学术投稿

建泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究

刘青芝;谷巍;吴启南;巢建国;桑晓华;刘琪;王小浩

关键词:建泽泻, 鲨烯合酶, 原核表达, 功能验证, 免疫检测
摘要:泽泻鲨烯合酶(AoSS)催化法呢基焦磷酸[(farnesyl diphosphate,FPP)]合成鲨烯,是碳源流向原萜烷型三萜生物合成的关键调节酶.为深入研究AoSS基因的功能及表达,课题组将前期克隆获得的建泽泻鲨烯合酶基因(accession No.JX866770)的开放阅读框(ORF)构建到原核表达载体pCzn1上,并在大肠杆菌BL21 (Roseta)中进行诱导表达,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经纯化获得高纯度的目的蛋白;以此目的蛋白进行体外酶促反应验证其功能,其结果显示该目的蛋白具有催化法呢基焦磷酸生成鲨烯的活性;为进一步研究其表达规律,在此基础上,利用该蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体并纯化,ELISA检测抗体效价大于1∶51 200,Western blotting检测表明其具有较好的特异性;用制备得到的抗体免疫检测建泽泻AoSS在不同组织中的表达情况,结果显示建泽泻块茎中AoSS表达高,其次为叶,根中表达甚微.原核表达载体的成功构建、基因功能的进一步验证及快速免疫检测方法的建立,为进一步开展AoSS基因功能及其调控的研究奠定基础,为泽泻资源性成分原萜烷型三萜的合成生物学应用提供科学依据.
中国中药杂志相关文献
  • 促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6在神经病理性疼痛中的研究进展

    细胞因子可分为促炎性细胞因子和抗炎性细胞因子2种类型.其中,促炎因子是一类由机体的免疫和非免疫细胞合成和分泌的小分子多肽类物质,它们调节多种细胞生理功能,并在创伤、疼痛、感染等应激过程中起重要作用.促炎性细胞因子包括白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF)等.越来越多证据表明,神经损伤后,促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6在脊髓和背根神经节中被诱导,并且可以导致神经痛敏反应.近年来,随着神经病理性疼痛机制研究的日趋深入和神经炎症研究领域的不断扩展,细胞因子及调控细胞因子的分子在神经病理性疼痛作用机制的阐明,有望为镇痛药物的开发提供新的作用靶点.该文就近年来研究较多的促炎因子TNF-α,IL-1β,IL-6在神经病理性疼痛的研究进行综述.

    作者:李秋月;许海玉;杨洪军 刊期: 2017年第19期

  • 中西医结合治疗2型心肾综合征的临床观察

    观察中西医结合治疗2型心肾综合征的临床疗效.将入选的2型心肾综合征患者分为单纯西医治疗组(对照组)和中西医结合治疗组(治疗组),2组患者均采用西医常规治疗,治疗组在此基础上给予补心益肾汤口服,共治疗3个疗程,观察2组患者治疗前后的总疗效、心功能指标、肾功能指标的变化情况.治疗组与对照组的总疗效分别为91.80%,72.41%.2组比较有显著性差异(P<0.01);组内比较,治疗组与对照组在治疗前后的心功能指标、肾功能指标都有明显改善,差异有统计学意义(P<0.01);2组治疗后心、肾功能指标比较,左室功能、血尿钠肽、血肌酐、尿素氮、胱抑素-C的改善,治疗组均优于对照组(P<O.05 ~0.01).结果表明,中西医结合治疗能提高2型心肾综合征的临床疗效,明显改善心肾功能,优于单纯的西医常规治疗,且具有良好的安全性.

    作者:胡小燕;张华;荣瑗瑗;张苗海;张向农 刊期: 2017年第19期

  • 中医药治疗急性咽炎的优势与问题探讨

    该文对近年来国内外相关文献进行系统检索,利用中国知网(CNKI)收集2006年1月1日——2016年12月31日有关中医药治疗急性咽炎的文献,采用文献计量学方法进行统计分析.初选文献493篇,根据纳入标准和排除标准,筛选出符合标准文献182篇.通过评价和分析文献发现:目前在急性咽炎诊断治疗过程中,《中药新药临床研究指导原则》为常用的诊疗标准;中医治疗本病以中成药为主;汤剂治疗本病常用中药为金银花、黄芩、桔梗、连翘、甘草、玄参、板蓝根、麦冬等;刺络放血法是外治法常用的方法.中西医在治疗本病方面各有其特点,西医学对于急性咽炎的治疗多以抗病毒、抗生素和糖皮质激素类药物为主,缺点为毒副作用、耐药以及易导致二重感染等.中医药在治疗本病方面有着丰富的经验,以其辨证施治、用药安全可靠、疗效确切、不易耐药,且中药剂型多样、携带服用方便、价格低廉、毒副作用小为特点,发掘中医药宝库,研究和制备新型有效的药物是一项艰巨而意义重大的任务.

    作者:张霞;谢雁鸣;李光熙;高扬;赵元辰;唐菁菁;姚晓燕;李萌 刊期: 2017年第19期

  • 固相亲合载体应用于中药复杂体系直接作用靶点研究的现状与挑战

    中药是由多种化学成分构成的复杂体系,其发挥疾病治疗作用的大特色就在于其所含的多种活性成分通过多靶点协同作用得以实现.以往针对中药的药理机制研究大多关注于对单一信号通路的检测或是对整体蛋白质组学变化的表型分析,尚无有效方法针对中药的直接作用靶点开展研究.因此无法从靶点源头上解析中药的分子作用机制,难以科学诠释其传统功效,进而严重影响其临床应用和国际化推广.该文主要针对中药复杂体系的直接作用靶点(群)的鉴定进行初步的方法学探讨,提出了基于光敏偶联技术的中药化学成分固相亲合载体的制备及靶点蛋白富集和鉴定策略,并在此基础上探讨了该策略的优势和局限性,同时针对今后的发展方向和有待解决的问题提出了新的见解.希望对于从事中药药理学研究特别是中药靶点确证的相关人员具有一定的指导和借鉴意义.

    作者:曾克武;屠鹏飞 刊期: 2017年第19期

  • 基于分子亲和色谱技术的肉苁蓉低分子糖巨噬细胞激活作用靶点群鉴定与机制分析

    探究肉苁蓉低分子糖(LMSC)对RAW264.7小鼠巨噬细胞的激活作用靶点蛋白群及相关作用机制.该研究首先通过测定巨噬细胞吞噬活性以及NO释放量来评价LMSC对RAW264.7巨噬细胞的激活作用.实验结果显示,LMSC在0.25~2g·L-1给药浓度可显著提高RAW264.7细胞的吞噬活性及NO的释放量,提示具有巨噬细胞激活作用.通过构建LMSC键合的环氧活化琼脂糖固相微球作为亲和介质,捕获RAW264.7细胞裂解液中特异性结合靶标蛋白;对高分辨质谱鉴定获得的LMSC靶标蛋白群进行信号通路富集分析,探讨LMSC巨噬细胞激活作用相关机制.实验共获得Eef2等24个LMSC靶点蛋白,分别涉及Fcγ受体依赖的吞噬、TNF-α NF-κB信号通路、糖酵解/糖原异生以及柠檬酸(TCA)循环和呼吸电子运输过程等10条巨噬细胞激活相关信号通路.以上结果提示LMSC通过作用于多个靶点进而调节细胞吞噬、NF-κB信号通路以及糖代谢途径终实现对RAW264.7巨噬细胞激活作用.

    作者:王丽超;刘丹;姜勇;屠鹏飞;曾克武 刊期: 2017年第19期

  • 密银花对照药材标定标准的研究

    建立道地药材密银花对照药材标定技术规范,作为密银花对照药材内在质量控制和评价的理论依据及技术标准,为道地药材现代研究及其特征辨识提供支撑.收集10批密银花,根据2015年版《中国药典》一部方法进行检验,10批样品均符合规定;建立LC-MS指纹图谱检测方法,确定了23个共有峰,并根据对照品和参考文献指认了8个共有峰,对10批密银花药材相似度进行了考察,其相似度在0.95以上.使用7对金银花种质鉴定核心引物进行SSR指纹图谱构建,10批密银花指纹图谱均与河南尖山大毛花种质SSR参照图谱差异位点数为1或0个,符合密银花种质分子特征.通过结合DNA指纹图谱和LC-MS化学指纹图谱,建立了首个中药道地药材的标定标准,该标定标准的制定为加快中药标准药材尤其是道地药材的评价体系的建设提供了理论依据及技术标准.

    作者:杨健;蒋超;金艳;赵玉洋;袁媛;黄璐琦 刊期: 2017年第19期

  • 合欢皮总皂苷抗肿瘤作用靶点鉴定与分子机制解析

    合欢皮作为常用中药,临床常用于治疗失眠、焦虑、肿瘤等.现代药理中针对合欢皮总皂苷(TSAJ)抗肿瘤活性多有报道,但由于单体成分分离困难,药理机制难以开展.该研究采用MTT法和Hoechst 33258染色法,确认了TSAJ对肝癌细胞的生长抑制作用,构建了表面修饰有TSAJ的固相亲合微球,利用该固相微球特异性地从人肝癌细胞裂解液中富集靶点蛋白,再利用高分辨质谱对富集到的靶点蛋白进行鉴定.采用MataboAnalyst 3.0处理数据,筛选并确定了Exportin-2,Beta-actin-like protein 2,Myosin-9,Protein transport protein Sec61 subunit beta,Cytochrome c oxidase copper chaperone等5个靶点蛋白.这些蛋白分别具有调控细胞凋亡及细胞生长、分化、运动等功能,提示TSAJ的抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成有关.综上所述,该研究利用TSAJ修饰的固相亲和微球,特异性富集并鉴定了TSAJ的靶点蛋白,从靶点源头上解释了TSAJ抗肿瘤作用机制,同时也为中药复杂体系的分子药理机制研究提供了一种全新的思路.

    作者:钱薏;韩清华;刘丹;屠鹏飞;曾克武;梁鸿 刊期: 2017年第19期

  • 黄芪甲苷和三七总皂苷配伍抗大鼠脑缺血再灌注损伤及其药动学的研究

    研究黄芪甲苷(AST Ⅳ)和三七总皂苷(PNS)配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响,并从4种主要有效成分AST Ⅳ、人参皂苷Rg1(Rg1)、人参皂苷Rb1(Rb1)、三七皂苷R1(R1)在脑缺血再灌注大鼠体内的药动学行为探讨二者协同增强抗脑缺血再灌注损伤的机制.采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞脑缺血/再灌注模型,以神经功能评分、脑梗死面积、病理形态学指标综合评价ASTⅣ和PNS配伍抗脑缺血再灌注损伤的药理效应;采用高效液相色谱-串联四极杆质谱法(UPLC-MS/MS)测定给药后不同时间大鼠血浆中AST Ⅳ,Rg1,Rb1,R1的含量,计算药代动力学参数,分析AST Ⅳ和PNS配伍后主要有效成分药代动力学行为的变化.结果发现AST Ⅳ,PNS单用及其配伍可以缩小大鼠脑梗死面积,降低神经功能缺失行为学评分,改善脑缺血后病理形态变化,AST Ⅳ和PNS配伍的效应强于二者单用.药代动力学分析结果,AST Ⅳ和PNS配伍后,AST Ⅳ,Rgl,Rb1,R1的曲线下面积(AUC)显著增加,平均驻留时间MRT0-t延长,达峰浓度(Cmax)显著增加,表观分布容积(Vz/F)减少,且体内清除速率显著减慢.表明AST Ⅳ和PNS配伍具有协同增强抗脑缺血再灌注损伤的作用,且二者配伍可使主要有效成分的药动学行为发生改变,提示其机制可能是AST Ⅳ和PNS配伍后,可在脑缺血状态下延长药物的体内滞留时间,使生物利用度增加,达到增强药效、延长药效、发挥协同增效的目的.

    作者:李静娴;杨筱倩;唐标;刘晓丹;唐映红;邓常清;黄小平 刊期: 2017年第19期

  • 中药对照制剂研制指导原则和技术要求

    中药对照制剂是中药标准物质发展的新形式.为指导该标准物质的建立,规范其研究及在国家药品标准中的应用,提出本指导原则.规定了中药对照制剂的定义,介绍其研制指导原则和技术要求,分析其在中药质量控制中的应用,并提出发展思路.对照制剂在中药质量控制中有广泛的应用前景,探索并推行以中药对照制剂为对照的质量评价体系具有实际意义.

    作者:聂黎行;戴忠;马双成 刊期: 2017年第19期

  • 《中国药典》收载中药海马的基原与性状探讨

    海马为重要动物药材,用药历史悠久,市场混伪品众多.为正本清源,对历代海马本草文字记载、图片和照片进行考证,结合标本馆馆藏动物标本和药源调查,认为我国海马的基原应该是海龙科动物克氏海马Hippocampus kelloggi,1901、棘海马H.spinosissimus,1913、管海马H.kuda,1852、三斑海马H.trimaculatus,1814或日本海马H.mohnikei,1853的干燥体.《中国药典》收载的刺海马H.histrix,1856实为棘海马.并建议对海马性状进行修订,增加鉴别方法,以建立完善的海马质量控制标准.

    作者:蒋超;单锋;袁媛;刘富艳;詹志来;金艳;赵玉洋;黄璐琦 刊期: 2017年第19期

  • 加味五子衍宗丸神经保护作用靶点群的鉴定与功能分析

    中药复杂体系的作用靶点群鉴定是中药药理机制研究的关键.该研究构建了一种表面键合有光敏二苯甲酮基团的磁性微球,利用紫外光激发下二苯甲酮基团活化并与中药化学成分中的碳氢键发生共价键合的特性,将中药加味五子衍宗丸的化学成分组键合到磁性微球表面,并与神经细胞裂解液共孵育,进而富集加味五子衍宗丸对应的神经保护靶点群.针对靶点群进行蛋白质组学分析,共发现32个潜在结合靶点.KEGG分析发现这些靶点主要与Hippo和Cell cycle信号通路关系密切,提示加味五子衍宗丸可能参与调控神经干细胞增殖和促进神经细胞分化.该研究从靶点源头上解释了加味五子衍宗丸发挥抗痴呆和神经保护作用的潜在药理机制,进而也提供了一种用于解析中药复杂成分体系作用靶点群的研究方法,可为今后中药方剂药理机制的科学诠释提供重要的方法学借鉴与参考.

    作者:曾克武;万彦军;廖理曦;姜昆;王学美;刘莲英;屠鹏飞 刊期: 2017年第19期

  • QuEChERS-超高效液相-三重四极杆串联质谱测定白茅根中16种真菌毒素

    该文建立了一种同时检测白茅根中16种真菌毒素的QuEChERS(Quick,Easy,Cheap,Effective,Rugged,Safe)超高效液相色谱串联质谱定量分析方法.白茅根以1%乙酸-乙腈超声提取,QuEChERS方法净化,用甲醇和含0.01%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,超高效液相色谱仪应用Agilent Eclipse Plus C18色谱柱,优化选择在电喷雾离子源正离子模式下以多反应监测方式检测.结果表明,16种真菌毒素在各自线性范围内线性关系良好,相关系数r在0.996 2 ~ 1.000,定量限为0.03~ 186.68 μg·kg-1,回收率为60.28% ~ 129.2%,RSD为0.29% ~ 11%.该方法净化效果好、灵敏度高、重复性好,适用于基质成分复杂的白茅根中多种真菌毒素的定量检测.

    作者:范妙璇;董娇娇;王京辉;郭洪祝;陈有根;傅欣彤 刊期: 2017年第19期

  • 藏药印度獐芽菜石油醚部位化学成分及体外活性研究

    采用各种柱色谱以及重结晶等方法对印度獐芽菜石油醚萃取部位进行化学成分研究.通过理化性质和波谱数据分析鉴定了15个化合物,包括8个(咄)酮,2个三萜,1个裂环烯醚萜,1个香豆素和3个其他类化合物,分别为1,8-二羟基-3,5-二甲氧基(咄)酮(1)、l-羟基-3,7,8-三甲氧基(咄)酮(2)、1,8-二羟基-3,5,7-三甲氧基(咄)酮(3)、1-羟基-3,5,7,8-四甲氧基(咄)酮(4)、1,5,8-三羟基-3-甲氧基(咄)酮(5)、1-羟基-3,7-二甲氧基(咄)酮(6)、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基(咄)酮(7)、1-羟基-3,5-二甲氧基(咄)酮(8)、古柯二醇(9)、齐墩果酸(10)、(±)-龙胆内酯(11)、东莨菪内酯(12)、芥子醛(13)、丁香醛(14)、β-谷甾醇(15).其中化合物3,4,9,11~14为首次从该植物中分离得到,化合物9和12为首次从獐芽菜属中发现.对5个量大(咄)酮1,2,5,7,8进行体外活性测试,结果显示其在高浓度50 μmol·L-1对胰腺癌细胞SW1990和BxPC-3的增殖和过氧化氢(H2O2)诱导的人脐静脉融合细胞EA.hy926氧化应激损伤均无明显作用.

    作者:尤蓉蓉;陈雪晴;何丹丹;黄长高;金阳;钱士辉;鞠建明;范君婷 刊期: 2017年第19期

  • 分布于西藏地区的鼠尾草属植物化学成分研究进展

    鼠尾草属Salvia是唇形科中大的一属,全世界约有1 000余种.我国鼠尾草属植物资源丰富,分布于全国各地,尤以西南为多.该属植物含有多种类型的化学成分,主要类型有倍半萜类、二萜类、三萜类和酚性类化合物等.为了更好的开发利用西藏地区鼠尾草属植物,该文将对分布于西藏地区鼠尾草属植物的化学成分进行综述.

    作者:符佳;杨龙飞;梁峻铭;徐玲;赵刚;付强 刊期: 2017年第19期

  • 中药制剂质量均一性的现状问题及保证策略研究

    中药制剂质量的稳定均一性是保证临床用药安全有效的基础.目前,我国中药制剂的质量参差不齐,不同生产厂家的同一中药制剂、同一生产厂家同一中药制剂,甚至同一厂家同品种的不同批次之间的中药制剂质量差异都较大,达不到稳定均一.该文通过查阅中药制剂质量控制等相关文献,从中药制剂质量现状和问题分析出发,探讨制药全过程影响质量均一的可能因素,并提出中药种植规范化、炮制规范化、制药设备标准化、混批投料、质量源于设计等策略,以期为保证中药制剂质量稳定均一提供参考.

    作者:曾丽华;伍振峰;王芳;王学成;王雅琪;岳鹏飞;万娜;林环玉;杨明 刊期: 2017年第19期

  • 基于五味子酯甲含量分析南五味子药材商品规格等级

    收集不同产地南五味子药材进行等级划分,采用药典方法进行水分、总灰分的测定,采用UPLC测定五味子酯甲含量进测定,确定南五味子商品等级划分和五味子酯甲之间的关系.结果表明不同产地的南五味子药材水分、总灰分及五味子酯甲含量均合格.不同等级间的南五味子药材五味子酯甲的含量无显著差异,但是二等品含量高,三等品、一等品含量低,等级与五味子酯甲的含量不成正相关关系.该研究结果对于南五味药材的生产经营和质量评价具有一定指导意义.

    作者:王振恒;晋玲;马毅;崔治家;李倩;黄得栋 刊期: 2017年第19期

  • 葛根素及其衍生物抗炎、抗痛风作用研究进展

    该文综述了葛根素及其衍生物在抗炎、抗痛风方面的研究进展.葛根素可通过影响免疫细胞、炎性因子、信号通路等方式起到抗炎作用;同时可通过抑制黄嘌呤氧化酶、促进尿酸排泄降低血清尿酸水平,达到抗痛风作用.虽然与临床使用的别嘌醇相比,其体内降尿酸水平活性较低,但葛根素能增强机体总抗氧化和清除氧自由基的能力,且抗炎作用较强,因此预测,以葛根素为先导化合物,对其结构进行修饰或改造以期寻找活性好、副作用小的新型抗痛风药物将是一个有一定前景的研究方向.

    作者:邢志华;马誉畅;李新萍;张冰;张梦迪;万升敏;杨鑫;杨天凤;姜婧雯;包然 刊期: 2017年第19期

  • 紫外光谱法快速测定醒脑静注射液一次提取过程中9种成分

    该研究建立了一种基于紫外光谱的醒脑静注射液一次提取过程分析方法,用于快速测定蒸馏提取液中异佛尔酮、4-亚甲基-异佛尔酮、莪术双环烯酮、莪术烯醇、莪术二酮、莪术酮、莪术呋喃二烯酮、莪术醇、吉马酮9种成分含量.在醒脑静注射液一次提取过程中收集郁金-栀子水蒸气蒸馏液样品166份,扫描紫外光谱,并用高效液相色谱测定9种成分含量,使用小二乘支持向量机和径向基人工神经网络等方法建立紫外光谱与各成分含量之间的多元校正模型.实验结果表明,该研究建立的紫外光谱分析方法能较准确地测定蒸馏提取液中9种成分含量,预测误差均方根分别为0.068,0.147,0.215,0.319,1.01,1.27,0.764,0.147,0.610 mg·L-1.该方法具有快速、简便、低成本的优点,有助于醒脑静注射液提取过程监测和提取终点判断,减少产品质量缺陷和质量差异.

    作者:黄凯毅;魏丹妮;方金阳;李晞瑗;严斌俊 刊期: 2017年第19期

  • 甘草色泽与有效成分含量的相关性研究

    为探讨甘草色泽与其质量评价的相关性,该研究以精密色差仪和视觉分析仪测定甘草根皮和断面颜色,以HPLC测定甘草药材中6种黄酮类和2种皂苷类成分的含量,采用偏小二乘回归法对两类数据进行相关分析.结果发现,野生和栽培甘草根皮颜色不存在显著差异,断面颜色存在显著或极显著差异(P <0.05,P<0.01);野生甘草的甘草苷、异甘草苷、异甘草素含量与甘草酸铵、甘草次酸含量显著或极显著高于栽培甘草;相关性结果表明,甘草根皮和断面的颜色均与有效成分含量具有显著或极显著相关性.该研究为传统以甘草色泽评价其质量提供了科学依据,为完善中药材质量评价体系提供新的参考.

    作者:马婷婷;龚慕辛;王智民;贺蕊;吴莎;张村;李静;李朝霞;陆允;许永崧 刊期: 2017年第19期

  • 芦荟中1个具有抗菌活性的多取代基萘类新化合物

    对库拉索芦荟的化学成分进行研究.运用硅胶、凝胶、MCI-gel树脂及RP-HPLC等多种色谱技术从库拉索芦荟70%乙醇提取物中分离鉴定了1个多取代基萘类化合物,该化合物鉴定为3-羟基-1-(1,7-二羟基-3,6-二甲氧基萘-2-基)-1-丙酮(1).生物活性测试表明,其对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株的MIC90为(48 ±4) mg·L-1,小于左氧氟沙星的MIC90(58 ±5) mg·L-1,具有突出的抗菌活性.

    作者:孔维松;李晶;刘欣;米其利;陈建华;李雪梅;杨光宇;胡秋芬;李涛;杨叶昆 刊期: 2017年第19期

中国中药杂志

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主管:中药通报

主办:中国科学技术协会