学术投稿

猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠神经前体细胞株的构建

高峰;田玉科;杨辉;安珂;张传汉

关键词:猴病毒40, 抗原, 多瘤病毒转化, 干细胞
摘要:目的建立猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)永生化大鼠神经前体细胞株,为细胞移植治疗和转基因治疗提供稳定的细胞来源.方法利用脂质体介导的基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代培养的新生大鼠神经前体细胞,经嘌呤霉素筛选,阳性克隆扩大培养并连续传代.应用巢蛋白抗体进行细胞鉴定,5%胎牛血清诱导细胞分化后,应用免疫细胞化学法检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制细胞生长曲线.用RT-PCR、Southern印迹杂交和免疫细胞化学法检测SV40Tag在转染细胞中的表达.结果转染细胞经筛选培养后获得1个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示细胞的巢蛋白和微管相关蛋白2染色为阳性,增殖能力较强.5%胎牛血清可诱导转染细胞分化为微管相关蛋白2阳性和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞.Southern印迹杂交结果显示转染细胞基因组中存在SV40Tag cDNA,并可检测到SV40Tag mRNA及其蛋白的表达.转染细胞经扩大培养,命名为永生化神经前体细胞.贴壁培养的神经前体细胞,群体倍增时间为(22.9±2.7)h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响.结论成功地构建了SV40Tag永生化的大鼠神经前体细胞株.
中华麻醉学杂志相关文献
  • 论著摘要应符合本刊要求

    作者: 刊期: 2005年第08期

  • 计量资料中有效数字的确定

    作者: 刊期: 2005年第08期

  • 等容量血液稀释对犬异丙酚药代动力学的影响

    目的观察等容量血液稀释对犬异丙酚药代动力学的影响.方法13只雄性犬随机分为对照组(n=7)与等容量血液稀释组(n=6).静脉注射地西泮0.5 mg/kg、氯胺酮5mg/kg麻醉后,股静脉与股动脉穿刺,乳酸钠林格氏液5~7ml·kg-1·h-1持续静脉滴注.麻醉后0.5 h等容量血液稀释组由股动脉放血,同时经股静脉1:1快速输入6%羟乙基淀粉,直至红细胞压积达25%.两组持续恒速静脉输注异丙酚10mg·kg-13·h-130 min,分别于输注2、5、10、15、20、30、31、32、35、40、50、70、90、120、150、180、240、300 min采动脉血,测定异丙酚血浆浓度并计算药代动力学参数.一周后两组均根据各自药代动力学参数靶控输注异丙酚60 min,分别于靶控输注5、15、30、45、60 min测定两组异丙酚血浆浓度、游离浓度、脑脊液浓度及脑组织含量.结果与对照组比较,恒速给药时等容量血液稀释组异丙酚血浆浓度降低,中央室分布容积、稳态分布容积与全身清除率均升高(P<0.05或0.01);靶控输注时两组异丙酚血浆浓度与血浆靶浓度一致,但等容量血液稀释组异丙酚游离药物浓度、脑脊液浓度、脑组织含量及脑/血浆分配系数升高(P<0.05),脑/血浆分配系数与游离药物百分比[异丙酚游离浓度/(异丙酚游离浓度+异丙酚血浆浓度)]呈正相关(r=0.87,P<0.05).结论等容血液稀释提高了异丙酚中央室分布容积、稳态分布容积和全身清除率,降低了分布项系数和浓度-时间曲线下面积,中枢药物浓度升高,可能导致药效增强.

    作者:曹晖;蒋豪;缪长虹;张鸿;薛张纲 刊期: 2005年第08期

  • 羟乙基淀粉急性高容量血液稀释对兔肾缺血再灌注损伤的影响

    缺血再灌注损伤是导致缺血性急性肾功能衰竭的重要环节,也是肾移植手术中影响移植肾早期功能恢复的主要因素.200/0.5中分子羟乙基淀粉(HES)溶液扩容半衰期长,可快速补充血容量,维持血液动力学稳定,改善血液流变学及微循环[1,2];HES还可抑制白细胞产生抗炎作用[3-5].有关HES急性高容量血液稀释对肾缺血再灌注损伤的影响有待进一步研究.本研究拟评价HES急性高容量血液稀释对肾缺血再灌注损伤是否有保护作用,为临床提供参考.

    作者:贺永进;贾慧群;宋予贤;杜洪印 刊期: 2005年第08期

  • 腹式子宫切除术后甲磺酸罗哌卡因与盐酸罗哌卡因硬膜外病人自控镇痛的比较

    目的比较腹式子宫切除术后甲磺酸罗哌卡因与盐酸罗哌卡因硬膜外病人自控镇痛(PCEA)的效果.方法44例腹式子宫切除术病人随机分为两组(n=22):对照组应用0.75%盐酸罗哌卡因连续硬膜外麻醉,术后应用0.2%盐酸罗哌卡因作PCEA;试验组应用0.894%甲磺酸罗哌卡因连续硬膜外麻醉,术后应用0.237%甲磺酸罗哌卡因作PCEA.采用视觉模拟评分法(VAS)评价病人静卧时与咳嗽时的疼痛程度,以修正的Bromage评分法评价病人运动阻滞程度,记录镇痛质量、PCEA情况和不良反应发生情况.结果两组病人术后VAS评分、镇痛质量、运动阻滞程度及不良反应的发生率比较差异无统计学意义(P>0.05),试验组镇痛泵有效按压次数少于对照组(P<0.05),除PCEA开始~4 h外,试验组病人其余时间段用药量均少于对照组(P<0.05).结论0.237%甲磺酸罗哌卡因可用于腹式子宫切除术后PCEA,其镇痛效果和安全性与0.2%盐酸罗哌卡因相似.

    作者:朱波;徐建青;叶铁虎;任洪智;黄宇光;罗爱伦 刊期: 2005年第08期

  • 食管超声多普勒监测指导非体外循环冠脉搭桥术病人容量治疗的可行性

    非体外循环(CPB)冠脉搭桥术(OPCAB)中,进行大血管操作时常发生血液动力学的波动[1].动物实验表明增加心脏的前负荷可以减轻心脏移位时血液动力学的变化[2],而对于临床上如何在OPCAB中维持适当前负荷尚需进一步研究.食管超声多普勒监测仪可以根据降主动脉血流波形,实时监测心排血量的变化,并反映心脏前负荷的水平[3].本研究拟探讨食管超声多普勒监测指导OPCAB病人容量治疗的可行性.

    作者:潘志浩;姜桢 刊期: 2005年第08期

  • 上肢手术患者不同腋路臂丛神经阻滞的效果

    腋路臂丛神经阻滞定位简单,能为前臂和手部手术提供完善的神经阻滞,但麻醉后发生的神经功能暂时性障碍在临床上不容忽视.不同的神经阻滞技术与阻滞效果及并发症发生率有关.外周神经刺激器定位已广泛用于腋路臂丛神经阻滞中,然而其阻滞效果尚需进一步探讨.本研究拟比较上肢手术患者三种腋路臂丛神经阻滞的效果,为临床提供参考.

    作者:徐桂茹;李斌;鲁毅军;韩力 刊期: 2005年第08期

  • 不同浓度人参皂甙对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

    人参皂甙具有细胞膜稳定性和抗炎作用[1],能改善急性心肌缺血所致的心脏舒张功能低于[2].而人参皂甙的对心肌缺血再灌注损伤的影响仍不明确,本研究拟观察不同浓度人参皂甙预处理和后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制,为临床应用提供参考.

    作者:李敬远;朱珊珊;曾因明 刊期: 2005年第08期

  • 异丙酚镇静对硬膜外麻醉患者大脑皮层不同区域的作用及对记忆的影响

    目的探讨异丙酚镇静对硬膜外麻醉患者大脑皮层不同区域的作用及对记忆的影响,分析内隐记忆消失时的脑电非线性参数近似熵界值.方法10例择期行腹部或下肢手术患者,采用硬膜外麻醉,术中持续输注异丙酚镇静,输注速率为6 mg·kg-1·h-1,监测异丙酚给药前后近似熵及近似熵脑电非线性地形图.应用分离加工测试方法,调查内隐记忆和外显记忆的成绩.常规监测血液动力学参数.结果与入室后相比,镇静后近似熵降低(P<0.05).与镇静前相比,镇静后外显记忆和内隐记忆成绩均下降(P<0.05).内隐记忆消失时数近似熵为0.55.通过近似熵脑电非线性地形图动态观察发现,异丙酚对大脑皮层各区域抑制顺序是:顶叶区、枕叶区→额叶区、颞叶区→全脑皮层;各脑区恢复顺序是:额叶区和颞叶区→顶叶区和枕叶区→全脑皮层.结论硬膜外麻醉患者应用异丙酚镇静,近似熵低于0.55时,内隐记忆消失.异丙酚对大脑皮层各区域的抑制和恢复有一定的规律.

    作者:贾宝森;吴东宇;张宏 刊期: 2005年第08期

  • 关于中华医学会系列杂志编排格式的补充通知

    作者: 刊期: 2005年第08期

  • 心脏瓣膜置换术中应用乌司他丁患者围术期粘附分子的变化

    目的评价心脏瓣膜置换术中应用乌司他丁患者围术期粘附分子的变化.方法体外循环(CPB)下择期行心脏瓣膜置换术患者26例,随机分为乌司他丁组(U组)和对照组(C组),每组13例.U组乌司他丁剂量1.2万U·kg-1,于麻醉诱导后至劈胸骨前静脉注射半量,另半量加入预充液中经CPB机转入体内.C组用等量复方氯化钠液代替.分别于诱导后切皮前(T1)、转流20 min(T2)、主动脉开放30min(T3)、术后4 h(T4)及24 h(T5)抽取动脉血,测定血浆肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)的活性、肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的浓度、血浆可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及可溶性P选择素(sP-Selectin)的浓度.记录心脏复跳情况.结果与T1相比,两组CK、CK-MB、cTnI及sICAM-1、sP-Selectin水平T3~5时升高(P<0.05).与C组比较,U组CK、CK-MB水平T5时、cTnI浓度T3~5时及sICAM-1、sP-Selectin水平T4、5时降低(P<0.05).U组心脏自动复跳率明显高于C组(P<0.05).结论心脏瓣膜置换术中应用乌司他丁通过降低粘附分子的表达,对心肌产生一定程度的保护作用.

    作者:李利文;李李;常业恬;何小京;沈金美;周建美 刊期: 2005年第08期

  • 高氧液对兔光气中毒性肺损伤的治疗作用

    光气是一种强氧化性窒息性毒剂,广泛应用于化学工业和化学武器,也作为重要的刺激性军用毒剂应用于战争和恐怖活动.目前,光气中毒损伤的机制及治疗仍在探索中,尚无有效的治疗措施.高氧液通过对基液(平衡液或葡萄糖液)溶氧活化处理,使高氧液含有高浓度溶解氧,具有高氧分压(80~100 kPa),经过紫外线辐射充氧后,其含有一定浓度的活性氧(O3),静脉注射后能增加机体组织氧供,提高氧的利用,改善微循环,纠正缺氧[1].O3还能提高红细胞变形能力,降低血小板凝聚力,增加纤维蛋白溶解度,有利于改善血液流变学指标,而且能调节细胞钙离子浓度,对器官缺血损伤有一定防治作用[2],细胞外给予O3可提高细胞的抗氧化能力,减弱氧自由基对肺的损伤[3].本研究拟观察静脉输注不同剂量高氧液对兔光气中毒性肺损伤的治疗作用及其机理,为光气中毒治疗的给氧途径提供参考.

    作者:王玲;唐时荣;徐礼鲜;海春旭 刊期: 2005年第08期

  • 手术患者0.894%甲磺酸罗哌卡因与0.75%盐酸罗哌卡因硬膜外麻醉的效果

    盐酸罗哌卡因是一种长效局部麻醉药,是纯S-对映体局麻药[1].与布比卡因相比,其中枢神经系统及心脏毒性较小[2],因此盐酸罗哌卡因是一种较理想的硬膜外局麻药[3-6].甲磺酸罗哌卡因是一种国产新型酰胺类局麻药,在化学结构上将盐酸罗哌卡因的盐酸根改为甲磺酸根,但其硬膜外麻醉的效果尚需进一步探讨.本研究拟采用多中心临床双盲随机对照试验方案,比较手术患者甲磺酸罗哌卡因与盐酸罗哌卡因硬膜外麻醉的效果.

    作者:徐建青;朱波;叶铁虎;吴新民;秦翔;王庚;许幸;于布为;李一亮;周静芳;王玉萍 刊期: 2005年第08期

  • 致本刊作者

    作者: 刊期: 2005年第08期

  • 低浓度利多卡因对大鼠海马CA1区缺氧神经元持续钠电流的影响

    目的观察低浓度利多卡因对大鼠海马CA1区缺氧神经元持续钠电流的影响,探讨其对缺血脑损伤保护作用的机制.方法酶消化法急性分离SD大鼠海马CA1区锥体细胞,随机分为7组(n=10):缺氧组(C组)、利多卡因1 μmol·L-1组(L1组)、3μmol·L-1组(L2组)、6μmol·L-1组(L3组)、10μmol·L-1组(L4组)、20μmol·L-1组(L5组)、30 μmol·L-1组(L6组).以全细胞膜片钳技术记录各组缺氧前持续钠电流的基础值后,C组以无糖缺氧灌流液、L1~6组以含有不同浓度利多卡因的无糖缺氧灌流液在20 s内快速置换灌流液,建立体外神经元缺氧模型.记录缺氧5min时各组神经元的持续钠电流.结果与基础值比较,各组神经元在缺氧5 min时持续钠电流均增大(P<0.01).在缺氧5 min时,L1~6组持续钠电流均低于C组,L2~6组均低于L1组,L3~6组均低于L2组,L4~6组均低于L3组(P<0.01).结论低浓度利多卡因能抑制大鼠海马CA1区神经元缺氧引起的持续钠电流增加,该作用在10μmol·L-1时达到大.

    作者:张一;杨伊林;焦志华;王士雷;周岱;庄心良 刊期: 2005年第08期

  • 不同血浆代用品高容血液稀释对病人循环和凝血功能的影响

    高容血液稀释(AHH)可维持正常的血浆胶体渗透压和扩充血容量,并可改善微循环的血流,但血容量的增加是否引起机体循环及凝血功能的异常改变尚需进一步探讨,本研究拟评价不同血浆代用品AHH对病人循环和凝血功能的影响,为临床应用提供参考.

    作者:徐雪;金海龙;赵砚丽;程会平;杨宾侠;王保国 刊期: 2005年第08期

  • 纳洛酮对心肺复苏犬血液动力学和心肌能量代谢的影响

    心跳呼吸骤停时,β-内啡肽(β-EP)大量释放,导致细胞代谢损伤,使心肺脑复苏难以成功[1,2],而作为阿片受体拮抗剂的纳洛酮可以逆转其作用,改善缺血后心、肺、脑组织的损害.纳洛酮通过抑制脂质过氧化、稳定细胞膜、改善能量代谢从而减轻心脏骤停后的缺血性脑损害[3].但维持循环功能稳定是脑复苏的基础,为此本实验拟通过观察纳洛酮对栽犬心肺复苏(CRP)后心肌能量代谢及血液动力学的影响,进一步探讨纳洛酮在CRP中的应用价值.

    作者:高鸿;安裕文;方开云;王竹梅;曾祥刚 刊期: 2005年第08期

  • 老年病人麻醉前肌肉注射咪达唑仑的安全剂量

    老年手术病人多合并有高血压、心脏病、糖尿病等,术前上述病症虽得到控制,但因术前精神紧张、焦虑不安可致血压增高、心率(HR)加快等,因此有必要应用具有较强抗焦虑、镇静作用而对心血管功能影响小的术前药.肌肉注射0.06~0.07 mg/kg咪达唑仑作为成人术前用药,能产生满意的镇静、抗焦虑和顺行性遗忘作用[1,2].但以咪达唑仑作为老年病人术前用药的剂量尚未定论.本研究拟探讨咪达唑仑肌肉注射用于老年病人术前用药的安全剂量,为临床应用提供参考.

    作者:刘雅;路红梅;曹瑞旗;黄立宁;董振明;张达仁 刊期: 2005年第08期

  • 本刊对统计学符号及统计学方法的要求

    作者: 刊期: 2005年第08期

  • 单心室镜面右位心子宫切除手术麻醉处理一例

    患者,女性,36岁,身高160 cm,体重46kg,无手术、外伤史,主诉右下腹痛1年,B超发现盆腔肿物后5 d入院.查体:口唇紫绀,杵状指,颈静脉无怒张,右侧胸壁下部隆起,心尖搏动位于胸骨右缘,可触及震颤,胸骨右缘第2~4肋间可闻及Ⅲ级收缩期吹风样杂音,两肺呼吸音清,双下肢无水肿,胸片示:心脏复杂畸形,镜面右位心;心电图示:左房心律;右房、右室扩大;心脏超声示:复杂先心病(右位心,单心室,大动脉转位,房间隔缺损25 mm,肺动脉狭窄,右房69 mm).

    作者:刘林力;梁治;高金贵 刊期: 2005年第08期

中华麻醉学杂志

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