赵玉玲；赵东阳；李辉；杨洪毅；马晓光；赵国强
目的 构建重组人Nanog基因腺病毒栽体(Ad-Nanog),转染人脐带间充质干细胞(hucMSCs),用于后续研究.方法 设计含有Kpn Ⅰ及Xho Ⅰ酶切位点的引物,PCR扩增Nanog基因,将扩增产物亚克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒上,经双酶切和基因测序鉴定,重组穿梭质粒经Pine Ⅰ线性化后,在含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中同源重组,筛选获得Ad-Nanog重组腺病毒质粒.经Pac Ⅰ酶切线性化,脂质体转染293A细胞,包装和扩增病毒,并感染hucMSCs.结果 重组腺病毒质粒经PCR和双酶切鉴定正确,测序结果 和设计片段的序列一致.荧光显微镜下观察在感染的hucMSCs中绿色荧光蛋白高效表达.结果 成功构建了Nanog腺病毒表达栽体,能高效转染hucMSCs,可用于后续转基因的研究.
作者：孙靖；徐哲；钱茜；严家来；陈圆；张徐；高硕；钱晖；许文荣 刊期： 2011年第03期
目的 对有Duchenne肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)家族史的孕妇进行产前诊断研究.方法 PCR检测胎儿的性别决定基因(SRY)和DMD基因常见缺失的18个外显子,同时用DMD基因的6个(CA)n重复序列STR位点进行连锁分析,对31例有DMD家族史的孕妇进行产前诊断;随访健康胎儿出生后的发育情况,评估产前诊断方法 的可靠性.结果 32例胎儿(1例双胎)中,18例女性胎儿中有6例为DMD基因携带者;14例男性胎儿中4例为DMD患儿.结果 对DMD高风险胎儿进行SRY基因检测,联合应用DMD基因的18个外显子检测和连锁分析能够准确、有效地产前诊断DMD.
作者：贺静；朱宝生；苏洁；唐新华；梁锐；章印红；朱姝；章锦曼；余蕊；李秀玲 刊期： 2011年第03期
目的 构建靶向信号转导及转录激活因子5(STATS)的RNAi重组质粒并进行鉴定.方法 设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒栽体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析.脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,western-blot、RT-PCR检测STATS基因表达.结果 酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STATS的序列特异性小发夹状RNA(shRNA)可有效抑制SMMC7721细胞STATS表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05).其中以Pgenesil-1-STAT5Al抑制效应强.结果 成功构建靶向STATS的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰栽体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础.
作者：张丽杰；赵振军；鹿刚；单保恩 刊期： 2011年第03期
目的 探讨糖化血红蛋白(HbAlc)在糖尿病(DM)诊断中的应用价值.方法 随机选择DM初筛患者535例,均行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),用高效液相色谱法检测HbAlc水平.根据OGTY结果 把受试者分为糖耐量正常(NGT)组、血糖调节受损(IGR)组和糖尿病(DM)组,NGT组和IGR组并称为非糖尿病组(non-DM).用ROC曲线分析HbAlc、空腹血糖(FPG)诊断DM及IGR的能力.结果 DM组患者、FPG、餐后2 h血糖(2h PG)及HbAlc均显著高于其他组(P均<0.01);上述指标IGR组亦显著高于NGT组(P均<0.01).DM组男性患者显著多于女性(P<0.01).HbAlc的cut off值为6.1%时,诊断DM的ROC曲线下面积(AUCRoc)为0.849,敏感性为79.1%,特异性为78.4%,与7.0 mmol/L FPG的诊断能力无显著性差异(P>0.05).2者联合应用显著提高诊断能力,AUC<'ROC>=0.885,敏感性为75.0%,特异性为88.0%.以HbAlc 5.7%为cut off值,诊断IGR(AUC<'ROC=0.66)能力显著低于FPG(AUC<'ROC>=0.787),P<0.01.结果 HbAlc的cut off值为6.1%时可用于诊断DM,与7.0 mmol/L FPG联合应用可增加诊断DM的能力,但5.7%HbAlc对IGR的筛查能力较弱,不及5.6 mmol/L FPG.
作者：王连升；庄兴；张琦；陈玉伟；陈福祥 刊期： 2011年第03期
伴放线凝聚杆菌旧称伴放线放线杆菌(Actinobacillus ac-tinomycetemcomitans),现已划分到凝聚杆菌属.本菌为人类口腔正常菌群,主要引起心内膜炎、心瓣膜损害,引起乳腺感染少见.
作者：刘晓富；朱亚宝 刊期： 2011年第03期
目的 建立一种高效液相色谱-荧光法(HPLC-FD)同时测定重性抑郁障碍(MDD)患者血清中酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)和5-羟色胺(5-HT)的含量,并探讨其应用价值.方法 血清标本去蛋白质后,取上清液直接测定.色谱柱采用AtlantisC<,18>(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相为0.1 mol/L KH<,2>PO<,4>:甲醇(85:15);流速为1.0 mL/min;荧光检测器激发波长和发射波长0～4 min分别为228 nm和306 nm,4～7.5 min为278 nm和338 nm,7.5 min后为285 nm和353 nm.用建立的方法 检测MDD患者和健康人对照组血清Tyr、Trp和5-HT含量.结果 Tyr、5-HT和Trp的保留时间约为3、5和9 min,3者分离良好(R>1.5);线性范围分别为0.55～275.00、0.094～47.03和0.049～49.00 μmol/L;低检测限分别为0.014、0.024和0.005μmol/L;平均回收率分别为100.6%、99.3%和97.0%;日内、日问精密度均<5%.苯丙氨酸(Phe)、犬尿氨酸(Kyn)、犬尿喹啉酸(Kyna)等物质无干扰.MDD患者血清Tyr、Trp和5-HT含量均低于健康人对照组,5-HT/Trp比值明显降低,差异有统计学意义(P均<0.01).结果 建立的HPLC-FD方法 简便、快速、特异性好,适用于临床检验与研究.测定血清中Tyr、Trp和5-HT含量对MDD的辅助诊断有一定价值.
作者：穆萨；李影；唐爱国；肖乐东 刊期： 2011年第03期
我们参照第4版[1](以下简称WHO手册)的标准和室内质控管理的相关要求,制备精子质控品并进行为期7个月(4～10月)的精子形态学观察,现报告如下.
作者：徐威香；朱卫中；吴小妹；叶明建 刊期： 2011年第03期
目的 建立血清烯醇化酶(enolase,ENO)活性的全自动速率测定法,进行方法 学评价及初步临床应用.方法 根据烯醇化酶和丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶及还原型辅酶I的偶联反应,在Olymbus Au5400全自动生化分析仪上用双试剂速率法测定EN0活性.结果 本方法 批内CV2.3%～3.7%,批间CV4.2%～5.6%;检测下限为0.26 U/L,线性范围0.3～88.6 U/L;溶血标本对测定有正干扰;胆红素浓度≤52 μmol/L无明显干扰;三酰甘油≤3.12 mmol/L对测定无干扰.370例健康人血清EN0活性(x±s)为(5.9±1.9)u/L.33例恶性肿瘤、44例脑挫伤及神经系统疾病患者血清EN0活性分别为(19.0±14.4)U/L、(17.1±11.4)u/L,与健康组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结果 全自动速率法测定ENO活性,具有准确、快速、简便、低成本等优点.初步临床应用表明,恶性肿瘤、脑挫伤及神经系统疾病患者血清ENO活性增高,对临床有一定参考价值.
作者：孙建中；王雍；许联红 刊期： 2011年第03期
目的 调查临床分离的鲍曼不动杆菌的分布和耐药性,了解鲍曼不动杆菌质粒对喹诺酮类抗菌药物的常见耐药基因和分子机制,为临床抗感染治疗提供依据.方法 用Vitek系统鉴定细菌,用M-H琼脂稀释法药物敏感试验测定菌株对左氧氟沙星、环丙沙星和加替沙星3种喹诺酮类药物的MIC,PCR扩增质粒上的qnrA、B、C、D、S,氨基糖苷类修饰酶基因aac(6')-Ib及外排泵qepA基因,选取部分PCR扩增产物进行测序分析.结果 鲍曼不动杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星的耐药率分别为78.3%、58.3%和40.0%.PCR扩增结果 显示,aac(6')-Ib阳性率达29.2%(35/120),测序发现aac(6')-Ib基因编码的氨基酸密码子不存在点突变,未检出新氨基糖苷类修饰酶aac(6')-Ib-Cr基因;未检测出质粒上的qnrA、B、C、D、S及外排泵qepA基因产物.结果 鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药情况严重,耐药机制与aac(6')-Ib-Cr亚型无关,也没有质粒上的qnrA、B、C、D、S和外排泵qepA基因的因素.
作者：袁星；沈继录；徐元宏；熊自忠 刊期： 2011年第03期
目的 建立并评价检测人血清载脂蛋白M(apo M)浓度的双抗体夹心ELISA法.方法 用抗apo M单克隆抗体作包被抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗apo M单克隆抗体作酶标记抗体,建立检测apo M的双抗体夹心ELISA法.检测483例体检健康者的血清apo M浓度,建立本实验室的参考值.结果 线性范围为31.3～500 ng/mL,低检测限为23.9 ng/mL;脂蛋白(a)、apo A1和apo B对apo M检测结果 干扰作用小;批内、批间变异系数(CV)均<10%;参考值为(22.1±12.1)μg/mL.结果 建立检测人血清apo M浓度的双抗体夹心ELISA法,为研究apo M的生理功能及其在脂质代谢中的作用提供了一种新的研究工具.
作者：黎照环；胡敏 刊期： 2011年第03期
目的 研究棒状杆菌的药敏试验方法,了解临床标本中分离的棒状杆菌对常用抗菌药物的敏感性.方法 以微量肉汤稀释法测定12种抗生素的低抑菌浓度(MIC),用SENSITITRE<'R> CMP2IHM微量肉汤药敏板进行质控对照.结果 184株棒状杆菌对青霉素、头孢噻肟、红霉素、环丙沙星、四环素、多西环素、克林霉素的耐药率超过50%.超过50%的菌株对亚胺培南、庆大霉素和利福平敏感,未发现对万古霉素和利奈唑胺耐药.结果 用微量肉汤稀释法检测临床分离棒状杆菌的MIC值,用CLSI M45-A判断标准判读结果,可为临床提供准确的敏感或耐药结果.棒状杆菌对多种抗菌药物的敏感性降低,多重耐药株在增加.
作者：陈东科；许宏涛；艾晓曼；胡云建 刊期： 2011年第03期
目的 观察citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的血清生化指标变化.方法 比较20例NICCD患儿和20例其他原因所致肝内胆汁淤积症患儿(非NICCD患儿)的ALT、AST、ALP及GGT等22项生化指标.结果 NICCD患儿组与非NICCD患儿组比较,ALT、AST/ALT(S/L)、ALP、LDH、GGT、TP、Alb、Glo、I-Bil、TBA、Lact存在统计学意义差异(P均<0.05);LDH和Lact具有一定的鉴别诊断价值.结果 ALT、S/L、ALP等11项生化指标对辅助NICCD诊断具有一定价值.
作者：陈凤平；吴晓蔓 刊期： 2011年第03期
目的 建立流式细胞术(FCM)定量检测不同ABO抗原红细胞嵌合体方法,探讨其在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中的应用.方法 选取标准 A、B和O型RBC在体外按不同的比例两两混合(嵌合体),采用FCM对5例allo-HSCT患者于术前及术后7、15、30、45、60和90 d体内RBC的嵌合体进行相对计数,计算其供体细胞的嵌合率.结果 体外混合的RBC嵌合体FCM测定值与理论值无显著性差异(P>0.05).5例患者移植后7 d均能检测到供体细胞,其中3例患者移植后90 d达到完全嵌合状态(FDC),1例患者移植后30 d,供体细胞的嵌合率为8.9%,移植后40 d疾病复发而死亡,另1例患者供体细胞的嵌合率由移植后60 d的86.5%下降至90 d的23.7%,死于严重感染.结果 FCM能定量检测不同ABO抗原的RBC嵌合体,可应用于临床allo-HSCT后RBC嵌合体的动态监测.
作者：翟菊萍；顾国浩；王雪明；蒋敏；周毓菁；彭群新；虞秀兰 刊期： 2011年第03期
目的 评价脑脊液(CSF)总tau蛋白(t-tau)和磷酸化tau蛋白(P-tau)浓度预测阿尔茨海默病(Alzheimer'S disease,AD)的有效性和准确性.方法 全面检索tau蛋白浓度预测轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)转化为AD的诊断性试验文献,评价纳入文献的质量,用Review Manager 5.1和Meta Disk 1.4软件进行Meta分析,计算合并效应量.结果 共纳入15项研究,MCI进展为AD的t-tau基线浓度(pg/mL)高于对照组[加权均数差(WMD):320.7;95%CI:274.2～367.3],p-tau基线浓度(pg/mL)亦高于时照组(WMD:32.8;95%CI:29.5～36.0).t-tau预测AD的诊断优势比(diagnostic odds ration,DOR)为14.1(95%CI:8.2～24.4);p-tau的DOR为22.4(95%CI:10.4～48.3).结果 CSF中tau蛋白可作为预测AD发生的重要指标.
作者：耿劲松；董建成；倪衡建；施李丽；吴辉群；蒋葵 刊期： 2011年第03期
某些基因正常位点多态性的变异、饮食影响、周围环境中致癌剂的暴露及个体免疫系统的不同可能是白血病发生的影响因素.药物代谢酶类遗传多态性为常见,如编码药物及周围环境有毒物质代谢酶类基因的多态性:I相代谢中编码细胞色素P450基因(CYPs)、Ⅱ相代谢中编码谷胱甘肽-S-甲基转移酶基因(GST)和自由基代谢或氧化胁迫中苯醌氧化还原酶基因(NQO1)的多态性等.
作者：杜秀敏；胡成进 刊期： 2011年第03期
激活素(activin)是参与肝纤维化形成的细胞因子,其中以激活素A(activin A)为重要….我们通过检测105例慢性乙肝患者血清activin A水平,并与肝组织病理改变相对照,进一步探讨activin A在慢性肝病肝纤维化诊断中的作用.
作者：杨清；张晓娜；王胜；韩树海 刊期： 2011年第03期
目的 检测1例不明原因智力低下(mental retardation,MR)患儿的基因组不平衡,寻找其致病原因.方法 经常规G显带核型分析,发现患儿核型为46,XX,del(1)(q25-q31)后运用微阵列比较基因组杂交(array-based comparative genomic hy-bridyzation,array-CGH)技术对患儿进行全基因组高分辨率扫描,对缺失区域的位置和大小作精确分析.结果 array-CGH结果 证实了患儿基因组存在一个病理性的拷贝数变异:del(1)(q25.1-q31.3)(172 832 580-193 394 460,～20.561Mb).结果 del(1)(q25.1-q31.3)是此患儿真正的致病原因;array-cGH技术具有高分辨率、高准确性等优点,有利于基因组异常的检测和临床遗传咨询.
作者：王艳；胡平；季修庆；林颖；李璃；张菁菁；周小燕；成建；马定远；曾荔；许争峰 刊期： 2011年第03期
目的 建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法 临床应用的可靠性.方法 依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法.用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果 进行比较.结果 186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例(71.5%),C型37例(19.9%),B/C混合型16例(占8.6%).选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100%,C型符合率100%,B/C混合型符合率81.25%,总符合率94.1%(Kappa=0.909,P<0.05).结果 建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果 有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测.
作者：商红艳；程祖建；欧启水 刊期： 2011年第03期
目的 研究河南省结核分枝杆菌基因型别与耐药性和地区分布关系.方法 用间隔区寡核苷酸序列(spoligotyping)基因分型技术对344株结核分枝杆菌进行分型.结果 344株结核分枝杆菌分为4个基因群[Beijing和Beijing近似群(简称北京群)、T群、MRnu2群、S和LAM3群],共24个基因型,北京基因型有299株,占87.7%,但北京型与非北京型之间耐多药(MDR)株所占比例差异无统计学意义(X<'2>=1.46,P>0.05);北京基因型在≤60岁感染者中分离率占83.6%;除个别地区外,不同地区间的分布无显著性差异.结果 河南省结核分枝杆菌以北京基因型为主要流行型,与MDR和任意耐药无相关性,以≤60岁感染者居多,嵩县分离率略低.
作者：赵玉玲；赵东阳；李辉；杨洪毅；马晓光；赵国强 刊期： 2011年第03期
目的 观察细胞液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)显性负性突变体VPS4B-K180Q在体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的效应.方法 用不同剂量野生型VPS4B真核表达质粒pXF3H-VPS4B和K180Q突变型真核表达质粒pXF3H-K180Q与pHBVl.3共转染Huh7细胞,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)定量检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg含量,Southernblot分析细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化.结果 野生型VPS4B可抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较弱;低剂量突变型VPS4可显著抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较强,且均呈剂量依赖的抑制效应.结果 计 VPS4B及其显性负性突变体可在体外表现出抗HBV的作用,突变型VPS4B抑制HBV能力高于野生型VPS4B.
作者：王维鹏；夏剑波；李磊；郝友华；杨东亮 刊期： 2011年第03期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
