张亮；陈统一；陈中伟
目的构建体外错配修复(mismatch repair,MMR)功能分析模型,应用于人类结直肠癌细胞株及肿瘤组织,分析其整体的MMR功能状态;并与微卫星稳定性(microsatellite stability,MSS)检测结果比较,评价这两种检测方法在结直肠癌基础研究和临床诊断治疗中的价值.方法以噬菌体M13mp2为材料,以lacZα为报告基因,构建含有单碱基错配及双碱基缺失的异源双链DNA分子;以其为待修复模板和细胞株TK6(作为MMR功能完整表型)共同组成体外MMR功能分析模型.提取结肠癌细胞株Lovo及1例遗传性非腺瘤病性结直肠癌(hereditary non-polyposis colorectal cancer,HNPCC),1例散发性直肠癌(sporadic rectal cancer,SRC)肿瘤组织的总蛋白,经大T抗原依赖性SV-40 DNA复制证实其生物学活性保持良好后与构建成功的异源双链DNA共同作用,通过作用前后噬斑的变化,计算修复效率,从而了解其错配修复系统功能状态.采用国际FHNPCC合作小组推荐的5个位点分析细胞及病人正常及肿瘤组织的微卫星稳定性.结果TK6细胞株微卫星稳定,对双碱基缺失del(2)的修复效率超过60%,对单碱基错配G·G的修复效率超过50%;而Lovo细胞株微卫星不稳,对双碱基缺失del(2)的修复效率低于20%,对单碱基错配G·G的修复效率低于10%.1例HNPCC病人肿瘤组织的修复效率与Lovo相比差异无显著性,其MMR功能丧失,其微卫星高度不稳(MSI-H).1例散发性直肠癌病人肿瘤组织修复效率与Lovo相比差异有显著性,仍具有MMR功能,其微卫星稳定(MSS).结论体外错配修复功能分析模型可以直接评价待测样本MMR系统的功能状态,敏感性高,结果可靠,对家族史不明确的结直肠癌病人的诊断和分类具有重要的意义;但操作复杂,费时较长.微卫星检测结果与功能分析相吻合,说明国际合作组织推荐的5个位点具有良好的检测敏感性,且技术成熟,方便快捷,适用于临床诊断与治疗.两者协同作用,对结直肠癌发病机制的研究,分类标准的制定并指导临床诊断和治疗都有深远的意义.
作者：王怡；Clark Alan；王家训；孙孟红；施达仁 刊期： 2004年第03期
目的探讨自固化磷酸钙人工骨(autosetting calcium phosphate cement,ACPC)椎体成形术对椎体生物力学性能的影响.方法自8具尸体脊柱标本上取胸腰段椎体共24节,在前屈压缩下造成骨折,随机分成4组,分别经双侧椎弓根注入椎体2、4、6和8 mL ACPC,再行前屈压缩.测定初始和术后椎体抗压强度和刚度,观察实验过程中椎体高度变化.结果经双侧椎弓根注入椎体2 mL ACPC就能显著性增强椎体抗压强度,同时刚度无明显变化.实验虽能在一定程度上恢复椎体高度,但从临床角度看无重要意义.结论合理选择灌注剂量既能显著恢复椎体的生物力学性能,又可以减少灌注剂渗漏.椎体成形术对压缩骨折后的椎体高度恢复作用不大.
作者：张亮；陈统一；陈中伟 刊期： 2004年第03期
目的探讨银汞合金对口腔内科医务人员肾功能指标的影响.方法以有银汞合金接触史的口腔内科医务人员为暴露组,同地区综合医院中无汞、银汞合金接触史的医务人员为对照组;选择尿汞浓度、尿白蛋白、β2-微球蛋白、NAG为指标,观察各指标在慢性汞接触中的差异.结果两组的尿汞浓度和尿白蛋白无显著性差异;暴露组尿中β2-微球蛋白和NAG的排泄量显著高于对照组,但都未超过正常值上限.结论银汞合金对口腔内科医务人员的肾功能指标无明显影响,但仍需加强对这一人群的监测.
作者：徐培成；许缃；朱霖；薛毅凯；叶细标；傅华 刊期： 2004年第03期
将我们近年通过病理学或影像学、胸液生化及临床抗痨治疗证实为结核性胸膜炎的48例胸腔积液患者行经皮穿刺细针胸膜活检(以下简称胸膜活检)的结果分析如下,并就胸膜活检对结核性胸膜炎的诊断价值作初步探讨.
作者：徐峰；夏靖燕；沈华浩；徐志豪；刘进 刊期： 2004年第03期
主动脉夹层分离是由于主动脉的血液经动脉内膜撕裂口进入主动脉中膜(多见于左锁骨下动脉远端的降主动脉),并沿主动脉长轴方向扩展,从而造成主动脉真假两腔分离的一种病理状态.由于夹层的存在可以导致动脉瘤样扩张、动脉壁破裂及重要脏器和肢体缺血等严重并发症,因此是一种严重危及生命的血管外科疾病.国外报道每年约有50～100/10万的发病率,是胸腹主动脉瘤破裂发生率的2倍[1].对于急性A型主动脉夹层分离的治疗,早期手术已成为国际公认的佳方案;而对于B型主动脉夹层分离,由于传统手术治疗死亡率高,术后并发症多,故在治疗选择上仍有一定争议.1991年,Parodi等[2]首先成功地将腔内人造血管支架技术运用于腹主动脉瘤的治疗,随后1995年Farm等[3]提出该项技术同样也可应用于治疗B型主动脉夹层分离.尤其近年来随着食管内超声(TEE)、螺旋CT血管三维重建(SCTA)、核磁共振成像(MRI)、血管内数字减影成像(DSA)等技术的日臻成熟,主动脉夹层分离的腔内治疗正日益成为一种更加安全、有效、经济的新方法.
作者：竺挺；符伟国 刊期： 2004年第03期
目的研究反义Toll样受体4(TLR4)表达质粒对体外内毒素刺激小鼠巨噬细胞的作用.方法反义TLR4表达质粒的构建,及转染入巨噬细胞株RAW 264.7.在不同时间用不同浓度的内毒素刺激转染细胞及对照组细胞.用半定量RT-PCR技术检测TLR4 mRNA的变化,ELISA方法检测TNF-α水平的变化.结果转染细胞的TLR4 mRNA水平低于对照组细胞.在体外用不同浓度内毒素及不同时间刺激的两组细胞TNF-α水平低于对照组细胞.结论反义TLR4表达质粒能够下调体外细胞TLR4 mRNA的表达,降低细胞因子TNF-α的分泌.
作者：李峻；曹中伟；张顺财；周康 刊期： 2004年第03期
目的探讨70岁以上喉癌患者手术的可行性及围手术期处理.方法对174例70岁以上喉癌患者手术治疗进行回顾性分析.结果153例术前有合并症(87.9%),以心血管系统疾患多(66.1%),其次为呼吸系统疾患(39.1%).全喉切除115例,喉部分切除11例,颈淋巴廓清术48例.无手术意外及死亡.术后并发症42例(21.4%).结论高龄不是喉癌手术禁忌,但应重视围手术期处理.
作者：周蔚；吴海涛 刊期： 2004年第03期
目的探索大容量诱导慢性髓性白血病(CML)细胞来源的树突状细胞(DCs)的适宜方法;研究CMLDCs刺激自体T淋巴细胞增殖并分泌γ-干扰素(IFN-γ)的能力.方法用CS-3000 plus血细胞分离机采集初诊CML病人的外周血单个核细胞(PBMNCs);单采的CML-PBMNCS转入组织培养袋,加入重组人粒-巨细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4[rhIL-4),培养诱导7 d;在诱导前后,用流式细胞仪分别检测细胞表面HLA-DR、CD1a、CD80和CD86的表达水平;用3H-TdR掺入法检测CML-DCs和CML-PBMNCs刺激自体和异体T细胞增殖的能力;用ELISA法检测在自体混合淋巴细胞培养(MLR)时T细胞分泌的IFN-γ浓度.结果用血细胞分离机收集的CML-PBMNCs,在组织培养袋内经细胞因子培养诱导,HLA-DR、CD1a、CD80、CD86的表达均有明显上调,细胞形态也表现典型的DC特征;CML-DCs能显著刺激自体和异体T细胞增殖,而CML-PBM-NCs仅能刺激异体T细胞的增殖,刺激自体T细胞增殖的能力很弱;刺激自体T细胞增殖时分泌的IFN-γ浓度,CML-DCs组为(877±214)pg/mL;CML-BPMNCs组仅为(14±1.7)pg/mL.结论单采的CML-PBMNCs 转入组织培养袋,加入rhGM-CSF和rhIL-4,可收获大容量的CML-DCs;CML-DCs在体外具有显著刺激自体T细胞增殖和促进IFN-γ分泌的作用.为进一步在临床应用CML-DCs进行免疫治疗白血病提供了可能.
作者：陈勤奋；谢彦晖；陈彤；戴振声；谢弘；谢毅 刊期： 2004年第03期
目的探讨FHIT基因蛋白(Fhit)表达情况与乳腺癌发生发展的关系.方法用免疫组化法检测了61例乳腺浸润癌,43例导管内癌及上皮不典型增生,37例导管上皮增生和42例正常乳腺上皮Fhit表达水平.结果90.5%正常乳腺上皮Fhit表达为强阳性,有49.2%乳腺癌Fhit表达阴性或明显降低,另有32.8%中度降低(P＜0.001);在乳腺上皮增生发展为癌的过程中,Fhit表达水平逐渐降低(P＜0.05);有异常p53蛋白表达的乳腺癌,其Fhit低表达率明显高于无异常p53蛋白表达者(P＜0.05).结论实验结果提示Fhit表达降低可能对乳腺癌的演化和进展具有一定重要作用,Fhit低表达可能与p53基因异常相关.
作者：唐峰；顾栋桦；王虹；赵为之；李薇；李琼；许祖德；朱虹光；胡锡琪 刊期： 2004年第03期
目的构建融合蛋白PTD-Calbindin D28K(CaBP28)的表达质粒,并进行诱导表达、纯化,在体外初步鉴定其跨膜转运功能.方法提取大鼠脑组织总RNA,反转录后用聚合酶链反应(PCR)法扩增编码CaBP28的全长cDNA序列,重组入pET-32a及含有PTD的pTransVector表达载体中,测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),构建重组体的表达菌株.IPTG诱导表达后,以NTA-Ni亲和层析柱进行分离纯化,SDS-PAGE以及Western blot鉴定.纯化的CaBP28及PTD-CaBP28用FITC标记,分别以一定的浓度孵育体外培养的cos7细胞,后荧光显微镜下观察两者在细胞中的分布情况,并用流式细胞仪(FCM)做定量分析.结果成功地构建了含有及不含有PTD的CaBP28表达载体,插入片断783 bp,表达产物相对分子质量分别约30 000、50 000,经Wetern blot鉴定,与抗CaBPD28K抗体均有特异性反应.孵育培养的cos7细胞后,CaBP28-FITC仅少量吸附于细胞膜表面,而PTD-CaBP28-FITC则分布于胞质内;FCM定量分析发现,细胞荧光强度随着目的蛋白的孵育浓度或孵育时间增加而增加,并且孵育时间为1 h时荧光达到强.结论重组PTD-CaBP28具有良好的细胞穿膜功能.
作者：樊永峰；吕传真；乔健；任惠民 刊期： 2004年第03期
目的探讨神经肌电技术在坐骨神经损伤的术中应用价值.方法对24例患者共24根腓总神经和19根胫神经损伤进行术中电生理功能评价,研究与术前电生理诊断间差异,并作预后随访分析.结果术中与术前的电生理诊断结果间存在差异.术中损伤近端存在复合肌肉动作电位(compound muscle action potential,CMAP)和远端存在躯体感觉诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)的损伤神经总体恢复较好.手术前后比较,胫神经预后较腓总神经好.结论术中神经电生理检测能完善术前对神经受损程度的诊断,术中能检测到SEP和CMAP的损伤神经,术后能达到较好的恢复.
作者：张秉文；俞永林；张凯莉；顾玉东 刊期： 2004年第03期
目的分析颈总动脉内膜-中层厚度(IMT)增厚的危险因素.方法心内科的住院病人142例,分别以高频超声检测其IMT,并以IMT≤1.0 mm或＞1.0 mm分成正常IMT和IMT增厚两组.血液生化指标检查包括:三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、空腹血糖(FBG)、尿酸(UA)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等;所有病人均做CPn-IgG检测.分别以单因素和多因素分析对以上因素及糖尿病、血脂代谢紊乱、高血压、吸烟、年龄与IMT的关系.结果以IMT增厚与否进行分组,两组间年龄[(52.3±10.5)对(64.1±7.7)岁;t=7.568,P＜0.001]、收缩压[(18.17±3.03)对(19.44±3.00)kPa;t=2.412,P=0.017]、BUN[(5.56±1.74)对(6.28±1.65)mmol/L;t=2.394,P=0.018]、UA[(321.2±82.7)对(356.3±86.7)mmol/L;t=2.386,P=0.018]、LDL[(2.543±0.806)对(2.967±1.163)mmol/L;t=2.296,P=0.024]有差异;两组间CPn-IgG阳性率略有差别,但差异无统计学意义(46.1%对60.4%;x2=2.723,P=0.099);其余包括吸烟史、舒张压及各项生化指标两组间差异均无统计学意义.多因素逐步回归分析发现,年龄和LDL是IMT增厚的独立危险因素,相对危险度为1.132(95%可信区间1.079～1.188)和1.618(95%可信区间1.054～2.482).结论IMT增厚的主要危险因素是年龄、LDL;其他相关因素包括血尿酸、血尿素氮等;CPn感染在其中有一定的作用,但并非主要的作用.
作者：龚辉；王卫群；范维琥；王亚芬 刊期： 2004年第03期
目的计算配对符号秩检验的确切概率.方法构造多项式,使其系数和配对符号秩检验的符号秩和相对应;同时采用递推公式计算多项式任意项的系数,后用Stata程序实现算法.结果通过实例应用表明,构造的多项式及递推算法能够反映配对符号秩检验的秩和分布,其累计频率就是秩和对应的P值.结论应用本方法可以计算配对符号秩检验的确切概率.和传统的方法相比,本方法得到的P值更加准确.
作者：罗剑锋；赵耐青 刊期： 2004年第03期
目的观察5-氟尿嘧啶(5-FU)缓释剂瘤内植入对胰腺癌患者血清肿瘤标记物和细胞免疫的影响,评估其临床疗效.方法2000年1月至2003年2月经手术探查不能切除之胰腺癌69例随机分成3组.5-FU缓释剂瘤内植入治疗组:手术中在胰腺肿瘤实体内注入5-FU缓释剂200 mg;术后行5-FU静脉化疗组:5-FU静脉滴注500mg/d,共5 d;对照组:术后2周内未予化疗.所有病人分别于术前l天和术后第14天采血,测定血清中NK细胞、T细胞亚群和CEA、CA50、CA19-9、CA125、CA242等5种血清肿瘤标记物水平.结果(1)治疗前各组在CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和NK细胞等各项细胞免疫指标水平和血清肿瘤标记物CEA、CA50、CA19-9、CAl25和CA242水平无显著差异(P＞0.05);(2)术后5-FU缓释剂瘤内植入治疗组和对照组的上述各项细胞免疫指标无显著差异(P＞0.05),而CD4+/CD8+和NK细胞水平两组均高于静脉5-FU化疗组(P＜0.05);(3)术后5-FU缓释剂瘤内植入治疗组上述血清肿瘤标记物水平明显低于对照组和静脉5-FU化疗组(P＜0.05).结论5-FU缓释剂植入胰腺癌实体内,能明显降低CEA、CA50、CA19-9、CAl25、CA242等血清肿瘤标记物水平,同时对患者的细胞免疫功能影响较小,有利于患者术后免疫功能的及时恢复,是一种用于治疗不能切除之胰腺癌的较好方法.
作者：华鲁纯；杜卫东；倪泉兴；张群华；傅德良 刊期： 2004年第03期
目的初步建立一种以全血为标本的流式细胞仪(FCM)检测血小板抗体的方法.方法FCM多参数分析全血中的CD61标记的血小板群.结果每次检测需血以微升为数量级单位,所用时间2 h.能从正常的血小板中检出3%含有CD61抗体的血小板,阳性率与理论值呈明显相关(r＞0.9,P＜0.001);可检测血小板计数低达10×109/L的标本.结论本法具有结果准确、重复性好的优点,需血量少,病人易接受,并且更接近生理状态;多参数检测,快速省时,更适用于血小板极低或抗体量少的患者.优于传统的定量法与定性法检测.
作者：宋一芳；谢毅；陈彤 刊期： 2004年第03期
目的观察链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病仓鼠机体代谢及心肌病理改变,建立一种理想的糖尿病心肌病变动物模型.方法腹腔注射STZ建立糖尿病仓鼠动物模型,10周后电镜观察心肌超微结构,光镜观察心肌病理改变,免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原变化,同时应用生化、放免法检测血糖、糖化血清蛋白、血脂、胰岛素变化.结果与正常对照(NC)组仓鼠相比,糖尿病(DM)组仓鼠血糖和糖化血清蛋白水平显著升高;血TG、CHO和LDL也明显升高;病程10周的糖尿病仓鼠表现为心肌内大量糖原颗粒沉积,心肌局灶性炎症细胞浸润和间质淡嗜伊红物质沉积;NC组仓鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量为1.92±0.27、1.11±0.12;DM组Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量分别为NC组的2.71和1.68倍(P＜0.001、＜0.01),且Ⅰ/Ⅲ型胶原比值也明显升高(P＜0.01).结论腹腔注射STZ可诱导稳定的糖尿病仓鼠动物模型;糖尿病仓鼠机体代谢和心肌病理变化与人类相似,是研究人类心肌病变的理想动物模型.
作者：丛丽；俞茂华；李益明；张秀荣；许祖德 刊期： 2004年第03期
目的研究人早孕期绒毛及滋养细胞趋化因子SDF-1的表达、分泌及其对蜕膜免疫活性细胞的募集作用.方法收集早孕期绒毛组织并检测SDF-1的定位表达;用ELISA分析早孕期滋养细胞培养上清液中SDF-1的浓度水平;分离早孕期蜕膜免疫活性细胞,以趋化试验研究SDF-1及滋养细胞培养上清液对蜕膜免疫活性细胞的趋化作用.结果人早孕期滋养细胞表达并分泌SDF-1;一定浓度范围的SDF-l对蜕膜免疫活性细胞具有趋化作用,大趋化指数为3.27±0.89;滋养细胞培养上清液也明显趋化蜕膜免疫活性细胞,趋化指数为2.11±0.79.结论人早孕期滋养细胞表达的SDF-1对蜕膜免疫活性细胞具有趋化、募集作用,从而有助于形成蜕膜独特的淋巴细胞群体并维持母-胎免疫耐受.
作者：吴霞 刊期： 2004年第03期
目的研究在不同程度的充血性心力衰竭时肺脏水通道蛋白1和5(AQP1、AQP5)和上皮性钠通道(ENaC)表达的情况.方法将SD大鼠通过腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘和冠脉结扎的方法建成不同的心衰模型.用Doppler超声心动图的方法比较其心功能的各项参数,用肺湿/干质量比和肺脏组织学检查了解各组大鼠肺水肿的情况,并以RT-PCR的方法检测肺脏AQP1、AQP5和ENaC α亚基的基因表达.结果穿刺造瘘大鼠心功能损害较轻,而冠脉结扎大鼠心功能严重失代偿.各组大鼠肺湿/干重比无显著性差异,但肺脏组织学检查显示冠脉结扎大鼠存在轻度的肺水肿.分子生物学检测发现冠脉结扎大鼠肺脏AQP1和α ENC mRNA表达上调(AQP1:1.488 vs 0.775,P＜0.001;αENaC:0.524 vs 0.306,P＜0.05),而AQP5mRNA表达在各组大鼠之间未见显著性差异.结论在严重的充血性心力衰竭大鼠肺脏存在着AQP1和ENaC基因表达的上调,其中AQP1表达增加可能参与了心源性的肺脏液体转运障碍.
作者：朱彤莹；顾勇；黄国英；刘少军；朱蔚钰；陆利民；林善锬 刊期： 2004年第03期
目的测定人房水中β-微量蛋白(β-tp)的含量.方法制备抗β-tp的抗体,用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定124例白内障(124眼)、15例青光眼(15眼)及8例视网膜剥离(8眼)患者房水中的β-tp浓度.结果白内障患者房水中β-tp浓度(1.08±0.75)×10-2ng/L.其中,男性为(1.12±0.78)×10-2 ng/L,女性为(1.07±0.76)×10-2 ng/L,≥60岁者(1.09±0.75)×10-2 ng/L,＜60岁者(1.27±0.82)×10-2 ng/L.青光眼患者房水中β-tp浓度为(0.67±0.21)×10-2ng/L,视网膜剥离患者为(0.90±0.30)×10-2ng/L.结论房水中β-tp浓度不受性别及年龄的影响,青光眼与老年性白内障患者房水内β-tp的浓度无明显差别.
作者：熊毅彤；徐康；李秋华；黄俊；任惠民；蒋雨平 刊期： 2004年第03期
目的在体外研究血栓素A2受体拮抗剂塞曲司特对组胺、乙酰胆碱、KCl诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩作用的抑制影响,并与短效β2受体激动剂沙丁胺醇比较.方法用定量药理分析方法测定和记录:(1)用塞曲司特孵育前后组胺、乙酰胆碱、KCl诱发的豚鼠离体气管条的收缩;(2)用沙丁胺醇孵育前后组胺、KCl诱发的豚鼠离体气管条的收缩;(3)塞曲司特、沙丁胺醇对组胺诱导的豚鼠肺条收缩的影响.结果(1)组胺、乙酰胆碱在体外引起了豚鼠离体气管条的浓度依赖性的收缩,塞曲司特抑制了组胺、乙酰胆碱诱发的收缩;(2)对60 mmol/L KCl诱发的气管条收缩,塞曲司特、沙丁胺醇均可抑制其大收缩反应;(3)对组胺诱导的肺条收缩,塞曲司特、沙丁胺醇均明显拮抗了其收缩.结论塞曲司特对致喘介质诱发的豚鼠离体气管条和肺条收缩有明显的抑制作用,是一种有效的支气管扩张剂.
作者：李惠萍；白春学；吴淦桐；卢中秋；洪群英；陈寿权 刊期： 2004年第03期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
