傅祝能；吴荣辉；郭小妹；楼跃明
目的 用改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,初步推测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行情况.方法 筛选出2009年4月～2010年4月对碳青霉烯类抗生素耐药以及敏感性下降或者碳青霉烯类抗生素敏感而一种以上三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌23株,用改良Hodge试验检测其碳青霉烯酶.结果 23株菌中21株(91.3％)呈多重耐药,其中5株菌改良Hodge试验阳性,分别为肺炎克雷伯菌1株、弗劳地枸橼酸杆菌1株、大肠埃希菌1株和霍氏肠杆菌2株.结论 改良Hodge试验阳性提示所测菌株中有产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌的存在,因此要加强对此类细菌的院内感染管理监测.
作者：吴兴福；赵静；谢小芳；周惠琴 刊期： 2011年第08期
目的 探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用.方法 以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条件,分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测,评价2种检测方法结果的一致性.结果 HRM法可检出系列混合样本中5％的突变型等位基因突变,且重复性较高.以测序法为金标准,HRM法的敏感性和特异性均为100％,两种方法结果一致.结论 HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测,具有较高的敏感性和特异性,可用于JAK2基因V617F突变的临床检测.
作者：郑卫东；方伟；刘艳辉；罗盈；杜欣；陈志红 刊期： 2011年第08期
肾移植后患者随着年龄的增长和机体免疫功能的改变,罹患恶性肿瘤的发病风险也随之增加.这类患者切除肿瘤后,部分个体化疗效果不佳,肿瘤复发率较高.因此利用癌细胞对疗药物敏感性性试验筛选有效药物,对指导设计患者个体适当的化疗方案很有必要.本例报告采用三磷酸腺苷(ATP)生物荧光法进行肿瘤化疗药物敏感性检测(tumor chemosensitivity assay,TCA),指导化疗用药.1病例摘要患者,女,48岁,山东济宁市人.2003年8月因慢性肾功能不全在我院进行同种异体右肾移植术.术后常规用环孢霉素(2008年1月起换用雷帕霉素)、强的松、吗替麦考酚酯进行免疫治疗,肾功能恢复正常出院.2006年10月因无明显诱因出现无疼痛血尿入院.超声检查报告:右肾重度积水伴输尿管肾盂连接处实质性占位;膀胱占位;左肾萎缩.
作者：王艾丽；张振宇；刘国瑞；严孝岭；郑田 刊期： 2011年第08期
目的 鉴定人骨髓间充质干细胞(human bone marrow- derived mesenchymal stem cell,HMSC)在肿瘤微环境下分化为肿瘤相关成纤维细胞(tumor associated fibroblast,TAF)及对肿瘤生长作用的观察.方法 用Transwell实验鉴定HMSC向人胃腺癌细胞株( SGC-7901)迁移的能力.对与人胃癌组织或SGC-7901培养上清液(TCM)长期共培养后的HMSC细胞,用免疫荧光染色检测肌动蛋白微丝(F-actin)的表达、免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及波形蛋白(vimentin)的表达.用实时定量PCR法检测与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞中α-SMA表达水平.分别以SGC-7901细胞、SGC-7901细胞+HMSC细胞、胃癌组织与HMSC共培养细胞+SGC-7901细胞、TCM与HMSC共培养细胞+SGC-7901细胞接种裸鼠,构建裸鼠致瘤模型,测定4组模型致瘤时间及瘤体大小.结果 Transwell实验结果表明HMSC在肿瘤微环境诱导下具有向肿瘤迁移的能力,诱导后的HMSC细胞高表达TAF细胞表面特征蛋白F-actin、t-SMA及vimentin,实时定量PCR结果表明与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞α-SMA mRNA表达水平分别为(0.58±0.05)和(0.52±0.06),与对照组(0.35±0.04)相比明显增高(F=4.72,F=5.31,P均＜0.05).裸鼠致瘤模型显示经肿瘤微环境诱导后的TAF可促进体内肿瘤生长.结论 肿瘤微环境诱导下HMSC活化并可分化为TAF,并对肿瘤生长起到促进作用.
作者：朱伟；李雅红；黄玲；陶燕；钱晖；许文荣 刊期： 2011年第08期
目的 建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb).方法 用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体.经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价.结果 本法抗原包被量为0.083 μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL；高、低浓度混合血清批间变异系数(CV)为9.2％、9.0％,批内CV为4.6％、5.6％；回收率为96.0％～104.0％；包被板37℃放置5d保持稳定；与抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)交叉反应率为0.22％.经检测120例健康人,将参考值定为＜65.7 IU/mL.与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数(r)为0.985(P＜0.01).结论 间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强；操作简单,成本较低,适合基层医院.
作者：孙颖；李会强；陈寅；仁杰；李婵 刊期： 2011年第08期
结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是细胞内致病菌,流行病学资料显示,我国结核病呈高患病率、高耐药率、高死亡率、高感染率、病例发现率低等特点[1].结核病的诊断主要根据病史、胸片、痰培养、涂片抗酸染色等.提供快速、敏感、特异、可靠、简便、适合临床应用的实验室检查技术是目前研究的重点之一.MTB基因分型技术能更准确地预测疾病的暴发流行及传播模式,主要是根据其插入序列或重复序列通过扩增或酶切杂交获得指纹图进行分析.本文就MTB的分子生物学分型方法的研究进展作一综述.
作者：代旭磊；柳爱华；宝福凯；汪亚玲；文霞；赵勤；吕松琴 刊期： 2011年第08期
目的 探讨Lymph-X和Lymph-Y在筛查IM、AL中的应用价值.方法 研究对象为1 500例健康体检者,110例IM、ALL、CLL及其他原因致外周血淋巴细胞升高患者.用Sysmex XE-2100血液分析仪检测血常规,统计Lymph-X和Lymph-Y参数并分析.结果 健康体检者Lymph-X和Lymph-Y值与患者年龄、性别及淋巴细胞计数无相关性,参考区间分别为765.3～809.8、624.4～731.4.IM组的Lymph-X和Lymph-Y值分别为871.6±49.3和810.1±153.7,ALL组分别为885.8±70.4和884.9±244.4,明显高于对照组、CL组以及淋巴细胞升高的其他疾病组(P＜0.05).当Lymph-X为839,Lymph-Y为755时,诊断IM的敏感性为94.4％,特异性为75.0％；当Lymph-X为836,Lymph-Y为792时,诊断ALL的敏感性为93.4％,特异性为75.2％.结论 参数Lymph-X和Lymph-Y可用于IM、ALL的筛查.
作者：王宏；戎国栋；陈丹；陆琳；周芸；潘世扬 刊期： 2011年第08期
目的 评价酶联免疫反应加速仪用于ELISA检测CEA、CA242的方法.方法 采用NY/MMJ ELISA加速仪改进法与常规ELISA法分别检测临床血清标本,评价加速仪改进法的精密度以及两法的相关性和一致性.结果 加速仪改进法检测CEA和CA242的批内、批间变异系数(CV)均＜8％,批间CV明显优于常规ELISA.改进法与常规法检测CEA、CA242结果的总符合率分别为99.3％和98.6％,Kappa值分别为0.985和0.934.结论 加速仪具有加速反应的作用,不影响检测结果,可应用于ELISA方法的改进.
作者：闫存玲；李志艳；燕容；冯珍如 刊期： 2011年第08期
目的 用随机扩增多态性DNA (RAPD)分析、以基因外重复回文序列(REP)及肠杆菌基因间重复一致序列(ERIC)为模板的重复序列聚合酶链反应3种基因分型方法对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌进行同源性分析,筛选各级医疗机构易于开展的基因分型方法.方法 从住院患者痰液、尿液、血液等标本中鉴定并筛选产ESBLs大肠埃希菌.以RAPD、ERIC、REP为引物进行扩增的方法,对产ESBLs大肠埃希菌的DNA进行PCR扩增并进行同源性分析.用SPSS 16.0软件进行聚类分析,比较其分辨率系数.结果 共筛选出产ESBLs大肠埃希菌25株,3种方法均可将大肠埃希菌扩增出丰富的区带,产ESBLs大肠埃希菌分别被分为15、18、20个基因型,分辨率系数分别为0.957、0.970、0.977.结论 在产ESBLs大肠埃希菌基因同源性分析中,RAPD、ERIC-PCR和REP-PCR 3种方法的分辨力均很好,尤以REP-PCR分辨率高.
作者：刘丹；王培昌；赵霞；王力红；张京丽；白淑媛；张丽丽；王育英；张红艳 刊期： 2011年第08期
目的 检测Slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义.方法 收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本,用RT-PCR、实时定量PCR检测Slug mRNA的表达；用western blot分析Slug蛋白的表达水平,并分析Slug mRNA在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素及高危型HPV病毒载量的相关性.结果 宫颈癌组织中Slug mRNA表达阳性率及相对表达水平均显著高于慢性宫颈炎症组织(x2=9.872；U=140,P均＜0.01)；western blot也证实Slug蛋白表达水平高于慢性宫颈炎症组织(U=98,P＜O.O1).在宫颈癌组织中,Slug的阳性表达与国际妇产科学联盟( International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)肿瘤分期相关,Ⅱ期阳性率高于Ⅰ期(x2=4.037,P＜0.05),与年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴细胞转移和病理类型无关；而Slug基因相对表达水平与高危型HPV病毒载量呈正相关(r =0.554,P＜0.01).结论 宫颈癌组织中Slug的表达上调,且与宫颈癌的FIGO分期相关,在宫颈癌的发生机制中,可能存在Slug和高危型HPV的协同作用.
作者：张铭；张一鸣；董一善；王梅；赵崇辉；丁小青；钱晖；许文荣 刊期： 2011年第08期
目的 探讨高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因(LDL-R)第2外显子XspⅠ位点多态性与血清IL-6的关系及意义.方法 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术结合DNA测序检测730例高胆固醇血症患者和200例体检健康者LDL-R基因的XspⅠ酶切位点多态性；按基因型分组,用ELISA法检测各基因型IL-6的浓度,对两者关系进行分析.用多元逐步回归分析影响IL-6水平的因素.结果 与健康对照组相比,高胆固醇血症组血清IL-6明显升高,HDL-C降低(P均＜0.05)；基因型分别为X-X-、X+X-、X+X+基因型的高胆固醇血症患者,TC、LDL-C、IL-6水平依次升高,HDL-C水平依次降低,差异有统计学意义(P均＜0.05)；多元线性回归分析显示基因型和胆固醇水平是影响IL-6水平的独立因素.结论 高胆固醇血症患者血清IL-6水平升高,LDL-R基因X+X+基因型可能通过影响IL-6水平促进高胆固醇血症.
作者：张明明；霍丽静；孙海娟；谢霞；周丽霞；帖彦青 刊期： 2011年第08期
目的 用液态芯片技术研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫复合物(IC)对关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌细胞因子的影响.方法 用聚乙二醇(PEG)沉淀法分别提取10份抗环瓜氨酸肽抗体(ACCP)阳性的RA患者及健康人对照血清IC,间接ELISA法测定IC中ACCP特异性IC水平.体外培养RA患者关节FLS,分别用RA患者ACCP-IC阳性IC(ACCP+-IC)、ACCP-IC阴性IC(ACCP--IC)及健康人对照血清IC(C-IC)刺激FLS,培养24h后,用液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响.结果 10份RA患者血清中提取的IC,包括ACCP+-IC 6份和ACCP--IC 4份,刺激FLS 24 h后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACCP+-IC组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8水平均显著高于ACCP- -IC组.3组刺激物组刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异.结论 ACCP+-IC具备更强的促FLS分泌GM-CSF、IL-6和IL-8的活性.
作者：高德玉；王凯；刘阳；夏海萍；严孝岭；虞伟；李晓军 刊期： 2011年第08期
无症状性脑梗死(silent cerebral infarction,SCI)是指临床上无明显脑卒中发作史,而影像学检查却有梗死病灶或有与卒中病史无关的梗死灶.SCI普遍存在,老年人更为常见,并可演变为有症状脑卒中或血管性痴呆,故SCI尽早诊治具有重要意义.有研究表明,心型脂肪酸结合蛋白( heart-type fatty acid-binding protein,H-FABP)、高半胱氨酸(hyperhomocysteine,Hcy)等生物学指标与脑梗死(CI)的发生、发展具有高度相关性[1].本文旨在探讨SCI、CI患者及体检健康人血清H-FABP和Hcy的水平差异.
作者：邱谷；戴世荣；王兴山 刊期： 2011年第08期
糖尿病肾病( diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见的慢性微血管并发症,是导致终末期肾功能衰竭的主要原因.血清β-痕量蛋白(B-trace protein,p-TP)又称为前列腺素D2合酶,是一种低分子量蛋白质,属于脂质运载蛋白质家族,含168个氨基酸,相对分子质量(Mr)在23 000 - 29 000(其大小取决于糖化程度).研究发现,肾功能下降时血p-TP明显升高,且血清肌酐( Scr)正常时(即所谓肌酐盲区)即已升高,是提示肾小球滤过率(GFR)下降的早期指标[1-2].我们研究2型糖尿病( 12DM)患者血清β-TP含量变化,初步探讨其在糖尿病肾损伤中的应用.
作者：陈新宽；郑萍；赵绍林；张欢欢；杨晋；杨新林；马宁；吴惠毅 刊期： 2011年第08期
目的 了解义乌妇女的人乳头瘤病毒( HPV)感染及分型情况.方法 收集4 178例HPV体检妇女宫颈脱落细胞标本,用流式荧光杂交法(液相芯片技术)检测HPV基因型7种低危型、19种高危型.结果 4 178例妇女中有765例阳性,总检出率为18.31％,其中单一基因型检出率为15.53％,二重感染率为2.28％,三重感染率为0.31％,四重感染率为0.19％.HPV亚型共检测出21种,分别是6、11、40、61、16、18、26、31、33、38、39、45、51、52、53、56、58、59、68、82、83型；常见的基因型分别为6、11、16、18、33、52、58等亚型.18 ～30岁组感染较集中的有6、11、16、33、52、58等基因型,31 ～40岁组较集中的有16、18、39、52、58等,41 ～50岁组较集中的有16、18、33、52、58等；低危型感染在18 ～30岁组检出率相对较高,16、52、58型在18～50岁组阳性率均较高；18型在31 ～40、41 ～50岁2组阳性率较高,与18 ～30岁组比较,P均＜0.05.HPV 18、11、6型在本地与外地人口的感染率存在显著差异,P＜0.01,HPV 18型本地人口高,而HPV 11、6型外地人口高.结论 义乌妇女的HPV感染受经商流动人口的影响,基因型分布较广.
作者：傅祝能；吴荣辉；郭小妹；楼跃明 刊期： 2011年第08期
目的 检测宫颈癌患者外周血单个核细胞(PBMC)和癌组织中TH 17细胞(CD3+ CD8 - IL-17+)的比例并分析其转录因子的表达水平,探讨TH 17细胞在宫颈癌发展进程中的作用.方法 收集42例宫颈癌患者外周血和癌组织标本,15例体检健康者外周血标本及15例正常宫颈组织标本.用流式细胞术检测PBMC和癌组织中TH17细胞的比例以及PBMC中CCR5、CCR6、CXCR4水平.用实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)技术测定癌组织标本中RANTES、CXCL12和CCL20的mRNA 表达水平.结果 与对照组比较,宫颈癌患者外周血和癌组织中TH17细胞比例均升高(P＜0.01和P＜0.05),尤以宫颈癌晚期为著.宫颈癌患者PBMC中TH17细胞表面CCR6显著升高(P＜0.01).癌组织中CCL20 mRNA水平亦升高(P＜0.05),RANTES、CXCL12水平无显著差异(P＞0.05).结论 宫颈癌患者外周血和癌组织存在高TH 17细胞水平,且随病程的进展呈现强势表达状态,监测TH 17细胞水平及其特异性转录因子表达状态,有助于病程的判断.
作者：杨佩芳；付婷；张建新；焦志军；王胜军；马洁；苏兆亮；仝佳；许化溪 刊期： 2011年第08期
本研究运用新的流式荧光杂交技术(xMAP)对90例再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者血清中与细胞免疫功能相关的各类细胞因子(CK)进行检测,探讨其在AA发病中所起的作用,为临床诊断与治疗提供理论依据.1材料与方法1.1研究对象2010年7月至2011年3月在我院或浙江大学附属第一医院、浙江大学附属儿童医院等多家医院就诊的AA患者90例,其中急性AA 33例,男10例,女23例,年龄3～67岁,中位年龄34岁;慢性AA57例,男33例,女24例,年龄9 ～74岁,中位年龄29岁.所有病例诊断均参照文献[1].非AA对照组为浙江省中医院门诊和体检人员,共37例,男19,女18例,年龄6～63岁,中位年龄35岁,临床和实验室检查排除血液系统疾病及感染性疾病.
作者：刘永林；周郁鸿；陈益民；陈婷婷；张丽；施丽华；吴迪炯；叶宝东；姚惠 刊期： 2011年第08期
目的 评价LC Green、Syto 9和Eva Green 3种高分辨熔解(HRM)染料对单核苷酸多态性(SNP)基因分型的能力.方法 以肿瘤坏死因子(TNF)基因启动子-857 C ＞T(rs1799724)位点为例,分别用上述3种荧光染料进行PCR-HRM检测,依据特征熔解曲线进行基因分型并测序验证.基因分型能力评价以野生型与纯合突变型PCR产物Tm值之差(△Tm)来表示.结果 PCR-HRM检测到4种特征熔解曲线,经测序后发现第4条为双突变杂合,包含-863C＞A(rs1800630)位点.HRM染料LC Green,Syto 9,EVa Green的基因分型能力分别为(0.52±0.030)℃、(0.51±0.066)℃和(0.39±0.152)℃.其中Syto 9野生型(CC)和突变型(TT)的变异系数(CV)均为0.03％,为3种染料中低.结论3种染料均能用于HRM技术进行SNP基因分型,Syto 9和LC Green分辨率优于Eva Green,其中Syto 9易用性好、Eva Green性价比高.
作者：尤崇革；李晓军；郜莉娜；李菲菲 刊期： 2011年第08期
糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,GHb)是红细胞内血红蛋白与糖类物质(主要是葡萄糖)通过非酶促作用形成的化合物.2007年中国2型糖尿病(T2DM)防治指南中已将GHb作为血糖控制状态的指标[1].本文对GHb形成的分子基础、检测方法的研究现状与标准化、测定影响因素和在糖尿病( diabetes mellitus.DM)诊疗中的应用进行综述.
作者：涂国华；姜旭淦 刊期： 2011年第08期
目的 探讨宫颈癌患者新辅助化疗前后血清胸苷激酶1(S-TK1)水平的变化在预测新辅助化疗疗效中的意义.方法 选择69例经宫颈活检证实为宫颈癌患者,行新辅助化疗2个疗程,用免疫增强化学发光点印记法( ECL dot-blot)检测化疗前后的S-TK1含量,同时检测42例体检健康者S-TK1水平.结果 宫颈癌患者S-TK1水平为(8.63±2.36) pmol/L,显著高于健康对照组的(0.52±0.42) pmol/L(P＜ 0.05)；宫颈癌患者新辅助化疗后的S-TK1水平为(3.63±2.76) pmol/L,明显低于化疗前的(8.63±2.36) pmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05)；临床缓解组的S-TK1含量降低的百分比显著高于临床无效组(P ＜0.05).结论 S-TK1检测可以作为评估宫颈癌新辅助化疗疗效的指标之一.
作者：陈赛英；史佃云 刊期： 2011年第08期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
