张国雄；杨桂珍；江广安
对于肺癌的辅助诊断和监测，常用的血清肿瘤标志物为:CEA、TSA、β2-MG、TUM等，鉴于它们均为非特异性的肿瘤相关抗原，检测肿瘤的敏感性及特异性均有限。我们将上述4种标志物进行联合测定和评价，并分析、比较不同的组合，以提高检测肺癌的敏感性。现报告如下。1 材料与方法1.1 健康人对照组 65例健康成人，男36例，女29例，年龄均在45～56岁。1.2 肺癌组经临床、实验室、影像学、病理学等确诊的58例肺癌患者，男46例，女12例，年龄均在42～70岁。1.3 术后组对肺癌组其中45例患者进行了术后6个月～2年的追踪检测，复诊时由CT及放射检查确定是否有转移或复发。
作者：张桂英；邓法文；田新 刊期： 2001年第03期
红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD),是磷酸戊糖旁路中产生还原型辅酶Ⅱ的关键酶。G6PD缺乏症是一种常见的人类遗传性酶缺陷疾病，其基因突变是导致G6PD缺乏症的主要分子基础。G6PD基因定位于X染色体长臂2区8带(x,q2.8)上，全长20 114 bp，由13个外显子和12个内含子组成。在G6PD的突变中nt1 376 G-T和nt1 388 G-A两个点突变是中国人中常见的突变，占发病率的65%左右。它们都位于12外显子上，位置上仅相差12个碱基。云南是G6PD缺陷的高发区，因此我们就第12外显子的突变用PCR-DGGE技术进行了研究，研究结果如下。
作者：王玉明；段勇；许冰莹；刘华 刊期： 2001年第03期
目的评价基于选择性水解原理的两种低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的直接测定法(Ⅰ法和Ⅱ法)的精密度、准确度和特异性。方法将这两种方法与聚乙烯硫酸沉淀法(PVS法)作了比较，并以超速离心分离的HDL和LDL组分分析了对LDL-C测定的特异性与准确性。结果高、低两种LDL-C浓度混合血清所测定的结果表明这两种方法均有良好的精密度，总CV值直接测定Ⅰ法3.96%～4.42%，直接测定Ⅱ法0.78%～3.91%，都可达到临床满意的程度。48份临床标本测定结果(±s)分别为3.68±1.23 mmol/L(PVS法)，3.25±1.11 mmol/L(直接测定Ⅰ法)和3.37±1.21 mmol/L(直接测定Ⅱ法)，直接测定法与PVS法测定结果的差异无统计学意义。PVS法(X)与直接测定Ⅰ法(Y)的回归方程为Y=0.848X+0.121(r=0.9427),与直接测定Ⅱ法(Y)的回归方程为Y=0.914X+0.007(r=0.9353)，两种直接测定法与PVS法有良好的相关。对超离心HDL和LDL组分测定的结果表明两种直接测定法对LDL-C有较好的特异性。稀释试验的结果表明两种直接测定法均有良好的线性，线性范围至少可达9.28 mmol/L。结论以选择性水解法直接测定LDL-C具有较好的精密度，对LDL有很好的特异性，适应自动分析，可以真实反映LDL-C的水平，值得在临床推广应用。
作者：贺娟；李清华；戴强 刊期： 2001年第03期
目的建立检测穿孔素mRNA的定量RT-PCR方法。方法用限制性内切酶制备竞争性模板，建立定量RT-PCR方法，检测正常人及部分肿瘤病人外周血的穿孔素mRNA水平。结果 6例正常人的外周血穿孔素mRNA含量为0.51±0.40 pmol/ml,消化道肿瘤患者的穿孔素mRNA水平与正常相比，有显著差异(P<0.01)，乳腺肿瘤及白血病患者的穿孔素mRNA水平与正常人相比，没有差异。结论穿孔素mRNA水平的降低可能是肿瘤发生的一个重要原因；除穿孔素途径以外，还存在别的抗肿瘤的效应机制。
作者：秦卫松；李芳秋；武建国 刊期： 2001年第03期
我们用荧光定量PCR检测宫颈分泌物中Ureaplasma urealyticum(解脲支原体，简称Uu)，结果如下。1 材料和方法1.1 仪器 PE-5700荧光定量PCR仪，万分之一天平Chyo JK180。1.2 试剂盒达安基因诊断中心产品。1.3 方法1.3.1 标本来源培养法阳性的解脲支原体感染病人的宫颈分泌物41份。1.3.2 棉拭子取样法将长8 cm棉拭子装入长10 cm的塑料离心管中，加热封口，经60Co照射灭菌。在分析天平上称量每只管的重量，标于管上。取样时，在管上端剪口，取出拭子，插入宫颈口捻转并停留数秒，取样后小心放回试管中，立即送检，称取该管重量。将取样后总管重量减去取样前总管重量即为所取宫颈分泌物的重量。加入1 ml生理盐水，震荡提取分泌物，分取定量体积(d)于1.5 ml塑料离心管中，10 000 r/min 离心10 min,弃上清液，加入50 μl裂解液，沸水裂解10 min，吸取2 μl于反应管中与标准曲线反应管一同按下列条件扩增:93℃ 2 min预变性，然后按93℃ 45 S、55℃ 120 S共40个循环。反应结束后电脑按标准曲线计算待测样品反应管中每微升体积Uu的考贝数(Copy/μl)，后按下列公式计算每克分泌物中含Uu的拷贝数(Copy/g): Copy/g=(Copy/μl×50 μl)/(g×d/1000)
作者：张宁；唐轶；李力；段云葵；齐倩 刊期： 2001年第03期
目的利用伯氏疏螺旋体基因工程抗原外膜蛋白C(OspC)建立间接ELISA，检测莱姆病特异性抗体IgM。方法基因工程抗原OspC的包被浓度和酶标抗μ链单抗所用浓度及血清稀释倍数，均由方阵滴定法确定，并进行精密度、特异性试验、阻断试验和干扰试验。结果 OspC佳浓度为150 μg/L，批内平均变异系数4.6%，批间平均变异系数14.2%，用ELISA测定临床已确诊莱姆病33例，57例正常体检者，同时与进口ELISA试剂盒比较，两方法符合率97.8%。结论该方法特异性强、敏感性高、实验结果可靠，是莱姆病早期诊断的好方法。
作者：贾月萍；周国萍；曾丽苹；高峰 刊期： 2001年第03期
本文测定了19例急性心肌梗死(AMI)病人血清CK-MB酶活性及其酶蛋白浓度，并对其在临床中的应用进行了初步比较。1 材料与方法1.1 实验对象门诊AMI病人19例，年龄55～85，男12例，女7例；疾病对照组为非心肌梗死(NAMI)的急诊病人17例，年龄35～85岁，男12例，女5例；正常对照组为健康体检之健康人26例，年龄20～52岁，男18例，女8例。1.2 仪器与试剂1.2.1 CK-MB酶蛋白浓度测定雅培AxSYM全自动免疫化学发光分析仪及CK-MB酶蛋白浓度测定试剂盒。1.2.2 CK-MB酶活性测定日立7170s型全自动生化分析仪，CK-MB酶活性测定试剂盒由日本第一化学株式会社提供。1.3 实验方法 19例AMI的门诊急诊病人在进行心电图检查的同时采取血液标本，以后每隔2 h采集一次血液标本。连续采集20次。同样采集NAMI以及健康对照组人群之血清标本。立即离心分离血清后储存于-80℃冰箱中待测CK-MB酶蛋白浓度。而CK-MB酶活性则立即进行测定。
作者：宋宇；钟家启；赵岚；王顺 刊期： 2001年第03期
目的探讨血浆纤维蛋白(原)降解产物(FDP)、D-二聚体(D-D)对凝固法(Clauss法)测定纤维蛋白原(Fib)的影响。方法留取22例体检正常标本和86例FDP、D-D可能增高的患者标本，分别用PT-衍生法(PT-der法)和Clauss法测定其Fib浓度，ELISA法测定其FDP、D-D含量。再将正常混合血浆和高FDP、D-D浓度的异常混合血浆以不同比例混合后同上法测其Fib、FDP、D-D的浓度。结果 PT-der法和Clauss法测定正常组血浆的Fib无显著性差异，P>0.05,而对PDP、D-D增高的异常血浆，用两种方法测得的Fib有显著性差异，Clauss法结果低于PT-der法，两者差值与FDP、D-D的浓度呈正相关。结论表明FDP、D-D会使Clauss法测定Fib的浓度偏低，其偏低的幅度与FDP、D-D的含量呈正相关。
作者：王明山；谢海啸；陈晓东 刊期： 2001年第03期
由于化疗能引起肿瘤病人的骨髓抑制，所以，需要持续监测有关的血细胞参数。血小板数(Plt)及平均血小板体积(MPV)为常用的两个血小板参数。本文对41例肿瘤患者化疗前后Plt及MPV的变化进行监测，以探讨由化疗引起的骨髓抑制与Plt、MPV变化之间的关系。1 材料与方法1.1 标本 41例住院化疗病人。男19例，女22例，平均年龄55.2岁。其中胃肠道肿瘤14例，肺癌16例，乳腺癌9例，肝癌2例，全部病例经病理证实，均未发生骨转移。1.2 方法 JT-IR血细胞分析仪(Coulter)，取静脉血0.5 ml,5 μl EDTA*K2 150 g/L抗凝，2小时内测定:化疗前1次；化疗后一周内隔天1次；一周后每3天1次；三周后1～2次/周，直至Plt恢复至化疗前水平。所测数据进行成组比较t检验。
作者：孙巍；刘秀巧；万文徽 刊期： 2001年第03期
目的建立适合于自动化分析的人血清和尿肌酐的肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶指示系统的酶促动力学测定方法。方法在反应体系中加入异柠蒙酸脱氢酶及其作用底物异柠檬酸，再生由主反应前氨消耗的NADPH和α-酮戊二酸，其后加入镁离子络合剂CyDTA和肌酐亚氨水解酶的启动试剂启动反应，在此同时NADPH和α-酮戊二酸的再生反应被终止，测定NADPH于340 nm处吸光度的变化，计算样品中肌酐的浓度。结果本法测定线性范围为40～2000 μmol/L,批内和常规条件下的变异系数均小于5%，回收率为98.5%，与高效液相色谱法具有良好的相关性(r=0.9930)。乳糜、黄疸、溶血、酮体、乳酸盐、临床常用的治疗药物和高至2 mmol/L的氨对测定没有干扰。结论本法操作简便、精确，推荐作为常规测定方法。
作者：徐国宾；朱立华；夏铁安 刊期： 2001年第03期
人类巨细胞病毒(CMV)感染能引起移植物的慢性排异，正确诊断及治疗CMV感染可有效提高移植物的存活率，减少医疗费用。然而在众多CMV感染的实验室检查中，究竟哪一种方法可靠一直存有争议。本项目采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测CMV DNA，报道如下。1 材料和方法1.1 92名1997年1月至2000年5月在我院接受肾移植的患者，移植时间2个月～40个月。收集中段晨尿，临床上有感染症状的患者在抗病毒治疗后反复留取尿标本，共收集标本112份。1.2 TagMan和CMV DNA荧光定量试剂由达安基因诊断中心提供。1.3 PE5700荧光定量PCR仪和计算机自动荧光检测仪(PE公司)。1.4 标本处理留取中段晨尿10 ml密封送检，取1 ml至1.5 ml离心管中，12 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀加生理盐水打匀，15 000 r/min离心5 min，沉淀加50 μl DNA提取液充分混匀，沸水浴10 min,10 000 r/min离心5 min,取上清液2 μl做PCR反应。1.5 PCR扩增及荧光测定取CMV PCR反应管，直接加入处理后样品2 μl，振荡器振荡2～3s混匀，将反应管放入PCR仪，93℃ 2 min预变性，93℃ 45s,55℃ 120 s,共做40个循环。然后通过计算机自动荧光检测CMV DNA含量，结果以基因拷贝数/ml表示。
作者：于青；谢匡成；姚建；徐琴君 刊期： 2001年第03期
目的根据引物二聚体形成原理，建立一种新的克隆目的基因的方法。方法人工合成两条或两条以上3′端互补配对的寡核苷酸链，寡核苷酸链、Taq酶和dNTP按一定比例混合，PCR扩增延伸，琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。结果 PCR产物经电泳鉴定，可见一条清晰的特异条带。结论此方法能合成500 bp以下的短片段目的基因。
作者：徐祥；刘昕；梁华平；代佳平；毛琼国；罗艳 刊期： 2001年第03期
糖原累积病(Glycogen storage disease,GSD)是糖原代谢途径中与糖原合成和分解有关的某些特定酶的缺陷，导致糖原在不同组织异常储积而造成的疾病。以往，这类疾病的确诊常需要进行组织活检，不仅造成损伤，亦不易为病人接受。本文试用红细胞糖原测定，替代肝糖原测定，作为GSD患者的筛查和诊断手段，报道如下。1 材料和方法1.1 试剂 (1)淀粉葡萄糖苷酶、已糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、糖原，均为Sigma产品。临用前将糖原按文献［1］用0.6 mol/L的高氯酸溶液配制成浓度度为50 mg/L的工作液。(2)酶反应缓冲液:浓度为70 mmol/L，pH 7.7的PBS，内含Mg2＋、NADP、ATP(Sigma产品)，终浓度分别为4 mmol/L,1.3 mmol/L,1.3 mmol/L。
作者：陶德定；舒丹；林汉华 刊期： 2001年第03期
RhD抗原是除ABO血型系统之外具免疫原性的红细胞抗原分子，在Rh血型系统中占重要地位［1］。D抗原根据其抗原量的变化表现其抗原性的强弱，表型D—/D—抗原性强，其次为弱D(Du)、弱为Del型［2］。既往对Du及Del基因结构仅限于推测，笔者采用基因检测技术分析构成Du、Del型基因的结构，现报告如下。1 材料和方法1.1 Du标本 5例，用血清学技术2次检定，方法按《中国输血技术操作规程》操作［3］。1.2 Del标本 8例，经血清学技术检定为Rh阴性(方法同上)的标本再用吸收放散试验检定。采用三氯乙烯和三氯甲烷放散法［2］。8例标本中，6例表现型为CCee，2例为Ccee。
作者：张志梅；兰炯采 刊期： 2001年第03期
ABO血型正反定型为血型血库实验室中重要的基本工作。ABO正反定型不合有技术性问题及理论性问题。技术性问题容易解决，只要认真重复试验，仔细核对血样和试剂，正确读取结果及防止书写错误即可避免，但理论性问题有时相当复杂，必须对ABO血型的基本理论全面了解才能解决。1 ABO正反定型不合的技术性问题 ABO正反定型不合存在如下技术性问题:血样搞错；书写错误；红细胞悬液太浓或太淡；漏加或误加试剂；试剂污染或失效；离心机速度未核实；结果判断方法不规范、标准不统一；判断结果时只注意了红细胞凝集而忽略了溶血现象。2 ABO正反定型不合的理论性问题 ABO正反定型不合理的理论性问题相当深奥，有时也不易弄清。在企图探查正反定型不合的原因之前，首先必需核对被检者的姓名、年龄、诊断、妊娠史、输血史。试剂的来源、品质和质量、人源抗血清还是单克隆试剂，必要时还应测定被检者免疫球蛋白的水平。
作者：毛菊珍；张莉尼；陈忠 刊期： 2001年第03期
目的探讨2型糖尿病周围神经病变(DPN)与抗神经节苷酯(GS)抗体的关系。方法采用固相酶联免疫吸附法对2型糖尿病神经病变和无神经病变以及其他神经病变和正常人进行抗神经节苷酯IgM、IgG抗体检测。结果 DPN组抗GS-IgM、抗GS-IgG抗体分别为46.7%和20.0%，明显高于无神经病变组和其他神经病变组及正常人。结论抗神经节苷酯抗体与糖尿病周围神经病变关系密切，其在病理过程中可能起着重要作用。
作者：周微雅；李妮；钟华；颜晓东；陈晖 刊期： 2001年第03期
糖尿病患者由于存在持续高血糖使非酶糖酰化速率加快，导致组织缺氧，血液粘滞度增高［1］，同时内皮细胞释放内皮素、P-选择素等血管活性物质［2］，使肾小球毛细血管张力变化，引起肾血流动力学改变，使肾小球处于高滤过状态引起肾损害。本文通过定量检测尿中微量蛋白［包括白蛋白(mAlb),IgG］,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)，探讨其在糖尿病肾损害中的临床价值。1 材料与方法1.1 检测对象 (1)临床确诊的糖尿病患者152例，其中男85例，女67例，平均年龄43.2±15.5岁。(2)对照组65例，健康献血员。1.2 尿微量蛋白测定尿微量白蛋白及IgG采用酶免疫法(ELISA)测定，NAG采用终点比色法，试剂盒均由福建太阳生物技术公司提供，严格按说明书操作，各组间采用t检验统计结果。 尿中两种微量蛋白及NAG含量正常参考值上限为:mA1b<19 mg/L,IgG<5.0 mg/L,NAG<18.5 U/L,测定结果高于参考值上限者判断为阳性。
作者：董德平；严冲；钱开成；周永华 刊期： 2001年第03期
1 病例摘要 患者，男，19岁，双眼结膜充血，流泪，畏光，有脓性分泌物。曾用氯霉素、氢化可的松滴眼有好转，但停药后又复发，持续了2个多月，于2000年3月18日来我院就诊，分别于3月18日、3月19日、3月20日，连续3次取眼分泌物做培养，均分离出Listeria grayi(格氏李斯特菌)。后经选用敏感药物红霉素，四环素滴眼而痊愈。2 细菌分离与鉴定取患者双眼分泌物，接种血琼脂培养基。置35℃ 24 h,出现细小、表面光滑，灰白色，圆形的菌落，直径1～2 mm,无β溶血环。革兰染色为阳性短小杆菌，可见到典型的V型或成双排列。将培养4天的细菌再作革兰染色，有较多的细菌呈阴性，但形态无改变。3 生化反应该菌氧化酶阴性，触酶阳性，有动力，能发酵葡萄糖、乳糖、半乳糖；甘露醇，肌醇，水解七叶苷，VP试验呈阳性反应。CAMP试验、硝酸盐还原、木糖、鼠李糖、水解马尿酸盐、山梨醇、松三糖均为阴性。4 药敏试验 K-B法，该菌对红霉素、四环素、复方新诺明敏感。对青霉素、氨苄青霉素、羟苄青霉素、头孢三嗪、卡那霉素、丁胺卡那霉素均耐药。
作者：敖必蓉 刊期： 2001年第03期
目的建立一种高效的基因多态性检测方法。方法用等位基因特异性扩增(ASA)和等位基因特异性扩增酶联免疫法(ASA-ELISA)对CYP1A1基因m2多态性进行检测。结果两种方法的检测结果基本一致，仅有1例不相同。ASA-ELISA将地高辛标记在扩增产物上，然后通过酶联免疫法检测扩增产物，检测灵敏度与等位基因特异性扩增(ASA)后琼脂糖凝胶电泳相比高100倍。结论该方法具有操作简单、快速、灵敏度高等特点，可用于大标本量的基因多态性检测。
作者：周新文；石云；周宜开 刊期： 2001年第03期
目的了解HBV感染的不同血清学指标组合的HBV-DNA阳性情况。方法对415份血清同时行ELISA方法测定HBV-M及普通PCR法检测HBV-DNA。结果 HBsAg(+)组HBV-DNA阳性率为77.8%(270/347)，HBsAg(-)组HBV-DNA阳性率19.1%(13/68)，二者差别显著(P<0.001)。其中153例HBsAg(+)HBeAg(+)抗HBc(+)血清，HBV-DNA全部阳性，阳性率为100%，HBsAg(+)抗HBe(+)抗HBc(+)组血清HBV-DNA阳性率为66.9%(79/118)，HBsAg(+)抗HBc(+)组血清HBV-DNA阳性率为50%(38/76)，抗HBs(+)组为18%(9/50)，9例抗HBs(+)抗HBe(+)抗HBc(+)血清中2例HBV-DNA阳性，3例抗HBs(+)抗HBc(+)血清中1例HBV-DNA阳性，4例单一抗HBc(+)血清中1例HBV-DNA阳性。结论单凭HBsAg或HBeAg是否阳性来判断肝脏中HBV复制及有无传染性是不够的，易造成部分慢性乙型病毒性肝炎的漏诊，对HBsAg阴性无论抗HBs是否阳性，只要有HBV感染后的任何血清学依据，都应进一步检测血清HBV-DNA作为诊断乙型肝炎的第二步筛选，有条件时肝活检加以证实。
作者：李娟；王春平；陈佩兰；陈天宝；范公忍；邓涛；彭晓君；胡大荣 刊期： 2001年第03期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
