学术投稿

外周血T淋巴细胞的培养、纯化及鉴定

李付广;李沛;靳静;董子明

关键词:T淋巴细胞, 流式细胞术, 细胞培养, 纯化
摘要:目的:建立外周血T淋巴细胞初步纯化方法.方法:取健康人外周血单个核细胞(PBMCs),在低剂量IL-2维持下,利用细胞培养淘汰法筛选纯化T淋巴细胞,用流式细胞术检测淋巴细胞培养过程中细胞表面标志的改变.结果:用流式细胞术检测发现:B淋巴细胞于第1周时基本死亡,第3周时完全消失;NK细胞于第1周时明显增加,第4周时大部分死亡;第4周时,所培养的细胞绝大多数为T淋巴细胞.T淋巴细胞亚群的整体变化趋势为:随着培养时间的延长,CD4+百分数稍增加,CD8+百分数明显增加,CD4+/CD8+比值明显降低,CD3+CD16+CD56+百分数明显增加.结论:在IL-2维持下,人PBMCs培养4周时,收获培养细胞为初步纯化的T淋巴细胞.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 单鼻孔蝶窦入路切除垂体腺瘤85例围手术期管理体会

    垂体腺瘤是起源于垂体前叶的良性肿瘤,为颅内常见肿瘤之一,约占颅内肿瘤的10%.临床大多以内分泌障碍起病,表现为月经紊乱、闭经、溢乳、双颞侧头痛、视力减退等[1].手术治疗包括经额下入路和经鼻蝶窦入路.额下开颅手术创伤较大,术后并发症多,传统的经口鼻蝶窦入路虽能满意切除肿瘤,但因唇龈交界血运丰富,容易出血,损伤鼻腭神经引起口唇上切齿麻木[2].本院神经外科自2004年1月至2005年4月采用经单鼻孔蝶窦入路显微手术切除垂体腺瘤85例,效果满意,现将围手术期管理报道如下.

    作者:程文兰 刊期: 2006年第04期

  • 大球囊过度扩张治疗下腔静脉阻塞型布-加综合征90例护理体会

    2002年1月至2004年9月,采用大球囊(直径30 mm)过度扩张治疗下腔静脉阻塞型布-加综合征90例,取得了较好效果,现将护理体会总结如下.

    作者:邹治真;张文萍;海丹丹 刊期: 2006年第04期

  • 脑膜瘤56例显微外科治疗体会

    2002年1月至2005年1月,采用显微外科手术治疗脑膜瘤56例,效果良好,报道如下.

    作者:张福生;阎长祥 刊期: 2006年第04期

  • 子痫前期患者胎盘组织中E-选择素的表达

    目的:探讨子痫前期患者胎盘组织中E-选择素(E-selectin)的表达情况.方法:用免疫组化法对20例正常孕妇(对照组)和40例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度16例,重度24例)的胎盘组织进行E-selectin定位,并用计算机图像分析系统进行定量分析比较.结果:子痫前期组中胎盘绒毛合体滋养细胞E-selectin的表达(53.5±0.5)低于对照组(53.8±0.4)(P<0.05),而在胎盘绒毛毛细血管内皮细胞中E-selectin的表达(63.0±0.5)高于对照组(62.6±0.4)(P<0.05);轻度、重度子痫前期间胎盘绒毛合体滋养细胞和毛细血管内皮细胞中E-selectin的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:E-selectin可能参与了子痫前期的发病过程.

    作者:王瑜;张曦;程国梅;任琛琛;崔世红 刊期: 2006年第04期

  • 经阴道徒手旋转胎头联合经腹部推胎背纠正持续性枕后位54例

    持续性枕后位(persistent occiput posterior posterior,POPP)是头先露中一种常见的头位异常,占头位难产中的首位,降低POPP发生率是降低头位难产的关键[1].作者选择进入活跃期产程阻滞的POPP 54例,采用经阴道徒手旋转及经腹部推胎背为脊前方位的联合手法纠正POPP,效果较好,报道如下.

    作者:陈楠 刊期: 2006年第04期

  • 氧化苦参碱对小鼠接触性皮炎的抑制作用

    目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对小鼠变态反应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用.方法:56只BALB/c小鼠随机分成7组,每组8只.除B组(该组小鼠不致敏,也不诱发ACD)外,其他6组均建立ACD模型.A组每d腹腔注射20 ml/kg的PBS,B、C、D、E、F、G组分别每d腹腔注射OMT 50 mg/kg、12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg及氢化可的松25 mg/kg,均给药28 d.于给药第8 d、14 d、29 d测各组小鼠左、右耳厚度,计算2耳差值.实验第1 d、7 d、14 d、21 d、28 d小鼠尾静脉采血三色免疫荧光标记,以流式细胞仪检测各组CD4+CD25+T细胞数.第29 d处死全部小鼠,测量胸腺及脾脏质量.结果:OMT具有强烈抑制DNFB诱发的小鼠耳部ACD作用,且OMT可增加各剂量组小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数,呈剂量依赖性.小剂量的OMT可以使小鼠胸腺和脾脏质量增加,而大剂量的OMT对小鼠脾脏质量的影响不明显,但能降低小鼠胸腺的质量.结论:OMT显著升高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数,可能是OMT抑制ACD的免疫学机制之一.

    作者:伍斌;任学群;谢红付;张江林;陈明亮;杜乾君;杨岚 刊期: 2006年第04期

  • 同种异体背驮式肝移植32例体会

    肝动脉血栓形成是肝移植术后早期严重并发症,可导致移植肝脏功能的丧失,甚至受体术后死亡.2003年2月至2004年2月,法国冈城大学医疗中心肝胆外科肝移植中心共完成同种异体背驮式肝移植32例次,现就肝移植中处理肝动脉的经验及预防肝动脉血栓形成的体会报道如下.

    作者:张宏伟;Ephrem Salame 刊期: 2006年第04期

  • 转染血红素氧化酶-1基因大鼠肝细胞系BRL体外抗凋亡作用

    目的:探讨血红素氧化酶-1(heme oxygenase,HO-1)基因转染对大鼠肝细胞系BRL的抗凋亡作用.方法:体外培养的BRL细胞转染HO-1基因后(对照组采用转染空载体pcDNA3的BRL细胞),应用RT-PCR检测肝细胞系BRL中HO-1基因的表达.用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激细胞,采用流式细胞仪(FACS)进行细胞计数,TUNEL染色等方法检测细胞的凋亡情况.结果:转染的肝细胞系BRL中均有HO-1 mRNA表达.转染HO-1的BRL细胞经TNF-α诱导凋亡后,细胞凋亡率(55.42%±3.12%)明显低于同等刺激下转染pcDNA3的BRL细胞(81.29%±3.08%)(P<0.05).结论:BRL肝细胞系中HO-1表现出较强的抗凋亡能力,为以细胞凋亡为主要病理表现的肝脏缺血再灌注损伤的临床治疗提供了新思路.

    作者:陈国勇;曲青山;孙建军;钱建民 刊期: 2006年第04期

  • 腰椎骨折87例椎弓根螺钉治疗体会

    20世纪80年代脊柱外科领域的突破性进展是以椎弓根螺钉技术为代表的脊柱内固定技术,现已被广泛用于治疗各类脊柱疾病[1].该类手术需要X线透视辅助定位,传统置钉方式易产生误差甚至损害神经根,而导航技术大大提高手术效率和安全性,使手术更快、更准、更安全[2].本科从2005年4月以来采用德国SIEMENS IsoC-3D X光机结合美国Metdtronic导航系统(FluoronavTM实时定位导航系统),完成87例共158枚椎弓根螺钉的植入,效果满意,报道如下.

    作者:罗汉文;关宏刚;陈志维 刊期: 2006年第04期

  • 先天性肌强直家系24例临床分析

    先天性肌强直发病率为0.3~0.6/10万[1],常见有2种遗传类型:Thomsen病-常染色体显性遗传[2];Becker病-常染色体隐性遗传[3],均表现为骨骼肌在随意收缩或刺激而收缩后出现肌强直,不易立即放松,Becker型较Thomsen型起病较晚,且有的在肌肉用力后有短暂的肌无力现象.该病在临床上极为罕见,国内仅有零星的家系报道,本研究中作者报道了有24例患者的常染色体显性遗传的先天性肌强直家系,并对所有患者进行临床分析.

    作者:张博爱;王海珍;李增富;郑红 刊期: 2006年第04期

  • 经戊二醛固定的牛颈静脉带瓣管道改性方法评价

    目的:改性后的牛颈静脉带瓣管道植入犬的右室流出道,观察其长期的防钙化性能.方法:从屠宰场取新鲜牛颈静脉,筛选后放入循环固定槽内,用体积分数为0.625%的戊二醛固定1 d,取出分为2组,分别于体积分数为100%2,3-丁二醇和体积分数为0.3%戊二醛中保存60 d,然后分组植入犬的右室-肺动脉之间,将犬的肺动脉近端结扎,饲养1 a后行牛颈静脉带瓣管道的组织病理学观察及钙含量测定.结果:2,3-丁二醇保存组管道内腔及瓣膜表面发现有内皮样细胞存在.戊二醛保存组较2,3-丁二醇组管道组织均存在较严重的炎性反应.2,3-丁二醇改性后的牛颈静脉管壁平均钙含量((8.72±0.71)mg/g)明显比戊二醛组((22.05±10.78)mg/g)低,P<0.05;2组瓣膜平均钙含量相比(2,3-丁二醛组:(1.38±0.86)mg/g),戊二醛组:((0.88±0.69)mg/g)差异无统计学意义(P>0.05).结论:戊二醛鞣制的生物组织材料经2,3-丁二醇改性后可明显减轻组织钙化程度.

    作者:张竞超 刊期: 2006年第04期

  • 人脑星形细胞瘤组织中转化生长因子α与肿瘤增殖细胞核抗原检测

    目的:探讨人脑星形细胞瘤组织中转化生长因子α(TGF-α)蛋白的表达与肿瘤增殖细胞核抗原(PC-NA)及预后的关系.方法:采用免疫组化SP法检测50例人脑星形细胞瘤(其中星形细胞瘤18例,间变性星形细胞瘤20例,多形性胶质母细胞瘤12例)石蜡标本和10例正常脑组织中TGF-α蛋白表达和PCNA标记指数(PCNA-LI),并随访比较50例人脑星形细胞瘤患者术后1 a的生存率.结果:10例正常脑组织中TGF-α、PCNA-LI蛋白无表达;50例人脑星形细胞瘤组织中TGF-α蛋白表达总阳性率为60.0%(30/50),总PCNA-LI为(67.86±28.68)%;随着肿瘤病理分级的增高,TGF-α蛋白表达和PCNA-LI也显著增高,各级别组间差异有统计学意义(P<0.05);TGF-α蛋白表达和PCNA-LI呈正相关(r=0.864,P<0.01),TGF-α蛋白表达强弱和PCNA-LI高低反映患者预后(P<0.01).结论:人脑星形细胞瘤中存在TGF-α和PCNA蛋白高表达,联合检测TGF-α蛋白和PCNA-LI对评估人脑星形细胞瘤的生物学行为具有重要意义.

    作者:徐滨;宋来君;徐国本;张智峰;辛志敏 刊期: 2006年第04期

  • 红细胞保存液中腺嘌呤含量的紫外分光光度法检测

    输血用红细胞保存液(MAP)为枸橼酸钠、枸橼酸、葡萄糖、磷酸二氢钠、氯化钠、甘露醇和腺嘌呤的灭菌水溶液.国家药品标准规定MAP中腺嘌呤含量采用高效液相色谱法测定[1],本中心于2003年3月探索采用紫外分光光度法测定MAP中腺嘌呤的含量,经特异性、灵敏度及可靠性检测,认为该方法具有操作简便、稳定可靠的优点,现报道如下.

    作者:王伟;陶玉生;张淑琴 刊期: 2006年第04期

  • 髂内动脉化疗泵注药预防浸润性膀胱癌术后复发54例体会

    1994年3月至2005年6月,作者采用髂内动脉置化疗泵,依次注射抗癌药物预防浸润性膀胱癌术后复发59例,其中54例获随访,疗效满意,现报道如下.

    作者:石红林;姬彤玉;宋少康;杜涛;李启忠;范小玲;任风鸣 刊期: 2006年第04期

  • 原发性肺动脉高压异体肺移植治疗后移植肺水肿的防治体会

    儿童原发性肺动脉高压是一种进行性恶化的终末期肺病,惟一有效的治疗方法是进行肺移植术.术后移植肺水肿的防治,是手术成败的关键.2004年12月22日,作者开展了国内首例儿童肺移植术,将患儿父亲的左肺下叶移植到该患儿的右胸腔,以求纠治其原发性肺动脉高压病.患儿因严重肺水肿所致的并发症,于术后2 d死亡.现总结如下,以探讨理想的移植肺水肿的防治措施.

    作者:赵高峰;赵松;赵文增;胡伟;李昂;秦建军;齐宇;李向楠;王铁栓 刊期: 2006年第04期

  • 宫颈癌132例综合治疗体会

    2000年7月至2005年6月,本院共收治宫颈癌患者132例,均采用综合治疗的方法,现分析报道如下.

    作者:黄同森 刊期: 2006年第04期

  • 人食管癌Eca-109细胞膜蛋白的分离和纯化

    目的:建立人食管癌Eca-109细胞系膜蛋白分离和初步纯化方法.方法:使用改良的Neville法提取细胞膜,在pH 6.3的条件下,用去垢剂Triton X-100和辛基β-葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来,以超滤法纯化膜蛋白并分组.结果:在pH 6.3的条件下,适当的去垢剂与膜蛋白质量之比使用去垢剂辛基β-葡糖苷时为6:1;使用Triton X-100时为2:1.超滤法将膜蛋白分为相对分子质量<3 000、3 000~10 000、<10 000、10 000~30 000、30 000~100 000、>100 000共6个组分.结论:获得适当的去垢剂与膜蛋白质量比,并获得了不同的膜蛋白组分,为进一步研究人食管癌Eca-109细胞肿瘤抗原奠定了基础.

    作者:李付广;杜英;孙涛;杨红艳;董子明 刊期: 2006年第04期

  • 应用ProTaper机用镍钛锉预备根管160例体会

    2004年9月至2005年9月,作者采用Protaper机用镍钛锉预备根管160例,报道如下.

    作者:王玲 刊期: 2006年第04期

  • 肾移植受者148例死亡原因分析

    肾移植是治疗终末期肾病的有效方法,可显著改善患者的生存质量,但亦存在多种风险,如感染、排斥、心脑血管疾病等严重并发症,重者危及生命.作者回顾性分析1990年12月至2003年12月本院148例肾移植受者的死亡原因,报道如下.

    作者:曲青山;吕宇涛;张小谱;苗书斋;陈国勇;邢利;蔡文利 刊期: 2006年第04期

  • 术后早期炎性肠梗阻9例治疗体会

    术后早期炎性肠梗阻(eary postoperotive inyammatory ileus,EPII)在术后肠梗阻中约占90%[1],且有2/3的病例发生在小肠手术后[2].如认识不足,处理不当,易增加患者创伤甚至引起肠瘘、重症感染等并发症[3].2002年5月至2005年5月,作者共收治EPⅡ患者9例,经积极治疗,效果较为满意,现报道如下.

    作者:侯红军;杨聪敏 刊期: 2006年第04期

郑州大学学报(医学版)杂志

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