罗波；段素群；郑小莉；毛樱逾
目的:构建含人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1基因的乳酸杆菌分泌表达载体.方法:从培养的CasKi细胞中提取DNA为模板,经PCR得到HPV16 L1衣壳蛋白基因,将其连接入乳酸杆菌分泌表达载体pVE5523质粒中,并转化入Top10菌中保存.结果:构建的HPV16 L1-pVE5523重组表达载体经PCR鉴定正确;获得的目的基因片段经测序与GenBank公布的HPV16 L1基因序列符合.结论:成功构建了HPV16 L1-pVE5523表达载体.
作者：罗波；段素群；郑小莉；毛樱逾 刊期： 2013年第01期
目的:探讨Netrin-1在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达情况及其与ESCC发生发展的关系.方法:采用免疫组化和原位杂交法分别检测40例ESCC及40例正常食管黏膜组织中Netrin-1 蛋白和mRNA的表达.结果:ESCC组织中Netrin-1蛋白的阳性表达率为47.5%(19/40),高于正常食管黏膜组织的5.0%(2/40)(χ2=18 660,P<0.001).ESCC组织中Netrin-1 mRNA的阳性表达率为52.5%(21/40),高于正常食管黏膜组织的5 0%(2/40)(χ2=22.029,P<0.001).Netrin-1 mRNA和蛋白的表达与ESCC的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期均有关(χ2mRNA=12.420、12.477、9.528、10.566,χ2蛋白=8.878、8.021、8.338、9.950,P均<0.05).ESCC组织中Netrin-1蛋白与mRNA的表达有关联(rP=0.517,P<0.001).结论:Netrin-1表达与ESCC的发生发展有关,可作为ESCC预后判断的辅助指标.
作者：刘宗文；王文娟；田薇薇；梁冰；杨家梅；刘萍；张钰浩；张艳 刊期： 2013年第01期
目的:观察纤维介素2(fgl2)基因沉默对心肌微血管内皮细胞(MMVECs)增殖、迁移及血管生成素-1、-2(Ang-1、Ang-2) mRNA表达的影响.方法:制作并包装人fgl2 RNA干扰慢病毒fgl2-RNAi-LV.将细胞分为单纯MMVECs组(对照组)、GFP空载体慢病毒转染组(GFP组)和fgl2-RNAi-LV转染组.稳定转染4 d后,应用实时定量RT-PCR法检测各组fgl2、Ang-1和Ang-2 mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移能力.结果:与对照组及GFP组比较,fgl2-RNAi-LV转染组fgl2 mRNA表达明显下调(F=180.301,P<0.001),Ang-1、Ang-2 mRNA的表达明显增加(F=59.450和54.572,P<0.001),MMVECs的增殖能力与迁移能力增强(F=5.341和6.122,P<0.05);对照组与GFP组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:fgl2基因沉默促进MMVECs的增殖、迁移,其分子机制可能与Ang-1、Ang-2 mRNA表达上调有关.
作者：郑振中；王亮；吴友平；殷然；王梦洪；郑泽琪；彭景添；魏云锋 刊期： 2013年第01期
血管生成在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生和发展中起非常重要的作用.参与血管发生过程的细胞因子多种多样,血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是其中重要的.
作者：刘少平；钱文军；茅卫东 刊期： 2013年第01期
目的:对先天性静止性夜盲症(CSNB)候选基因附近的6个STR基因座在河南汉族人群中的遗传多态性分布进行群体遗传学研究.方法:取100名健康无关个体的河南汉族人群血样,提取DNA,应用PCR结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术,对CSNB候选致病基因RHO、PDE6B和GNAT1附近的D3R1、D3R2、D4P1、D4P2、D3G1及D3G2等6个STR基因座进行基因型分析.结果:6个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,杂合度在0.660~0.800,多态性信息含量为0.550~0.730(≥0.5),个体识别率在0.761~0.891(＞0.7),D3R1、D4P2、D3G2 的非父排除率＞0.5.结论:这6个基因座是一组良好的遗传标记,可用于CSNB致病基因的定位;D3R1、D4P2及D3G2在法医学方面具有一定的应用价值.
作者：杨洋；朱运良 刊期： 2013年第01期
目的:观察中国20～60岁男性腰3(L3)椎体松质骨密度和生物力学的变化.方法:取捐献的新鲜中国男性L3椎体32个,年龄20～60岁,分成20～、30～、40～和50～60岁4个年龄组,每组8个椎体.常规操作去除L3椎体周围软组织及附属结构,只保留椎体部分.沿椎体正中矢状面将椎体切成左右两半,均保留上下终板,制成规则试件,一部分行密度测量,另一部分行生物力学实验.结果:①随着年龄的增长,骨胶原交联能力下降,胶原纤丝粗细不等,走向一致,但排列松散、稀疏、紊乱,连接相邻较粗纤丝的更细的胶原纤丝的走向杂乱无章.②与20~岁组比较,30~60岁的L3椎体松质骨表观密度和体积比均逐渐减小(F=8.280、10.600,P均<0.001),但30~60岁各年龄组间差异无统计学意义(P>0.05).③与20~岁组比较,50~60岁组的L3椎体松质骨弹性模量和极限应力均减小(F=4.330、9.800,P均<0.05).结论:中国20~60岁男性椎体松质骨的密度、极限载荷和弹性模量逐渐减小,骨密度和生物力学随年龄的变化可能是中国男性骨质疏松和骨折危险性增加的根本原因.
作者：刘国民；孔宁；白云深；韩宏志 刊期： 2013年第01期
目的:用酵母双杂交的方法筛选与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基(FLA8)C端相互作用的蛋白.方法:设计特异性引物(上下游分别引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点),扩增FLA8 C端(433个氨基酸)cDNA,与穿梭载体pGBKT7连接以构建诱饵表达载体,然后转化酵母菌株Y187和AH109,Western blot法检测诱饵蛋白在转化酵母菌株内的表达.通过自激活实验和毒性实验检测诱饵表达载体是否适合利用酵母双杂交的方法筛选相互作用蛋白.转化诱饵质粒的酵母菌株Y187与AH109(文库菌)杂交,待三叶形合子形成后用营养缺陷型培养基和α-半乳糖苷酶活性实验筛选阳性克隆,并对阳性克隆进行测序.结果:成功构建了pGBKT7-FLA8-C双杂交诱饵载体;经检测该载体的表达产物对Y187和AH109均无自激活和毒性作用,可用于酵母双杂交实验;杂交后筛选得到2个阳性克隆,测序结果显示为鞭毛结合蛋白107(FAP107)和含蛋白结合结构域的预测蛋白.结论:成功筛选得到了与杜氏盐藻驱动蛋白Ⅱ动力亚基C端相互作用的蛋白,分别为FAP107和预测蛋白.
作者：李靓；崔柳青；王瑞莉；毛丽红；韩康；柴丹丹；薛乐勋 刊期： 2013年第01期
目的:建立肝癌细胞中C60含量测定的荧光分析法.方法:采用荧光分光光度法,以220 nm为激发波长,在371 nm发射波长处测定肝癌细胞中C60的荧光强度.肝癌细胞经破碎、离心处理后进行测定,以减小蛋白质和酶的干扰.结果:该方法检测肝癌细胞中C60含量的标准曲线为I=2.240 3C+44.188(r=0.995 8,P<0.05),检测范围在1.28～46.08 mg/L,检测限为0.275 mg/L,平均回收率为86.5%,RSD为10.8%.结论:该方法简便、准确、快速,可用于肝癌细胞中C60的定量分析.
作者：姚寒春；孙敏；张振中 刊期： 2013年第01期
目的:评价血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)水平对冠状动脉粥样硬化严重程度及不良事件风险的预测价值.方法:对45例急性冠脉综合征(ACS)患者和35例稳定性心绞痛(SA)患者行冠脉造影(QCA)检查和IVUS-VH分析,同时行血浆LP-PLA2水平测定.结果:ACS组斑块坏死核心、钙化成分比例较SA组高(t=5.655,10.974,P<0.001).ACS组患者冠状动脉病变处以正性重构为主,SA组以负性重构为主(χ2=40.555,P<0.001).ACS组患者血浆LP-PLA2水平较SA组显著升高(t=2.934,P=0.004).ACS和SA组患者随着Gensini积分增加,血浆LP-PLA2水平均逐渐增高(F=4.227,3.783,P＜0.05).ACS患者斑块中坏死核心比例与血浆LP-PLA2水平呈明显正相关(r=0.439,P=0.003).结论:血浆LP-PLA2水平可用以评价斑块性质及冠脉狭窄严重程度.
作者：牛原源；李新华；赵晓燕；武丽娜；吴世陶；吴摇斐；李文龙 刊期： 2013年第01期
目的:探讨子痫前期(PE)患者血浆对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及溶血磷脂酸(LPA)受体蛋白Edg4表达的影响.方法:体外培养HUVEC,取对数生长期的细胞分为对照组、正常晚孕组、轻度PE组和重度PE组4组,分别用RPMI 1640培养液、含体积分数20%正常晚期孕妇血浆、20%轻度PE患者血浆和20%重度PE患者血浆的RPMI 1640培养液继续孵育48 h.应用MTT比色法检测细胞增殖能力,应用免疫细胞化学SP法和RT-PCR检测细胞Edg4蛋白及其mRNA表达水平.结果:4组细胞增殖抑制率及Edy4蛋白、mRNA的表达差异均有统计学意义(F=104.200,χ2=32.941,F=5 803.360,P均<0.05).与对照组和正常晚孕组相比,轻度和重度PE组HUVEC增殖抑制率增大,Edg4蛋白及mRNA表达明显升高,且重度PE组较轻度PE组升高更明显(P<0.05).结论:PE患者血浆LPA水平升高可能是引起血管内皮细胞损伤的原因之一.
作者：李留霞；李秀芳；张兰兰；张毅 刊期： 2013年第01期
急性肺栓塞(acute pulmonary embolism,APE)临床表现缺乏特异性,误诊率与漏诊率均较高[1].未经治疗的APE病死率为30%,如能早期诊断和充分治疗,病死率可降低至2%~8%[2].APE因栓子的大小、数量、栓塞的部位不同,对患者生命的威胁差异很大,较小的栓子可能无任何临床症状,而较大的栓子可引起呼吸困难、紫绀、昏厥、猝死等.
作者：刘桂芝 刊期： 2013年第01期
气管插管或气管切开术常用于危、急、重患者的紧急抢救,是解除上呼吸道阻塞、防止下呼吸道分泌物潴留、保证正常供氧、维持生命的有效措施.但如果操作或处理不当,可导致术后拔管困难,甚至终生戴管,严重影响患者的生活质量[1].气管切开术后拔管困难发生率为3.3%～19.3%,气管切开术后引起拔管困难的原因约51.3%是气管狭窄[2-3].作者利用介入放射学方法置入可取出内支架治疗21例气管狭窄性拔管困难,顺利拔出气管套管,恢复正常气道通气,明显提高了患者生活质量,报道如下.
作者：李宗明；吴刚；韩新巍；申翔宇；任克伟；路慧彬；马骥；丁鹏绪 刊期： 2013年第01期
肺癌的发病率和病死率呈逐年上升趋势,其传统的化疗、放疗方法和近年提出的肿瘤细胞免疫治疗、放射免疫治疗均给患者及社会带来了极大的经济负担[1-2].如何实现肺癌的个体化治疗已逐渐成为肿瘤治疗的新方向[3-4].近年来出现的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(如吉非替尼、厄洛替尼)备受关注.
作者：孙丽娟；付群；李宏云；秦超；冯永海 刊期： 2013年第01期
目的:探讨伴有胃肠动力障碍的重症急性胰腺炎(SAP)大鼠结肠黏膜下神经节一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的改变.方法:20只SD大鼠随机分为假手术组与模型组,用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠的方法制作大鼠SAP模型.24 h后,测定2组小肠推进比、结肠蠕动频率、粪便含水量,并进行胰腺病理评分;制作结肠黏膜下神经丛全层标本,运用免疫荧光技术观察黏膜下神经节NOS阳性神经元的变化.结果:与假手术组相比,模型组小肠推进比减少[(41.04±4.36)% vs(14.54±2.30)%,t=15.477,P<0.001],结肠蠕动频率减慢[(13.40±1.35)min-1 vs (4.00±0.93) min-1,t=16.748,P<0.001],粪便含水量降低[(41.56±6.69)% vs(12.98±6.56)%,t=8.869,P<0.001],胰腺病理评分增高[(1.20±0.63) vs (15.75±1.72),t=23.569,P<0.001],但其结肠黏膜下NOS阳性神经元计数无明显改变[(22.49±5.14)% vs(26.36±2.57)%,Z=-1.955,P=0.055].结论:伴胃肠动力障碍的SAP大鼠结肠黏膜下NOS阳性神经元可能未发生明显重塑.
作者：袁园；林中；李小玲 刊期： 2013年第01期
目的:研究磷酸肌酸钠(PCr)对缺氧窒息幼鼠肾组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:24只幼鼠随机分为PCr干预组(PCr组)、模型组和正常对照组,每组8只.PCr和模型组幼鼠制作缺氧窒息模型,PCr组幼鼠在制作模型前0.5 h和缺氧窒息后即刻腹腔注射1.4 mg/g的PCr.模型组在相同时间点腹腔注射等量的生理盐水.正常对照组不作处理.缺氧窒息后6 h,切除各组幼鼠肾脏,采用HE染色法观察肾组织病理形态变化,RT-PCR和免疫组织化学法检测肾组织HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白的表达.结果:模型组幼鼠肾组织可见肾小管上皮细胞肿胀,大量炎性细胞浸润,部分上皮细胞变性坏死,肾小球出现水肿、甚至固缩;PCr组幼鼠肾小管和肾小球受损状况明显减轻.3组幼鼠肾组织HIF-1α和VEGF mRNA及蛋白的表达比较,差异有统计学意义(F=196.805、484.734、90.410和79.329,P均<0.001),PCr和模型组均较正常对照组升高,PCr组较模型组降低(P<0.05).结论:PCr可能通过下调HIF-1α、VEGF的表达减轻肾组织的缺氧性损伤.
作者：刘月梅；陈莹；李永凤；刘春艳 刊期： 2013年第01期
目的:探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病(DM)大鼠肾组织中胰岛素样生长因子1(IGF-1)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为对照组(n=12)、糖尿病组(DM组,n=11)、MMF组3组(n=10).于8周末检测24 h尿蛋白量、血糖、内生肌酐清除率(Ccr)、相对肾质量(左肾质量/体质量);PAS染色观察肾脏病理改变;免疫组化、Western印迹检测肾脏IGF-1、MMP-2的表达.结果:3组大鼠相对肾质量、血糖、24 h尿蛋白和Ccr差异有统计学意义(F分别为51.097、150.925、161.315和103.307,P<0.001),MMF组相对肾质量、24 h尿蛋白和Ccr均低于DM组,高于对照组(P<0.05).与对照组比较,DM组肾小球体积增大,系膜区基质明显增生,肾小球毛细血管袢受压,基底膜增厚,而MMF组较DM组有所改善.3组大鼠肾组织IGF-1、MMP-2蛋白表达差异有统计学意义(F分别为15.715和20.449,P<0.001),DM组中IGF-1的表达较对照组增加,MMP-2的表达较对照组下降;MMF组IGF-1较DM组下降,MMP-2增加(P＜0.05).结论:MMF可能通过减少肾脏IGF-1的表达,同时上调MMP-2表达,起到保护肾脏的作用.
作者：李敏；王建生；刘东伟 刊期： 2013年第01期
目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中Bmi-1的表达及意义.方法:分别采用免疫组化SP法和原位杂交法检测宫颈鳞状细胞癌(84例)和慢性宫颈炎(20例)组织中Bmi-1蛋白和mRNA的表达情况,并分析其表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征之间的关系.结果:宫颈鳞状细胞癌组织中Bmi-1蛋白及mRNA的阳性表达率分别为71.4%和58.3%,高于其在慢性宫颈炎组织中的阳性表达率(5.0%和10.0%)(χ2=29.394和15.100,P均＜0 001);且Bmi-1蛋白和mRNA在宫颈鳞状细胞癌组织中的阳性表达与临床分期、淋巴结转移有关(χ2=18.088、20.000和16 622、28.476,P均＜0.001),而与肿瘤分化程度无关(P>0.05).Bmi-1蛋白及mRNA在宫颈鳞状细胞癌中的表达呈正相关(rP=0.305,P=0.003).结论:Bmi-1可能成为判断宫颈癌生物学行为的可靠的生物学指标.
作者：林爱琴；朱晓菡；吕新全；薛金慧 刊期： 2013年第01期
目的:分析西部民族地区高校大学生城镇居民医疗保险(城居医保)的参保情况及其影响因素.方法:采用分层随机整群抽样的方法抽取627名西部民族地区某高校在校大学生作为样本,采用问卷调查方法对城居医保的参保情况进行调查.结果:64.9%的学生不了解城居医保,74.8%的学生认为政府、学校、学生三方共同承担医保费用,大学生城居医保的参保率为38.4%,未参保的主要原因有觉得没有必要参加(28.3%)、参加了其他类型的医疗保险(23.3%)、家庭经济状况(21.4%)等,59.7%的参保大学生对城居医保的满意程度感觉一般,不满意的方面主要有报销比例低、报销程序复杂、卫生服务态度较差、医疗服务不能满足健康需求等.结论:西部民族地区大学生城居医保参保率及利用率偏低;应进一步完善筹资机制,改善医疗服务质量,建立以城居医保为主,其他医疗保险为补充的、全面可持续的大学生医疗保障体系.
作者：郭振友；石武祥；张丽华；杨子靖；孟繁文 刊期： 2013年第01期
目的:构建杜氏盐藻FLA8原核表达载体.方法:用RT-PCR方法扩增杜氏盐藻FLA8基因的开放阅读框,通过预先添加的酶切位点切割后按正确的顺序插入到经相同酶切割后的原核表达载体pET28a(+)中,转化到大肠杆菌DE3中测序正确后进行原核表达.结果:成功地将FLA8的开放阅读框插入到表达载体中,FLA8在大肠杆菌中的表达主要以包涵体的形式存在,蛋白质的相对分子质量为87 000.结论:杜氏盐藻FLA8基因原核表达载体构建成功.
作者：侯永杰；李庆华；薛乐勋 刊期： 2013年第01期
目的:构建杜氏盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN 1622-氯霉素乙酰转移酶(CAT).方法:以光非依赖性的原叶绿素酸酯还原酶chlN基因为同源片段,以CAT抗性基因为选择标记,构建盐藻叶绿体转化载体pUC-chlN 1622-CAT,并通过电击法转入野生型盐藻细胞,筛选转化藻株.结果:在氯霉素浓度为300 mg/L的选择压力下,野生型盐藻10 d左右死亡,转化藻仍正常生长,得到表达氯霉素抗性的盐藻转化株.结论:以chlN基因作为同源片段构建盐藻叶绿体转化载体是可行的.
作者：张汇征；崔柳青；潘卫东；薛乐勋 刊期： 2013年第01期
郑州大学学报（医学版）杂志
主管:河南省教育厅
主办：郑州大学
