显微镜定时观察对草酸钙晶体晶型的生成,优选出佳体外草酸钙结晶形成的条件。结果:随着培养时间的延长,不同浓度琼脂凝胶均呈现一定比例的一水草酸钙(COM)、二水草酸钙(COD)、三水草酸钙(COT)及聚集体,其中以1%琼脂浓度下的聚集速率快且易形成COM;培养温度在37℃时利于COM的成核、生长以及聚集;0.1/0.2 mol·L-1氯化钙/草酸钠,在37℃下培养3天,生成的COM及聚集体比例大,达总晶体量90%以上。结论:pH7.4、1%琼脂及0.1/0.2 mol·L-1氯化钙/草酸钠的琼脂凝胶研究系统在37℃下培养3天,为复制以COM为主的体外草酸钙结石模型佳条件。

    作者:曾春晖;杨柯;李先梅;谭娥玉;蔡妮娜;徐明光 刊期: 2013年第09期

  • 中西药复方蛇脂清癣软膏抗真菌及抗炎作用研究

    目的:研究中西药复方蛇脂清癣软膏对真菌感染动物的治疗作用及抗炎作用。方法:采用红色毛癣菌和羊毛状小孢子菌感染的豚鼠模型,观察硝酸咪康唑与蛇油、苦参等中药合用制成的蛇脂清癣软膏(SZQX软膏)经皮肤给药后的抗真菌感染作用;并同时观察其对巴豆油所致小鼠耳肿胀、角叉菜胶诱发大鼠足肿胀的影响。结果:SZQX软膏对红色毛癣菌和羊毛状小孢子菌分别感染的豚鼠有保护作用,可明显降低感染豚鼠局部皮损的镜检评分(P<0.01),效果优于中西药单独运用;SZQX软膏还能显著减轻巴豆油致小鼠耳肿胀程度、减轻角叉菜胶诱发的大鼠足肿胀程度(P<0.05或P<0.01),具有明显的抗炎作用,且优于中、西药单独运用。结论:SZQX软膏具有明显的抗真菌感染及抗炎作用。

    作者:曹亮;陶晓倩;李娜;丁为现;丁岗;萧伟 刊期: 2013年第09期

世界科学技术-中医药现代化杂志

世界科学技术-中医药现代化杂志

主管:世界科学技术-中药现代化

主办:中国科学院