胡勇；邵肖梅；张旭东
目的 检测苏州地区2006年临床分离的儿童肺炎链球菌对常用抗生素的耐药情况.方法 从新人院患儿鼻咽部采集标本,经实验室分离,并采用奥普托欣和(或)去氧胆酸钠鉴定为肺炎链球菌后,采用纸片扩散法(Kir-by-Bauer法)和E-test法对分离到的89株肺炎链球菌进行抗生素的敏感性试验.结果 89株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株47株,为52.8%,红霉素、四环素、克林霉素、复方新诺明和氯霉素的耐药率分别为88.8%,78.7%,86.5%,55.1%和10.1%,多重耐药率为89.9%.对万古霉素,氧氟沙星100%敏感.结论 苏州地区儿童肺炎链球菌的耐药情况严峻,本研究结果对肺炎链球菌感染的治疗和抗菌药物的选择具有参考价值.
作者：张涛；赵根明；陶云珍；陈蓉；诸丽娟；林玉尊；丁云芳；郝创利 刊期： 2008年第03期
目的 建立测定小鼠肝脏药物浓度的HPLC法,比较凝胶化法制备的壳聚糖-聚天冬氨酸-5-氟尿嘧啶(CTS-Pasp-5-FU)纳米粒与5一氟尿嘧啶原药在小鼠肝脏中药物浓度.方法 雄性健康昆明小鼠(KW)分为2组,分别灌胃给予5-FU原药及其CTS-Pasp纳米粒,灌胃后0.25、1、2、4、6、8、12、16、24和48 h 10个时间点取小鼠肝脏,匀浆液用乙酸乙脂提取,氮气挥干,残渣用甲醇溶解后进样,HPLC法测定2组给药组肝脏内药物浓度.结果 5-FU原药组在肝脏中的药物峰浓度出现在灌胃后2 h左右.此后肝脏药物浓度逐渐降低,CTS-Pasp-5FU纳米粒组经小鼠灌胃后,肝脏药物浓度呈现出三峰型,在0.25 h即达到一个药物峰浓度,此后峰浓度分别出现在4 h和16 h左右,16 h时候达到高峰,此后逐渐下降,CS-Pasp-5FU纳米粒的肝脏中药物峰浓度(Cmax)降低,肝脏中药物浓度时间曲线下面积(AUC)明显增加.结论 CS-Pasp-5FU纳米粒能延缓5-FU在肝脏内的分布.
作者：张丹瑛；朱新宇；董玲；王吉耀；沈锡中；郑永丽 刊期： 2008年第03期
目的 研究DNA修复基因XRCC1密码子194多态性与肺癌易感性的关系,并探索其与吸烟可能的交互作用.方法 采用病例-对照研究,收集原发性肺癌患者396例为病例组,同时抽取465名当地健康居民作为对照组,进行流行病学调查.运用PCR-RFLP方法分析XRCC1基因Arg194Trp位点的多态性.应用Lo-gistic回归模型分析该位点多态性与肺癌易感性的关系.结果 等位基因Arg和Trp在病例组的频率分别为69.82%和30.18%,在对照组中则分别为74.30%和25.70%,两组间有显著差异(P=0.038 6).携带纯合突变基因型Trp/Trp者患肺癌的风险显著高于携带野生型Arg/Arg者,其OR值为1.72(95%CI:1.05-2.80).携带纯合型Trp/Trp的吸烟者患肺癌的风险约为携带野生型Arg/Arg的非吸烟者的7倍(OR=7.18,95%CI:3.09-16.66);是携带野生型的吸烟者的2倍(OR=2.02,95%CI:0.92-4.43).结论 DNA修复基因XRCC1密码子194的多态性可能与肺癌的易感性有关,且在吸烟者中,Trp/Trp基因型可使肺癌发病风险显著提高,提示XRCC1可能通过遗传因素及遗传因素与环境致癌因素的交互作用影响肺癌的危险性.
作者：苏佳；牛润桂；韩小友；史建平；刘力；李家伟；卫国荣；陈传炜；俞顺章；张作风；穆丽娜 刊期： 2008年第03期
目的 比较慢病毒载体和腺病毒载体转染人脐带血间充质干细胞后,外源基因的表达.方法 采用人脐带血分离培养间充质干细胞,制备表达GFP的慢病毒载体和腺病毒载体,用以转染间充质干细胞,观察其外源基因的表达.结果 脐带血间充质干细胞与骨髓中的类似,其外表呈纤维样;转染5周后,慢病毒载体转染的GFP阳性表达明显高于腺病毒载体.结论 慢病毒载体较腺病毒载体作为基因转导系统更有优势.
作者：马晓生；吕飞舟；姜建元；李小康 刊期： 2008年第03期
目的 通过制作早产儿脑白质损伤动物模型,探讨自由基在早产儿脑白质损伤发病机制中的作用及别嘌呤醇的保护作用.方法 利用新生1日龄SD大鼠32只行双侧颈总动脉结扎(BCA0)制作脑白质损伤模型,随机分为假手术组(Sham,n=8)、BCAO组(BCAO,n=12)及别嘌呤醇干预组(ALLO,n=12).BCAO后48 h检测脑白质XO、iNOS、Na+-K+-ATP酶、谷胱甘肽转移酶(GST)及·OH活力、尿酸(UA)及丙二醛(MDA)含量.结果 MDA含量(nmol/mg prot):BCAO组(2.56±0.78)较Sham组(1.36±0.23)明显升高(P<0.01),而ALLO组(1.59±0.19)较BCAO组明显降低(P<0.01).UA含量(mg/g prot):BCAO组(13.57±0.72)及ALLO组(12.34±0.21)均较Sham组(11.42±0.56)明显升高(P<0.01),而ALLO组较BCAO组明显降低(P<0.01);·OH活力(U/mg prot):与Sham组(156.0±8.07)比较,BCAO组(206.6±21.27)明显升高(P<0.01),而ALLO组(191.7±13.04)较BCAO组显著降低(P<0.05).XO及iNOS活力:BCAO组较Sham组明显升高(P<0.01),而ALLO组较BCAO组明显降低(P<0.05);Na+-K+-ATP酶活力(umol pi/mg prot/h):与Sham组(3.04±0.26)比较,BCAO组(2.30±0.37)及ALLO组(2.11±0.26)均明显降低(P<0.01),而ALLO组与BCAO组相比差异无显著性(P>0.05);GST活力(U/mg prot):与Sham组(56.75±4.22)比较,BCAO组(37.60±8.32)明显降低(P<0.01),而ALLO组(43.39±4.44)比BCAO组显著提高(P<0.05).结论 自由基在早产儿脑白质损伤中可能发挥了核心作用.别嘌呤醇对缺血引起的早产大鼠脑白质损伤具有一定的保护作用.
作者：胡勇；邵肖梅；张旭东 刊期： 2008年第03期
目的 观察高脂饲料喂养的小鼠心脏和肺组织中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric-oxide syn-thase,eNOS)及血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的含量变化,探讨高脂血症对eNOS和HO-1表达的影响.方法 高脂饮食组(n=8)和普通饮食组(n=8)C57BL/6小鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养18周后,测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipopro-tein,HDL)和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)含量,采用Real-time PCR检测心脏和肺组织中eNOS及HO-1的mRNA水平,以免疫组化方法检测其蛋白表达.结果 高脂饮食组TC、TG和LDL明显高于普通饮食组,HDL则低于普通饮食组;高脂饮食组心脏和肺组织中eNOS的mRNA和蛋白水平低于普通饮食组,HO-1的mRNA和蛋白水平高于普通饮食组.结论 高脂饲料喂养能使小鼠形成高脂血症,并引起心脏和肺组织中eNOS的表达降低,同时HO-1的表达升高.
作者：江一峰；曹晓娥；王丽；赵凤娣；殷莲华 刊期： 2008年第03期
目的 采用醛糖还原酶抑制剂(aldose reductase inhibitor,ARI)抑制醛糖还原酶(aldose reductase,AR)活性,观察其对大鼠系膜细胞(mesangical cells,MsC)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNFα)作用后表达诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthesis,iNOS)的影响,并对这一现象进行初步的机制探讨.方法 实验分为对照组、Sorbinil作用组、Zopolrestat作用组.分别采用NO测试盒检测亚硝酸盐含量;免疫荧光、Western blot检测iNOS表达;Real-time PCR检测iNOS mRNA,对比正常生长MsC及ARI(Sorbinil和Zolpor-estat)预处理的MsC在TNFα作用不同时间后上述指标的变化.分别采用非放射性标记的分光光度检测法检测转录因子NFkB p65亚基试剂盒(colorimetric nonradioactive NFkB p65 transcription factor assay kit)以及Western blot的方法对以上各组细胞进行转录因子NF-kB活性检测,及其上游通路IkB信号通路活化情况检测.结果 与正常MsC相比,TNFα可上调培养大鼠MsC中iNOS mRNA和蛋白的表达,以及NO合成水平,但此作用可以被两种ARI不同程度地抑制;抑制TNFα导致的NFxB的活化及IkBα信号通路的磷酸化,并具有一定的时间相关性.结论 AR参与调控TNFα诱导iNOS表达上调的过程,且此调控可能是通过影响转录因子NFkB的活性以及上游信号通路的活化而实现的.
作者：瞿俊杰；蒋涛；林伊凤；李慧；陈琦；张农 刊期： 2008年第03期
目的 构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达质粒,并观察其在HEK293细胞中的表达,检测目的 蛋白的生物学活性.方法 采用PCR技术,分别设计引物扩增所需序列并进行PCR鉴定.再采用分子克隆的方法,以内部核糖体进入位点(internal ribosome entry sites,IRES)序列连接CTGF和TIMP1并克隆到AAV表达质粒pSNAV2.0构建重组质粒pSNAV2-CTGF-IRESTIMP1.把重组质粒转染HEK293细胞,用双重免疫荧光和Western blot的方法对重组质粒的表达进行研究,MTT法检测细胞培养上清液中CTGF蛋白的生物学活性,ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP1蛋白的含量.结果 PCR、酶切、DNA测序等方法均证实成功构建了含有完全正确的CTGF和TIMP1基因序列的AAV表达质粒.双重免疫荧光和Western blot检测到目的 蛋白的表达,转染后的细胞上清具有促使成纤维细胞增殖的生物学活性,ELISA法结果证实重组载体能够高表达TIMP1蛋白.结论 成功构建了双表达质粒pSNAV2-CTGF-IRES-TIMP1,转染HEK293细胞后能够表达具有生物学活性的目的 蛋白,为基因治疗椎间盘退变的研究工作奠定了基础.
作者：魏见伟；王德春；胡有谷 刊期： 2008年第03期
随着对自身免疫性肝病认识的加深,近年来国内原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)和自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)的病例报道增多,发病率有增加的趋势,因此不再认为是少见的疾病.PBC和AIH在临床症状、生化指标和组织学表现方面有所不同而易于鉴别.然而,文献报道5%的AIH和19%的PBC患者存在疾病的相互重叠现象,即所谓的重叠综合征(overlap syndrome)<'[1]>.AIH-PBC重叠综合征是指在同一时间段或病程中具备PBC和AIH两种疾病的临床表现、血清学及组织学特征.目前临床对重叠综合征的研究不多,由于病例数的限制和存在明显异质性等,尚无大规模的临床随机对照研究资料,对其诊断与治疗仍是临床的难点.本文报道我院确诊的6例PBC-AIH重叠综合征病例及分析,并就近年国内外的文献报道进行复习,以加深对此病的认识.
作者：涂传涛；朱新宇；张顺财；胡锡琪；王吉耀 刊期： 2008年第03期
目的 研究基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009的低毒性和对于肿瘤细胞的靶向性.方法 将野生型沙门氏菌(对照组)和VNP20009(研究组)分别通过尾静脉注射感染正常小鼠,观察其生存期差别;将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记VNP20009,红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和GFP分别标记小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma cell,MFC)的胞质和胞核,尾静脉注射感染离体肿瘤细胞和荷瘤小鼠,以双色荧光成像的定性方法和组织匀浆细菌培养的定量方法显示细菌在离体肿瘤细胞、在体肿瘤和正常组织中的生长情况.结果 接受野生型沙门氏菌注射的对照组小鼠在注射后4 d全部死亡,而接受VNP20009注射的研究组小鼠在注射后10 d依然全部存活;VNP20009能在离体肿瘤细胞中持续增殖并引起核碎裂;在体实验中,感染后第6天,正常组织中的细菌明显减少,到第18天时几乎消失,但在肿瘤组织中依然持续增殖.细菌在肿瘤/正常组织(肝脏)中的比例在感染后第4天约为224:1,第6天为1020:1.结论 基因工程减毒的沙门氏菌VNP20009有着良好的低毒性以及肿瘤靶向性,具有作为肿瘤基因治疗载体的潜力.
作者：周易明；刘常星；邬剑华；王依婷；陈宗祜 刊期： 2008年第03期
目的 探索一个高效分离和扩增人骨髓问充质干细胞的方法,并通过形态学和多向分化能力进行鉴定.方法 抽取人胸椎骨髓标本,联合利用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs,体外扩增后传代,相差显微镜形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面标记CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR.在地塞米松、左旋Vit C、β磷酸甘油、FK506作用下向成骨细胞诱导分化;在TGF-beta 3、重组人胰岛素、丙酮酸钠、亚硒酸等作用下向软骨细胞诱导分化;在地塞米松、IBMX、吲哚美辛的作用下向脂肪细胞诱导分化;在VEGF、bFGF作用下向血管内皮细胞分化.结果 原代和传代细胞呈梭形外观,生长增殖能力良好.细胞表面标记物CD13、CD29,HLA-2阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性.经定向诱导分化后,细胞分别呈现成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞的表型特征.结论 该方法能从人骨髓中高效分离和扩增MSCs,能成功定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞.
作者：戴文达；方涛林；李熙雷；林红；董健；陈峥嵘 刊期： 2008年第03期
目的 研究类胰蛋白酶对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435侵袭力的影响及其机制.方法 通过体外细胞侵袭力试验观察不同浓度、不同时间类胰蛋白酶对乳腺癌MDA-MB-435细胞跨膜侵袭力的影响,并利用RT-PCR以及明胶酶谱法研究类胰蛋白酶对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)表达水平的调节.结果 150～500 pmol/L的类胰蛋白酶可以促进MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭;还可以促进MMP-2、TIMP-2的mRNA表达(P<0.01)和MMP-2的蛋白表达(P<0.05).结论 类胰蛋白酶可以促进人乳腺癌细胞系MDA-MB-435细胞的跨膜侵袭,该作用可能与增加MMP-2的mRNA和蛋白表达、TIMP-2的mRNA表达相关.
作者：顾漪萍；向萌；陆超；赵凤娣；李晓波；殷莲华 刊期： 2008年第03期
目的 探讨多聚物-1(copolymer-1,Cop-1)反应性T细胞对高眼压大鼠视网膜神经节细胞(retinalganglion cells,RGCs)的保护机制.方法 大鼠后肢足垫注入0.2 mg Cop-1或磷酸盐缓冲溶液(phosphate buff-ered solution,PBS)后10 d,取出腹股沟淋巴结,培养Cop-1反应性T细胞(TCop-1)或PBS对照组T细胞(TPRS),用逆转录聚合酶链反应测定γ干扰素(interferon-gamma,γ-IFN)和IL-4 mRNA的表达水平,从而分析培养的T细胞亚型;39只高眼压大鼠随机分为2组,1组(n=19)腹膜内注射TCop-1,另1组(n=20)注入TPRS作为对照,21d后观察RGCs的存活情况;用ELISA法测定T细胞上清液中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophicfactor,BDNF)的分泌量.结果 免疫后21 d,Cop-1组RGCs存活数目较PBS组多(t=8.020 4,P<0.01),TCop-1组gamma干扰素(interferon-gamma,γ-IFN)mRNA表达水平较PBS组高,而IL-4在两组间的表达差别无统计学意义.TCop-1在Cop-1刺激后脑源性神经营养因子分泌量为(3 385.42±836.33)pg/mL,单纯(TCop-1)分泌量为(1 026.24±135.10)pg/mL,而T<.PBS>分泌量为(19.87±71.20)pg/mL.前者分泌量远大于后两者(F=175.66,P均<0.01,单因素方差分析和Bonferroi法).结论 Cop-1反应性Th1细胞是发挥视神经保护作用的重要细胞,保护机制之一可能通过TCop-1在局部分泌BDNF来实现.
作者：李霞；钱韶红；孙兴怀 刊期： 2008年第03期
目的 探讨Snmd 7基因对大鼠肾小球系膜细胞(MsC)Ⅰ、Ⅲ型胶原(col工、ColⅢ)表达的影响,为试图运用Smad 7对肾纤维化进行基因治疗提供实验依据.方法 经脂质体介导将含有Smad 7重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及Northern blot、Western blot法鉴定;又分别采用RT-PCR和Western blot法,检测转染阳性MsC克隆Col Ⅰ、Col Ⅲ表达改变.结果 成功建立稳定高表达Smad 7的阳性MsC克隆(S-22与S-26),并证实两阳性MsC克隆ColⅠ及Col Ⅲ mRNA及蛋白的表达均被明显抑制,其中S-22克隆COl Ⅰ及ColⅢ mRNA表达分别降低47%和56%,其蛋白表达分别降低65%和54%.结论 Smad 7可能通过抑制组织内Col Ⅰ及Col Ⅲ的生成而起到减轻肾纤维化进展的作用.
作者：于鸿；陈琦；刘晔；赵仲华；郭慕依 刊期： 2008年第03期
宫颈妊娠是一种严重的异位妊娠,可以导致阴道大出血甚至危及生命,这也是其治疗中的一个难点.血管性介入治疗(子宫动脉栓塞术)能够安全有效地控制阴道出血,单独应用或联合其他治疗取得良好的效果,正逐渐被采用.
作者：赵文荣；杨丹 刊期： 2008年第03期
目的 探讨小鼠腹部心脏移植术的手术技巧及并发症的预防和处理.方法 雄性昆明(KM)小鼠60只,随机分供、受体2组,采用大鼠Ono术式进行小鼠腹部异位心脏移植,小鼠供体升主动脉与受体腹主动脉端侧吻合,供体肺动脉与受体下腔静脉吻合,实验30例.结果 实验成功率86.7%(26/30).取供心时间(9.4±1.2)min,供心修取时间(14.8±1.2)min,受体手术时间(60.4±2.4)min,其中吻合时间(29.8±2.5)min.结论 掌握小鼠心脏移植的显微外科技巧和正确的处理手术并发症,可以成功建立小鼠腹部心脏移植模型.
作者：彭润生；王春生；杨兆华 刊期： 2008年第03期
目的 探讨骨髓单个核细胞植入对心肌梗死后心脏功能的影响.方法 以冷冻损伤的方法建立新西兰种家兔心肌梗死模型,分为骨髓单个核细胞组(mononuclear bone marrow cells,MN-BMCs组)和对照组,各8只.4周后,MN-BMCs组中将提取分离的MN-BMCs,植入心肌梗死及其边缘区,对照组于心肌梗死及其边缘区注射相应体积的MDM完全培养液.以超声心动图分析细胞植入前后心脏功能改善情况.结果 MN-BMCs植入心肌梗死及其边缘区可以改善局部及整体心脏功能:细胞移植4周后两组之间比较,MN-BMCs组局部心脏功能明显优于对照组,表现为MN-BMCs组比对照组心肌梗死区室壁厚度增加,[(4.81±0.55)mm VS(3.94±0.54)mm,P<0.05];收缩期和舒张期心肌梗死区室壁运动速度明显增加[分别为(8.20±0.77)cm/s vs(7.00±0.56)cm/s,P<0.05;(8.51±0.93)cm/s vs(6.75±0.57)cm/s,P<0.053.细胞移植4周后,MN-BMCs组整体心脏功能亦优于对照组,表现为MN-BMCs组比对照组心腔减小,LVDD分别为(14.89±1.36)mm vs(16.24±1.31)mm(P<0.05),LVSD分别为(10.48±1.32)mm vs(12.29±1.48)mill(P<0.05);MN-BMCs组左心室收缩功能明显改善,左室射血分数及缩短分数提高,LVEF分别为(65.25±5.73)%vs(57.00±5.81)%,P<0.05;LVFS分别为(30.25±3.73)%vs(24.88±3.95)%,P<0.05.结论 骨髓单个核细胞植入心肌梗死及其边缘区可以改善心肌梗死后心脏功能.
作者：孙勇新；赵强；潘翠珍；夏利民；徐德民；陈安清；王哲 刊期： 2008年第03期
早期的动物实验表明麻黄碱相对α肾上腺素受体激动剂而言极少引起子宫胎盘血流减少,因此一直是产科麻醉首选的升压药,然而近年来的研究提示,对苯肾上腺素等α受体激动剂引起子宫胎盘血管收缩的顾虑被夸大了.麻黄碱可引起产妇心动过速,并且由于代谢兴奋作用能引起胎儿血pH和碱剩余降低,而苯肾上腺素处理脊麻后低血压更加有效且容易滴定,没有发现引起胎儿酸血症的报道.尽管在这一领域还需要进一步的研究,但目前的证据似乎提示苯肾上腺素才是更符合产科需要的升压药.
作者：黄绍强 刊期： 2008年第03期
氯普鲁卡因(Chloroprocaine,CP)经动物和临床证实,是一种起效快、效果确切、没有快速耐药、毒副反应小的短效局麻药.近国外已经证实去除防腐剂(亚硫酸盐)和稳定剂后的纯盐酸CP可安全用于硬膜外麻醉,重新燃起了业界将CP用于脊麻的兴趣.本文总结了近几年关于CP脊麻临床特点的观察,针对目前使用中存在的争议,探讨其神经毒性的相关因素及发生机制,为进一步研究CP鞘内给药安全性提供有效手段和可靠途径.
作者：解轶；黄绍强；梁伟民 刊期： 2008年第03期
目的 采用自行设计的CO2超临界流体(supercritical carbon dioxide,ScCO2)包衣设备研究肠溶包衣参数,为开发蛋白质及多肽的口服制剂提供工艺基础.方法 以载牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)颗粒为微丸核心,以EUDRAGIT L100-55作为pH敏感的肠溶包衣材料,采用正交表研究压力、温度、增塑剂和包衣持续时间等不同的工艺参数组合,并考察肠溶包衣微丸的形态学和体外释放特性,以选择优的二氧化碳超临界流体包衣工艺.结果 压力为20 Mpa、温度为35℃、使用40%增塑剂的条件下包衣30min,所得BSA微丸在模拟胃液中释放量小于5%,在模拟肠液中迅速释放,符合肠溶包衣的要求.结论 得到了通过ScCO2制备肠溶微丸的优参数组合,为二氧化碳超临界流体包衣的进一步研究提供了基础.
作者：肖菊香；马晓文；莫炜；宋后燕 刊期： 2008年第03期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
