学术投稿

脉冲场电泳进行E.coli O157的分型

周晓明;卢林耿;卫国荣;张幼辰;俞顺章

关键词:PFGE, 质粒图谱, 基因分型, E.cpli O157
摘要:E.coli O157是一种新型的致病性大肠杆菌,其感染已成为世界性卫生问题。药敏、质粒图谱分析、多位点酶电泳和噬菌体分型[1]等被用于E.coliO157的分型,以确定不同菌株之间的关联性,用于传染源的追踪和传播途径的探讨。但这些方法在一定情况下使用,尚不能有效地用于所有暴发流行事件的调查。脉冲场冲泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)是80年代初建立的一种基因分析技术,已成功地用于一些病原体的分子流行病学调查[2]。我们对药敏、质粒图谱、PFGE用于E.coli O157分型的分子流行病学研究进行初步探讨。材料和方法菌株E.coli O157产毒株(933 w/o,VT+)、非产毒株(882364,VT-)由中预防医学科学院提供,4株E.coli O157 VT+菌从上海地区牛肉中分离(SH3、SH4、SH7、SH9)。
复旦学报(医学版)杂志相关文献
  • 榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

    目的 探讨榄香烯乳治疗胃癌细胞的作用机制。方法 应用四唑盐比色试验、端粒重复扩增-微孔板杂交法、TUNEL染色研究榄香烯乳对胃癌细胞SGC-7901的细胞生长、端粒酶活性及诱导凋亡的作用。结果榄香烯乳对胃癌SGC-7901细胞生长具有较强的抑制作用。榄香烯乳抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡有关。榄香烯乳抑制端粒酶活性的效果与浓度及时间相关。结论 榄香烯乳对胃癌细胞生长具有很强的抑制作用,与抑制端粒酶活性、诱导凋亡有关。

    作者:范钰;林庚金;钱立平;李华;朱行;颜吉丽 刊期: 2001年第01期

  • 超声心动图对高血压病人左室舒张功能再评价

    目的 探讨超声心动图对高血压(EH)病人左室舒张功能评价价值。方法 140例EH病人分为左室肥厚组47例,非左室肥厚组93例,予二维超声心动图及Doppler频谱检测,并与25例正常人对照。结果 在正常组和NLVH组,E/A比值、PA值和PAi有显著差异;IVRT、LAD在3组之间有显著差异;EF%值在NLVH组与正常组相似,与LVH组差异有统计学意义。结论 PA、PAi增高、E/A比值减低、IVRT延长和LAD增大是EH左室舒张功能减低的敏感指标。EF值变化提示EH早期左室收缩功能并未受到影响,随着疾病进展而逐步受损。

    作者:胡瑞;张象贤;王亚芬;刘国平;龚辉;沈伟;徐浩仁 刊期: 2001年第01期

  • c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

    目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-mycmRNA 5'端非翻译区的一个18 bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10 h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法检测白血病细胞的凋亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血病,且该作用的特异性好。

    作者:张宝春;单易非 刊期: 2001年第01期

  • 百草枯对小鼠黑质纹状体多巴胺能系统的影响

    目的 探讨百草枯对小鼠黑质纹状体通路的影响。方法 将39只新生C57BL小鼠随机分为5组,分别于出生后第10、11天每天喂食单剂量MPTP、百草枯和生理盐水。(1)MPTP 0.3 mg/kg组,11=8;(2)MPTP20 mg/kg组,n=8;(3)百草枯0.07 mg/kg组,n=8;(4)百草枯0 36 mg/kg组,n=8;(5)等量生理盐水/kg组,n=7。正常饲养至4月龄观察小鼠自发性行为的变化,采用HPLC测定各组小鼠纹状体中多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)及其代谢产物含量,免疫组化方法检测中脑黑质细胞数量的变化。结果 MPTP 20 mg/kg组及百草枯0 36 mg/kg组C57BL小鼠的自发性活动减少,纹状体中DA及其代谢产物含量降低,中脑黑质细胞数量减少。结论 新生期的C57BL小鼠暴露于大剂量的百草枯可产生类似于帕金森病(PD)的行为,黑质纹状体也发生相应的生化病理改变。

    作者:丁正同;任惠民;蒋雨平;蔡振林;朱秋毓 刊期: 2001年第01期

  • Biomesh膜用于牙周组织引导再生术的临床观察

    牙周病造成牙周支持组织的破坏,牙周附着的丧失。牙周病治疗的目的不仅在于炎症的控制,更在于使已经破坏的牙周组织再生,形成新附着。引导牙周组织再生术是根据1976年Melcher提出的牙周组织再生潜能理论在近年发展起来的。牙周手术治疗的新方法,已经在动物实验和临床运用,取得了较好的效果。Biomesh膜就是将一物理性屏障置于龈瓣与根面之间,用以隔绝龈上皮及周围结缔组织,使其不能到达根面,创造一个有利于牙周韧带细胞自由迁移分化、增殖,重新形成牙骨质、牙槽骨以及附着于两者之间的牙周韧带,建立新附着。术后组织愈合的过程也就是牙周组织再生的过程。作者根据引导组织再生术的原理,应用Biomesh膜治疗20颗上下第一、二磨牙Ⅱ度根分叉病变,观察结果,尚属满意。

    作者:俞立英;吴斌;蔡意达 刊期: 2001年第01期

  • 胎羊体外循环的建立及探讨

    随着诊断技术的不断提高,许多胎儿先天性心脏病在宫内即能得到诊断。一些复杂的心血管畸形如主动脉闭锁和肺动脉瓣闭锁,虽然解剖畸形单纯,但由于其严重的血流动力学改变及继发性心脏发育不良,故若在出生后施行根治或姑息手术,疗效及预后均差。如原发病在宫内纠治则可使胎儿心脏在继续怀孕过程中得以正常发育。这就要求建立一种安全可靠的体外循环技术,以便于胎儿心脏手术的顺利进行。本实验旨在探讨胎羊体外循环的建立及其技术要点。材料和方法健康孕羊6只(孕120~125 d),禁食24 h。麻醉采用肌肉注射Ketamine 10~20 mg/kg,气管插管后接Bird呼吸机行机械通气,分别行颈静脉、颈动脉穿刺置管,以监测孕羊的中心静脉压、动脉压和心率。孕羊以每小时Ketamine 3~5 mg/kg静脉维持麻醉,以每小时4mg/kg输入林格氏液。孕羊正中剖腹切口,在超声心动图引导下于胎羊前胸方位切开子宫,暴露胎羊,温盐水持续冲洗胎羊和子宫。

    作者:钟慧;陈张根;贾兵;李;叶明 刊期: 2001年第01期

  • 重组血管生成抑制因子r-K4K5的分离纯化与功能鉴定

    目的 分离纯化r-K4K5,探讨r-K4K5对牛毛细血管内皮(BCE)细胞、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC-Al生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r-K4K5,BCE细胞在含r-K4K5的DMEM中培养24、48、72 h后分别计数;孵化7 d的鸡胚加r-K4K5后继续孵育72 h,观察新生血管生成;已经接种人SPC-Al肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠(Balb/c,nu/nu),瘤旁注射r-K4K5继续饲养,观察肿瘤生长变化。结果 r-K4K5抑制BCE细胞增殖,48~72 h作用明显;r-K4K5处理的CAM组中直径小于50μm的小血管明显减少;高剂量r-K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r-K4K5能够抑制BCE细胞增殖,抑制鸡胚CAM新生血管生成,抑制实验性人SPC-Al肺腺癌生长。

    作者:官孝群;王跃祥;莫炜;吴良成;宋后燕 刊期: 2001年第01期

  • 165例恶性淋巴瘤中p16基因异常的研究

    目的 检测恶性淋巴瘤(ML)中p16基因的缺失、甲基化及p16蛋白的表达,探讨p16基因异常在淋巴瘤中的意义。方法 收集淋巴瘤新鲜组织标本50例,存档石蜡包埋组织标本115例,均包括T、B非霍奇金淋巴瘤(NHL)及霍奇金淋巴瘤(HL)。用PCR、甲基化特异的PCR方法检测新鲜组织中的p16基因的等位缺失及5’CpG岛异常甲基化;用免疫组织化学方法检测石蜡标本中p16蛋白的表达情况。另外,分别选取9例反应性增生(RH)组织的标本作对照。结果 12/50例(24.0%)新鲜标本中检出p16基因纯合性缺失,16/50例(32 0%)检出p16基因异常高甲基化;石蜡包埋标本中p16蛋白的失表达率为41.6%,其中B-NHL为46.0%,T-NHL为54.5%,HL为31.6%。恶性程度较高的淋巴瘤类型中p16蛋白的失表达率也相应较高,各类型之间比较:弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和滤泡性淋巴瘤(FL)的p16失表达率存在组间差异的显著性。所有RH标本均未见p16基因或蛋白表达的异常。结论 恶性淋巴瘤中p16基因的异常是一个频发事件,p16基因表达异常参与了淋巴瘤的发生及进展。

    作者:药锦娟;李小秋;许良中;施宗高;朱伟萍;许越香;郑爱华 刊期: 2001年第01期

  • 运动引起心肌SPECT断层伪影的实验研究(摘要)

    目的 探讨心肌断层采集过程中体位移动的方向、幅度、时限对断层影像的影响。方法 在探头旋转到45°.90°、1 35°时,将心脏模型依次沿x、y和z轴方向分别移动±5 rm、±10 mm、±20 mm。其图像分别与无移动者对比,并由3名医师判别伪影;结果经统计学处理。结果 在移动5 mm时无伪影;移动10 mm以上出现伪影,且距离愈大愈明显。在短轴上呈典型的三角形分布且交替出现“冷”、“热”结节。在水平及垂直长轴上,表现为前间隔和前侧壁、前壁和下壁的对称性变薄内收,心尖拉长。结论 位移≥10 mm时,出现具有特征性的可识别伪影。 [全文刊登于中华核医学杂志2000,20(3):109]

    作者:石洪成 刊期: 2001年第01期

  • 全麻复合胸段硬膜外阻滞对兔实验性心肌梗死的影响(摘要)

    目的 研究全麻复合胸段硬膜外阻滞(TEA)与否对免实验性心肌梗死的保护作用。方法 实验组兔于气管切开插管全麻复合胸段硬膜外阻滞下开胸结扎左冠状动脉前降支,在不同的时段取血,测血浆肌酸磷激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LIH)、谷草转氨酶(AST)活性和一氧化氮(NO)及超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化;对照组不作TEA,其余处理与实验组相同。结果实验组兔在不同时间段CK、LDH活性变化与时间关系的直线回归系数,相对于对照组有显著性差异;方差分析CK、LI、SOD、NO模型有意义。结论 复合麻醉对实验性心肌梗死及其应激性损伤有确切的保护作用。 [全文刊登于中华麻醉学杂志2000,20(10):618]

    作者:陈志扬 刊期: 2001年第01期

  • 白内障超声乳化术527例临床分析

    自从Kelman(1967)首次报道超声乳化技术应用于白内障摘除术以来,这一手术在我国迅速得到推广和发展[1~3]。我院自1998年4月至1999年6月,使用Storz公司超声乳化仪为527例692只眼施行了白内障超声乳化术。对象和方法对象 施行白内障超声乳化术共527例,692只眼。男性275例,362只眼;女性252例,330只眼。右眼366只,左眼326只。小年龄10岁,大年龄104岁,平均年龄63.77岁。先天性白内障27只眼,外伤性白内障21只眼,余均为老年性白内障或并发性白内障。伴有高度近视眼(≥-10.00D)111只眼,伴有糖尿病104只眼,抗青光眼术后17只眼,青光眼白内障联合手术21只眼,陈旧性葡萄膜炎瞳孔粘连17只眼,伴有视网膜剥离12只眼,网膜剥离术后16只眼。

    作者:李秋华;陈丹;熊毅彤 刊期: 2001年第01期

  • 中药天癸方对雄激素致不孕大鼠下丘脑Leptin受体及神经肽Y mRNA的影响(摘要)

    目的 从基因转录水平探讨中药天癸方对雄激素致不孕大鼠(ASR)肥胖及无排卵的影响。方法 采用α-32P标记瘦素(leptin)受体(OB-R)及神经肽Y(NPY)寡核苷酸探针原位杂交、放射自显影技术结合图像分析,观察中药治疗前后下丘脑弓状核(ARC)两种物质tRNA的表达变化。结果 ASR中ARC的NPY基因表达水平明显增加(P<0.01),OB-R基因表达水平明显降低(P<0.01),ASR呈肥胖、无排卵状态。用中药天癸方治疗后,NPY基因表达下降,OB-R基因表达上升至正常大鼠水平。结论 ADR肥胖及无排卵可能与NPY mRNA过度表达、OB-R tRNA数目异常有关,中药可调节NPY和O1B-RmRNA表达而发挥减肥及促排卵作用。 [全文刊登于中国中西医结合杂志2000.20(5):362]

    作者:孙斐 刊期: 2001年第01期

  • HPLC和HPCE法测定罂粟壳中3种生物活性生物碱(摘要)

    目的建立中药罂粟壳中3种生物活性生物碱——吗啡、可待因和罂粟碱的含量测定法,根据样品测定结果提出其质量评价的建议。方法HPLC和HPCE法。结果用HPLC及HpCE法测定了罂粟壳12个样品中3种生物碱含量,并根据两种方法含量测定的结果建议罂粟壳所含3种生物碱以吗啡含量不低于0.04%,可待因含量不低于0.02%以及罂粟碱含量不低于0.01%为宜。结论本工作建立的HpLC及HPCE含量测定法均具有快速、简便、灵敏、分离度好等特点,适用于罂粟壳中3种生物碱的分离测定。 [全文刊登于药学学报2000.35(4):289]

    作者:郝红艳 刊期: 2001年第01期

  • 高分子量角蛋白在前列腺增生的基底细胞中的表达

    目的 为了探讨前列腺基底细胞的免疫组化特征。方法 采用常规HE染色及免疫组化En Vision两步法,用高分子角蛋白34βE12、广谱CK、Vim、PSA、PsAP、S-100、SMA7种标记物对37例良性前列腺增生(BTH)的基底细胞进行检测观察。结果 所有37例BPH的基底细胞对高分子角蛋白34βE12均呈胞质阳性反应,阳性率100%;大部分基底细胞(71%)对广谱CK表达阳性;PsAP及PSA在基底细胞中的阳性率均为35%;S-100蛋白阳性率较低,仅13.5%;而Vim及SMA则均呈阴性反应。结论 高分子角蛋白34β12是前列腺基底细胞的特异性标记物;前列腺基底细胞具有向前列腺腺泡上皮分化的能力,也可引起局部自身增殖,故其在前列腺的生长、增生甚至疾病的发生中起着一定的作用;前列腺基底细胞与肌上皮细胞是不同的,但其是否具有向肌上皮分化或化生仍有待进一步探讨。

    作者:徐杭蓓;益莉娜 刊期: 2001年第01期

  • 神经生长因子对小鼠颈上神经节和大鼠腓神经损伤后修复的影响

    目的 应用形态学方法观察研究神经生长因子(NGF)对长春新碱(VCR)损伤的小鼠颈上神经节和钳夹损伤的大鼠腓神经修复再生作用。方法 颈上神经节:出生2d的昆明种小鼠随机分为实验组、对照组和空白对照组。实验组皮下注射VCR(0.2 mol/L~10 μl/g体重)和NGF(2、5、10μg/g体重),对照组仅注射VCR,每天1次,连续4 d。光镜下测量颈上神经节横径并且观察神经节细胞形态变化。周围神经:将钳夹损伤腓神经的SD大鼠随机分为实验组和对照组,并从损伤后第1天在近损伤处分别肌注NGF(2、4、8μg/kg体重)和生理盐水,每天1次,连续12 d。取腓神经和趾长伸肌,光镜观察,并计数损伤处远端和近端神经纤维数量。结果VCR可损伤颈上神经节,神经节横径缩小,节细胞凋亡解体;NGF则可改善VCR的损害作用,神经节横径增大61%~95%,节细胞数明显增多59%~70%,细胞凋亡现象显著减轻,改善程度与NGF剂量相关。NGF对腓神经再生和趾长伸肌形态变化也有明显改善作用,尤以大剂量NGF的作用更显著。结论 NGF对长春新碱损伤的小鼠颈上神经节和经钳夹损伤的大鼠腓神经有明显的促修复作用。

    作者:陈红;佘振珏;童夙明;褚云鸿 刊期: 2001年第01期

  • 凋亡调节蛋白的表达与K562/VCR多药耐药性的关系

    目的 探讨K562/VCR细胞中凋亡调节蛋白表达的变化与其多药耐药性(MDR)的关系。方法 通过免疫细胞化学法和免疫印迹法(western blot)对凋亡调节蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bak在多药耐药细胞K562/VCR和药物敏感细胞K562中的表达进行分析。结果 抗凋亡调节蛋白Bcl-2、Bcl-XL在K562/VCR细胞中的表达阳性率分别为(40.0±8.0)%和(60.0±10.0)%,在K562细胞中为(1.0±0 3)%和(20.0±40)%,阳性率差异均具有显著性(n=3,P<0.05)。促凋亡调节蛋白Bax在以上两种细胞中的表达程度无明显区别促凋亡调节蛋白Bak在两种细胞中均不表达或表达程度极低。结论抗凋亡调节蛋白(Bcl-2、Bcl-XL)在K562/VCR细胞MDR发生中可能发挥重要作用,而促凋亡调节蛋白Bax、Bak可能不起主要作用。

    作者:朱玉胜;吕元;林果为;张荣兴;杨正洪;吕沅冈 刊期: 2001年第01期

  • 高效液相色谱法测定氟比洛芬缓释片中药物及有关物质含量

    氟比洛芬为非甾体类抗炎镇痛药,具有镇痛、消炎解热作用。临床普遍用于治疗类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊椎炎以及手术后疼痛和癌症疼痛。在同类药物中,具有剂量小、疗效高、副作用小等特点,是一安全、优良的抗炎镇痛药。国外自1977年起陆续有氟比洛芬常释和缓释制剂上市,在欧美国家广泛使用。我国目前仍处于研制开发阶段。我们采用高效液相色谱法测定氟比洛芬缓释片中药物及有关物质含量,具有准确度好、重视性强、操作简便等优点。材料和方法试药 氟比洛芬对照品、氟比洛芬缓释片由复旦大学药学院药剂学教研室研制,联苯丙酸由Sigma公司提供,甲醇为色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司),三蒸水,其余所有试剂、溶剂均为分析纯。

    作者:屠林华;翁伟宇;徐惠南 刊期: 2001年第01期

  • 8例自身免疫性肝炎病理学分析

    目的 探讨自身疫性肝炎的病理组织学特点。方法回顾性分析和研究8例自身免疫性肝炎(.AIH)的临床资料、肝脏活检组织病理学、肝炎病毒免疫荧光检查结果。结果 8例临床诊断为AIH病例均为女性,年龄16~72岁,临床表现主要包括发热、关节疼痛、皮疹或黄疸。多数伴有类风湿性关节炎等其他自身免疫性疾病表现。实验室检查:γ球蛋白、ALT和AST等均有不同程度升高,且多数病例为自身抗体[RF和(或)ANA]阳性。血清学肝炎病毒标志物均为阴性。肝组织病理变化主要为轻、中度慢性肝炎(小叶性肝炎居多),肝细胞点状坏死、碎片状坏死、桥接样坏死多见,汇管区纤维组织增生和炎症细胞浸润。免疫荧光检查:多数病例中可在肝细胞膜、汇管区和肝血窦等处见不同程度的IgG等免疫复合物沉积;2例有HBsAg阳性。结论 我国该组AIH病例的肝组织病理学改变主要表现为慢性肝炎,病变具有特征性但无特异性,肝活检组织病理学和免疫荧光检查对AIH的诊断和鉴别诊断,尤其是对于变异型AIH的诊断具有重要意义,有助于指导临床治疗,应引起重视。

    作者:刘国元;张农 刊期: 2001年第01期

  • 脑灰质异位MRI表现的分析

    已有不少学者[1~3]对脑灰质异位核磁共振MRI表现及临床症状的相关因素进行过探讨,许多学者[1~3 ]认为脑灰质异位患者顽固性癫 的相关因素不明,但癫 的形式与异位灰质的部位及相伴的其他发育异常的部位有关。本研究着重探讨癫 的发生与异位灰质的类型、部位及发病年龄的关系。材料和方法18例经MRI证实的脑灰质异位患者,男性6例,女性12例。年龄3~15(8±2.3)岁。脑室周结节状灰质异位10例,层状灰质异位8例。年龄小于10岁的12例(结节状和层状各6例),年龄大于10岁的6例(4例为结节状,2例为层状)。

    作者:叶春;张晓龙;冯晓源;陈向军;吕传真;耿道颖;沈天真 刊期: 2001年第01期

  • 氯胺酮对大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

    目的 研究不同浓度氯胺酮对KCl诱发的大鼠心肌细胞钙离子移动的影响,探讨其对心肌收缩力的作用。方法 用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色急性分离的大鼠心肌细胞,在激光共聚焦显微镜下动态测定用药前和使用浓度为1×10-5、1×10-4、1×10-3 mmol/L氯胺酮后,KCl诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果 1×10-5mmol/L氯胺酮对心肌细胞钙离子移动无明显影响(P>0.05),1×10-1nmol/L氯胺酮虽减慢钙的内流,但终细胞内钙离子浓度与对照组无统计学差异(P>0.05)。而高浓度1×10-3 rmol/L氯胺酮则明显抑制钙离子跨膜内流,细胞内钙荧光强度峰值下降13.2%(P<0.05)。结论 氯胺酮呈浓度依赖地抑制心肌细胞钙离子内流,这可能是其心肌抑制作用的原因之一。

    作者:张莹;李士通;庄心良;李继昌 刊期: 2001年第01期

复旦学报(医学版)杂志

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