学术投稿

抗人蛋白酶激活受体4单克隆抗体的制备与鉴定

王顺兰;何韶衡

关键词:蛋白酶激活受体4, 单克隆抗体, 杂交瘤细胞, A549细胞
摘要:目的:制备抗人蛋白酶激活受体4(PAR4)单克隆抗体(mAb).方法:以hPAR4为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR4 mAb.采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig类型,采用ELISA、点杂交、免疫组化染色法(人结肠、扁桃体及包皮组织)、流式细胞术、激光共聚焦显微镜(CLSM)技术鉴定mAb的特异性.结果:获得3株可稳定分泌抗PAR4 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.免疫组化染色表明,mAb将人结肠组织中的腺上皮细胞、疑似肥大细胞和淋巴细胞,扁桃体组织中的淋巴细胞和包皮组织中的肥大细胞染成褐色.流式细胞术分析显示,3株mAb与A549细胞的PAR4均呈阳性反应.CLSM观察发现,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质和胞膜上.结论:成功制备了抗PAR4 mAb,为进一步的研究工作提供了有用的试剂.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 猫背外侧脑桥中脑被盖区神经细胞损毁对睡眠-觉醒状态的影响

    目的:损毁猫背外侧脑桥中脑被盖区神经细胞,观察其对睡眠-觉醒状态的影响.方法:采用红藻氨酸(KA)微量注射入猫(6只)双侧背外侧脑桥中脑被盖区(每侧6ug),损毁该区域.通过脑电活动和肌电活动测量损毁前后动物的觉醒-睡眠状态.统计损毁前后各时相数据占每次睡眠描记时间的百分比、每次睡眠描记的快眼动(REM)睡眠次数及每次REM睡眠时间.结果:损毁后觉醒时间的百分比从损毁前的(14.68±1.37)%增加到(20.78 4-3.37)%(t=-1.350,P=0.235);慢波睡眠时间从(65.07 4±2.73)%减少到(64.65±4.35)%(t=0.089,P=0.932);REM睡眠时间从(20.26±2.74)%减少到(13.65±2.25)%(t=3.843,P=0.012);REM睡眠次数从损毁前的(12.2±1.6)次/6 h减少到(10.0 4±1.4)次/6 h(t=1.976,P=0.119);REM睡眠时间从(6.3±0.6)min/次减少到(5.5 4±0.5)min/次(t=0.939,P=0.401).有4只动物在双侧背外侧脑桥中脑被盖区神经细胞损毁后的REM睡眠过程中仍维持一定的肌张力,而在正常睡眠描记过程中肌张力完全消失,只出现时相性的肌肉颤搐.损毁部佗的组织学观察显示距损毁部位1-2 mm内的神经细胞消失.损毁区域的神经纤维破坏不明显.结论:背外侧脑桥中脑被盖区的神经细胞在REM睡眠的维持及其伴随的颈肌迟缓的产生中起重要作用.

    作者:潘胜军;李丽蓉;王雨若 刊期: 2009年第06期

  • 郑州市某体检人群代谢综合征患病率

    目的:调查郑州市某体检人群代谢综合征(MS)的患病情况及特点,为今后开展健康教育提供依据.方法:随机选取在某医学院附属厌院参加健康体检的人群.根据中华医学会制定的Ms诊断标准,收集146名体检人员的身高、体质量、血压、空腹血糖及血脂测定的数据,分析该人群中MS的检出率和分布特点.结果:该人群MS检出率为15.1%,中心性肥胖组MS的检出率(28.6%)高于止常组(2.6%)(X2=19.158,P=0.001),饮酒者MS检出率(25.0%)高于不饮酒者和以前饮酒现在不饮洒者(8.1%)(X2=10.158,P=0.006);MS人群慢病知识知晓率低.未做过血糖检测及不知道是否测过的有35.6%,未做过血脂检测及不知道是否测过的有28.8%,未检测血压的有14.4%.结论:该体检人群MS患病率已经达到中国城市居民MS患病平均水平,相关部门要对其加强健康教育.

    作者:韩洁;王玲;吕全军 刊期: 2009年第06期

  • 志贺菌6种毒力基因的多重PCR检测

    目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素I基因(setl)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stxl)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测.方法:选掸志贺菌的6种毒力基因作为靶基因,以A群和C群4株标准及B群和D群4株临床分离株为模型,应用降落PCR方法在1个反应管中同时进行扩增,根据扩增片段大小定性判断结果.通过样本倍比稀释检验多重PCR的灵敏性,并在NCBI网站上用BLAST检索各引物的特异性.另选取河南省2001年至2007年115株志贺菌进行多重PCR检测,以验证多重PCR的可行性.结果:多重PCR能同时检测上述6种毒力基因,与单基因PCR分别检测6种毒力基因相比具有相近的灵敏度与特异性.应用多重PCR方法检测115株志贺菌,除stxl外,其余5种毒力基因的阳性率均在85%以上.结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究.

    作者:徐兰英;许汴利;马宏 刊期: 2009年第06期

  • 转化生长因子-β1对大鼠肠黏膜缺血再灌注损伤的保护作用

    目的:观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肠黏膜缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法:30只SD大鼠随机分成3组(n=10):假手术组(A组)、I/R组(B组)和实验组(C组).C组夹闭肠系膜上动脉(SMA)60 min,再灌注120 min,缺血前10 min经SMA注入TGF-β1溶液0.5 mL;B组以生理盐水代替TGF-β1,余同C组;A组单纯分离肠SMA,不做阻断,余同B组.采用HE染色及Chiu评分法判断小肠黏膜形态学损伤程度,检测门静脉血浆中D-乳酸水平.结果:B组肠黏膜损伤较A组严重,C组肠黏膜损伤较B组明显改善.3组间比较,Chiu评分和门静脉血D-乳酸水平差异均有统计学意义(F=20.490、33.084,P均<0.001);门静脉血浆D-乳酸水平与肠黏膜损伤病理评分呈正相关关系(r=0.881,P<0.001).结论:TGF-β1可以减轻小肠L/R损伤,血D-乳酸水平可以间接反映肠黏膜屏障的通透性,进而评价肠黏膜屏障的损伤程度.

    作者:孙培春;吴万庆;吴刚;韩斌 刊期: 2009年第06期

  • 护理干预联合皮炎平霜治疗中心静脉导管置管后局部皮肤过敏22例疗效观察

    经外周静脉穿刺置人中心静脉导管(peripherally inserted central catheter,PICC)是近年来研究成功的一种静脉输液方法[1],操作简单,穿刺危险性小,并发症少[2],导管留置时间长,临床上被广泛应用.临床观察发现[3],部分患者PICC置管后,穿刺点局部先后出现皮肤过敏(轻度表现为皮肤发红伴瘙痒,中度表现为局部瘙痒和皮疹,重度可出现水疱和脓疱),影响了患者的生活质量.

    作者:牛秋梅;陈长英;董蕾 刊期: 2009年第06期

  • 郑州市某体检人群血脂异常相关因素分析

    目的:调查分析血脂异常相关因素.方法:对郑州市某体检人群263人进行血脂测定及膳食和生活习惯问卷调查,对调查结果进行单因素分析及logistic回归分析.结果:血脂异常率为45.2%,不同年龄组血脂异常率不同(X2=8.467,P=0.014);每目饮酒量、体质指数(BMI)不同组之问血脂异常率不同(X2=12.550,P<0.001;X2=11.182,P<0.001);logistic回归分析结果显示,BMI≥24 kg/m2、过量饮酒及年龄≥45岁为血脂异常的危险因素.结论:可通过调整膳食、控制体质量、建立良好的生活方式,减少血脂异常的发生.

    作者:曹磊;韩洁;吕全军 刊期: 2009年第06期

  • 食管鳞状细胞癌组织中神经性钙黏附蛋白和mRNA的表达

    目的:检测食管鳞状细胞癌组织中神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和mRNA的表达.方法:采用免疫组织化学PV法和RT-PCR法检测62例食管鳞状细胞癌组织及62例正常食管黏膜组织中N-cadherin蛋白和mR.NA的表达.结果:正常食管黏膜组织及食管鳞状细胞癌组织中N-cadherin蛋白的阳性表达率和mRNA的相对含量分别为29.O%、75.8%和(0.154±0.019)、(0.663±0.016),差异均有统计学意义(X2=23.758,t=1 290.840,P均<0.001).N-cadherin蛋白阳性表达率及mRNA的相对含量与食管鳞状细胞癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关(X2=6.924、9.345、4.486,F/t=555.231、4.971、7.269,P<0.05或0.01).结论:N-cadherin的高表达与食管鳞状细胞癌的发生发展及浸润转移密切相关.

    作者:史祖宣;李克;樊青霞 刊期: 2009年第06期

  • 豫医无毛小鼠无毛基因突变部位的定位和分析

    目的:研究豫医无毛小鼠(YYHL)突变的分子机制.方法:对豫医无毛小鼠和昆明小鼠的基因组DNA进行PCR扩增,对扩增片段克隆后测序,并与Mus muscnlus进行同源性分析.结果:共测出YYHL DNA序列1 824bp和昆明小鼠DNA序列1816 bp,其不同之处有27处,变异方式包括插入、缺失和点突变.其中在12外显子中有一无义突变(G→A),导致该部位由编码色氨酸的UGG转变为终止密码子UGA.结论:YYHL无毛性状的产生可能与基因组的变异有关.

    作者:臧文巧;杨璇;王涛;轩小燕;李敏;杜英 刊期: 2009年第06期

  • 撕脱头皮再植吻合血管数目的血管造影检测

    目的:通过介入方法行单侧颞浅动脉血管造影术,观察能达到保证头皮血供的动脉低数目.方法:用介入技术,行单侧颈外动脉和颈内动脉造影(6例),于正侧位观察头皮的动脉血供.经颈外动脉造影时,在生理状态下和按压对侧颞浅动脉搏动点时,分别在正位片上测量经颞浅动脉顶支的造影剂显示的远点.结果:颞浅动脉的额支、顶支、枕动脉主干以及眶七动脉分支走形基本平行,各终末端在头顶部密集.在生理状态下和按压对侧颞浅动脉搏动点时,显影的至远点距正中线的夹角分别为(7.81±0.76)°和(20.91±1.76)°(t=26.310,P<0.001).按压对侧颞浅动脉搏动点时,单侧颞浅动脉顶支的血供范围差异有统计学意义.结论:头皮血管交联成网,单侧颞浅动脉与双侧多组动脉交通.行吻合单侧颞浅动脉的头皮再植术,是治疗头皮撕脱伤可靠的方法.

    作者:张芳;杨颖涛;刘林嶓;管生;王永奎 刊期: 2009年第06期

  • 获得性凝血因子XⅢ缺乏症2例治疗体会

    获得性凝血因子XⅢ(F XⅢ)缺乏是一种罕见的出血性疾病,常规的筛选试验如血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血小板功能试验、纤维蛋白原测定(Fbg)、凝血酶凝固时间和血管性假血友病(vW病)的检查结果都在正常范围[1].

    作者:刘延方;赵丽颖;赵晓明;张晓丽 刊期: 2009年第06期

  • 小鼠Ar18a基因逆转录病毒载体MSCV-GFP-Ar18a的构建

    目的:克降小鼠Ar18a(mAr18a)cDNA,构建带有检测标签的逆转录病毒载体系统,并检测由该病毒系统介导的mAr18a基因在骨髓来源树突状细胞中的表达.方法:从培养的小鼠骨髓来源树突状细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出mAr18a基因片段,再将其克隆入pDrive克隆载体并测序.然后将mAr18a目的基因插入逆转录病毒载体MSCV-GFP中,以磷酸钙法转染294T包装细胞,收集病毒卜清感染树突状细胞后,通过流式细胞术检测mAr18a的表达.结果与结论:成功克隆了mAr18a的cDNA,并成功构建其重组逆转录病毒载体MSCV-GFP-Ar18a,该载体可有效将Ar18a基因转移到骨髓米源的树突状细胞中,转染效率达28.3%.

    作者:唐蓓 刊期: 2009年第06期

  • 急性白血病患者骨髓细胞畸胎瘤衍生生长因子-1及CIX34的表达

    目的:检测畸胎瘤衍生生长因子-1(Cripto-1)及CD34抗原在白血病(AL)患者骨髓细胞的表达情况.方法:应用流式细胞术检测63例初治AL患者[其中急性髓系白血病(AML)49例,急性淋巴细胞白血病(ALL)14例]及16例对照人群骨髓细胞中Cripto-1及CD34抗原的表达.结果:Cripto-1在AL患者及正常对照组的阳性表达率分别为26.98%和0(P=0.007),CD34的阳性表达率分别为60.32%和0(P<0.001).ALL患者中未检测到Crip-to-1的表达,AML患者中Cripto-1及CD34的表达具有关联性(X2=9.095,rp=0.396,P=0.003).结论:AL患者Cripto-1及CD34表达升高.Cripto-1/CD34共同高表达是AL的一个不良预后因素.

    作者:张秋堂;包丰昌;孙慧 刊期: 2009年第06期

  • 大豆异黄酮对去卵巢大鼠子宫内膜细胞增殖的影响

    目的:观察大豆异黄酮(GS)对去卵巢大鼠子宫内膜细胞增殖的影响.方法:30只成年雌性去卵巢大鼠于术后8 d随机分为阴性对照组、GS(低、中、高)剂量组与阳性对照组,按2.0 mL/kg分别腹腔注射蒸馏水、GS及雌二醇(E2),1次/d,连续注射3 d.观察各组大鼠子宫内膜细胞有丝分裂数.结果:阴性对照组、阳性对照组及GS组细胞有丝分裂数差异有统计学意义(F=54.886,P<0.001),且阳性对照组与GS组均高于阴性对照组(P<0.05).随GS剂量的升高,GS组细胞有丝分裂数增加(F=4.692,P=0.026).结论:GS能加速去卵巢大鼠子宫内膜细胞的分裂和增殖,其在大鼠体内可能具有雌激素样作用.

    作者:吕斌;张萍;李振国;何伟 刊期: 2009年第06期

  • 盐酸吡格列酮对2型糖尿病患者微量蛋白尿的影响

    近年来,糖尿病(diabetes mellitus,DM)的发病率日益升高,糖尿病所致肾病已成为慢性肾功能不全的首要病因,该病早期无明显临床表现,当检出异常时,肾脏病变已较严重[1],早期诊断治疗尤为重要[2].

    作者:曲蕴慧;陈奎生 刊期: 2009年第06期

  • 吻合器痔上黏膜环切术前肠道准备方法改良90例观察

    吻合器痔上黏膜环切术(procedure for prolapse and hemorrhoids,PPH)是目前治疗重度痔的首选方法.肠道清洁程度直接关系到PPH能否顺利完成及其手术效果.

    作者:冯江雪;武玉娟;石玉兰;陈爱霞 刊期: 2009年第06期

  • 促红细胞生成素对体外培养的SD大鼠多巴胺能神经元细胞活力的影响

    目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对体外培养的SD大鼠帕金森病细胞模型多巴胺能神经元细胞活力的影响.方法:取孕14.5 d的SD大鼠胚胎中脑原代培养.将细胞分成:正常对照组、6-羟基多巴(6-OHDA)组和6-OHDA+不同剂量EPO(0.10、1.00、3.25、10.00和32.50 U)组.在培养的第6天给实验组加入不同剂量的EPO,第8天加入6-OHDA(100 umoL/L)作用0.5 h,收集各组细胞,用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色法观察TH阳性神经元生长情况,用MTT法测定多巴胺能神经元的细胞活力.结果:与正常对照组相比,6-OHDA组TH阳性细胞数减少,为(27.2±3.4)个/mm2,而预先给予EPO干预的各组细胞6-OHDA的毒性作用明显减轻,TH阳性细胞数分别为(28.0±1.1)、(39.2±1.9)、(41.8 4-1.3)、(66.4±4.2)和(65.3 4±3.0)(F=48.29,P=0.02)个/mm2.与正常对照组相比,6-OHDA组多巴胺能神经元的细胞活力为(51.2±1.2)%,而预先给予EPO干预的各组细胞6.OHDA的毒性作用明显减轻,细胞活力分别为(52.2±1.0)%、(60.5 4±3.5)%、(68.1 4±2.7)%、(89.6±3.1)%和(76.5±4.0)%(F=28.42,P=0.01).结论:EPO能够对抗6-OHDA的毒性作用.增加多巴胺能神经元的细胞活力.

    作者:朱红灿;卢欣;赵鹏;臧卫东;张华;任秀花;张博爱 刊期: 2009年第06期

  • 河南省7~18岁学生营养不良流行趋势

    目的:了解河南省中小学生营养不良流行趋势,为制定政策,提高中小学生的营养水平提供依据.方法:使用SPSS 12.0对河南省1991、1995、2000和2005年7-18岁中小学生的体质调研结果进行分析.结果:河南省7-18岁学生1991、1995、2000和2005年营养不良的检出率分别为27.7%、29.8%、22.0%和5.7%,呈下降趋势(X2趋势=9 398.3,P<0.001).1991年与1995年营养不良检出率城市高于乡村,2000年与2005年乡村高于城市.1991、1995与2000年营养不良检出率女生高于男生,2005年男生高于女生.1991至2005年小学、初中和高中段学生的营养不良检出率分别为17.5%、25.0%和24.5%,3者相比,差异有统计学意义(X2=335.2,P<0.001).结论:1991至2005年河南省中小学生的营养状况有了很大改善,但应注意提高乡村学生及初、高中学生的营养水平.

    作者:周晓娜;吕全军 刊期: 2009年第06期

  • 抗人蛋白酶激活受体4单克隆抗体的制备与鉴定

    目的:制备抗人蛋白酶激活受体4(PAR4)单克隆抗体(mAb).方法:以hPAR4为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR4 mAb.采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig类型,采用ELISA、点杂交、免疫组化染色法(人结肠、扁桃体及包皮组织)、流式细胞术、激光共聚焦显微镜(CLSM)技术鉴定mAb的特异性.结果:获得3株可稳定分泌抗PAR4 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.免疫组化染色表明,mAb将人结肠组织中的腺上皮细胞、疑似肥大细胞和淋巴细胞,扁桃体组织中的淋巴细胞和包皮组织中的肥大细胞染成褐色.流式细胞术分析显示,3株mAb与A549细胞的PAR4均呈阳性反应.CLSM观察发现,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质和胞膜上.结论:成功制备了抗PAR4 mAb,为进一步的研究工作提供了有用的试剂.

    作者:王顺兰;何韶衡 刊期: 2009年第06期

  • 过敏性紫癜患儿食物过敏原特异性IgG抗体检测

    目的:检测过敏性紫癜患儿食物过敏原特异性IgC抗体.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测156例过敏性紫癜患儿(男100例,女56例)及100例健康对照者14种日常食物过敏原特异性IgG抗体水平.结果:患儿组食物过敏原特异性IgG抗体阳性率为100.0%,较对照组(65.0%)升高(X2=63.247,P<0.001),且患儿组4种以上食物过敏原阳性者占48.7%,高于对照组的8.0%(X2=45.828,P<0.001).通过调整饮食,大多数患儿病情好转,治疗有效率为73.0%.男、女患儿在不耐受食物分布及耐受程度上存在部分差异.结论:过敏性紫癜与食物不耐受密切相关,部分结果存在性别差异.

    作者:周明锦 刊期: 2009年第06期

  • 骨髓干细胞移植治疗糖尿病兔下肢缺血效果观察

    目的:对比骨髓干细胞移植、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员及局部骨髓干细胞移植联合G-CSF动员3种方法对糖尿病兔缺血组织血管新生的作用.方法:40只健康新西兰兔,用四氧嘧啶(ALX)诱导成为糖尿病兔后,均结扎右后肢股动脉,建立糖尿病下肢缺血动物模型,然后随机分为4组,每组10只.其中1组不进行治疗作对照(A组),余3组分别用G-CSF动员(B组)、局部骨髓干细胞移植(C组)及G-CSF动员联合局部骨髓干细胞移植(D组)进行治疗.28 d后均以右侧股内侧正中部位为中心等距离取局部肌肉组织,免疫组织化学染色检测肌组织微血管密度及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平.结果:上述A、B、C、D 4组缺血组织微血管密度(1)分别为(22.0±6.0)、(35.8 4±7.5)、(38.1±7.2)和(48.7±9.1)个/高倍视野,VEGF蛋白表达水平(2)分别为(8.87 4-1.51)%、(11.83 4-1.65)%、(12.32±1.34)%和(17.13±2.73)%,局部干细胞移植(1)和G-CSF动员(2)对微血管密度和VEGF的表达有影响(F1分别为50.599、35.930,F2分别为39.846,25.435,P均<0.001,但F1x2分别为2.256,0.437,P>0.05).结论:G-CSF动员和局部骨髓干细胞移植均可用于治疗糖尿病下肢缺血性疾病.

    作者:孟建波;康胜群;康素娴;杨彦;周晨光 刊期: 2009年第06期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主办:郑州大学