学术投稿

幽门螺杆菌 lpp20基因在食品级乳酸菌中的表达及免疫活性鉴定

孙楠;张荣光;段广才;陈帅印;彭晓燕;范清堂;郗园林

关键词:乳酸菌, lpp20基因, 幽门螺杆菌, 分泌表达, 食品级
摘要:目的:构建分泌表达幽门螺杆菌 lpp20基因的重组乳酸乳球菌菌株,并鉴定其免疫活性,为研究安全高效的幽门螺杆菌口服疫苗奠定基础。方法:采用 PCR 法从幽门螺杆菌基因组 DNA 中扩增 lpp20基因,将 lpp20先与 T 载体(pMD19-T)连接,进而经双酶切与表达载体 pNZ8149-SPusp45连接,用电穿孔法将重组质粒转入食品级乳酸乳球菌菌株 NZ3900中,并用 Nisin 诱导 Lpp20表达,表达产物通过 Western blot 法鉴定免疫活性。结果:lpp20基因的 PCR 扩增产物大小约为540 bp,重组质粒的酶切、PCR 和测序鉴定结果符合预期;在菌体和培养基中均检出表达的 Lpp20蛋白,重组表达的 Lpp20蛋白相对分子质量约为20000,且具有与小鼠抗幽门螺杆菌血清反应的免疫活性。结论:成功构建了能够分泌表达幽门螺杆菌 Lpp20抗原的乳酸乳球菌菌株,该重组菌株在口服疫苗研究中具有应用潜力。
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 某市轨道交通空气微生物浓度及其影响因素

    目的:调查某市地铁站空气微生物浓度及分布状况,并对其影响因素进行分析。方法:依据《公共场所卫生检验方法》,随机抽取该市的5个地铁站,对其空气微生物分布状况、温度、湿度、人流量进行调查,并对空气微生物种类进行鉴定分析。结果:站台、站厅、车厢细菌总数合格率均为100%,细菌总数分布表现为车厢、站厅>站台>地面。站台、站厅、车厢真菌总数合格率分别为72%、60%、50%,真菌总数分布表现为地铁内部(站台、站厅、车厢)菌落总数都大于地面。细菌总数、真菌总数与人流量的相关系数分别为0.719、0.344(P <0.05)。细菌中优势菌为葡萄球菌属,真菌中优势菌为曲霉菌属和青霉菌属。结论:该市地铁内部细菌污染程度较轻,但真菌污染程度较严重,且空气微生物浓度与人流量密切相关。

    作者:龙金照;朱杰辉;黄璐;杨永光;郗园林 刊期: 2016年第04期

  • β-胡萝卜素对食管鳞癌 EC1细胞增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响

    目的:观察β-胡萝卜素对食管鳞癌 EC1细胞增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响。方法:用不同浓度(1、5、10、20、30、50μmol/L)β-胡萝卜素分别处理 EC1细胞12、24、36、48、60、72 h 后,CCK-8法检测β-胡萝卜素对EC1细胞增殖率的影响,筛选β-胡萝卜素的佳处理时间及浓度;随后,在此条件下将 EC1细胞分为3组(阴性对照组、空白对照组和实验组),采用 Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Tr-answell 迁移实验检测细胞迁移能力的变化, Western blot 检测小窝蛋白1(Cav-1)、p-Akt、p-NF-κB、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin 蛋白表达水平的变化。结果:经筛选,选用50μmol/L β-胡萝卜素作用 EC1细胞48 h 进行后续实验。与阴性对照组和空白对照组相比,实验组 EC1细胞凋亡率显著提高(P <0.001),G0/G1期细胞比例增加(P <0.001),而 S 期细胞比例降低(P <0.001),发生迁移的细胞数量减少(P <0.001),且细胞黏附因子 E-cadherin 的表达显著增加(P <0.001),Cav-1及 AKT信号通路关键蛋白 p-Akt、p-NF-κB、Bcl-2表达量明显下调,而 Caspase-3的表达被激活(P <0.001)。结论:β-胡萝卜素能够有效促进 EC1细胞的凋亡,推测可能是通过抑制 Cav-1介导的AKT/NF-κB 信号通路发挥作用。

    作者:朱相展;张彦婷;杨露;张楠楠;李庆华;马珊珊;张琨;薛乐勋;关方霞 刊期: 2016年第04期

  • 能谱 CT 佳单能量图像在胃周动脉显影中的应用

    目的:探讨能谱 CT 佳单能量图像在胃周动脉显影中的应用价值。方法:对64例怀疑胃部疾病的患者行宝石能谱 CT 扫描,利用佳对比信噪比(CNR)技术得到佳单能量图像,然后观察胃周动脉成像质量(观察指标包括 CT 值、CNR、噪声),同时用5分法评价图像质量,记录胃周动脉的显示率,并和混合能量图像相比较。结果:显示胃周动脉的佳单能量水平为(53±3) keV。佳单能量图像的腹腔干 CT 值、噪声、CNR 均高于混合能量图像(P 均<0.05);胃周动脉图像5分法评分均高于混合能量图像(P <0.05),但是二者胃周动脉显示率差异无统计学意义(P >0.05)。结论:能谱 CT 佳单能量图像可以提高胃周动脉成像的质量。

    作者:万娅敏;姬妮娜;高剑波 刊期: 2016年第04期

  • 慢性阻塞性肺疾病模型大鼠骨骼肌中 Calpains 的表达

    目的:探讨 Calpains 在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌萎缩中的作用。方法:40只健康雄性Wistar 大鼠随机分为 COPD 模型组及对照组,模型组采用气管内注入脂多糖加香烟烟雾染毒法建立大鼠 COPD 模型,HE 染色法观察肺组织及骨骼肌(趾长伸肌、膈肌)组织的病理学改变;分别采用免疫组化和 RT-PCR 法测定骨骼肌组织中 Calpains(μ-Calpain 和 m-Calpain)蛋白及 mRNA 的表达。结果:在 COPD 模型组大鼠观察到骨骼肌萎缩,对照组大鼠未见骨骼肌萎缩。与对照组比较,COPD 模型组大鼠趾长伸肌及膈肌中μ-Calpain 和 m-Calpain 蛋白及 m-Calpain mRNA 表达增强(P <0.05),而μ-Calpain mRNA 的表达差异无统计学意义(P >0.05)。结论:Calpains在 COPD 模型大鼠骨骼肌中表达上调,可能参与 COPD 模型大鼠骨骼肌萎缩。

    作者:刘待见;冯慧芬;刘剑波 刊期: 2016年第04期

  • 丹蒌片对同型半胱氨酸诱导的兔主动脉内皮细胞 CHOP、BIP蛋白表达和凋亡的影响

    目的:观察丹蒌片对同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔主动脉内皮细胞凋亡及内质网应激相关蛋白 C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)表达的影响。方法:以 HCY诱导建立兔主动脉内皮细胞损伤模型,分别用瑞舒伐他汀(他汀)、丹蒌片含药血清或二者联合共同培养48 h 后, Annexin V-PI 法检测细胞凋亡率,Western blot 法检测 CHOP、BIP 蛋白表达情况。以未诱导细胞作空白对照。结果:模型细胞凋亡率及 BIP、CHOP 蛋白表达水平均高于空白对照(P <0.05)。丹蒌片和他汀可明显降低模型细胞的凋亡率,二者具有协同作用(F丹蒌片=475.288,F他汀=235.248,F交互=121.377,P <0.05);丹蒌片可显著下调模型细胞BIP、CHOP 蛋白的表达水平,与他汀无协同作用(F丹蒌片=7.017,8.147,P 均<0.05;F交互=0.590,1.406,P 均>0.05)。结论:丹蒌片可通过下调 CHOP、BIP 的表达抑制血管内皮细胞凋亡。

    作者:张妍;史占江;牛春玲;沈晓君 刊期: 2016年第04期

  • 低位梗阻性左半结直肠癌经肛肠梗阻导管清洗减压与术中结肠灌洗效果比较

    结直肠癌合并梗阻是临床较常见的一种急腹症,其发生率占所有结直肠癌的8%~29%[1],传统治疗方法是结肠造瘘、分期手术,严重影响患者的生活质量。1980年,Dudley 等[2]报道采用术中顺行结肠灌洗一期切除吻合可使部分患者避免二次手术的痛苦,一期切除吻合逐渐为人们接受。近年来,经肛置入肠梗阻导管清洗减压技术逐渐应用于低位梗阻性左半结直肠癌患者的治疗。2005年3月至2015年6月,作者对93例低位梗阻性左半结直肠癌患者分别采用了经肛肠梗阻导管清洗减压和术中结肠灌洗,该文回顾了其临床资料,比较两种方法的疗效。

    作者:郑立;史朝辉 刊期: 2016年第04期

  • 非酒精性脂肪肝患者肝组织中 Irisin 的表达

    目的:探讨 Irisin 在非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者肝穿刺组织中的表达及其意义。方法:回顾性分析病理活检确诊的非酒精性单纯性脂肪肝(NAFL,n =56)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH,n =75)患者及无脂肪变和脂肪性肝炎的正常者(n =20)的临床资料,免疫组化 SP 法检测各组肝穿刺组织中 Irisin 的表达水平。结果:3组年龄及性别构成比差异无统计学意义(P >0.05)。与正常对照组相比,NAFL 组及 NASH 组存在脂质代谢异常。 NAFL 组和 NASH 组肝组织中 Irisin 表达水平高于对照组(P <0.05),但 NAFL 组和 NASH 组间差异无统计学意义(P >0.05)。结论:Irisin 可能是一种补偿性调节肝脏脂质蓄积的因子。

    作者:马圆圆;吴雪;刘晓钢;张丽侠;李姗;王亭亭;王志芳;李冲;李静怡;韩超;李付广;郑丽丽 刊期: 2016年第04期

  • 基于周期分解的圆形分布法分析我国流行性乙型脑炎季节特征

    目的:探讨基于周期分解的圆形分布法在分析我国流行性乙型脑炎(乙脑)季节特征方面应用的可行性。方法:先使用周期分解法对我国2005年至2014年乙脑发病的季节特征进行分解,再用圆形分布法验证分解出来的季节指数的季节性特征。结果:2005年至2014年我国乙脑发病数呈下降的趋势;乙脑发病呈现出明显的季节性,发病高发日在8月16日,高峰期在7月至9月,流行期在6月至10月。结论:我国乙脑发病具有明显的季节性。满足圆形分布法的应用条件时,基于周期分解的圆形分布法在了解传染病季节特征方面具有较好的应用价值。

    作者:王永斌;柴峰;李向文;袁聚祥 刊期: 2016年第04期

  • 河南省城市社区基本公共卫生服务实施现状及公平性分析

    目的:了解河南省18个地级市城市社区基本公共卫生服务项目实施情况,并进行公平性分析,为河南省基本公共卫生服务建设提供数据支持。方法:通过查阅2013年《河南省卫生统计年鉴》《河南人口统计年鉴》和河南省2013年基本公共卫生服务调查报告资料,对比分析河南省2013年城市社区基本公共卫生服务项目实施情况,采用基尼系数和泰尔指数对河南省城市社区基本公共卫生服务项目实施的公平性进行分析。结果:河南省18个城市地区基本公共卫生服务项目的基尼系数大部分小于0.3,预防接种服务项目、传染病报告项目、其他慢性病患者管理项目的基尼系数处于0.3~0.4之间,卫生监督协管报告的事件或线索项目的基尼系数超过0.4。除了预防接种服务实种剂次、传染病报告卡片数、重症精神疾病患者管理人数、2型糖尿病患者管理人数4项外,其他几项城市地区基本公共卫生服务项目差异的组间差异贡献率均大于组内差异贡献率。结论:河南省城市地区基本公共卫生服务实施公平性整体较好,但一些服务项目实施情况在各地区间仍存在差异,其主要由各地区间卫生资源配置的不均衡所造成。

    作者:于达;孙亮;连祎晓;杨淑敏;吴迪;李小芳 刊期: 2016年第04期

  • 以反复右侧胸腔积液为临床表现的原发性系统性淀粉样变一例并文献复习

    系统性淀粉样变是指以细胞外异常折叠(β折叠)蛋白为主的淀粉样物质在器官组织细胞外沉积所引起的一组疾病,可累及机体任何器官,常累及肾脏、皮肤、胃肠道、肝脏和神经系统,但累及胸膜并以顽固性胸腔积液为主要表现的淀粉样变则少见[1-2]。现将郑州大学第一附属医院收治的一例原发性系统性淀粉样变的资料结合国内外相关文献总结论述如下。

    作者:周璐;李芳;王焕勤;黄亚辉;田文娴;王静 刊期: 2016年第04期

  • 大气细颗粒物不同成分对 A549细胞遗传毒性的影响

    目的:研究大气细颗粒物(PM2.5)不同成分对人肺腺癌Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549)遗传毒性的影响,探索 PM2.5暴露的细胞毒性机制及发病机制,为开展河南地区 PM2.5的健康危害评估提供实验依据。方法:于郑州市采集并处理 PM2.5非水溶性成分和水溶性成分,分为 PM2.5非水溶性和水溶性成分不同浓度(50、100、200、400、800 mg/L)染毒组和对照组,采用 CCK-8比色法测量 A549细胞在染毒后6、12、24、48和72 h 的细胞存活率,微核实验检测各个浓度染毒24 h 后细胞染色体损伤情况。结果:PM2.5非水溶性和水溶性成分均能抑制 A549细胞增殖(P <0.05)。染毒24 h 时800 mg/L 的大气 PM2.5非水溶性成分或染毒48 h 时800 mg/L 的大气 PM2.5水溶性成分作用下细胞存活率低。 PM2.5非水溶性成分和水溶性成分均能诱导 A549细胞染色体损伤,与对照组相比,实验组微核率明显升高(P <0.05),非水溶成分致细胞微核率较高(P <0.05)。结论:PM2.5能抑制 A549细胞增殖,导致 A549细胞染色体损伤。非水溶成分的影响可能更大。

    作者:刘雪亚;王平;李杰;李萍;卫军华;高祎楠;张国俊 刊期: 2016年第04期

  • 鱼腥草挥发油对 Raji 细胞增殖和凋亡的影响

    目的:研究鱼腥草挥发油对 Raji 细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用 MTT 法观察不同体积分数的鱼腥草挥发油体外诱导 Raji 细胞24、48和72 h 对细胞增殖的影响;分别采用 Annexin V-FITC/PI 双染法及 PI 单染法检测不同体积分数的鱼腥草挥发油处理 Raji 细胞48 h 后细胞凋亡及细胞周期的改变。结果:鱼腥草挥发油诱导 Raji细胞24、48和72 h 的 IC50(V/V)分别为0.12580×10-3、0.09958×10-3和0.10522×10-3,且随鱼腥草挥发油体积分数的增加,细胞增殖抑制率及凋亡率均呈升高的趋势(P <0.05);细胞周期检测结果表明鱼腥草挥发油将细胞阻滞于 G0/G1期。结论:鱼腥草挥发油能够显著抑制 Raji 细胞的增殖,诱导细胞凋亡;其作用机制可能与阻滞细胞G1/M 转化有关。

    作者:张壮丽;赵宁;王亚飞;邹敏;赵志鸿;张小俊;王桂芳 刊期: 2016年第04期

  • 表皮生长因子受体在臭氧致小鼠肺部炎症中的作用

    目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在臭氧致小鼠肺部炎症中的作用。方法:40只 SPF 级 BALB/c 小鼠随机分为4组(n =10),分别暴露于空气或0.5、1.0、2.0 mg/m3臭氧中,每天暴露3 h,连续暴露7 d。 HE 染色观察小鼠肺部炎症病理学改变,并进行评分;免疫组化法检测小鼠支气管上皮 EGFR(Y1068)磷酸化水平;双抗夹心ELISA 法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中趋化因子 CXCL1的含量。结果:0.5、1.0、2.0 mg/m 3臭氧组小鼠肺组织炎症评分均高于空气组(P 均<0.05),小鼠支气管上皮 EGFR(Y1068)磷酸化水平和 BALF 中趋化因子 CXCL1的表达水平亦均高于空气组(P 均<0.05)。相关分析结果显示,小鼠支气管上皮 EGFR(Y1068)磷酸化水平与小鼠肺组织炎症病理学变化总分(r =0.652, P =0.030)、BALF 中趋化因子 CXCL1表达水平(r =0.925, P <0.001)均呈正相关。结论:EGFR 磷酸化可能与臭氧诱导的小鼠肺部炎症有关。

    作者:晋乐飞;吴卫东;段丽菊;段书音;胡鹏;冯斐斐 刊期: 2016年第04期

  • 幽门螺杆菌 lpp20基因在食品级乳酸菌中的表达及免疫活性鉴定

    目的:构建分泌表达幽门螺杆菌 lpp20基因的重组乳酸乳球菌菌株,并鉴定其免疫活性,为研究安全高效的幽门螺杆菌口服疫苗奠定基础。方法:采用 PCR 法从幽门螺杆菌基因组 DNA 中扩增 lpp20基因,将 lpp20先与 T 载体(pMD19-T)连接,进而经双酶切与表达载体 pNZ8149-SPusp45连接,用电穿孔法将重组质粒转入食品级乳酸乳球菌菌株 NZ3900中,并用 Nisin 诱导 Lpp20表达,表达产物通过 Western blot 法鉴定免疫活性。结果:lpp20基因的 PCR 扩增产物大小约为540 bp,重组质粒的酶切、PCR 和测序鉴定结果符合预期;在菌体和培养基中均检出表达的 Lpp20蛋白,重组表达的 Lpp20蛋白相对分子质量约为20000,且具有与小鼠抗幽门螺杆菌血清反应的免疫活性。结论:成功构建了能够分泌表达幽门螺杆菌 Lpp20抗原的乳酸乳球菌菌株,该重组菌株在口服疫苗研究中具有应用潜力。

    作者:孙楠;张荣光;段广才;陈帅印;彭晓燕;范清堂;郗园林 刊期: 2016年第04期

  • 慢病毒介导的 RNA 干扰下调 p16的表达对 hUC-MSCs 衰老的影响

    目的:利用慢病毒(LV)介导的 RNA 干扰下调老龄人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)中 p16基因的表达,研究 p16表达下调与 hUC-MSCs 衰老的关系。方法:实验分为第3代(P3)hUC-MSCs 组(P3组)、P15 hUC-MSCs组(P15组)、LV-sip16感染 P15 hUC-MSCs 组(LV-sip16组)和 LV-NC 感染 P15 hUC-MSCs 组(空病毒组)。采用CCK-8法检测细胞增殖,β-半乳糖苷酶染色计算衰老细胞率,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,qRT-PCR 检测衰老相关基因 p16、p21、p53、pCNA、sirt1、sirt2、CyclinD1、CDK4 mRNA 的表达。结果:LV-sip16感染能促进 P15 hUC-MSCs 增殖,降低衰老细胞率,促使细胞周期进入 S 期,抑制 hUC-MSCs 的早期凋亡(P 均<0.05);同时,LV-sip16组细胞中 p16、p21、p53 mRNA 表达量较 P15组降低,而 pCNA、sirt1、sirt2、CyclinD1、CDK4 mRNA 表达量升高(P 均<0.05)。结论:下调 P15 hUC-MSCs 中 p16基因的表达能够延缓和改善 hUC-MSCs 的衰老。

    作者:韩康;马珊珊;朱相展;孟楠;王欣欣;邢衢;黄团结;韩莉;石振庆;杨波;关方霞 刊期: 2016年第04期

  • 移植物中CCR6+及CCR7+T细胞数量与异基因造血干细胞移植受者急性移植物抗宿主病发生的关系

    目的:探讨移植物中表达趋化因子受体6(CCR6)或 CCR7的 T 细胞数量与异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病(GVHD)发生的关系。方法:选取行亲缘异基因造血干细胞移植的52对供受者为研究对象,经重组人粒细胞集落刺激因子动员后,测定并比较骨髓和外周血采集物中 CCR6+或 CCR7+T 细胞的数量,分析输注的各亚群 T 细胞数量与移植后受者发生Ⅱ-Ⅳ度急性 GVHD 的关系。结果:动员后,外周血采集物中 CD4+CCR6+、CD8+CCR6+、CD4+CCR7+及 CD8+CCR7+ T 细胞的绝对数量均较骨髓中增多(P <0.05),是骨髓中的15~25倍,但移植物中上述各亚群细胞的绝对数量不是移植后受者发生急性 GVHD 的危险因素(P >0.05)。结论:移植后受者急性 GVHD 的发生可能与移植物中 CCR6+或 CCR7+ T 细胞的数量无关。

    作者:王萌;徐衍;孙慧;谢新生;马杰;甘思林;刘延方 刊期: 2016年第04期

  • 硼替佐米联合地塞米松及沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的临床疗效

    多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是以骨髓单克隆浆细胞异常增生为特征的恶性肿瘤,发病年龄大多在50~70岁,至今仍不能治愈,目前其主要治疗方法为联合化疗。硼替佐米是一种蛋白酶体抑制剂,在骨髓瘤患者的治疗中发挥持久的疗效。沙利度胺具有抗血管生成和免疫调节作用,在 MM的治疗中取得良好疗效。该研究采用硼替佐米联合地塞米松及沙利度胺治疗 MM,取得一定疗效,报道如下。

    作者:戴豫苏;孙玲;孙慧;陈绍倩;刘林湘;王芳;万鼎铭;姜中兴;刘延方;孟小莉;陈胜梅 刊期: 2016年第04期

  • 合并脑积水的巨大垂体腺瘤的临床特点及治疗

    巨大垂体腺瘤有很强的侵袭性,常侵袭鞍上、海绵窦等重要结构,向鞍上生长压迫侧脑室及室间孔,引起幕上脑积水,临床上出现视力视野障碍、意识障碍、行走不稳及大小便失禁等症状[1]。作者共搜集42例行手术治疗的合并脑积水的巨大垂体腺瘤患者的临床资料,对其临床特点和治疗探讨总结如下。

    作者:曹玉魁;宋来君;郭付有 刊期: 2016年第04期

  • 先天性上唇多发表皮样囊肿合并皮肤瘘管一例及文献复习

    表皮样囊肿是一种较少见的良性病变,它源于胚胎发育时遗留于组织中的上皮细胞,或源于创伤植入的上皮细胞[1],囊壁病理表现为内衬的被覆复层鳞状上皮,且结缔组织中不含皮肤附属结构[2]。表皮样囊肿可发生于身体的任何部位,面颈部位发病率约为7%,而口腔发病率仅为1.6%,约占所有口腔囊肿的0.01%[1,3-4]。口底、舌、颌下、颏下为口腔颌面部表皮样囊肿常见发病部位,国内外鲜有报道其位于下颌骨[5]、硬腭[6]、悬雍垂[7]、腭扁桃体[8]、腮腺[9]及上唇[10-12]等处,且均为单发,而多发于口腔颌面部者仅见几例报道[13-14]。另外,在中外文献中,表皮样囊肿发生于口腔颌面部且合并皮肤瘘管者仅见一例报道[15]。作者收治了一例该病患者,报道如下。

    作者:孟沙沙;韩新光 刊期: 2016年第04期

  • 《郑州大学学报(医学版)》投稿须知

    作者:《郑州大学学报 医学版 》编辑部 刊期: 2016年第04期

郑州大学学报(医学版)杂志

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